CN104388537A - 一种血清中尿素检测试剂 - Google Patents

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张永英
谭柏清
李静
王绮
赵新
朱玉娥
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Abstract

本发明公开了一种血清中尿素检测试剂。本发明的尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂，其中R1试剂包括：Tris缓冲液、α-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、乙二胺四乙酸钠、丙酮酸脱羧酶、纳米粒子、烷基糖苷和二磷酸腺苷；R2试剂包括：Tris缓冲液、脲酶、还原型辅酶Ⅰ、乙二胺四乙酸钠和十二烷基苯磺酸钠。本发明的试剂可将血清中的干扰物质去除，保证结果的准确性，具有操作简便、抗干扰性强、稳定性高，普遍适用于各种型号的全自动生化分析仪的优异性能。

Description

一种血清中尿素检测试剂
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种血清中尿素检测试剂。
背景技术
尿素含量增高可见下列三种情况：（1）肾性增高见于急性肾炎、慢性肾炎、中毒性肾炎、严重肾盂肾炎、肾结核、肾血管硬化症、先天性多囊肾和肾肿瘤等引起的肾功能障碍，尤其是对尿毒症的诊断有特殊价值，其增高程度与病情严重性成正比。（2）肾前性增高见于充血性心力衰竭、重度烧伤、休克、消化道大出血、脱水、严重感染、糖尿病酸中毒、肾上腺皮质功能减退、肝肾综合征等。（3）肾后性增高见于因尿路梗阻增加肾组织压力，使肾小球滤过压降低时，如前列腺肥大、肿瘤压迫所致的尿道梗阻或两侧输尿管结石等。尿素减少：临床意义较小，偶见于急性肝萎缩、中毒性肝炎、类脂质肾病等。
常规检测试剂盒普遍存在三点缺陷：1.检测时受到样本中含有的丙酮酸的干扰；2. 检测时受到抗凝剂肝素的干扰；3.尿素的稳定性差。这些缺陷最终影响检测结果的准确性，从而限制了常规检测试剂盒在市场上的应用。
发明内容
为克服现有技术中存在的问题，本发明提供了一种血清中尿素检测试剂，该试剂具有操作简便、抗干扰性强、稳定性高，普遍适用于各种型号的全自动生化分析仪的优异性能。
本发明的技术方案如下：
一种血清中尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
所述的，R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10-100mmo1
α-酮戊二酸                              5-20mmo1
谷氨酸脱氢酶                            200-1000U
乙二胺四乙酸钠                          1-10mmo1
丙酮酸脱羧酶                            0.1-2KU
纳米粒子                                10-50mmol/L
烷基糖苷                                1-10mmo1
二磷酸腺苷                              1-5 mmo1
                                        去离子水加至1L；
所述的，R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10-100mmo1
脲酶                                    1000-2000U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          1-10mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        1-20 g
                                        去离子水加至1L。
所述的，纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，其粒径为25nm。
优选的，R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              60mmo1
α-酮戊二酸                              12mmo1
谷氨酸脱氢酶                            500U
乙二胺四乙酸钠                          6mmo1
丙酮酸脱羧酶                            1KU
纳米粒子                                30mmol/L
烷基糖苷                                5mmo1
二磷酸腺苷                              3 mmo1
                                        去离子水加至1L。
优选的，R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              50mmo1
脲酶                                    1500U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          5mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        10 g
                                        去离子水加至1L。
本发明尿素检测试剂的原理如下：
反应中利用脲酶、谷氨酸脱氢酶一系列的催化反应，最终在340nm的波长检测NADH的含量变化，获得待测样本中尿素的含量。
本发明的有益效果：
1）本发明血清中尿素检测试剂为双试剂，分别为R1试剂和R2试剂，在R1试剂中加入丙酮酸脱羧酶和烷基糖苷，将血清样本中的干扰物质丙酮酸和肝素去除，γ-Fe2O3纳米粒子可增强乳酸脱氢酶的活性，使得反应进行的更彻底，当加入R2试剂对尿素进行检测时，不会有干扰物质的影响，进而保证了结果的准确。
2）本发明的尿素检测试剂中添加了适量二磷酸腺苷和十二烷基苯磺酸钠，增强溶液的稳定性。
3）本发明的尿素检测试剂具有稳定性高、准确度好、抗干扰性强的优异性能，是一种值得推广的新型尿素检测试剂。
附图说明
图1 实施例1制得的尿素检测试剂的相关性试验结果；
图2 实施例2制得的尿素检测试剂的相关性试验结果；
图3 实施例3制得的尿素检测试剂的相关性试验结果；
图4 实施例4制得的尿素检测试剂的相关性试验结果；
图5 实施例1至4制得的尿素检测试剂的稳定性试验结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种血清中尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10mmo1
α-酮戊二酸                              5mmo1
谷氨酸脱氢酶                            1000U
乙二胺四乙酸钠                          10mmo1
丙酮酸脱羧酶                            2KU
纳米粒子                                10mmol/L
烷基糖苷                                10mmo1
二磷酸腺苷                              5 mmo1
                                        去离子水加至1L；
R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              100mmo1
脲酶                                    1000U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          1mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        1g
                                        去离子水加至1L。
纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，其粒径为25nm。
实施例2
一种血清中尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              60mmo1
α-酮戊二酸                              12mmo1
谷氨酸脱氢酶                            500U
乙二胺四乙酸钠                          6mmo1
丙酮酸脱羧酶                            1KU
纳米粒子                                30mmol/L
烷基糖苷                                5mmo1
二磷酸腺苷                              3mmo1
                                        去离子水加至1L；
R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              50mmo1
脲酶                                    1500U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          5mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        10g
                                        去离子水加至1L。
纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，其粒径为25nm。
实施例3
一种血清中尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              100mmo1
α-酮戊二酸                              20mmo1
谷氨酸脱氢酶                            200U
乙二胺四乙酸钠                          1mmo1
丙酮酸脱羧酶                            0.1KU
纳米粒子                                50mmol/L
烷基糖苷                                1mmo1
二磷酸腺苷                              1mmo1
                                        去离子水加至1L；
R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10mmo1
脲酶                                    2000U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          10mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        20 g
                                        去离子水加至1L。
纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，其粒径为25nm。
实施例4
一种血清中尿素检测试剂包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              100mmo1
α-酮戊二酸                              20mmo1
谷氨酸脱氢酶                            200U
乙二胺四乙酸钠                          1mmo1
                                        去离子水加至1L；
R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10mmo1
脲酶                                    2000U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1 
乙二胺四乙酸钠                          10mmo1
                                        去离子水加至1L。
本发明的一种血清中尿素检测试剂的使用方法为：选用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪，配制试剂1和试剂2，先将试剂1加至全自动生化分析仪37℃预孵育3分钟，再将试剂2加至试剂1中，混匀后于全自动生化分析仪37℃预孵育5分钟，试剂1和试剂2的体积比为3:1，调整生化分析仪的参数，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、朗道校准品和样本，据全自动生化分析仪测定的样本的吸光度，就可以获得样本的尿素浓度。具体操作如表1所示。
表1 尿素检测试剂的使用方法
计算：尿素含量（mmo1/L）＝（?A测定/min÷?A标准/min）×C标准
相关性实验
对同一高值血清样本，该血清样本应用肝素钠采血管处理，在检验机构确定样本中尿素的浓度约为50mmo1/L，该样本用生理盐水进行稀释，实施梯度如表2所示。
表2 对样本梯度稀释体积比
样本浓度（X） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
生理盐水 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
浓度 X 0.8X 0.6X 0.4X 0.2X 0
分别利用实施例1至3制得的尿素检测试剂对各浓度梯度样本进行检测，检测方法如表1所示，结果如图1-4所示。
由图1-4可知，检测结果随稀释浓度呈线性变化，实施例1的线性相关系数为r=0.9933，说明实施例1的试剂对于各个浓度的样本检测结果都比较准确，而且能够检测到50mmo1/L的样本。对比而言，实施例2的线性相关系数为r=0.9994，实施例3的线性相关系数为r=0.9928，实施例4的线性相关系数为r=0.9779<0.9900。实施例4线性相关性很差，主要原因是样本中存在干扰物质，影响了检测结果的准确性。而本发明血清中尿素检测试剂中加入丙酮酸脱羧酶和烷基糖苷，将血清样本中的干扰物质丙酮酸和肝素去除，γ-Fe2O3纳米粒子可增强乳酸脱氢酶的活性，使得反应进行的更彻底，保证了检测结果的准确。
稳定性试验
将试剂放置在4℃冰箱中，跟踪试剂的稳定性，对同一稳定样本，分别利用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的试剂，进行检测，每月定时检测一次，跟踪检测18个月，检测结果如图5所示。
由图5可知，随着时间的推移，试剂的稳定性在衰减，但是对比而言，实施例1-3的试剂稳定性明显比实施例4的试剂要好，而实施例2的试剂稳定性又明显优于实施例1和实施例3，说明在加入适量十二烷基苯磺酸钠后，试剂的稳定性明显提高。
本发明结合常规方法检测尿素的原理，在原始配方的基础上，在试剂R1中加入抗干扰物质丙酮酸脱羧酶和烷基糖苷，去除血清样本中丙酮酸及抗凝剂肝素的干扰，明显增强了试剂检测的准确度和抗干扰能力；试剂R2中各加入一定量的稳定剂十二烷基苯磺酸钠，增强了试剂在放置过程的稳定性。通过本实验优化获得了一种准确、稳定、抗干扰性强的尿素检测试剂，增强了该项目的市场推广应用，具有很高的临床应用价值。

