CN104560951A - 一种宏基因组dna的提取方法及其试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种宏基因组DNA的提取方法。该方法包括：取待测样品与裂解液混合后，经溶菌酶溶液处理、震荡破壁、蛋白酶K处理后，经NaCl处理、异丙醇处理、乙醇洗涤，即得；本发明通过在提取前加入裂解液和溶菌酶，并调节提取条件，使微生物细胞壁更易破碎，DNA分子更多的溶出，从而保证了提取所得DNA的丰度、片段完整性和纯度，且操作简单，成本较低。实验表明，采用本发明提供的方法提取唾液宏基因组DNA或对细菌、真菌的总DNA进行提取，与现有试剂盒相比，所得产物经PCR后电泳条带更加清晰，特别是对唾液样本的提取，所得产物经PCR后电泳条带较用现有试剂盒提取的结果更加清晰，明亮，完整。

Description

一种宏基因组DNA的提取方法及其试剂盒

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种宏基因组DNA的提取方法及其试剂盒。

背景技术

宏基因组(the genomes of the total microbiota found in nature)是指生境中全部微生物基因的总和，它包含了可培养的和未培养的微生物的基因总和。人类生活在一个微生物的世界，作为一个完整的人体，真核细胞仅占细胞总数的10％，而90％是原核细胞，因此诺贝尔奖获得者Lederberg提出人体是由真核细胞与体内共生的原核细胞共同组成的“超级生物体(Super organism)”。

越来越多研究表明，人体的生理代谢和生长发育不仅受自身基因控制。有许多现象，例如对疾病的易感性、药物反应等，无法全部用人体基因的差异来解释。而体内菌群的组成和活动与人的生长发育、生老病死息息相关。因此，宏基因组研究已经成为目前微生物生态学和生物医学研究的新热点。

宏基因组学研究的对象是特定环境中的总DNA，因此，DNA的提取是宏基因组研究成功的关键步骤。提取步骤通常需要满足两个条件：既要尽可能提取样品所有微生物的基因，又要保持片段的完整和纯度。

目前所开发的DNA提取方法有两种：细胞提取法和直接裂解法。但这些常规提取细菌DNA的方法往往只能针对革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌中的一类，缺乏通用性，所得宏基因组DNA丰度欠佳。有些方法虽能更好的提取多种生物中的基因组DNA，但却存在操作繁琐、成本高、得率低的弊端。

因此，进一步开发宏基因组DNA的提取方法，提高提取丰度、片段完整性和纯度，并降低成本是十分必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种宏基因组DNA的提取方法及其试剂盒，本发明提供的方法和试剂盒能够提高丰度、片段完整性和纯度，且操作简单，成本较低。

本发明提供的基因组DNA的提取方法包括：取待测样品与裂解液混合后，经溶菌酶溶液处理、震荡破壁、蛋白酶K处理后，经NaCl处理、异丙醇处理、乙醇洗涤，即得；

溶菌酶溶液的pH值为8.0，其中包括：20mM Tris-Cl、2mM EDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100、溶菌酶20mg/mL。

溶菌酶的作用在于破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使微生物细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。

作为优选，溶菌酶溶液的配制方法为现用现配，预先配制溶菌酶缓冲液，用前加入溶菌酶粉末溶解，经超滤，低温离心机12000rpm离心20min，即得。

优选的，超滤采用100kDa超滤管。

优选的，溶菌酶缓冲液包括：20mM Tris-Cl、2mM EDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100。

裂解液的加入一方面可以破裂微生物的细胞，另一方面也阻止了菌类的增殖，本发明提供方法所采用的裂解液中包括：50mM Tris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mM NaCl、质量分数为1％的SDS，pH值为8.0。

