CN109943623A

CN109943623A - 一种肌酸激酶检测试剂盒

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Publication number: CN109943623A
Application number: CN201910240196.4A
Authority: CN
Inventors: 曾宪亮
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-03-28
Filing date: 2019-03-28
Publication date: 2019-06-28

Abstract

本发明适用于医学检验技术领域，提供了一种肌酸激酶检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括如下组分：2.5～4KU/L的己糖激酶、1～2.5g/L的腺苷一磷酸、10～23KU/L的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶、1.5～4.8g/L的腺苷二磷酸、1.2～2.3g/L的醋酸镁、25～65mg/L的五磷酸二腺苷、5.2～8.5g/L的N‑乙酰半胱氨酸、0.45～1.2g/L的乙二胺四乙酸、0.35～0.9g/L的氧化型辅酶I和1.2～3.6g/L的咪唑缓冲液；所述试剂R2包括如下组分：1～5g/L的葡萄糖、14～26g/L的磷酸肌酸、1～2.8g/L的咪唑缓冲液和0.6～1.8g/L的表面活性剂。本发明的试剂盒可应用于检测人体血清中的肌酸激酶的活性，试剂稳定性高且检测结果具有高精密度和准确度。

Description

一种肌酸激酶检测试剂盒

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，尤其涉及一种肌酸激酶检测试剂盒。

背景技术

肌酸激酶(Creatin Kinase，CK)是由M(肌肉)型和B(脑)型两种单体亚单位组成的二聚酶，主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在。急性心肌梗死后的2h～4h，CK活性开始增高，可高达正常上限的10～20倍，但CK对心肌梗死诊断的特异性不高。各种类型的进行性肌萎缩时，血清CK活性增高。神经因素引起的肌萎缩如脊髓灰白质炎时，CK活性正常。皮肌炎时CK活性可轻度或中度增高。病毒性心肌炎时，CK活性也明显升高，对诊断及判断预后有参考价值。CK增高还见于脑血管意外、脑膜炎、甲状腺功能低下患者。CK是诊断急性心肌梗塞(AMI)重要的酶学指标之一，一些非疾病因素如剧烈运动、各种插管及手术、肌内注射冬眠灵和抗生素也可能引起CK活性增高。

然而，市售的肌酸激酶活性检测试剂在检测时经常因为样本中存在的丙酮酸、肝素等干扰物影响，从而影响了检测结果的准确性和精确度，同时存在稳定性不高的问题。

发明内容

本发明实施例提供一种肌酸激酶检测试剂盒，旨在提供一种准确度和精密度高、稳定性好的肌酸激酶检测试剂盒。

本发明实施例是这样实现的，一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括如下组分：2.5～4KU/L的己糖激酶、1～2.5g/L的腺苷一磷酸、10～23KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、1.5～4.8g/L的腺苷二磷酸、1.2～2.3g/L的醋酸镁、25～65mg/L的五磷酸二腺苷、5.2～8.5g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.45～1.2g/L的乙二胺四乙酸、0.35～0.9g/L的氧化型辅酶I和1.2～3.6g/L的咪唑缓冲液；

所述试剂R2包括如下组分：1～5g/L的葡萄糖、14～26g/L的磷酸肌酸、1～2.8g/L的咪唑缓冲液和0.6～1.8g/L的表面活性剂。

下面对本发明试剂盒中的各种试剂的功效/作用做具体说明：

生物缓冲剂：咪唑缓冲液，为酶促反应提供稳定的、适宜的PH环境。试剂储存时，为试剂提供一个良好的储存环境，保证试剂的有效储存。

冰醋酸：PH值调节剂，用于调节试剂的PH值。

醋酸镁：血清钙离子是镁离子的竞争抑制剂，加入EDTA可以消除钙离子的影响。加入的醋酸镁可提供镁离子，虽然也可以被EDTA螯合，但由于加入量充足，不影响对肌酸激酶的激活。

乙二胺四乙酸钠：金属螯合剂，可以螯合血清样本中的金属离子，减少对反应酶的影响，提高检测的准确性和稳定性。还可以防止N-乙酰-L-半胱氨酸由于二价离子催化发生的氧化，有利于试剂的稳定。

