CN107058288A - 一种快速提取病毒rna的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明属于分子生物学检测领域，公开了一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris‑HCl；利用该试剂盒，只需一步操作即可使流感病毒的核酸释放出来，后续的物质可以用于荧光PCR的检测。

Description

一种快速提取病毒RNA的试剂盒
技术领域
本发明涉及分子生物学检测技术领域，更具体地，涉及一种快速提取病毒RNA的试剂盒。
背景技术
核酸提取是核酸检测整个技术流程的第一步，也是分子生物学中最关键的方法之一。它是下游核酸检测和科学研究的基础，抽提的核酸的质量及其完整性会直接影响临床研究或诊断的结果。一般的核酸提取过程包括两大步骤：样品的裂解和纯化。裂解指使样品中的核酸释放到反应体系中，纯化则是指使核酸与反应体系中的其它成分，如蛋白质、盐类以及其他杂质彻底地分离。常用的RNA的提取方法有TRIZOL法、异硫氰酸胍法、CTAB-LiCl法及国内外各生物公司的总RNA提取试剂盒等。RNA提取的经典方法是TRIZOL法，它是一种基于异硫氰酸肌/苯酚/氯仿抽提原理的方法，该法适用范围广，动植物都适用，提取的RNA基本无基因组DNA的污染，但是该法操作步骤繁琐，提取试剂中使用了苯酚、氯仿等有毒试剂，而且该法不适用于富含多糖多酚材料RNA的提取。CTAB-LiCl法常被用来提取植物组织RNA的提取，但是由于CTAB木身是一个与SDS功能相类似的试剂，尽管它可和RNA以及DNA形成不溶的复合物，但CTAB法通常要结合其它操作，如再经LiCl沉淀等步骤，使得该法操作繁琐，并且在抽提时使用有毒试剂氯仿。传统的提取试剂由于提取得率相对较低，且步骤较为繁杂，给提取工作带来一定影响，因此难以得到合格的RNA样品。
磁珠法是近几年才发展起来的核酸提取方法。磁珠的直径几十纳米至数微米，在磁场下表现出磁性，由无机/有机或者无机/无机材料组成的外形呈现为球状的复合粒子。磁珠法提取核酸不需要苯酚和氯仿等毒性大的有机溶剂，提取的核酸纯度高、产量大。专利号为201010281633.6、201510023368.4的专利公开了提取病毒DNA/RNA的方法，但这些试剂组成比较复杂，提取步骤比较复杂，提纯周期长，不利于客户快速提取纯化RNA。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种快速提取病毒RNA的试剂盒。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris-HCl。
本发明试剂盒的工作原理：样本在病毒裂解结合液的作用下，可以使病毒的结构发生改变，使病毒RNA释放出来。因此所述病毒裂解结合液不含抑制PCR反应的成分，所以产物可直接用于后续的PCR检测。
优选地，所述聚醚醇的浓度为10～14%（V/V）。
优选地，所述病毒裂解结合液的pH为6.5～7.5。
优选地，所述蔗糖的浓度为20～50mM，Tris-HCl的浓度为10～50mM。
作为一种具体的实施方式，所述病毒解裂结合液的组成为：20～50mM蔗糖，10～50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl），10～14%（V/V）聚醚醇，溶剂为高压灭菌水（pH值为6.5～7.5）。
本发明还提供一种利用所述RNA试剂盒进行核酸快速提取检测的方法，是将样本于病毒裂解结合液混合，震荡室温静置5～10min后，取混合液进行PCR反应。
优选地，样本和病毒裂解结合液的混合体积比为1～1.5：1。
优选地，混合液在PCR反应体系中的体积不超过25%。
作为一种具体的实施方式，本发明所述利用RNA试剂盒进行核酸快速提取检测的方法是：将200μl新鲜样本于200μl病毒裂解混合液震荡混合均匀后，室温静置5～10min，取5～10μl混合液进行PCR反应检测核酸。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris-HCl；利用该试剂盒，只需一步操作即可使流感病毒的核酸释放出来，后续的物质可以用于荧光PCR的检测。
附图说明
图1为实施例1所述荧光PCR检测结果；图中的1-5分别对应着相应的样本编号，本发明的检测结果为蓝色箭头所指，其他的为对照试剂结果。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员熟悉的意义相同。
实施例1
其中病毒裂解结合液终浓度组成为：20mM蔗糖，10mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl），14%（V/V）聚醚醇，溶剂为高压灭菌水，病毒裂解结合液的pH值为7.0，利用该病毒裂解结合液进行核酸检测的方法：取一无RNase的1.5ml的离心管，在管内先加入200μl病毒裂解结合液，然后再加入200μl新鲜流感样本，震荡混合均匀室温静置5min中。
对照试剂选用QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的样本量为200µl，洗脱体积为100µl。
提取完成后，取上述核酸RNA提取液5µl作为模板，应用达安基因的甲型流感病毒核酸检测试剂盒（一步PCR荧光法）进行检测，检测结果见下表1和附图1。
表1 不同样本CT值比较
样本编号 本发明检测结果（CT值） Qiagen试剂检测结果（CT值）
1 31.47 31.73
2 32.32 33.13
3 32.88 31.86
4 26.74 27.31
5 32.92 32.23
结果表明，市面上提取1个流感病毒RNA的核酸提取试剂提取时间为30～40分钟。本发明仅用5分钟即可完成流感样本的核酸提取，并且本发明的流感核酸提取效率与现有的核酸提取试剂的提取效率处于同一水平，因此，本发明在快速核酸提取应用方面具有明显优势。
实施例2
实验方法同实施例1，唯一不同的是，病毒裂解结合液终浓度组成为：30mM蔗糖，30mMTris-HCl，12%（V/V）聚醚醇，溶剂为高压灭菌水，病毒裂解结合液的pH值为6.5。
实施例3
实验方法同实施例1，唯一不同的是，病毒裂解结合液终浓度组成为：50mM蔗糖，50mMTris-HCl，10%（V/V）聚醚醇，溶剂为高压灭菌水，病毒裂解结合液的pH值为7.5。

Claims (7)

1.一种快速提取流感病毒RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含病毒裂解结合液，所述病毒裂解结合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris-HCl。
2.根据权利要求1所述的快速提取流感病毒RNA的试剂盒，其特征在于，所述聚醚醇的浓度为10～14%。
3.根据权利要求1所述的快速提取流感病毒RNA的试剂盒，其特征在于，所述病毒裂解结合液的pH为6.5～7.5。
4.根据权利要求3所述的快速提取流感病毒RNA的试剂盒，其特征在于，所述蔗糖的浓度为20～50mM，Tris-HCl的浓度为10～50mM。
5.一种利用权利要求1至4任一项所述RNA试剂盒进行核酸快速提取检测的方法，其特征在于，是将样本于病毒裂解结合液混合，震荡室温静置5～10min后，取混合液进行PCR反应。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，样本和病毒裂解结合液的混合体积比为1～1.5：1。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，混合液在PCR反应体系中的体积不超过25%。
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