CN104548061A - 对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物及其制备方法，所述组合物由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，按其重量份数计玉米低聚肽粉1-5份、葛根提取物0.5-3.5份、枳椇子提取物0.5-3.5份、枸杞提取物0.2-1.6份、党参提取物0.1-0.3份、百合提取物0.5-1份、败酱草提取物1-1.5份、乌梅提取物0.5-1份和甘草提取物0.8-1.2份，通过混合方法获得，对急、慢性化学性肝损伤均能发挥显著功效。

Description

对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药颗粒剂及其制备方法，尤其是一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物及其制备方法。

背景技术

在各种聚会、节假日聚餐、商务宴请等等社交场合中举杯觥筹交错应酬总少不了，而饮酒轻者伤肝害胃，重者造成酒精中毒，引起脑力衰竭、精神障碍和器官损伤，都对身体造成急性或慢性伤害。因此，解酒保肝也就成为一种社会化的需要，为了减轻酒精对身体的伤害，快些醒酒，解酒类产品就成了广大人士的秘密武器。化学药品和中药制剂，在解酒的同时，会对肝脏、肾脏造成代谢负担而产生不同程度的伤害。酒后最好的办法是食解--即食物、食品解酒。因此，通过对天然食材和药食同源的中药材进行合理组方，研究出保肝护肝的日常保健品将具有非常重要的应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，按其重量份数计玉米低聚肽粉1-5份、葛根提取物0.5-3.5份、枳椇子提取物0.5-3.5份、枸杞提取物0.2-1.6份、党参提取物0.1-0.3份、百合提取物0.5-1份、败酱草提取物1-1.5份、乌梅提取物0.5-1份和甘草提取物0.8-1.2份。

优选的，上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，按其重量份数计玉米低聚肽粉1.5-4.5份、葛根提取物0.8-3份、枳椇子提取物0.8-3份、枸杞提取物0.5-1.0份、党参提取物0.2-0.3份、百合提取物0.6-0.8份、败酱草提取物1.2-1.4份、乌梅提取物0.6-0.9份和甘草提取物1.0-1.2份。

优选的，上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，按其重量份数计玉米低聚肽粉2.4份、葛根提取物1.2份、枳椇子提取物1.2.份、枸杞提取物0.7份、党参提取物0.2份、百合提取物0.7份、败酱草提取物1.3份、乌梅提取物0.7份和甘草提取物1.1份。

优选的，上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，所述葛根提取物为乙醇回流提取物，枳椇子提取物为水煎煮提取物，枸杞提取物为乙醇回流提取物，党参提取物为甲醇热回流提取物，百合提取物为醇提—正丁醇萃取提取物，败酱草提取物为乙醇提取物，乌梅提取物为乙醇提取物，甘草提取物乙醇回流提取物。

优选的，上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，还可以根据实际需要加入功能甜味剂、高倍甜味剂和/或食用胶，其中，所述功能甜味剂是麦芽糖醇、赤藓糖醇、低聚麦芽糖醇、聚葡萄糖中的一种或几种；所述高倍甜味剂是三氯蔗糖、安赛蜜、甜菊糖苷中的一种或两种；所述食用胶是结冷胶、卡拉胶、黄原胶、瓜尔豆胶中的一种或几种，添加量在上述组方的基础上按其重量份数计功能甜味剂1-20份、高倍甜味剂0.01-0.12、食用胶0.01-0.1份。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

优选的，上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，可在步骤(2)混合均匀的原料中根据需要加入组方量的功能甜味剂、高倍甜味剂和/或食用胶。

本发明的有益效果是：

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，将传统中药合理组方，相互协同增效，与玉米低聚肽粉配合，通过提高肝脏乙醇脱氢酶活性,增强乙醇的生物转化，从乙醇的吸收、代谢、排泄三个环节发挥协同解酒作用，抑制酒精吸收，促进肝脏解毒，对急、慢性化学性肝损伤均能发挥显著功效，服用安全，副作用少；其制备方法简单，适合规模化工业生产的需要。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。

实施例1

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，其中，玉米低聚肽粉2.4kg、葛根提取物1.2kg、枳椇子提取物1.2.kg、枸杞提取物0.7kg、党参提取物0.2kg、百合提取物0.7kg、败酱草提取物1.3kg、乌梅提取物0.7kg和甘草提取物1.1kg。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