葡萄糖：葡萄糖和ATP在己糖激酶的作用下生产葡萄糖六磷酸和ADP。

叠氮化钠：防腐剂，用于防止溶液中微生物生长，保持试剂的稳定性。

F88：环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物F88，新型的低泡非离子表面活性剂。具有改变界面特性、羟基性质以及逆溶性的性能。对原料起到乳化分散的作用，确保试剂体系的均匀性和稳定性。

硫代硫酸钠：硫代硫酸根离子具有配合性，可与许多金属离子形成稳定配合物，消除重金属离子对酶中的活性巯基作用，避免酶失活。

N-乙酰-L-半胱氨酸：肌酸激酶的巯基很容易失活，有时要用带巯基的物质激活巯基。加入N-乙酰-L-半胱氨酸可以激活肌酸激酶。血清保本在保存期内，会因为日光使得肌酸激酶失活，反应液中的EDTA和N-乙酰-L-半胱氨酸可以使经4℃保存一周的血清中的肌酸激酶重新激活达99％。

氧化型辅酶I：葡萄糖六磷酸和氧化性辅酶I在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用下生成6-磷酸葡萄糖酸和还原型辅酶I。

一磷酸腺苷：红细胞及几乎所有组织中均含有腺苷酸激酶(AK),可以催化ADP生成ATP,生成的ATP可导致表现CK活性的增加。加入一磷酸腺苷和二磷酸腺苷是用于抑制腺苷酸激酶(AK活性)。

聚乙二醇6000：环氧乙烷水解产物的聚合物，是一种非离子型的水溶性聚合物，具有水溶性、不挥发性、生理惰性、温和性等特性，可与F88协同作用，作为分散剂和乳化剂，提高配制溶液和反应体系的均匀性和稳定性。

二腺苷五磷酸：可以竞争性抑制肌肉及红细胞中的腺苷酸激酶(AK)，但对肝及肾的AK抑制很小。AMP,AP5A合用，能够有效的抑制红细胞和肝细胞的AK。

己糖激酶：葡萄糖和ATP在己糖激酶的作用下生产葡萄糖六磷酸和ADP。

3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐：为酶促反应提供稳定的、适宜的PH环境。试剂储存时，为试剂提供一个良好的储存环境，保证试剂的有效储存。

磷酸肌酸：作为反应底物，磷酸肌酸和二磷酸腺苷在肌酸激酶的作用下生成肌酸和三磷酸腺苷。

二磷酸腺苷：红细胞及几乎所有组织中均含有腺苷酸激酶(AK),可以催化ADP生成ATP，生成的ATP可导致表现CK活性的增加。加入一磷酸腺苷和二磷酸腺苷是用于抑制腺苷酸激酶(AK活性)。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶：葡萄糖六磷酸和氧化性辅酶I在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作用下生成6-磷酸葡萄糖酸和还原型辅酶I。

本发明实施例的肌酸激酶检测试剂盒，采用双试剂的方式，试剂R2中添加了适量的表面活性剂，可明显提高试剂的开平稳定性和效期稳定性，其中将试剂的开瓶稳定性长达60天，不开盖存储的有效期长达21个月。经临床验证，本发明的试剂盒可应用于检测人体血清中的肌酸激酶的含量，最高检测范围可达1228U/L，且检测结果具有高精密度和准确度以及抗干扰能力好的特点，具有很好的临床应用价值。

附图说明

图1是本发明实施例提供的肌酸激酶检测试剂盒的检测线性范围拟合曲线；

图2是本发明实施例提供的肌酸激酶检测试剂盒与CK理论值的相关性拟合曲线。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

在本发明实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义。还应当理解，本文中使用的术语“和/或”是指并包含一个或多个相关联的列出项目的任何或所有可能组合。

本发明实施例的肌酸激酶检测试剂盒，采用双试剂的方式，试剂R2中添加了适量的表面活性剂，可明显提高试剂的开平稳定性和效期稳定性，经临床验证，本发明的试剂盒可应用于检测人体血清中的肌酸激酶的含量，且检测结果具有高精密度和准确度以及抗干扰能力好的特点，具有很好的临床应用价值。

