CN105181692A - 一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒 - Google Patents

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李艳梅
甘宜梧
谭柏清
李静
包兴艳
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Abstract

本发明公开了一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R1中加入一定量的Triton×100和在试剂R2中加入一定量的硫脲,有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度,其线性范围也较好,试剂的准确度高,有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒。
背景技术
近年来研究发现,缺血修饰白蛋白(IMA)是美国食品药品管理局FoodandDrugAdministration,FDA)批准的,具备理想心肌标志物特征的早期心肌缺血生化检测标志物。传统的心肌损伤标志物均是在心肌坏死4-6h血中浓度才升高,而IMA在心肌缺血发作后5-10min血中浓度就开始升高,缺血停止后能持续2-4h,12h后可恢复正常,具有敏感、特异、早期、稳定、快速、经济、容易分析等特点,可以在急性冠状动脉综合征(AcuteCoronarysyndromes,ACS)早期可逆阶段时检出,是更为理想的早期心肌缺血生化检测标志物,为临床早期诊断心肌损伤和排除诊断ACS及其危险程度的分级提供科学的依据。
血清中正常人的血清白蛋白(HumanSerumAlubumin,HSA)是以活性形式存在的,当加入氯化钴后,Co2+与具有正常结合能力的HSA的N-末端结合,致使溶液中游离的Co2+浓度降低,而心肌缺血患者的HSA转化成了缺血修饰白蛋白(IschemiaModifiedAlbumin,IMA)。此时,IMA与外源性Co2+结合能力就会大大地下降,当向血清中加入同样浓度的氯化钴后,Co2+与正常的HSA充分结合以后,溶液中仍会有大量的游离Co2+,没有结合的Co2+就会与接下来加入的二巯苏糖醇(1,4-dithiothreitol,DTT)发生反应显色,显色愈强,表明没结合的Co2+就越多,IMA浓度也就越高,即IMA水平与反应显色的强度是呈正相关的,用分光光度法检测它的吸光度,就可以推算出血清中IMA的浓度。该试剂盒,就是利用剩余的Co2+与DTT反应生成红褐色的产物,在波长500nm下比色,其吸光度与Co2+浓度成正比,通过对比标准品,即可计算出样本中IMA的含量。
发明内容
针对于现有技术存在的问题,本发明提供了一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,该试剂盒与常规的试剂盒相比,稳定性和线性范围比常规的检测试剂盒要好,分析灵敏度高,有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为：18.16mmol/LpH7.6Tris缓冲液、15mmol/L氯化钴、30ml/LTriton×100、7.7mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：18.16mmol/LpH7.6Tris缓冲液、10mmol/LDTT、26mmol/L硫脲、7.7mmol/L叠氮钠。
所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1：R2=200：100。
本发明所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的IMA校准品。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行,其具体使用方法如图7所示，加入生理盐水、样本或校准品30μl,之后再加入R1试剂200μl预孵育5min后读取吸光度A1,之后再加入100μl的试剂R2反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA。
本发明的有益效果：
本发明提供的缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,通过在试剂R1中加入了30ml/LTriton×100,降低了血清中的蛋白对实验准确度的影响。在试剂R2中加入Cu2+掩蔽剂硫脲,大大降低了Cu2+对Co2+的干扰,从而提高了试剂的分析灵敏度。
附图说明
图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图4实施例1-4线性相关验证实验检测结果
图5稳定性验证实验检测结果；
图6分析灵敏度实验结果；
图7本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上的使用方法。
具体实施方式
为了更好的理解本发明,下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
pH7.6Tris缓冲液18.16mmol/L
氯化钴15mmol/L
叠氮钠7.7mmol/L
试剂R2组成为：
Tris缓冲液pH7.618.16mmol/L
DTT10mmol/L
叠氮钠7.7mmol/L
本实施例描述的试剂盒,在使用时,其测定方法是采用具有双试剂功能的日立7180自动分析仪,操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品30μl,之后再加入R1试剂200μl预孵育5min后读取吸光度A1,之后再加入100μl的试剂R2反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA。
本实施例所使用的校准品为北京九强生物技术有限公司生产的IMA校准品。
实施例2
一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
pH7.6Tris缓冲液18.16mmol/L
氯化钴15mmol/L
Triton×10020ml/L
叠氮钠7.7mmol/L
试剂R2组成为：
Tris缓冲液pH7.618.16mmol/L
DTT10mmol/L
硫脲15mmol/L
叠氮钠7.7mmol/L
具体测定方法同实施例1。
实施例3
一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
pH7.6Tris缓冲液18.16mmol/L
氯化钴15mmol/L
Triton×10025ml/L
叠氮钠7.7mmol/L
试剂R2组成为：
Tris缓冲液pH7.618.16mmol/L
DTT10mmol/L
硫脲20mmol/L
叠氮钠7.7mmol/L
具体测定方法同实施例1。
实施例4
一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
pH7.6Tris缓冲液18.16mmol/L
氯化钴15mmol/L
Triton×10030ml/L
叠氮钠7.7mmol/L
试剂R2组成为：
Tris缓冲液pH7.618.16mmol/L
DTT10mmol/L
硫脲26mmol/L
叠氮钠7.7mmol/L
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组,市场上获得认可的一种准确度优异的缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒(深圳某公司生产)作为对照组进行对比实验,对40个样本进行检测,检测的结果如图1-图3。
通过图1-图3的检测数据可知,实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果相关性分别为0.9950、0.9977、0.9991,相关性比较好,表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒有高度一致性,证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响,试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验：
找到缺血修饰白蛋白高值样本为180U/mL,用生理盐水进行系列稀释,配制6个不同浓度的样本,依次为180U/mL、144U/mL、108U/mL、72U/mL、36U/mL、0U/mL浓度的样本,每个浓度水平各样本分别测定三次,分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如图4所示。
图4检测结果显示,实施例1-4检测结果相关性均大于0.990,但实施例2、3、4的检测结果大于0.998,与实施例1相比具有更好的线性相关性,这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃-8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂,检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次,取平均值,与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比,从而确定试剂的稳定时间。检测数据如图5。
实验结果显示,实施例1试剂在2℃-8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定,而实施例2、3、4试剂在2℃-8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定,说明在试剂中加入Triton×100和硫脲二者共同作用有效的提高了缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒的稳定性。
分析灵敏度验证实验：
用本发明缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒测试已知浓度在50.3U/mL的样本,记录吸光度差值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如图6所示。
通过检测数据可知,实施例2、3、4检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高,说明在试剂中加入Triton×100和硫脲能增强试剂的分析灵敏度
综合以上分析,本发明提供的缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,在试剂R1中通过加入一定量的Triton×100和在试剂R2中加入一定量的硫脲能够有效的提高试剂盒的稳定性和分析灵敏度,线性范围较好,试剂的准确度也较好。因此,本发明提供的缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (2)

1.一种缺血修饰白蛋白比色法检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为：18.16mmol/LpH7.6Tris缓冲液、15mmol/L氯化钴、30ml/LTriton×100、7.7mmol/L叠氮钠；试剂R2组成为：18.16mmol/LpH7.6Tris缓冲液、10mmol/LDTT、26mmol/L硫脲、7.7mmol/L叠氮钠。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1：R2=200：100。
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