CN101372689A - 一种土壤微生物基因组dna提取方法 - Google Patents

一种土壤微生物基因组dna提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101372689A
CN101372689A CNA2007100125399A CN200710012539A CN101372689A CN 101372689 A CN101372689 A CN 101372689A CN A2007100125399 A CNA2007100125399 A CN A2007100125399A CN 200710012539 A CN200710012539 A CN 200710012539A CN 101372689 A CN101372689 A CN 101372689A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
soil
genome dna
volume
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2007100125399A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101372689B (zh
Inventor
苏振成
张惠文
李新宇
吴敏娜
张成刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Applied Ecology of CAS
Original Assignee
Institute of Applied Ecology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Applied Ecology of CAS filed Critical Institute of Applied Ecology of CAS
Priority to CN 200710012539 priority Critical patent/CN101372689B/zh
Publication of CN101372689A publication Critical patent/CN101372689A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101372689B publication Critical patent/CN101372689B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及分子生物学技术领域，具体的说是一种土壤微生物基因组DNA提取方法。具体将土壤样品与石英沙相混合放入提取缓冲液中，而后将离心管置于核酸提取仪内振荡40－60秒，或在涡旋混合器上振荡10－20分钟；加将50－100μl溶菌酶，30－40℃温浴30－60分钟后，再加入75－125μl SDS混匀，再在50－60℃温浴30－60分钟，离心得上清液；经进一步分离纯化，即得土壤微生物基因组DNA。采用本发明方法提取的土壤基因组DNA纯度高，OD260nm/OD280nm值可达1.6以上，产量可达100ug/ml，全程用时约10小时；整个过程中不需用纯化试剂盒进一步纯化，可以直接应用于PCR扩增，以所得DNA为模板，可以顺利扩增出目的产物。