以下通过具体的实施例对本发明的技术方案和技术效果做进一步的说明。

实施例1：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：4KU/L的己糖激酶、1.25g/L的腺苷一磷酸、10KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、4.8g/L的腺苷二磷酸、2.3g/L的醋酸镁、25mg/L的五磷酸二腺苷、8.5g/L的N-乙酰半胱氨酸、1g/L的乙二胺四乙酸、0.35g/L的氧化型辅酶I和3.6g/L的咪唑缓冲液(pH值为6)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：1g/L的葡萄糖、26g/L的磷酸肌酸、2.8g/L的咪唑缓冲液和0.6g/L的表面活性剂(烷基葡糖苷)。

实施例2：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：2.5KU/L的己糖激酶、1g/L的腺苷一磷酸、15KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、1.5g/L的腺苷二磷酸、1.2g/L的醋酸镁、65mg/L的五磷酸二腺苷、5.2g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.45g/L的乙二胺四乙酸、0.9g/L的氧化型辅酶I和1.2g/L的咪唑缓冲液(pH值为7)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：5g/L的葡萄糖、14g/L的磷酸肌酸、1g/L的咪唑缓冲液和1.8g/L的表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物)。

实施例3：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：2KU/L的己糖激酶、1.24g/L的腺苷一磷酸、12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、2.5g/L的腺苷二磷酸、1.68g/L的醋酸镁、50mg/L的五磷酸二腺苷、6.24g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.94g/L的乙二胺四乙酸、0.86g/L的氧化型辅酶I和2.2g/L的咪唑缓冲液(pH值为6.7)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：2g/L的葡萄糖、20g/L的磷酸肌酸、2.4g/L的咪唑缓冲液和1g/L的表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物0.7g/L+烷基葡糖苷0.3g/L)。

实施例4：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：2.8KU/L的己糖激酶、2g/L的腺苷一磷酸、20KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、3g/L的腺苷二磷酸、2.36g/L的醋酸镁、45mg/L的五磷酸二腺苷、7.4g/L的N-乙酰半胱氨酸、1.2g/L的乙二胺四乙酸、0.65g/L的氧化型辅酶I、2.5g/L的咪唑缓冲液(pH值为6)、1mL/L的冰醋酸、0.8g/L的葡萄糖、1.4g/L的防腐剂(叠氮化钠)、1g/L的硫代硫酸钠和0.45g/L的非离子表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：3g/L的葡萄糖、18g/L的磷酸肌酸、2.6g/L的咪唑缓冲液、1.2g/L的表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物1g/L+烷基葡糖苷0.2g/L)、2g/L的3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐、1.5g/L的叠氮化钠和12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

实施例5：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：3.6KU/L的己糖激酶、2.5g/L的腺苷一磷酸、23KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、3.5g/L的腺苷二磷酸、1.38g/L的醋酸镁、60mg/L的五磷酸二腺苷、6.68g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.82g/L的乙二胺四乙酸、0.74g/L的氧化型辅酶I、3.1g/L的咪唑缓冲液(pH值为6)、2mL/L的冰醋酸、2.5g/L的葡萄糖、0.3g/L的防腐剂(叠氮化钠)、0.25g/L的硫代硫酸钠和1.25g/L的非离子表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：4g/L的葡萄糖、24g/L的磷酸肌酸、1.7g/L的咪唑缓冲液、0.9g/L的表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物)、3g/L的3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐、0.2g/L的叠氮化钠和12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

实施例6：

一种肌酸激酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1由以下浓度的组分组成：2KU/L的己糖激酶、1.24g/L的腺苷一磷酸、12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、2.5g/L的腺苷二磷酸、1.68g/L的醋酸镁、50mg/L的五磷酸二腺苷、6.24g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.94g/L的乙二胺四乙酸、0.86g/L的氧化型辅酶I、2.2g/L的咪唑缓冲液(pH值为6.7)、1.25mL/L的冰醋酸、2g/L的葡萄糖、0.5g/L的防腐剂(叠氮化钠)、0.625g/L的硫代硫酸钠和2.2g/L的非离子表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物)；