作为优选，震荡破壁具体为：取玻璃珠与经溶菌酶溶液处理的样品混合，以组织细胞破碎仪震荡5min后，以涡旋振荡20min。

优选的，玻璃珠的直径为0.1mm、0.5mm和1.0mm，其中，直径0.1mm玻璃珠、直径0.5mm玻璃珠和直径1.0mm玻璃珠的体积比为1:1:1。

作为优选，待测样品与裂解液混合的体积比为1:1。

作为优选，溶菌酶溶液处理的温度为37℃，时间为30min。

作为优选，溶菌酶溶液与待测样品的体积比为9:50。

利用无菌的玻璃珠进行打击，充分的破裂细胞壁，保证细胞壁较厚的革兰氏阳性菌也能充分破裂。

作为优选，蛋白酶K处理的温度为53℃，时间为8h～12h。

优选的，蛋白酶K处理采用蛋白酶K溶液。其质量体积浓度为20mg/mL。

优选的，蛋白酶K处理具体为：经震荡破壁的样品加入1.5％倍体积的蛋白酶K溶液和7％～8％倍体积的SDS溶液，53℃孵育8h～12h后，95℃孵育10min。

作为优选，NaCl处理具体为：取经蛋白酶K处理的样品与1～3倍体积5mol/LNaCl混合，0℃孵育10min，经离心取上清液。

作为优选，异丙醇处理具体为：取经NaCl处理的上清液，与3～5倍体积异丙醇混合，18～30℃孵育10min，经离心取沉淀。

优选的，以本发明提供的方法提取唾液宏基因组DNA包括以下步骤：

步骤1：取唾液样品与裂解液以体积比为1:1混合后，加入溶菌酶溶液，37℃处理30min，制得第一细胞溶液，溶菌酶溶液加入量为待测样品体积的18％；

步骤2：以体积比为1:1:1取直径为0.1mm玻璃珠、0.5mm玻璃珠和1.0mm玻璃珠，与第一细胞溶液混合，以组织细胞破碎仪震荡5min后，以涡旋震荡20min，8000rpm离心5min取第一上清液；

步骤3：取第一上清液加入1.5％体积的蛋白酶K溶液和7％～8％倍体积的SDS溶液，53℃孵育8h～12h后，95℃孵育10min，制得第二细胞溶液；

步骤4：取第二细胞溶液，加入0.2倍体积的NaCl溶液，NaCl溶液的摩尔浓度为5mol/L，0℃孵育10min后，13000rpm离心10min，取第二上清液；

步骤5：取第二上清液，与60％～70％体积的异丙醇混合，18～30℃孵育10min后，13000rpm离心15min，取沉淀；

步骤6：取沉淀，以3～5倍体积的乙醇水溶液洗涤2次，晾干后用50μL TE缓冲液溶解，即得。

更优选的，唾液样品的取法具体为：

步骤1：唾液样品提供者在收集唾液前30分钟内无饮食，无咀嚼口香糖；

步骤2：唾液样品提供者用舌尖顶住上颚或按摩唾液样品提供者两侧颊部，保持2min后，将唾液含于口中，轻柔的刷洗两颊约10秒钟；

步骤3：取装有裂解液的离心管，唾液样品提供者低头，张口，使唾液自然沿下唇流出，收集唾液的体积与裂解液体积相等时，停止收集。

本发明提供的提取方法在提取唾液宏基因组DNA、细菌或真菌总DNA中的应用。

作为优选，细菌为大肠杆菌。

作为优选，真菌为枯草芽孢杆菌或细黄链霉菌。

本发明通过在提取前加入裂解液和溶菌酶，并调节提取条件，使微生物细胞壁更易破碎，DNA分子更多的溶出，从而保证了提取所得DNA的丰度、片段完整性和纯度，且操作简单，成本较低。

本发明还提供了一种提取唾液宏基因组DNA、细菌或真菌总DNA的试剂盒，包括：溶菌酶溶液；

溶菌酶溶液的pH值为8.0，其中包括：20mM Tris-Cl、2mM EDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100、溶菌酶20mg/mL。

作为优选，试剂盒中还包括：玻璃珠、裂解液和蛋白酶K；

裂解液的pH值为8.0，其中包括：50mM Tris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mM NaCl、质量分数为1％的SDS；