实施例2

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，其中，玉米低聚肽粉4.5kg、葛根提取物0.8kg、枳椇子提取物3kg、枸杞提取物1.0kg、党参提取物0.2kg、百合提取物0.6kg、败酱草提取物1.4kg、乌梅提取物0.9kg和甘草提取物1.0kg。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

实施例3

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，其中，玉米低聚肽粉1.5kg、葛根提取物3kg、枳椇子提取物0.8kg、枸杞提取物0.5-kg、党参提取物0.3kg、百合提取物0.8kg、败酱草提取物1.2kg、乌梅提取物0.6kg和甘草提取物1.2kg。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

实施例4

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，其中，玉米低聚肽粉1kg、葛根提取物3.5kg、枳椇子提取物0.5kg、枸杞提取物1.6kg、党参提取物0.3kg、百合提取物0.5kg、败酱草提取物1kg、乌梅提取物1kg和甘草提取物0.8kg。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

实施例5

一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，其中，玉米低聚肽粉5kg、葛根提取物0.5kg、枳椇子提取物3.5kg、枸杞提取物0.2kg、党参提取物0.1kg、百合提取物1kg、败酱草提取物1.5kg、乌梅提取物0.5kg和甘草提取物1.2kg。

上述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

实施例1-5之一所述各组分均为市售产品，将各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的重量份数关系均属于本发明的保护范围。其中，所述葛根提取物为乙醇回流提取物，枳椇子提取物为水煎煮提取物，枸杞提取物为乙醇回流提取物，党参提取物为甲醇热回流提取物，百合提取物为醇提—正丁醇萃取提取物，败酱草提取物为乙醇提取物，乌梅提取物为乙醇提取物，甘草提取物乙醇回流提取物，购自西安三江生物工程有限公司；所述玉米低聚肽粉购自武汉天天好生物制品有限公司(申请号2007100527772，申请号02115912.2)。

本发明所述组合物的组方原理是：方中米低聚肽粉为应用现代生物科技生产出的生物活性肽产品，是从天然食物中经提取、酶解得的天然食品原料，具有促进肝脏的解毒功能，减少有毒有害物质对肝脏的损害，并有抑制酒精吸收，醒酒之功效；通过葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物的共同使用，相互协同作用，提高肝脏乙醇脱氢酶活性,增强乙醇的生物转化；多种物质联合应用可从乙醇的吸收、代谢、排泄三个环节发挥协同解酒作用,对急、慢性化学性肝损伤均能发挥解酒、护肝作用且功效显著。

试验例1(服用效果试验)：

1材料和方法

1.1样品：实施例1所述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物。人体推荐用量为每人(成人)每日2次，每次成人体重按60kg计算，折合剂量为1.7mg/kg BW。以送检的5倍样品浓缩液进行实验，样品浓缩液置冰箱保存。

1.2实验动物及环境：选用广西医科大学实验动物中心繁殖的SPF级SD种雄性大鼠50只，体重199.9±12.2g，实验动物生产许可证号：SCXK(桂)2009-0002，实验动物质量合格证号：0006691。动物实验室为屏障系统，使用许可证号：SYXK(桂)2011-0005。动物实验室温度：22～25℃，相对湿度：55～70％。

1.3剂量选择与受试物给予方式：根据样品的人体推荐用量，设8.5、17、34mg/kg BW 3个剂量组(分别相当于推荐量的5、10、20倍)，另设一个酒精肝损伤模型组(模型对照组)和一个阴性对照组。每组10只动物。量取5倍样品加纯水至200mL，配成68％浓度作为高剂量组溶液，再用纯水依次将该溶液对倍稀释成34％、17％浓度作为中、低剂量组溶液，分别给予相应剂量组动物灌胃，灌胃量为1.0mL/100gBW，模型对照组和阴性对照组给予等体积纯水，每天灌胃一次，连续30天。