试剂R2由以下浓度的组分组成：2g/L的葡萄糖、20g/L的磷酸肌酸、2.4g/L的咪唑缓冲液、1g/L的表面活性剂(环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物0.7g/L+烷基葡糖苷0.3g/L)、2.2g/L的3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐、0.5g/L的叠氮化钠和12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

为进一步说明本发明的技术效果，下面对本发明实施例提供的肌酸激酶试剂盒的使用方法、性能评价进行详细说明：

一、使用方法：

本发明实施例提供的肌酸酶检测试剂盒采用双试剂(试剂R1和试剂R2)，使用时，双试剂无需配制，可直接使用。

应用本发明试剂盒检测人体血清中的肌酸激酶含量的检测方法具体如下：

检测样本：新鲜血清，空腹采血后应及时分离，避免溶血。

试验条件详见下表1。

在具体应用中，可根据不同检测仪器索取不同的上机参数，例如，可根据日立7060、日立7080、日立7170、日立7600、日立7180、东芝40、岛津8000、罗氏P800、雅培2000、贝克曼CX、贝克曼DX、贝克曼LX、奥林巴斯400、奥林巴斯640、奥林巴斯2700、奥林巴斯5400、麦迪卡EasyRA全自动生化分析仪的上机参数具体确定试验条件。

表1

校准方式	线性	反应方向	上升
				主/副波长	340/405nm	样本	10μl
反应类型	速率法	试剂1	200μl
				反应温度	37℃	试剂2	50μl
校准方法	2点定标	R1：R2	4:1
				孵育时间	5min	延迟时间	2min
测定时间	2min	/	/

校准程序：使用朗道校准血清，两点定标线性处理，测定方法同样本。

质量控制程序：使用朗道质控血清，控制相对偏差在性能指标范围内。

试验结果的计算：其中，ΔA/min：每分钟平均吸光度的变化；ε：毫摩尔消光系数＝6.3mmolL^-1cm^-1；T_V：总反应体积(μl)；S_V：样本体积(μl)；L：比色杯光径(cm)。

二、性能评价

对本发明实施例1～6提供的肌酸激酶试剂盒中的双试剂进行性能评价：

1、线性范围：在贝克曼AU480全自动生化分析仪上进行试验：将待测血清标本加入本发明的肌酸激酶检测试剂中，混匀，37℃孵育5min后，连续监测2分钟波长405nm的吸光度变化速率，测得待测血清标本中肌酸激酶的活性数值。为了减少偶然误差重复测定三次平均值，计算测值与靶值的相对偏差。

试验方法：取临床高值标本，将高值标本按照以下浓度梯度进行加水稀释：0、1/8、1/4、2/4、3/4、1，采用本发明实施例1～6的双试剂对每个浓度梯度的样本进行测试，每个样品测3次，取平均值数据记录如下表2(单位：U/L)。

表2

浓度梯度	CK理论值	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5	实施例6
								0	0	1	2	2	2	2	3
1/8	153.5	154	155	156	157	157	154
								1/4	307	309	310	312	308	311	310
2/4	614	620	622	623	619	621	620
								3/4	921	930	934	936	940	929	937
1	1228	1301	1304	1320	1298	1302	1306

并且，根据实施例3与CK理论值做相关性曲线，得到的相关性曲线为y＝1.0597X-11.154，R²≥0.9983。结合上表2的试验结果可以看出，本发明实施例1～6提供的肌酸激酶双试剂的最高检测范围可达1228U/L，判定依据R²≥0.990。

2、精密度试验：

选取临床上的一个低值和一个高值的血清样品，采用本发明实施例6提供的肌酸激酶试剂盒检测血清样品来计算该试剂盒的批内精密度和批间精密度，重复测定20次，计算变异系数，结果详见下表3(批内精密度)和表4(批间精密度)。