Description

一种土壤微生物基因组DNA提取方法
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体的说是一种土壤微生物基因组DNA提取方法。
背景技术
土壤微生物是土壤生态系统中最具活力的组成部分，对维持土壤生态功能起重要作用。土壤微生物对土壤质量的变化非常敏感，因此，土壤微生物一直被认为是与土壤质量及可持续发展能力最为密切相关的生物学指标之一，为科学评价土壤质量变化、预测各种人类活动对土壤环境的破坏及其潜在风险提供依据.目前可在实验室培养的微生物还不到自然界中微生物总数的1％，还有相当多的菌种因为无法人工培养而未被人类所认识。分子生物学技术的引入，使研究土壤微生物生态降低了对培养技术的依赖性，而提取土壤DNA则成为开展土壤微生物分子生态学工作的前提。土壤成分复杂，含有大量的无机及有机化合物，存在着对某些酶反应的抑制剂，如腐殖酸、重金属离子等都会干扰提取反应的进行。且各种土壤类型组成不一，这些都为从土壤中有效提取高质量的DNA带来了困难。
分子生物学技术研究土壤微生物群落结构的实质是用土壤微生物DNA的不均一性来反映土壤微生物的种群结构特征。因此，获得高浓度、大片段、多样性程度高、具有代表性的土壤微生物总DNA是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础。由于土壤样品中含有较多的腐殖质酸和粘粒等抑制物质，这些物质可对内切酶消化、PCR扩增、杂交等后续操作产生强烈的影响，因而提取与纯化土壤微生物基因组总DNA在研究中尤为重要。
土壤微生物基因组DNA提取分为直接和间接提取两种方法。(1)间接法:从土壤中收集细胞，然后进行裂解得到DNA。此法分离得到的DNA纯度较高，但是由于微生物细胞与土壤粘附在一起，不容易分离，细胞收集过程中会丢失很多，所获得DNA量比较少。(2)直接法:通过各种手段使微生物细胞在土壤中裂解，然后抽提纯化直接得到总DNA。此法获得的DNA会受到胞外DNA以及土壤中腐殖质酸等物质的污染，纯度不及间接法高，但是可以得到较多的DNA。
土壤微生物分子生态学研究的基础是DNA的提取，只有提取到的DNA量大质纯，多样性程度高才能更全面真实地反映土壤中微生物的分布状态。
发明内容
本发明提供了一种提取纯度高不需要核酸吸附材料进一步纯化，可直接用于PCR扩增的土壤微生物基因组DNA提取方法。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为:
提取方法:1)初步裂解微生物细胞:取土壤样品与石英沙相混合放入含有850-1000μl提取缓冲液的离心管中，其中土样与石英沙重量比为1:0.5-1:2；而后将离心管置于核酸提取仪内振荡40-60秒，或在涡旋混合器上振荡10-20分钟；
2)进一步裂解微生物细胞:将50-100μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解液中混匀，在30-40℃温浴30-60分钟后，再加入75-125μl20％(w/v)的SDS，混匀，再在60-70℃温浴30-60分钟，10000-12000转/分钟离心10-20分钟，收集上清；
3)土壤微生物基因组DNA:将裂解后的缓冲液经分离纯化得粗提DNA溶液，而后将粗提液纯化，即得土壤微生物基因组DNA。
所述称取的待测土样重量为0.3-0.8g；提取缓冲液为:50-120mMTris-HCl(pH8.0)、50-120mM EDTA(pH8.0)和1.0-1.6M，NaCl。
所述提取缓冲液优选为:100mM Tris-HCl(pH8.0)，100mM EDTA(pH8.0)和1.5M NaCl。
所述细胞裂解液的纯化:步骤2)分离后的上清液内加入其0.1-0.3倍体积的5-10M KAc，冰浴20-60分钟后，12000-14000转/分钟离心10-20分钟，收集上清，而后在上清液中加入其0.3-0.7倍体积的20％-60％(w/v)聚乙二醇溶液和0.1-0.3倍体积的5M-15M NaCl溶液，混匀，室温放置30分钟，离心收集DNA沉淀，70％乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入500-700μlTE溶解，得到粗提DNA溶液，其中聚乙二醇分子量为6000-10000。
所得粗提DNA溶液用与其等体积的酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后再用与上层水相等体积的氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后加入0.1-0.2倍体积的3M NaAc溶液和0.6-1.0倍体积的异丙醇溶液，混匀后室温放置30-60分钟，离心收集DNA沉淀，70％(v/v)乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入30-50μTE溶解，得到DNA溶液；其中:酚、氯仿和异戊醇按体积份数比为25:24:1，氯仿和异戊醇按体积份数比为24:1。
本发明所具有的优点:
1.提取产物纯度高，本发明通过核酸提取仪或涡旋混合器振荡进行细胞破碎，并通过二次细胞裂解和二次纯化，得到高纯度基因组DNA可直接用于PCR的扩增。
2.提取成本低，本发明在提取土壤微生物基因组DNA的过程中，不需使用商品化的纯化试剂盒进行纯化，因而降低了成本。
3.适用范围广，可用于多种土壤、活性污泥以及水体沉淀物等样品中微生物基因组DNA的提取。
附图说明
图1为三种方法所得DNA电泳图谱；其中:1为本发明，2为利用美国Q-BIOGENE公司生产的FastDNA SPIN for soil KIT，3为周氏方法，M为Markerλ-Hind III，最大片段为23.13Kb。
图2为以三种方法提取DNA为摸板的PCR结果图，其中:1、2为本发明提取的基因组DNA，3、4为采用美国Q-BIOGENE公司生产的FastDNA SPIN forsoil KIT试剂盒提取的基因组DNA，5、6为周氏方法提取的基因组DNA，M为Marker DL2000。
图3为采用本发明提取4种土壤的基因组DNA电泳图谱；其中:1为水稻田土，2为旱田棕土，3为草垫土，4为旱田黑土，M为Marker λ-EcoT14。
具体实施方式
实施例1
以东北农田黑土为例(参见表2)，采用三种方法提取土壤微生物基因组DNA:
表2 供试土壤理化性质/g·kg-1
方法一是本发明提供的方法:
1)初步裂解微生物细胞:取0.5g土与0.5g石英沙放入1.5ml旋盖离心管，加入850μl提取缓冲液，用核酸提取仪(美国Q-biogene公司，型号FP220)振荡40S，震荡速度为5.5m/s。
2)进一步裂解微生物细胞:将50μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解的细胞液中混匀，37℃温浴30min后，再加入100μl20％(w/v)的SDS，混匀，再在65℃温浴30min，而后以12000转/分钟，室温离心5min，收集上清；
3)初步纯化裂解液:步骤2)分离后的上清液内加入其0.2倍体积的8M KAc，冰浴20min后，以14000转/分钟，10℃下离心20min，收集上清，而后在上清液中加入其0.5倍体积的20％(w/v)分子量为8000的聚乙二醇溶液和0.1倍体积的5M NaCl溶液，混匀，室温放置30min，以14000转/分钟，10℃下离心20min，收集DNA沉淀，而后用70％乙(v/v)醇洗涤沉淀2次，自然干燥后，加入500μl TE溶解，得到粗提DNA溶液，所述TE溶液为:10mM Tris和1mM EDTA，pH8.0；70％乙醇为4℃预冷；异丙醇为4℃预冷。
4)进一步纯化裂解液:将所得粗提DNA溶液用与其等体积的酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后再用与上层水相等体积的氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后加入上层水相0.1倍体积的3MNaAc溶液和0.6体积的倍异丙醇溶液，混匀后室温放置30min，以14000转/分钟，10℃下离心20min，收集DNA沉淀，70％(v/v)乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入50μl TE溶解，得到DNA溶液；其中:酚、氯仿和异戊醇按体积份数比为25:24:1，氯仿和异戊醇按体积份数比为24:1，所述TE溶液为:10mM Tris和1mM EDTA，pH8.0。
5)测定所得DNA溶液浓度及纯度，并用琼脂糖电泳检测目的DNA片段大小及纯度。琼脂糖凝胶浓度为0.6％，电压50V，电泳2小时，EB染色30分钟；检测提取核酸的浓度和纯度使用美国Bio-Rad公司生产的核酸-蛋白含量测定仪(SmartSpec Plus Spectrophotometer)。
方法二利用美国Q-BIOGENE公司生产的FastDNA SPIN for soil KIT进行提取(提取方法见使用说明书)
方法三周氏方法(Zhou JZ，Mary AB.Tied je JM.1996.DNA recoveryfrom soils of diversity composition.Appl Environ Microbiol。62(2):316-322)
表1.三种方法所得DNA浓度及纯度
 