1.4主要仪器与试剂

仪器：半自动生化分析仪、冷冻切片机、电子分析天平、显微镜、离心机、组织匀浆器、旋涡混匀器、水浴锅及微量加样器等。

试剂：MDA试剂盒、GSH试剂盒和TG试剂盒。

1.5实验方法：依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中对化学性肝损伤有辅助保护作用实验方法，采用酒精肝损伤模型方案。大鼠在SPF级动物实验室内饲养观察5天后，根据体重分层随机分为5组，即3个剂量组和2个对照组，每组10只雄性大鼠。开始实验后，各剂量组大鼠灌胃给予相应浓度的受试溶液,模型对照组和阴性对照组给予纯水，灌胃量为1.0mL/100gBW。每天灌胃一次，每周称重两次，连续30天。实验至第30天时，模型对照组及样品各剂量组动物一次灌胃给予50％乙醇溶液1.2mL/100g BW，制造肝损伤模型；阴性对照组灌给等体积的纯水。禁食16小时后处死大鼠，快速取出肝脏，其中一部分(左叶)用作冷冻切片，进行病理组织学检查,观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积并进行评分；另一部分用于制成肝匀浆分别测定丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及甘油三酯(TG)含量。

1.6实验数据处理：采用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。

1.7结果判定：满足以下任一条件，可判定受试样品具有对化学性肝损伤有辅助保护作用。

17.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标阳性。

1.7.2肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。

2.实验结果

2.1样品对大鼠体重的影响

从表Ⅰ可见，实验前各组大鼠体重一致，实验过程各周各组大鼠的体重及实验结束时的增重量相互比较，差异均没有显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的体重增长没有明显影响。

表Ⅰ 实验前后各组大鼠体重变化

注：表中各组间比较差异均无显著性(P>0.05)。

2.2样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量的影响

从表Ⅱ可见，肝损模型对照组大鼠肝组织的MDA含量明显高于阴性对照组，且两者的差异具有非常显著性(P<0.01)，说明肝损模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织MDA含量均低于肝损模型对照组，且高、中剂量组与模型对照组的差异有非常显著性(P<0.01)，表明该样品具有降低酒精性损伤的大鼠肝组织中过氧化脂质含量的作用。

表Ⅱ 各组大鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)含量

2.3样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织甘油三酯(TG)含量的影响

从表Ⅲ可见，肝损模型对照组的肝组织TG含量明显高于阴性对照组，两者差异具有非常显著性(P<0.01)，说明肝损模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织TG含量均低于肝损模型对照组，且高、中剂量组与肝损模型对照组的差异具有显著性(分别P<0.01和P<0.05)，表明该样品具有降低酒精性损伤的大鼠肝组织中甘油三脂(TG)含量的作用。

表Ⅲ 各组大鼠肝组织匀浆TG含量

2.4样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响

从表Ⅳ可见，肝损模型对照组的肝组织中GSH含量显著低于阴性对照组，两者差异有非常显著性(P<0.01)，表明肝损模型成立。样品各剂量组大鼠的肝组织GSH含量高于模型对照组，且各剂量组与肝损模型对照组的差异均具有显著性(P<0.01或P<0.05)，表明该样品具有提高酒精性肝损伤的大鼠肝组织中GSH含量的作用。

表Ⅳ 各组大鼠肝组织匀浆GSH含量

2.5样品对酒精性肝损伤大鼠的肝组织脂肪变性的影响

从表Ⅴ可见，肝损模型对照组大鼠的肝组织脂肪变性评分值高于阴性对照组，两者差异具有非常显著性(P<0.01)，表明肝损模型成立。样品各剂量组大鼠肝组织脂肪变性评分值均低于肝损模型对照组，但各剂量组与肝损模型对照组的差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对酒精性肝损伤的大鼠肝组织脂肪变性无明显的减轻作用。

表Ⅴ 各组大鼠肝组织脂肪变性检查结果

3结果判定

分别以8.5、17、34mg/kg BW(相当于人体推荐用量5、10、20倍)剂量的实施例1所述组合物给大鼠连续灌胃30天，能降低酒精性肝损模型大鼠的肝组织中的丙二醛(MDA)和甘油三酯(TG)含量，提高大鼠的肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)含量，对大鼠的体重增长及其肝组织脂肪变性程度无明显影响，提示该样品对酒精性肝损伤有辅助保护作用。

