CN110554179B - 一种抗肝素干扰的ckmb测定试剂盒 - Google Patents
一种抗肝素干扰的ckmb测定试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:咪唑:7‑10g/L,乙酸:2‑5ml/L,乙酸镁:3.2‑4.1g/L,氯化钙:2‑5g/L,葡萄糖:4‑7g/L,EDTA:0.5‑2g/L,TX‑100:0.1%,NAC:3‑5g/L,ADP:1‑2g/L,AMP:0.5‑1g/L,Ap5A:8‑12mg/L,β‑NAD:1.5‑2.0g/L,HXK:2‑4KU/L,CKMM单抗:1.5‑1.8ml/L;所述试剂R2包括以下浓度组分:CAPSO:4‑5g/L,磷酸肌酸:48‑51g/L,NaOH:0.1‑0.2g/L,G6pDH:18‑25KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。本发明通过在R1试剂中添加浓度为2‑5g/L的氯化钙,在R2试剂中采用浓度为0.5%的月桂二甲基氧化胺替代TX‑100作为表面活性剂,使肝素抗凝管样本测定结果回复到正常测定状态,抗凝管所测定结果与血清管相比,结果不再出现负值,与血清管结果一致。
Description
技术领域
本发明涉及肌酸激酶同工酶测定技术领域,具体涉及一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒。
背景技术
肌酸激酸(CK)广泛存在于各种组织中,CK是由M(肌肉)型和B(脑)型两种亚单位组成的二聚体酶,在细胞质内共有三种同工酶:CK-MM、CK-MB、CK-BB。CK-MB是重要的心肌标志物,主要用于急性心肌梗死诊断,也用于心肌梗死面积评估。急性心肌梗死胸痛发作后,血清中CK-MB上升,先于总活力升高,24h达峰值,36h内其波动曲线与总活力相平行,至48h消失。目前常用的CK-MB测定方法为免疫抑制法,用特异的抗CK-M抗体抑制CK-M的活性,在340nm波长处,通过连续监测吸光度的上升速率,测定CK-B的活性,将CK-B活性测定值乘以2,即可计算出样本中CK-MB的活性。
肌酸激酶同工酶(CKMB)测定试剂盒是一个目前市面上较成熟,大多数IVD厂家均已注册的常规项目。现有的肌酸激酶同工酶(CKMB)测定试剂盒存在以下缺陷:当用肝素管作为抗凝管时,所采集的血浆比相同条件下的血清管测定结果偏低,且有负值出现。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,使肝素抗凝管所测定结果与血清管相比,结果不再出现负值,与血清管结果一致。
本发明通过下述技术方案实现:
一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:7-10g/L,乙酸:2-5ml/L,乙酸镁:3.2-4.1g/L,氯化钙:2-5g/L,葡萄糖:4-7g/L,EDTA:0.5-2g/L,TX-100:0.1%,NAC:3-5g/L,ADP:1-2g/L,AMP:0.5-1g/L,Ap5A:8-12mg/L,β-NAD:1.5-2.0g/L,HXK:2-4KU/L,CKMM单抗:1.5-1.8ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4-5g/L,磷酸肌酸:48-51g/L,NaOH:0.1-0.2g/L,G6pDH:18-25KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
本发明所述咪唑为缓冲液,提供反应进行的离子强度和酸碱度,所述乙酸用于调节pH,氯化钙抗肝素干扰试剂,所述EDTA为络合剂,络合可能存在的微量重金属离子,所述TX-100为表面活性剂,增加液体的表面活性,所述NAC为N-乙酰半胱氨酸,提供还原性巯基,使样本中肌酸激酶具有活性,所述ADP为二磷酸腺苷,所述AMP为一磷酸腺苷,为试剂抗干扰成份,抑制样本中腺苷酸激酶AK的干扰,所述Ap5A为5磷酸二腺苷,抑制样本中腺苷酸激酶AK的干扰,所述β-NAD为氧化型辅酶Ⅱ,所述HXK为己糖激酶,所述CKMM单抗。
所述CAPSO为3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸,为缓冲液,提供反应进行的离子强度和酸碱度,所述NaOH用于调节试剂pH,所述G6pDH为6-磷酸葡萄糖脱氢酶,所述月桂二甲基氧化胺为阳离子表面活性剂,抗肝素干扰。
肝素是一种存在于动物体内多种组织中的一种物质,是一种由N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的硫酸脂黏多糖,其呈酸性,带有大量的负电荷。其通过抑制活化的凝血因子Ⅹa、凝血因子Ⅱa(凝血酶)、凝血因子Ⅻa等,达到抗凝血的目的。
正由于其带有大量的负电荷,当含有肝素的血浆样本加入到试剂后,其大量的负电荷致使待测酶-肌酸激酶(CK)、反应工具酶-己糖激酶(HXK)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6pDH)外周电荷平衡打破,空间结构发生变化,酶逐步失去活力,反应强度偏低。而CKMB为CK的同工酶,正常人中含量很低,当各酶活力丧失后,反应强度则变得更小,再加上仪器自身的噪声,就会导致零值或负值的结果出现。