批内精密度：使用同一生产批号的试剂盒；批间精密度：使用连续三批次不同生产批号的同一款试剂盒。

表3

表4

从上表3和表4的试验结果可以得出，采用本发明实施例6提供的肌酸激酶双试剂测定的变异系数(CV％)，批内精密度和批间精密度均小于3％。

需要说明的是，本发明实施例1～5均进行上述精密度测试，测试的结果显示批内和批间精密度的变异系数CV％＜5％，由此可见，本发明实施例1～6提供的肌酸激酶试剂盒中的双试剂具有良好的精密度。

3、准确度试验：

用英国朗道实验诊断有限公司质控血清和相应的参考测量程序对本发明实施例3提供的肌酸激酶试剂盒进行测试，重复测定三次，取测试结果的均值(M)，按公式(6)计算相对偏差B。

B＝(M-T)/T×100％；式中，T：—英国朗道实验诊断有限公司质控血清-肌酸激酶靶值。

结果见下表5～表6。

表5

表6

从上表5～6的试验结果可以得出，采用本发明实施例3提供的三批肌酸激酶双试剂测定的相对偏差均小于5％。

需要说明的是，本发明实施例1～2、4～6均进行上述准确度测试，测试的结果显示准确度相对偏差均＜5％，由此可见，本发明实施例1～6提供的肌酸激酶试剂盒中的双试剂具有良好的准确度。

4、稳定性试验：

(1)开瓶稳定性：将本发明实施例1～6的试剂盒中的试剂进行稳定性试验，以实施例3的试剂盒为例，将试剂盒中的每种试剂开口放置2～8℃冰箱内，选取一组临床高值血清标本和一组临床低值血清标本分别混匀、分装放置于-20℃冰箱内保存，每隔10天采用上述双试剂分别测定上述高值血清标本(活性约235U/L)和低值血清标本(活性约40U/L)的肌酸激酶的酶活一次，每份双试剂试样检测3次，记录其平均值，连续监测60天，，以第0天的检测结果均值作为基准，计算第60天检测结果的均值与第0天检测结果均值的相对偏差。通过准确度的测定比较试剂稳定性。其余实施例的稳定性测试参照上述实施例3的测试方法。

本发明实施例1～3的开瓶稳定性测试结果详见下表7(单位：U/L)：

表7

从上表7的试验结果可以得出，试剂R2中添加表面活性剂可以明显提高试剂的稳定性，单独添加环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物的试剂稳定性相对比单独添加烷基葡糖苷的效果要好，而同时添加环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和烷基葡糖苷的试剂稳定性最好，检测结果的相对偏差均≤10％。由此可以得出，环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和烷基葡糖苷具有协同作用，可以共同提高肌酸激酶检测试剂的开瓶稳定性，开瓶稳定性长达60天。

本发明其余实施例的开瓶稳定性检测结果也是显示出与上述实施例1～5的相同结论，并且，实施例3的稳定性效果最好。

(2)效期稳定性：将本发明实施例1～6的试剂盒中的试剂进行稳定性试验，以实施例3的试剂盒为例，将试剂盒中放置2～8℃冰箱内，选取一组临床高值血清标本和一组临床低值血清标本分别混匀、分装放置于-20℃冰箱内保存，每隔3个月采用上述双试剂分别测定上述高值血清标本(活性约235U/L)和低值血清标本(活性约40U/L)的肌酸激酶的酶活一次，每份双试剂试样检测3次，记录其平均值，连续监测21个月，以第0月的检测结果均值作为基准，计算第21个月检测结果的均值与第0月检测结果均值的相对偏差。其余实施例的稳定性测试参照上述实施例3的测试方法。

本发明实施例1～3的效期稳定性测试结果详见下表8(单位：U/L)：

表8

从上表8的试验结果可以得出，试剂R2中添加表面活性剂可以明显提高试剂的稳定性，单独添加环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物的试剂稳定性相对比单独添加烷基葡糖苷的效果要好，而同时添加环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和烷基葡糖苷的试剂稳定性最好，检测结果的相对偏差均≤10％。。由此可以得出，环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和烷基葡糖苷具有协同作用，可以共同提高肌酸激酶同工酶检测试剂的效期稳定性，有效期长达21个月。