方法一 方法二 方法三
DNA产量(μg/ml) 109.75 228.25 392.5
OD260nm/OD280nm 1.69 1.77 1.17
OD260nm/OD230nm 1.89 0.72 0.87
由表1可知，方法1所提取的土壤基因组DNA产量最少，但产物的纯度接近试剂盒所提取的结果，方法三提取的DNA产量最高，但其纯度最低，含有大量腐殖质等杂质，因而方法三提取产物必须经过核酸纯化试剂盒纯化后才能扩增出产物来。由图1可以看出，方法一的产物条带较为整齐，方法二的碎片段较多，方法三的产物杂质较多，三种方法均可得到大片段的基因组DNA。
实施例2
以实施例1三种方法所提取的基因组DNA为摸板，扩增16S rRNA基因部分片段，PCR扩增引物为27F:5′-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′519R:5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3′，在前引物5′端加上一个GC夹:5′-cgcccgccgcgcgcggcgggcggggcgggggcccggggg-3′。PCR反应体系为:buffer溶液为:100mM Tris、100mM EDTA和1.5M NaCl，pH8.0；MgCl2反应终浓度2.0mM；dNTP反应终浓度0.2mM；前引物P1反应终浓度0.5μM；后引物P2反应终浓度0.5μM；Taq酶(Takara公司)1U；反应模板1μl；反应体系总量25μL。
PCR反应条件:预变性:94℃，5min；变性:94℃，10s，退火:63℃，30s，10次循环，每次循环退火温度下降1℃。延伸:68℃，2min；变性:94℃，2min，退火:53℃，30s，25次循环；延伸:68℃，2min；末次延伸:68℃，10min。(参见图2)
由图2所知直接以方法三提取的土壤基因组DNA进行扩增没有得到产物，采用试剂盒(Promega Wizard DNA Clean-Up)纯化后再进行扩增得到了目的产物。方法一和方法二所获得DNA直接扩增出目的产物，说明方法一的提取产物不需要进一步纯化，可以直接用于PCR扩增。
实施例3
采用本发明的方法同时提取四种土壤:水稻田土、旱田棕土、草垫土、旱田黑土，前三种土壤样品采至中科院沈阳生态所沈阳生态站，黑土采至中科院黑龙江海伦农业生态实验站。提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳，胶浓度为6％，电压50V，电泳2小时，同时检测提取核酸的浓度和纯度(参见表4)。
表4.四种土壤基因组DNA提取结果
 