试验例2(毒理学安全性评价试验)：

1材料和方法

1.1样品：实施例1所述对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物。人体推荐用量为每人(成人)每日2次，每次成人体重按60kg计算，折合剂量为1.7mg/kg BW。以送检的毒理样品粉末进行试验，该粉末1.0克相当于成品18.2mg，即每天服用5.5g粉末，折合剂量为91.67mg/kg BW。

1.2实验动物及环境：SPF级昆明种小鼠，由广东省医学实验动物中心和广西医科大学实验动物中心繁殖，生产许可证号和实验动物质量合格证号分别为：SCXK(粤)2008-0002，44007200005552、44007200005553；SCXK(桂)2009-0002，0006311。SPF级SD种大鼠，由广东省医学实验动物中心繁殖，生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002，实验动物质量合格证号：44007200007763。动物实验室为屏障系统，使用许可证号：SYXK(桂)2011-0005。动物实验室温度：22～25℃，相对湿度：55～70％。

1.3小鼠急性经口毒性试验：采用最大耐受剂量(MTD)试验法，选昆明种小鼠20只(18～22g)，雌、雄性各10只。试验前动物禁食16h，不限饮水。称取37.5g样品，加纯水至50mL，混匀，配成750mg/mL浓度溶液，然后按0.4mL/20g BW给动物灌胃1次，剂量为15000mg/kg BW。灌胃后观察、记录动物的中毒表现。每周称重一次，观察两周时间，试验结束解剖动物进行大体观察。按毒性分级标准评价受试物的急性毒性。

1.4Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102四种菌株进行试验。称取5.0g样品，用纯水溶解并加至100mL，配成50mg/mL浓度溶液，再依次5倍稀释(取10mL加纯水至50mL)，分别配成10、2、0.4、0.08mg/mL浓度溶液，受试溶液经高压灭菌(0.103Mpa 20min)处理后供试验用。以多氯联苯诱导的大鼠肝微粒体酶(S_-9)作为体外代谢活化系统。采用平板掺入法，在保温的顶层培养基中依次加入0.1mL试验菌株增菌液(活菌数1.64×10⁹个/mL)、0.1mL受试物溶液和0.5mL S_-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。5个试验剂量分别为5000、1000、200、40、8μg/皿，同时设自发回变对照、溶剂对照和阳性突变剂对照。自发回变对照除不加样品外，其余条件与样品组相同。溶剂对照用灭菌纯水替代样品，其余条件与样品组相同。每个剂量组的各种菌株均做3个平行皿。在37℃下培养48小时，计数每皿的菌落数。整套试验在相同条件下重复做两次。如果受试物的回变菌落数增加超过自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂量-反应关系者，即为诱变试验阳性。

1.5小鼠骨髓细胞微核试验：采用间隔24小时两次经口灌胃法进行试验。选体重为25～30g的昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。试验组3个剂量分别设10000、5000、2500mg/kg BW，以纯水为阴性对照，40mg/kg BW剂量的环磷酰胺(cp)作阳性对照。分别称取20.0、10.0、5.0g样品，各加纯水至40mL，混匀，配成500、250、125mg/mL浓度的溶液，然后按0.4mL/20g BW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的纯水，

阳性对照组灌给等体积的2mg/mL环磷酰胺溶液。第二次给样后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核细胞率以含微核的PCE千分率计，同时计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/NCE)。应用SPSS统计软件中的泊松分布均数比较法统计处理。如试验组的微核细胞率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.6小鼠精子畸形试验：选体重为25～35g的昆明种雄性小鼠50只，随机分成5组，每组10只。试验组3个剂量分别设10000、5000、2500mg/kg BW，以纯水为阴性对照，40mg/kg BW剂量的环磷酰胺(cp)作阳性对照。分别称取20.0、10.0、5.0g样品，各加纯水至40mL，混匀，配成500、250、125mg/mL浓度的溶液，然后按0.4mL/20g BW的体积给动物灌胃，阴性对照组灌给等体积的纯水，阳性对照组灌给等体积的2mg/mL环磷酰胺溶液。每天灌胃一次，连续5天。末次给样后第30天处死动物，取副睾的精子涂片，甲醇固定，伊红染色。在光学显微镜下，每只动物计数完整精子1000个，计算精子畸形率。应用SPSS统计软件中的Wilcoxon秩和检验统计处理。如试验组的精子畸形率比阴性对照组增高，并有明显的剂量-反应关系和统计学意义，即为阳性结果。