本发明其余实施例的效期稳定性检测结果也是显示出与上述实施例1～5的相同结论，并且，实施例3的稳定性效果最好。

5、相关性测试：随机选取临床上的40例血清标本，标本浓度范围分布为低、中、高全覆盖，检测三次取平均值，以本发明实施例3为例做详细说明，记录如下表9(单位：U/L)。

测定步骤：选择实施例3肌酸激酶同工酶试剂盒和罗氏公司肌酸激酶检测试剂盒同时检测上述随机选取临床的40例血清标本，每例标本重复测定3次取平均值，检测结果如下。

表9

并且，根据CK的罗氏检测试剂和采用本发明实施例3的试剂测试血清样本中的肌酸激酶含量的实测值做相关性曲线，X轴表示实施例3测值，Y轴表示罗氏试剂测值，得到相关性曲线方程为：y＝1.02764x-1.5655，相关系数R²＝0.9989。可见本发明实施例3提供的肌酸激酶试剂盒的检测结果与罗氏肌酸激酶检测试剂的检测结果的相关性良好。

本发明其余实施例1～2、4～6的相关性测试参照上述实施例3的测试方法，其检测结果均显示与罗氏试剂CK测值的相关性良好，R²＞0.99。

本发明实施例提供的肌酸激酶检测试剂盒，采用双试剂的方式，试剂R2中添加了适量的表面活性剂，可提高试剂的开瓶稳定性合效期稳定性，其中将试剂的开瓶稳定性长达60天，不开盖存储的有效期长达21个月。经临床验证，本发明的试剂盒可应用于检测人体血清中的肌酸激酶的活性，最高检测范围可达1228U/L，且检测结果具有高精密度和准确度以及抗干扰能力好的特点，具有很好的临床应用价值。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；

所述试剂R1包括如下组分：2.5～4KU/L的己糖激酶、1～2.5g/L的腺苷一磷酸、10～23KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、1.5～4.8g/L的腺苷二磷酸、1.2～2.3g/L的醋酸镁、25～65mg/L的五磷酸二腺苷、5.2～8.5g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.45～1.2g/L的乙二胺四乙酸、0.35～0.9g/L的氧化型辅酶I和1.2～3.6g/L的咪唑缓冲液；

2.如权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括如下组分：2KU/L的己糖激酶、1.24g/L的腺苷一磷酸、12KU/L的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、2.5g/L的腺苷二磷酸、1.68g/L的醋酸镁、50mg/L的五磷酸二腺苷、6.24g/L的N-乙酰半胱氨酸、0.94g/L的乙二胺四乙酸、0.86g/L的氧化型辅酶I和2.2g/L的咪唑缓冲液；

所述试剂R2包括如下组分：2g/L的葡萄糖、20g/L的磷酸肌酸、2.4g/L的咪唑缓冲液和1g/L的表面活性剂。

3.如权利要求1或2所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和/或烷基葡糖苷。

4.如权利要求1或2所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物和烷基葡糖苷。

5.如权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述咪唑缓冲液的pH值为6～7。

6.如权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1还包括如下组分：1～2mL/L的冰醋酸、0.8～2.5g/L的葡萄糖、0.3～1.4g/L的防腐剂、0.25～1g/L的硫代硫酸钠和0.45～1.25g/L的非离子表面活性剂。

7.如权利要求6所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1还包括如下组分：1.25mL/L的冰醋酸、2g/L的葡萄糖、0.5g/L的防腐剂、0.625g/L的硫代硫酸钠和1g/L的非离子表面活性剂。

8.如权利要求6或7所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为叠氮化钠；

所述非离子表面活性剂为环氧丙烷一环氧乙烷嵌段共聚物。

9.如权利要求1所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2还包括：2～3g/L的3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐、0.2～1.5g/L的叠氮化钠和8～13KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

10.如权利要求9所述的肌酸激酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2还包括：2.2g/L的3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸钠盐、0.5g/L的叠氮化钠和12KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。