样品 水稻田土 旱田棕土 草垫土 旱田黑土
DNA产量(μg/ml) 107.5 84.2 62.5 150.1
OD260nm/OD280nm 1.84 1.88 1.99 1.78
OD260nm/OD230nm 1.78 1.73 2.03 1.70
由提取结果说明本发明提供的方法完全适合于四种土壤的基因组DNA提取，提取产量在60μg/ml以上，OD260nm/OD280nm在1.78-1.99之间，D260nm/OD230nm介于1.70-2.03，说明提取结果纯度较高。电泳结果(参见图3)说明所提取的DNA条带较为整齐，且碎片段较少。
实施例4
与实施例1不同之处在于:
提取方法:1)初步裂解微生物细胞:取0.3g土壤样品与0.15g石英沙相混合放入含有1000μl提取缓冲液的离心管中，而后将离心管置于在涡旋混合器上振荡10分钟；提取缓冲液为:50mM Tris-HCl(pH8.0)、120mMEDTA(pH8.0)和1.0M，NaCl。
2)进一步裂解微生物细胞:将100μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解液中混匀，在30℃温浴60分钟后，再加入75μl20％(w/v)的SDS，混匀，再在70℃温浴60分钟，10000转/分钟离心20分钟，收集上清；
3)初步纯化裂解液:步骤2)分离后的上清液内加入其0.3倍体积的5M KAc，冰浴60分钟后，12000转/分钟离心20分钟，收集上清，而后在上清液中加入其0.7倍体积的60％(w/v)聚乙二醇溶液和0.3倍体积的15MNaCl溶液，混匀，室温放置30分钟，离心收集DNA沉淀，70％乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入700μl TE溶解，得到粗提DNA溶液，其中聚乙二醇分子量为10000。
4)进一步纯化裂解液:所得粗提DNA溶液用与其等体积的酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后再用与上层水相等体积的氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后加入0.2倍体积的3M NaAc溶液和1.0倍体积的异丙醇溶液，混匀后室温放置60分钟，离心收集DNA沉淀，70％(v/v)乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入30μTE溶解，得到DNA溶液；其中:酚、氯仿和异戊醇按体积份数比为25:24:1，氯仿和异戊醇按体积份数比为24:1。
实施例5
与实施例1不同之处在于:
1)初步裂解微生物细胞:取0.8g土壤样品与1.6g石英沙相混合放入含有900μl提取缓冲液的离心管中，而后将离心管置于核酸提取仪内振荡60秒；提取缓冲液为:120mM Tris-HCl(pH8.0)、50mM EDTA(pH8.0)和1.6M NaCl。
2)进一步裂解微生物细胞:将80μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解液中混匀，在30℃温浴40分钟后，再加入125μl20％(w/v)的SDS，混匀，再在60℃温浴50分钟，11000转/分钟离心10分钟，收集上清；
3)初步纯化裂解液:步骤2)分离后的上清液内加入其0.3倍体积的10M KAc，冰浴40分钟后，13000转/分钟离心15分钟，收集上清，而后在上清液中加入其0.3倍体积的40％(w/v)聚乙二醇溶液和0.2倍体积的10MNaCl溶液，混匀，室温放置30分钟，离心收集DNA沉淀，70％乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入600μl TE溶解，得到粗提DNA溶液，其中聚乙二醇分子量为6000。

Claims (5)