氯化钙在溶液中电离出2+价的钙离子,其能与聚阴离子态的肝素发生络合作用,通过实验,在合适的金属离子中,能与聚阴离子态肝素发生络合作用且不影响原试剂性能的,氯化钙是最优的选择。
月桂二甲基氧化胺是一种在溶液中显示非离子或阳离子活性的表面活性剂,其阳离子活性基团能与肝素的聚阴离子结合,阻止了肝素对酶的表面水化膜的破坏,从而让各酶保持原有的活性功能,完成正常的催化反应。同时,月桂二甲基氧化胺能与原体系中的TX-100表面活性剂复配,试剂各组份混合反应时,不会发生因为表面活性剂不相溶而出现混浊的现象。
肝素抗凝管的生产制作是将一定浓度的肝素溶液加入真空采血管中,通过采血管的真空度控制采血的量,最终所得到的血浆中肝素的浓度大致是恒定的,我们通过实验的方法,确定在该试剂组成方案中,氯化钙的浓度为2-5g/L,月桂二甲基氧化胺浓度为0.5%时抗肝素的效果,氯化钙的浓度为0.5g/L,月桂二甲基氧化胺浓度为0.5%时抗肝素的效果是最优的。
本发明通过在R1试剂中添加浓度为2-5g/L的氯化钙,在R2试剂中采用浓度为0.5%的月桂二甲基氧化胺替代TX-100作为表面活性剂,使肝素抗凝管样本测定结果回复到正常测定状态,抗凝管所测定结果与血清管相比,结果不再出现负值,与血清管结果一致。
进一步地,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:8g/L,乙酸:3ml/L,乙酸镁:3.68g/L,氯化钙:3.0g/L,葡萄糖:5g/L,EDTA:1.0g/L,TX-100:0.1%,NAC:4.08g/L,ADP:1.5g/L,AMP:0.75g/L,Ap5A:10mg/L,β-NAD:1.6g/L,HXK:3KU/L,CKMM单抗:1.7ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4.8g/L,磷酸肌酸:49g/L,NaOH:0.1g/L,G6pDH:20KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
申请人通过试验发现:在R1试剂中添加浓度为3g/L的氯化钙,在R2试剂中采用浓度为0.5%的月桂二甲基氧化胺替代TX-100作为表面活性剂,效果最佳。
进一步地,试剂R1和试剂R2均还还包括防腐剂:1.0g/L。
进一步地,防腐剂为NaN3。
进一步地,试剂R1 pH值为6.3~6.8;试剂R2 pH值为8.5~9.2。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
本发明通过在R1试剂中添加浓度为2-5g/L的氯化钙,在R2试剂中采用浓度为0.5%的月桂二甲基氧化胺替代TX-100作为表面活性剂,使肝素抗凝管样本测定结果回复到正常测定状态,抗凝管所测定结果与血清管相比,结果不再出现负值,与血清管结果一致。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解,构成本申请的一部分,并不构成对本发明实施例的限定。在附图中:
图1为本发明实施例3和对比例1的反应曲线对比图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下面结合实施例和附图,对本发明作进一步的详细说明,本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明,并不作为对本发明的限定。
实施例1:
一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:7g/L,乙酸:2ml/L,乙酸镁:3.2g/L,氯化钙:2g/L,葡萄糖:4g/L,EDTA:0.5g/L,TX-100:0.1%,NAC:3g/L,ADP:1g/L,AMP:0.5g/L,Ap5A:8mg/L,β-NAD:1.5g/L,HXK:2KU/L,CKMM单抗:1.5ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:5g/L,磷酸肌酸:51g/L,NaOH:0.2g/L,G6pDH:25KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
实施例2:
一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:10g/L,乙酸:5ml/L,乙酸镁:4.1g/L,氯化钙:5g/L,葡萄糖:7g/L,EDTA:2g/L,TX-100:0.1%,NAC:5g/L,ADP:2g/L,AMP:1g/L,Ap5A:12mg/L,β-NAD:1.5-2.0g/L,HXK:4KU/L,CKMM单抗:1.8ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4-5g/L,磷酸肌酸:48-51g/L,NaOH:0.1-0.2g/L,G6pDH:18-25KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
实施例3:
一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:8g/L,乙酸:3ml/L,乙酸镁:3.68g/L,氯化钙:3.0g/L,葡萄糖:5g/L,EDTA:1.0g/L,TX-100:0.1%,NAC:4.08g/L,ADP:1.5g/L,AMP:0.75g/L,Ap5A:10mg/L,β-NAD:1.6g/L,HXK:3KU/L,CKMM单抗:1.7ml/L,防腐剂:1.0g/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4.8g/L,磷酸肌酸:49g/L,NaOH:0.1g/L,G6pDH:20KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%,防腐剂:1.0g/L。
对比例1:
本对比例基于实施例3,与实施例3的区别在于:
R1试剂中不含氯化钙,R2试剂中采用TX-100替换月桂二甲基氧化胺。
对比例2:
本对比例基于实施例3,与实施例3的区别在于:
氯化钙的浓度为1.0g/L。
对比例3:
本对比例基于实施例3,与实施例3的区别在于:
氯化钙的浓度为6.0g/L。
将实施例1-实施例3,对比例1至对比例3的试剂盒进行试验,试验方法如下:
检测仪器:日立7180全自动生化分析仪
参数设置:样本:试剂1:试剂2=10:200:50(单位:μl),测定方法:Rate-A,检测波长:主波长340nm,副波长405nm,读点:22-30
20例样本测定结果:(单位U/L)
试验结果如表1至表4所示,其中,表1为实施例3与对比例1的对比数据,表2为实施例3与对比例2的对比数据,表3为实施例3与对比例3的对比数据,表4为实施例1和实施例2的数据。
表1
注:相同序号血清样本和肝素样本为同一病人样本。
同一病人样本,对于血清样本,实施例3测定结果与对比例1测定结果无明显差异;但对于肝素样本,实施例3测定结果与血清样本测定结果无明显差异,但对比例1测定结果呈系统性偏低,且当样本值较低时,会出现零值和负值结果。
表2
注:相同序号血清样本和肝素样本为同一病人样本。
同一病人样本,对于血清样本,实施例3测定结果与对比例2测定结果无明显差异;但对于肝素样本,实施例2测定结果呈系统性偏低,且有两例负值。
表3
注:相同序号血清样本和肝素样本为同一病人样本。
表3的测试数据采用了另一组样本(与表1、表2和表4不同的样本)。
对比例3与实施例3相比,对于低值肝素样本,对比例3测定结果已经不出现零值负值现象,但当测定高浓度样本时,对比例3测定血清样本与肝素样本均出现测定值偏高的现象。
表4
注:相同序号血清样本和肝素样本为同一病人样本。
实施例1、2、3相比,肝素样本与血清样本,各测定值均无明显差异,都通达到抗肝素的效果。
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,其特征在于,包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:7-10g/L,乙酸:2-5ml/L,乙酸镁:3.2-4.1g/L,氯化钙:2-5g/L,葡萄糖:4-7g/L,EDTA:0.5-2g/L,TX-100:0.1%,NAC:3-5g/L,ADP:1-2g/L,AMP:0.5-1g/L,Ap5A:8-12mg/L,β-NAD:1.5-2.0g/L,HXK:2-4KU/L,CKMM单抗:1.5-1.8ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4-5g/L,磷酸肌酸:48-51g/L,NaOH:0.1-0.2g/L,G6pDH:18-25KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
2.根据权利要求1所述的一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,其特征在于,所述试剂R1包括以下浓度组分:
咪唑:8g/L,乙酸:3ml/L,乙酸镁:3.68g/L,氯化钙:3.0g/L,葡萄糖:5g/L,EDTA:1.0g/L,TX-100:0.1%,NAC:4.08g/L,ADP:1.5g/L,AMP:0.75g/L,Ap5A:10mg/L,β-NAD:1.6g/L,HXK:3KU/L,CKMM单抗:1.7ml/L;
所述试剂R2包括以下浓度组分:
CAPSO:4.8g/L,磷酸肌酸:49g/L,NaOH:0.1g/L,G6pDH:20KU/L,月桂二甲基氧化胺:0.5%。
3.根据权利要求1所述的一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2均还包括防腐剂:1.0g/L。
4.根据权利要求3所述的一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,其特征在于,所述防腐剂为NaN3。
5.根据权利要求1所述的一种抗肝素干扰的CKMB测定试剂盒,其特征在于,所述试剂R1pH值为6.3~6.8;试剂R2 pH值为8.5~9.2。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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