玻璃珠的直径为0.1mm、0.5mm和1.0mm；

优选的，试剂盒中还包括：质量分数为10％的SDS溶液、摩尔浓度为5M的NaCl溶液、异丙醇、TE缓冲液和体积分数为70％的乙醇水溶液。

更优选的，TE缓冲液的pH值为8.0，其中包括：10mMTris-HCl和1mMEDTA。

本发明提供的基因组DNA的提取方法包括：取待测样品与裂解液混合后，经溶菌酶溶液处理、震荡破壁、蛋白酶K处理后，经NaCl处理、异丙醇处理、乙醇洗涤，即得；本发明通过在提取前加入裂解液和溶菌酶，并调节提取条件，使微生物细胞壁更易破碎，DNA分子更多的溶出，从而保证了提取所得DNA的丰度、片段完整性和纯度，且操作简单，成本较低。本发明提供的试剂盒以本发明提供的方法为基础，操作简单，提取出的DNA丰度较高。

实验表明，采用本发明提供的方法提取唾液宏基因组DNA或对细菌、真菌的总DNA进行提取，与现有试剂盒相比，所得产物经PCR后电泳条带更加清晰，特别是对唾液样本的提取，所得产物经PCR后电泳条带较用现有试剂盒提取的结果更加清晰，明亮，完整。

附图说明

图1示实施例1～4及对比例1～4所提取的DNA的扩增产物电泳结果；

其中，泳道CK示未添加模板的PCR扩增产物电泳结果；

泳道M示DNA分子标准；

泳道1示以实施例1提取唾液宏基因组DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道2示以实施例2提取枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道3示以实施例3提取大肠杆菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道4示以实施例4提取细黄链霉菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道5示以对比例1提取唾液宏基因组DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道6示以对比例2提取枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道7示以对比例3提取大肠杆菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

泳道8示以对比例4提取细黄链霉菌总DNA为模板扩增产物电泳结果；

图2示本发明提供试剂盒提取唾液宏基因组DNA为模板扩增产物电泳结果，其中，

泳道M示DNA分子标准；

泳道1示以本发明提供试剂盒提取的唾液宏基因组DNA为模板扩增产物电泳结果。

具体实施方式

本发明提供了一种宏基因组DNA的提取方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明所用的试材皆为普通市售品，皆可由市场购得。

其中，蛋白酶K购自Sigma公司；

溶菌酶购自Sigma公司；

玻璃珠购自biospec公司；

组织细胞破碎仪购自next advance公司；

涡旋振荡器购自VORTEX-GENIE公司；

对照试验采用试剂盒购自天根；

化学试剂皆为国产分析纯；

下面结合实施例进一步阐述本发明。

实施例1唾液样品宏基因组DNA提取

试剂配制：

裂解液中包括：50mMTris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mMNacl、质量分数为1％的SDS，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶缓冲液中包括：20mMTris-Cl、2mMEDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶溶液的配制：使用前，在溶菌酶缓冲液中加入溶菌酶，至浓度为20mg/mL，混合溶解，用100kDa超滤管超滤，低温离心机12000rpm离心20min，即得。

取样：

1).确保标本提供者在收集唾液前30分钟内无饮食，无咀嚼口香糖。

2).用准备好的含有2mL裂解液的离心管，每次至吐出唾液时候才将盖子打开，吐完后立刻盖起。

3).收集唾液首先要刺激唾液分泌增多，如用舌尖顶住上颚，帮助提供者按摩两侧颊部，并嘱咐提供者勿将唾液吞入。约2分钟后口腔内大致有5毫升唾液。

4).嘱咐提供者将唾液含于口中，轻柔的刷洗两颊约10秒钟。

5).打开离心管瓶盖，低头，张口，使唾液自然沿下唇流出。

6).当离心管满4毫升时(即收集了大约2毫升的唾液时)，将盖子封紧。充分混匀(上下翻转8-10下)。

唾液样品宏基因组DNA的提取：

取收集的唾液样本3ml到15ml离心管，加入270μL溶菌酶溶液，混匀，置于37°水浴锅中孵育30min；

在有帽管中加入1/5左右的玻璃珠(直径0.1mm、0.5mm、1.0mm的玻璃珠等比例混匀)，加入孵育后的唾液样本，用组织细胞破碎仪振荡5min，涡旋振荡20min后，8000rpm离心5min上述液体，使玻璃珠沉淀，取上清液。