1.一种土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于按如下步骤操作：
1)初步裂解微生物细胞：取土壤样品与石英沙相混合放入含有850-1000μl提取缓冲液的离心管中，其中土样与石英沙重量比为1:0.5-2；而后将离心管置于核酸提取仪内振荡40-60秒，或在涡旋混合器上振荡10-20分钟；
2)进一步裂解微生物细胞：将50-100μl浓度为100mg/ml的溶菌酶加入初步裂解液中混匀，在30-40℃温浴30-60分钟后，再加入75-125μl 20％(w/v)的SDS，混匀，再在60-70℃温浴30-60分钟，10000-12000转/分钟离心10-20分钟，收集上清；
3)土壤微生物基因组DNA：将裂解后的缓冲液经分离纯化得粗提DNA溶液，而后将粗提液纯化，即得土壤微生物基因组DNA。
2.按权利要求1所述的土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于：所述称取的待测土样重量为0.3-0.8g；提取缓冲液为：50-120mM Tris-HCl、50-120mM EDTA和1.0-1.6M，NaCl。
3.按权利要求1所述的土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于：所述提取缓冲液优选为：100mM Tris-HCl，100mM EDTA和1.5M NaCl。
4.按权利要求1所述的土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于：所述细胞裂解液的纯化：步骤2)分离后的上清液内加入其0.1-0.3倍体积的5-10M KAc，冰浴20-60分钟后，12000-14000转/分钟离心10-20分钟，收集上清，而后在上清液中加入其0.3-0.7倍体积的20％-60％(w/v)聚乙二醇溶液和0.1-0.3倍体积的5M-15M NaCl溶液，混匀，室温放置30分钟，离心收集DNA沉淀，70％(v/v)乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入500-700μlTE溶解，得到粗提DNA溶液，其中聚乙二醇分子量为6000-10000。
5.按权利要求1或4所述的土壤微生物基因组DNA提取方法，其特征在于：所得粗提DNA溶液用与其等体积的酚、氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后再用与上层水相等体积的氯仿和异戊醇的混合液抽提，取上层水相；而后加入0.1-0.2倍体积的3M NaAc溶液和0.6-1.0倍体积的异丙醇溶液，混匀后室温放置30-60分钟，离心收集DNA沉淀，70％(v/v)乙醇洗涤沉淀，自然干燥后，加入30-50μTE溶解，得到DNA溶液；其中：酚、氯仿和异戊醇按体积份数比为25:24:1，氯仿和异戊醇按体积份数比为24:1。
CN 200710012539 2007-08-22 2007-08-22 一种土壤微生物基因组dna提取方法 Expired - Fee Related CN101372689B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200710012539 CN101372689B (zh) 2007-08-22 2007-08-22 一种土壤微生物基因组dna提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 200710012539 CN101372689B (zh) 2007-08-22 2007-08-22 一种土壤微生物基因组dna提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101372689A true CN101372689A (zh) 2009-02-25
CN101372689B CN101372689B (zh) 2012-07-04