Claims (4)

1.一种血清中尿素检测试剂，其特征在于，它包括体积比为3:1的R1试剂和R2试剂；
所述R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10-100mmo1
α-酮戊二酸                              5-20mmo1
谷氨酸脱氢酶                            200-1000U
乙二胺四乙酸钠                          1-10mmo1
丙酮酸脱羧酶                            0.1-2KU
纳米粒子                                10-50mmol/L
烷基糖苷                                1-10mmo1
二磷酸腺苷                              1-5 mmo1
                                        去离子水加至1L；
所述R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              10-100mmo1
脲酶                                    1000-2000U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1
乙二胺四乙酸钠                          1-10mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        1-20g
                                        去离子水加至1L。
2.根据权利要求1所述的尿素检测试剂，其特征在于，所述纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，其粒径为25nm。
3.根据权利要求1所述的尿素检测试剂，其特征在于，所述R1试剂的组分为：
Tris缓冲液                              60mmo1
α-酮戊二酸                              12mmo1
谷氨酸脱氢酶                            500U
乙二胺四乙酸钠                          6mmo1
丙酮酸脱羧酶                            1KU
纳米粒子                                30mmol/L
烷基糖苷                                5mmo1
二磷酸腺苷                              3 mmo1
                                        去离子水加至1L。
4.根据权利要求1所述的尿素检测试剂，其特征在于，所述R2试剂的组分为：
Tris缓冲液                              50mmo1
脲酶                                    1500U
还原型辅酶Ⅰ                            0.8mmo1
乙二胺四乙酸钠                          5mmo1
十二烷基苯磺酸钠                        10g
                                        去离子水加至1L。
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