在上清液中加入45μL蛋白酶k(20mg/ml)，和225μl 10％SDS，充分混匀，置于53℃水浴锅孵育8～12h(中间隔一段时间最好振荡一次)；取过夜的样本于95℃水浴锅中孵育10min；

将孵育后的样品置于冰块上冷却，加入600μL5MNaCl，稍微混匀，冰上孵育10min，13000rpm离心10min，取上清；

将上清液转出到新的15mL离心管，加入2250μL 100％异丙醇，室温下孵育10min，同时柔和地上下颠倒管子，13000rpm离心15min，取沉淀；

用1500μL 70％乙醇洗涤沉淀2次，13000rpm离心5min，取沉淀在空气中晾干(用时5～10min)，用50μL TE缓冲液溶解沉淀，即得。

实施例2枯草芽孢杆菌总DNA提取

试剂配制：

裂解液中包括：50mMTris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mMNacl、质量分数为1％的SDS，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶缓冲液中包括：20mMTris-Cl、2mMEDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶溶液的配制：使用前，在溶菌酶缓冲液中加入溶菌酶，至浓度为20mg/mL，混合溶解，用100kDa超滤管超滤，低温离心机12000rpm离心20min，即得。

实验方法：

取枯草芽孢杆菌培养液1.5mL，与1.5mL裂解液混合后加入270μL溶菌酶溶液，混匀，置于37°水浴锅中孵育30min；

在有帽管中加入1/5左右的玻璃珠(直径0.1mm、0.5mm、1.0mm的玻璃珠等比例混匀)，加入孵育后的唾液样本，用组织细胞破碎仪振荡5min，涡旋振荡20min后，8000rpm离心5min上述液体，使玻璃珠沉淀，取上清液。

在上清液中加入45μL蛋白酶k(20mg/ml)，和225μl 10％SDS，充分混匀，置于53℃水浴锅孵育8～12h(中间隔一段时间最好振荡一次)；取过夜的样本于95℃水浴锅中孵育10min；

将孵育后的样品置于冰块上冷却，加入600μL5MNaCl，稍微混匀，冰上孵育10min，13000rpm离心10min，取上清；

将上清液转出到新的15mL离心管，加入2250μL 100％异丙醇，室温下孵育10min，同时柔和地上下颠倒管子，13000rpm离心15min，取沉淀；

用1500μL 70％乙醇洗涤沉淀2次，13000rpm离心5min，取沉淀在空气中晾干(用时5～10min)，用50μL TE缓冲液溶解沉淀，即得。

实施例3大肠杆菌DNA提取

试剂配制：

裂解液中包括：50mMTris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mMNacl、1％SDS，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶缓冲液中包括：20mMTris-Cl、2mMEDTA、1.2％Triton X-100，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶溶液的配制：使用前，在溶菌酶缓冲液中加入溶菌酶，至浓度为20mg/mL，混合溶解，用100kDa超滤管超滤，低温离心机12000rpm离心20min，即得。

实验方法：

取大肠杆菌培养液1.5mL，与1.5mL裂解液混合后加入270μL溶菌酶溶液，混匀，置于37°水浴锅中孵育30min；

在有帽管中加入1/5左右的玻璃珠(直径0.1mm、0.5mm、1.0mm的玻璃珠等比例混匀)，加入孵育后的唾液样本，用组织细胞破碎仪振荡5min，涡旋振荡20min后，8000rpm离心5min上述液体，使玻璃珠沉淀，取上清液。

在上清液中加入45μL蛋白酶k(20mg/ml)，和225μl 10％SDS，充分混匀，置于53℃水浴锅孵育8～12h(中间隔一段时间最好振荡一次)；取过夜的样本于95℃水浴锅中孵育10min；