Family

ID=40447066

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 200710012539 Expired - Fee Related CN101372689B (zh) 2007-08-22 2007-08-22 一种土壤微生物基因组dna提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101372689B (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101935647A (zh) * 2010-09-13 2011-01-05 原平皓(天津)生物技术有限公司 一种提取微生物dna的试剂盒及其方法
CN102031252A (zh) * 2010-11-09 2011-04-27 盎亿泰地质微生物技术（北京）有限公司 一种快速提取土壤总dna的方法
CN102140451A (zh) * 2010-12-09 2011-08-03 中国农业大学 一种提取dna和rna的方法
CN102260666A (zh) * 2010-05-24 2011-11-30 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种池塘底泥样品高纯度总dna的提取方法
CN101709298B (zh) * 2009-12-14 2012-05-02 上海市农业科学院 一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤dna提取方法
CN104560951A (zh) * 2014-12-03 2015-04-29 复旦大学泰州健康科学研究院 一种宏基因组dna的提取方法及其试剂盒
CN107418952A (zh) * 2017-09-11 2017-12-01 广东美格基因科技有限公司 一种土壤微生物宏基因组dna的提取方法及相应的试剂盒
CN112921031A (zh) * 2021-04-20 2021-06-08 深圳职业技术学院 一种土壤微生物总dna高效提取方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100410377C (zh) * 2006-08-29 2008-08-13 中国科学院南海海洋研究所 从土壤中提取微生物基因组dna的试剂盒及方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101709298B (zh) * 2009-12-14 2012-05-02 上海市农业科学院 一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤dna提取方法
CN102260666A (zh) * 2010-05-24 2011-11-30 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种池塘底泥样品高纯度总dna的提取方法
CN101935647A (zh) * 2010-09-13 2011-01-05 原平皓(天津)生物技术有限公司 一种提取微生物dna的试剂盒及其方法
CN101935647B (zh) * 2010-09-13 2012-07-25 原平皓(天津)生物技术有限公司 一种提取微生物dna的试剂盒及其方法
CN102031252A (zh) * 2010-11-09 2011-04-27 盎亿泰地质微生物技术（北京）有限公司 一种快速提取土壤总dna的方法
CN102140451A (zh) * 2010-12-09 2011-08-03 中国农业大学 一种提取dna和rna的方法
CN104560951A (zh) * 2014-12-03 2015-04-29 复旦大学泰州健康科学研究院 一种宏基因组dna的提取方法及其试剂盒
CN107418952A (zh) * 2017-09-11 2017-12-01 广东美格基因科技有限公司 一种土壤微生物宏基因组dna的提取方法及相应的试剂盒
CN112921031A (zh) * 2021-04-20 2021-06-08 深圳职业技术学院 一种土壤微生物总dna高效提取方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101372689B (zh) 2012-07-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101372689B (zh) 一种土壤微生物基因组dna提取方法
Chachkhiani et al. 16S rDNA characterisation of bacterial and archaeal communities during start-up of anaerobic thermophilic digestion of cattle manure
Nakasaki et al. Comparison of organic matter degradation and microbial community during thermophilic composting of two different types of anaerobic sludge
Cherif et al. Effects of municipal solid waste compost, farmyard manure and chemical fertilizers on wheat growth, soil composition and soil bacterial characteristics under Tunisian arid climate
CN101475987B (zh) 废水生物处理反应器中微生物群落组成的快速分子检测方法
CN101307311A (zh) 一种猪粪样总dna的提取方法
Hong et al. Comparison of CE-SSCP and DGGE for monitoring a complex microbial community remediating mine drainage
CN101696410B (zh) 一种适用于底泥中微生物群落结构分析的dna提取方法
CN101709298B (zh) 一种用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤dna提取方法
CN101712953B (zh) 用于评价动物肠道微生物群落多样性的dna提取方法
CN102978198A (zh) 用于评价动物肠道微生物群落多样性的微生物基因组dna间接提取方法
CN102851277B (zh) 一种简单快速的肉鸭粪样总dna提取方法
de los Reyes III et al. Microbial community structures in foaming and nonfoaming full‐scale wastewater treatment plants
Staley et al. Critical evaluation of solid waste sample processing for DNA-based microbial community analysis
CN101717771B (zh) 用于评价植物根系微生物群落多样性的土壤dna间接提取方法
CN102220309A (zh) 一种厌氧反应器中活性污泥dna的提取方法
JP4947672B2 (ja) 新規微生物及びそれを用いた堆肥の製造方法
CN108315471A (zh) 鉴定根肿病菌4号生理小种的特异基因、特异性引物、含有所述引物的试剂盒及其应用
Dong et al. Evaluation of several DNA extraction methods for obtaining total community DNA from anaerobic digestion sludge
CN103421697B (zh) 一株降解金霉素的米曲霉lj366
CN102260666A (zh) 一种池塘底泥样品高纯度总dna的提取方法
CN103045585B (zh) 一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总dna提取方法
CN114507620B (zh) 一株樊庆笙氏红球菌及其获取方法与应用
Zhong et al. Succession of microbial community in organic waste digestion using simulated intestinal system
Mokni-Tlili et al. Study of the effects of urban organic residues on the distribution of culturable actinomycetes in a Tunisian agricultural soil

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20120704

Termination date: 20140822

EXPY Termination of patent right or utility model