CN105368917A - 一种尿素检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种尿素检测试剂盒,属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R2中加入由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂,有效的提高了试剂盒的稳定性,其线性范围也较好,试剂的准确度高,有利于在市场中进一步的推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及一种尿素检测试剂盒。
背景技术
尿素是由碳、氮、氧和氢组成的有机化合物,又称脲(与尿同音)。其化学公式为CON2H4、(NH2)2CO或CN2H4O,分子质量60,国际非专利药品名称为Carbamide。外观是白色晶体或粉末。它是动物蛋白质代谢后的产物,通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成,是哺乳类动物排出的体内含氮代谢物。这代谢过程称为尿素循环。
尿素(UREA)是人体内氨基酸代谢的终产物,构成了血液中绝大部分的非蛋白氮,在肝脏内合成,经肾脏排泄到尿中,因此其含量取决于蛋白质的摄入、蛋白质分解代谢及肾功能。尿素可自由地从肾小球滤出,因此是反映肾功能的敏感指标。
人血清或血浆中尿素参考范围为1.7~8.3mmol/L。UREA含量增高可见下列三种情况:(1)肾性增高见于急性肾炎、慢性肾炎、中毒性肾炎、严重肾盂肾炎、肾结核、肾血管硬化症、先天性多囊肾和肾肿瘤等引起的肾功能障碍。尤其是对尿毒症的诊断有特殊价值,其增高程度与病情严重性成正比。(2)肾前性增高见于充血性心力衰竭、重度烧伤、休克、消化道大出血、脱水、严重感染、糖尿病酸中毒、肾上腺皮质功能减退、肝肾综合征等。(3)肾后性增高见于因尿路梗阻增加肾组织压力,使肾小球滤过压降低时,如前列腺肥大、肿瘤压迫所致的尿道梗阻或两侧输尿管结石等。UREA减少:临床意义较小,偶见于急性肝萎缩、中毒性肝炎、类脂质肾病等。
脲酶利用水将尿素转化为碳酸氢根离子,并释放出铵根离子。铵根离子与α-酮戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的作用下生成L-谷氨酸和NAD+以及水。340nm波长下尿素的生成速度与NADH的消耗速度成正比。该方法是一种无需预处理样本,技术和设备要求不高,而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备,可以实现自动化,且可测定大量标本,因此受到临床广泛推广。但是普通的尿素检测试剂中由于存在酶,会使该试剂的稳定性受到影响,不利于试剂的长期保存,从而造成准确度差及浪费的不良后果。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明提供了一种尿素检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比,稳定性好,准确度高,线性范围好,分析灵敏度高,有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的:
一种尿素酶检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
4-甲酰苯基硼酸0.01%(W/V)
葡甘露聚糖0.5-1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%(V/V)
BSA0.1-1g/L。
所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1:R2=3:1。
所述的一种尿素检测试剂盒,其特征在于,所述复合稳定剂为4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六种成分。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行,其具体使用方法如下:
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
加入生理盐水、样本或校准品4μl,之后再加入R1试剂300μl预孵育5min后加入100μl的试剂R2,30秒后开始记录吸光度值A1,反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA/min。
本发明的有益效果:
本发明提供的尿素脲酶-谷氨酸脱氢酶法检测试剂盒,通过在试剂R2中加入了由4-甲酰苯基硼酸(4-FPBA)、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂,各组分协同作用使试剂稳定性能优异,解决了酶长期保存不稳定这一难题,在试验中它能增加酶的稳定时间,而不会影响酶的活性,从而有效地增强了试剂盒的稳定性,却不会对试剂的准确度和分析灵敏度产生影响,有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。
具体实施方式
为了更好的理解本发明,下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
市场上获得认可的一种准确度优异的尿素试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
本实施例描述的试剂盒,在使用时,其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪,操作如下:
加入生理盐水、样本或校准品4μl,之后再加入R1试剂300μl预孵育5min后加入100μl的试剂R2,30秒后开始记录吸光度值A1,反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA/min。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
一种尿素检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
4-FPBA0.01%(W/V)
葡甘露聚糖0.5mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%(V/V)
BSA0.1g/L
具体测定方法同实施例1。
实施例3
一种尿素检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
4-FPBA0.01%(W/V)
葡甘露聚糖0.8mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%(V/V)
BSA0.5g/L
具体测定方法同实施例1。
实施例4
一种尿素检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
4-FPBA0.01%(W/V)
葡甘露聚糖1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%(V/V)
BSA1g/L
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验:
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组,实施例1中市场上获得认可的准确度优异的尿素试剂盒作为对照组进行对比实验,对40个样本进行检测,检测的结果如图1-图3。
通过图1-图3的检测数据可知,实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9994、0.9992、0.9995,相关性比较好,表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的尿素检测试剂盒有高度一致性,证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响,试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验:
找到尿素高值样本为36mmol/L,用生理盐水进行系列稀释,配制6个不同浓度的样本,依次为36mmol/L、28.8mmol/L、21.6mmol/L、14.4mmol/L、7.2mmol/L、0mmol/L浓度的样本,每个浓度水平各样本分别测定三次,分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表1所示。
表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果
理论浓度(mmol/L) | 实施例1检测结果(mmol/L) | 实施例2检测结果(mmol/L) | 实施例3检测结果(mmol/L) | 实施例4检测结果(mmol/L) |
0 | 0.18 | 0.12 | 0.15 | 0.15 |
7.2 | 7.22 | 6.97 | 7.08 | 7.12 |
14.4 | 14.12 | 14.28 | 14.56 | 14.43 |
21.6 | 21.87 | 21.66 | 21.56 | 21.07 |
28.8 | 29.49 | 28.26 | 28.53 | 29.58 |
36 | 35.28 | 36.35 | 36.84 | 35.89 |
相关系数r | 0.9989 | 0.9996 | 0.9995 | 0.9992 |
上述检测结果显示,实施例1-4检测结果相关性均大于0.990,但实施例2、3、4的检测结果大于0.999,与实施例1相比具有更好的线性相关性,这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验:
在2℃~8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂,检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次,取平均值,与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比,从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
表2稳定性验证实验检测结果
时间 | 实施例1试剂检测结果 | 实施例2试剂检测结果 | 实施例3试剂检测结果 | 实施例4试剂检测结果 | 新鲜的实施例1试剂检测结果 |
12个月 | 0.05657 | 0.05606 | 0.05687 | 0.05698 | 0.05679 |
13个月 | 0.05568 | 0.05587 | 0.05646 | 0.05632 | 0.05682 |
14个月 | 0.06656 | 0.06668 | 0.06654 | 0.06674 | 0.06664 |
15个月 | 0.06326 | 0.06399 | 0.06387 | 0.06355 | 0.06406 |
16个月 | 0.01975 | 0.05966 | 0.05967 | 0.06008 | 0.05987 |
17个月 | 0.00221 | 0.06734 | 0.06686 | 0.06691 | 0.06729 |
18个月 | 0.00163 | 0.05826 | 0.05757 | 0.05811 | 0.05843 |
19个月 | 0.00022 | 0.05453 | 0.05432 | 0.05463 | 0.05457 |
20个月 | 0.00001 | 0.06685 | 0.06596 | 0.06623 | 0.06635 |
21个月 | 0.00000 | 0.05374 | 0.05421 | 0.05417 | 0.05461 |
22个月 | 0.00000 | 0.06284 | 0.06314 | 0.06321 | 0.06358 |
23个月 | 0.00000 | 0.06263 | 0.06198 | 0.06167 | 0.06265 |
24个月 | 0.00000 | 0.06198 | 0.06213 | 0.06191 | 0.06235 |
25个月 | 0.00000 | 0.02857 | 0.02843 | 0.03830 | 0.06232 |
26个月 | 0.00000 | 0.00165 | 0.00182 | 0.00297 | 0.06328 |
实验结果显示,实施例1试剂在2℃~8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定,而实施例2、3、4试剂在2℃~8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定,说明在试剂中通过加入复合稳定剂能够有效的提高尿素检测试剂盒的稳定性。
综合以上分析,本发明提供的尿素检测试剂盒,在试剂R2中通过加入复合稳定剂能够有效的提高试剂盒的稳定性,线性范围较好,试剂的准确度也较好。因此,本发明提供的尿素检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
Claims (3)
1.一种尿素检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、R2和校准品,其中试剂R1组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸8mmol/L
谷氨酸脱氢酶1000U/L
叠氮化钠0.5%(W/V)
试剂R2组成为:
Tris缓冲液100mmol/L
脲酶2000U/L
NADH0.8mmol/L
4-甲酰苯基硼酸0.01%(W/V)
葡甘露聚糖0.5-1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%(V/V)
BSA0.1-1g/L。
2.根据权利要求1所述的一种尿素检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1:R2=3:1。
3.根据权利要求1所述的一种尿素检测试剂盒,其特征在于,所述复合稳定剂为4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六种成分。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160302 |