将孵育后的样品置于冰块上冷却，加入600μL5MNaCl，稍微混匀，冰上孵育10min，13000rpm离心10min，取上清；

将上清液转出到新的15mL离心管，加入2250μL 100％异丙醇，室温下孵育10min，同时柔和地上下颠倒管子，13000rpm离心15min，取沉淀；

用1500μL 70％乙醇洗涤沉淀2次，13000rpm离心5min，取沉淀在空气中晾干(用时5～10min)，用50μL TE缓冲液溶解沉淀，即得。

实施例4细黄链霉菌总DNA提取

试剂配制：

裂解液中包括：50mMTris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mMNacl、1％SDS，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶缓冲液中包括：20mMTris-Cl、2mMEDTA、1.2％Triton X-100，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶溶液的配制：使用前，在溶菌酶缓冲液中加入溶菌酶，至浓度为20mg/mL，混合溶解，用100kDa超滤管超滤，低温离心机12000rpm离心20min，即得。

取细黄链霉菌培养液1.5mL，与1.5mL裂解液混合后加入270μL溶菌酶溶液，混匀，置于37°水浴锅中孵育30min；

在有帽管中加入1/5左右的玻璃珠(直径0.1mm、0.5mm、1.0mm的玻璃珠等比例混匀)，加入孵育后的唾液样本，用组织细胞破碎仪振荡5min，涡旋振荡20min后，8000rpm离心5min上述液体，使玻璃珠沉淀，取上清液。

在上清液中加入45μL蛋白酶k(20mg/ml)，和225μl 10％SDS，充分混匀，置于53℃水浴锅孵育8～12h(中间隔一段时间最好振荡一次)；取过夜的样本于95℃水浴锅中孵育10min；

将孵育后的样品置于冰块上冷却，加入600μL5MNaCl，稍微混匀，冰上孵育10min，13000rpm离心10min，取上清；

将上清液转出到新的15mL离心管，加入2250μL 100％异丙醇，室温下孵育10min，同时柔和地上下颠倒管子，13000rpm离心15min，取沉淀；

用1500μL 70％乙醇洗涤沉淀2次，13000rpm离心5min，取沉淀在空气中晾干(用时5～10min)，用50μL TE缓冲液溶解沉淀，即得。

对比例1采用现有试剂盒提取唾液样品宏基因组DNA

采用实施例1提供的取样方法进行取样，采用购自莱枫(lifefeng)试剂盒对唾液样品的宏基因组DNA进行提取。操作参照试剂盒说明书。

对比例2采用现有试剂盒提取枯草芽孢杆菌总DNA

采用购自天根的试剂盒对枯草芽孢杆菌的总DNA进行提取，操作参照试剂盒说明书。

对比例3采用现有试剂盒提取大肠杆菌DNA

采用购自天根的试剂盒对大肠杆菌的总DNA进行提取，操作参照试剂盒说明书。

对比例4采用现有试剂盒提取细黄链霉菌总DNA

采用购自天根的试剂盒对细黄链霉菌的总DNA进行提取，操作参照试剂盒说明书。

实施例5实施例1～4及对比例1～4提取的DNA质量鉴定

取实施例1～4及对比例1～4所提取的DNA为模板，以

16S rRNA_Primer_F：AGAGTTTGATCMTGGCTCAG和

16S rRNA_Primer_R：TACGGYTACCTTGTTACGACTT为引物，

进行PCR扩增；

扩增体系为：25μL体系，其中PCR Mix 12.5μL，Primer F 0.5μL(20μM),Primer R 0.5ul(20μM),DNA模板1μL，最终用双蒸水补齐到25μL。

扩增程序为：

取扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示。

由图可知，以本发明提供的方法提取唾液宏基因组DNA，经PCR扩增后，条带明亮清晰。如图所示，本发明提供的方法提取的DNA质量明显优于以现有试剂盒提取的DNA质量。并且，以本发明提供方法提取真菌或细菌中的DNA，经PCR扩增后也取得了良好的效果，DNA质量优于现有试剂盒提取效果。

实施例6本发明提供的试剂盒的制备

裂解液包括：50mMTris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mMNacl、1％SDS，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

溶菌酶缓冲液包括：20mMTris-Cl、2mMEDTA、1.2％Triton X-100，以双蒸水配制，调节pH 8.0。

TE缓冲液包括：10mMTris-HCl和1mM EDTA，以双蒸水配制，调节pH8.0。

取配置好的裂解液、溶菌酶缓冲液、溶菌酶、蛋白酶K、直径为0.1mm、0.5mm和1.0mm的玻璃珠、质量分数为10％的SDS溶液、摩尔浓度为5M的NaCl溶液、异丙醇、体积分数为70％的乙醇水溶液和TE缓冲液，包装即得。