1.7大鼠30天喂养试验

1.7.1剂量选择与受试物给予方式：选SD种大鼠80只，雌、雄性各半，体重60～80g。将动物随机分为4组，即对照组和3个试验组，每组20只，雌、雄各半。根据该样品的人体推荐用量，3个试验组剂量分别设为2292、4583、9167mg/kg BW，分别相当于人体推荐剂量的25、50、100倍。采用掺入饲料法给受试物，以动物每天摄食量为自身体重10％的理论值计算饲料量。因掺入样品的比例较大，为使各组饲料中的蛋白含量平衡，用酪蛋白粉(蛋白质含量85％)加入基础饲料(蛋白质含量18％)进行调整。分别称取22.92、45.83、91.67g样品，分别加6.2、12.3、24.6g酪蛋白粉，再加基础饲料至1000g，混匀，配成2.292％、4.583％、9.167％样品含量的饲料(各剂量组的饲料的蛋白含量与基础饲料组一致)，分别给相应剂量组大鼠喂饲，对照组给予基础饲料。每天喂给饲料一次，连续喂养30天。

1.7.2实验方法：实验期间所有动物给予所配饲料，单笼饲养，自由摄食饮水。每天喂给饲料一次，记录给食量和剩食量，同时观察动物的活动和生长情况；每周称一次体重，计算每周进食量和食物利用率。实验结束动物隔夜禁食(禁食16h，不限饮水)，然后称动物空腹体重，处死大鼠，采2份血样，一份血抗凝用血球计数仪检测Hb、RBC、WBC及其分类、PLT等；另一份血不抗凝分离血清，用试剂盒和全自动生化分析仪检测血清AST、ALT、BUN、Cr、TC、TG、Glu、TP、Alb等项目。采血后解剖动物，进行大体观察，取肝脏、肾脏、脾脏和睾丸等脏器进行称重，计算脏/体比值，取肝脏、肾脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸和卵巢等脏器进行病理组织学检查。在对各剂量组动物作大体检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行高剂量组和对照组动物的主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对中、低剂量组相应器官及组织进行检查。

1.7.3实验数据统计：应用SPSS统计软件进行单因素方差分析。在统计分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett检验进行多个剂量组与对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对数据进行适当的变量

转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若转换数据仍未达到方差齐要求，改用秩和检验进行统计分析。

2结果

2.1急性经口毒性试验

表1 天狮肽能饮对小鼠的急性毒性试验结果

从表1可见，以15000mg/kg BW剂量给予小鼠灌胃样品后，动物生长良好，未见体重受到影响。受试小鼠均未见有中毒症状，观察14天无动物死亡。试验结束解剖动物、大体观察，肝、肾、脾、心、肺、胃、肠等主要脏器均未见明显异常改变。结果表明，该样品对小鼠的急性经口毒性MTD大于15000mg/kg BW，急性经口毒性属无毒级。

2.2 Ames试验

表2 天狮肽能饮第一次Ames试验结果

注：1、以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。2、阳性对照：TA97a+S_-9、TA98+S_-9、TA100+S_-9采用2-氨基芴(剂量为10μg/皿)；TA98－S_-9采用柔毛霉素(剂量为6μg/皿)；TA97a－S_-9、TA102－S_-9采用敌克松(剂量为50μg/皿)；TA100－S_-9采用叠氮钠(剂量为1.5μg/皿)；TA102+S_-9采用1,8-二羟基蒽醌(剂量为50μg/皿)。表3同。

从表2、表3可见，对TA97a、TA98、TA100、TA102四种试验菌株，无论是否加入S_-9，样品各剂量组的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的两倍，亦无剂量-反应关系，表明该受试物诱变试验结果为阴性。

表3 天狮肽能饮第二次Ames试验结果

注：以上结果(菌落数)均为3个平皿的均值±标准差。

2.3小鼠骨髓细胞微核试验

表4 天狮肽能饮对小鼠的骨髓细胞微核细胞发生率的影响

注：**与阴性对照组比较，P<0.01；cp为环磷酰胺。

从表4可见，样品各剂量组小鼠的骨髓细胞微核细胞率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，各剂量的PCE/NCE值均在正常值范围内，各剂量组PCE/NCE值均不少于阴性对照组的20％，与阴性对照组比较也无明显差异，而环磷酰胺阳性对照组的微核细胞率与阴性对照组的差异有非常显著性(P<0.01)，提示该样品对小鼠的骨髓细胞没有损伤和抑制作用。