实施例7本发明提供试剂盒的使用

使用本发明提供的试剂盒对目前公认难以提取的唾液宏基因组DNA进行提取，唾液的取样方法参照实施例1提供的取样方法。

取收集的唾液样本3ml到15ml离心管，加入270μL溶菌酶溶液，混匀，置于37°水浴锅中孵育30min；

在有帽管中加入1/5左右的玻璃珠(直径0.1mm、0.5mm、1.0mm的玻璃珠等比例混匀)，加入孵育后的唾液样本，用组织细胞破碎仪振荡5min，涡旋振荡20min后，8000rpm离心5min上述液体，使玻璃珠沉淀，取上清液。

在上清液中加入45μL蛋白酶k(20mg/ml)，和225μl 10％SDS，充分混匀，置于53℃水浴锅孵育8～12h(中间隔一段时间最好振荡一次)；取过夜的样本于95℃水浴锅中孵育10min；

将孵育后的样品置于冰块上冷却，加入600μL 5MNaCl，稍微混匀，冰上孵育10min，13000rpm离心10min，取上清；

将上清液转出到新的15mL离心管，加入2250μL 100％异丙醇，室温下孵育10min，同时柔和地上下颠倒管子，13000rpm离心15min，取沉淀；

用1500μL 70％乙醇洗涤沉淀2次，13000rpm离心5min，取沉淀在空气中晾干(用时5～10min)，用50μL TE缓冲液溶解沉淀，即得。

对所得DNA采用实施例5所述的引物和扩增体系及扩增程序进行扩增，结果如图2所示。扩增产物电泳结果显示条带明亮清晰。说明提取DNA的丰度较高；扩增条带无拖尾表明DNA的完整度和纯度较高。表明本发明提供的试剂盒提取的唾液宏基因组DNA质量很好，且操作简单。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括：将待测样品与裂解液混合，经溶菌酶溶液处理、震荡破壁、蛋白酶K处理后，经NaCl处理、异丙醇处理、乙醇洗涤，即得；

所述溶菌酶溶液的pH值为8.0，其中包括：20mM Tris-Cl、2mM EDTA、体积百分数为1.2％的Triton X-100、溶菌酶20mg/mL。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述震荡破壁具体为：取玻璃珠与经溶菌酶溶液处理的样品混合，以组织细胞破碎仪震荡5min后，涡旋震荡20min。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述玻璃珠的直径为0.1mm、0.5mm和1.0mm，其中，直径0.1mm玻璃珠、直径0.5mm玻璃珠和直径1.0mm玻璃珠的体积比为1:1:1。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述裂解液的pH值为8.0，其中包括：50mM Tris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mM NaCl、质量分数为1％的SDS。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述待测样品与裂解液的体积比为1:1。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述溶菌酶溶液处理的温度为37℃，时间为30min。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述蛋白酶K处理的温度为53℃，时间为8h～12h。

8.如权利要求1～7任一项所述的提取方法在提取唾液宏基因组DNA、细菌或真菌总DNA中的应用。

9.一种提取唾液宏基因组DNA、细菌或真菌总DNA的试剂盒，其特征在于，包括：溶菌酶溶液；

所述溶菌酶溶液的pH值为8.0，其中包括：20mM Tris-Cl、2mM EDTA、体积分数为1.2％的Triton X-100、溶菌酶20mg/mL。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括：玻璃珠、裂解液和蛋白酶K；

所述裂解液的pH值为8.0，其中包括：50mM Tris、50mM EDTA、50mM蔗糖、100mM NaCl、质量分数为1％的SDS；

所述玻璃珠的直径为0.1mm、0.5mm和1.0mm。

11.根据权利要求9或10所述的试剂盒，其特征在于，还包括：质量分数为10％的SDS溶液、摩尔浓度为5M的NaCl溶液、异丙醇、TE缓冲液和体积分数为70％的乙醇水溶液。