2.4小鼠精子畸形试验

表5 天狮肽能饮对小鼠精子畸形发生率的影响

注：**与阴性对照组比较，P<0.01；cp为环磷酰胺。

从表5可见，样品对小鼠精子畸形发生率未产生明显改变，样品各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组的差异有非常显著性(P<0.01)，提示该样品对雄性小鼠的精子未产生畸变作用。

2.5大鼠30天喂养试验

2.5.1动物一般表现：实验期间，各组动物生长发育良好，未见动物有异常行为和中毒表现，各组动物均无死亡。

2.5.2样品对大鼠体重及食物利用率的影响

结果见表6～表11，以2292、4583、9167mg/kg BW剂量的天狮肽能饮掺入饲料中连续给大鼠喂养30天，实验期间，样品各剂量组雌雄鼠每周的体重、增重量、每周进食量及总进食量、每周食物利用率及总食物利用率与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的体重增长和食物利用率无明显影响。

表6 天狮肽能饮对大鼠体重的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表7 天狮肽能饮对大鼠第1周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表8 天狮肽能饮对大鼠第2周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表9 天狮肽能饮对大鼠第3周体重增长和食物利用率的影响

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表10 天狮肽能饮对大鼠第4周体重增长和食物利用率的影响

注：第4周的天数为9天。表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表11 天狮肽能饮对大鼠总食物利用率的影响

注：表中各剂量组的总增重、总进食量和总食物利用率与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

2.5.3样品对大鼠血常规指标的影响

表12 天狮肽能饮30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表13 天狮肽能饮30天喂养试验结束大鼠血常规指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

从表12、表13可见，以2292、4583、9167mg/kg BW剂量的天狮肽能饮掺入饲料中连续给大鼠喂养30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数及其分类、血小板数与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血常规指标无明显影响。

2.5.4样品对大鼠血液生化指标的影响

结果见表14、表15，以2292、4583、9167mg/kg BW剂量的天狮肽能饮掺入饲料中连续给大鼠喂养30天，样品各剂量组雌、雄性大鼠的血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、血糖与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，表明该样品对大鼠的血液生化指标无明显影响。

表14 天狮肽能饮30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

表15 天狮肽能饮30天喂养试验结束大鼠血液生化指标检查结果

注：表中各剂量组与阴性对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)。

3小结

以15000mg/kg BW剂量的样品给予小鼠灌胃后，未见动物有中毒症状和死亡，该样品对小鼠的急性经口毒性MTD大于15000mg/kg BW，急性经口毒性属无毒级。三项遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)结果均为阴性。30天喂养试验，以2292、4583、9167mg/kgBW(分别相当于人体推荐用量的25、50、100倍)3个剂量的样品掺入饲料中连续给大鼠喂养30天，实验期间动物生长发育良好，各剂量组大鼠的体重、增重量、进食量、食物利用率、血常规指标、血液生化指标与对照组比较，均无显著性差异(P>0.05)；大体解剖观察和组织病理学检查未见与样品有关的异常改变。在受试剂量范围内未见该样品对大鼠各项观察指标产生毒副作用。

上述参照实施例对该一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物及其制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，其特征在于：由玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物组成，按其重量份数计玉米低聚肽粉1-5份、葛根提取物0.5-3.5份、枳椇子提取物0.5-3.5份、枸杞提取物0.2-1.6份、党参提取物0.1-0.3份、百合提取物0.5-1份、败酱草提取物1-1.5份、乌梅提取物0.5-1份和甘草提取物0.8-1.2份。

2.根据权利要求1所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，其特征在于：按其重量份数计玉米低聚肽粉1.5-4.5份、葛根提取物0.8-3份、枳椇子提取物0.8-3份、枸杞提取物0.5-1.0份、党参提取物0.2-0.3份、百合提取物0.6-0.8份、败酱草提取物1.2-1.4份、乌梅提取物0.6-0.9份和甘草提取物1.0-1.2份。

3.根据权利要求1所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，其特征在于：按其重量份数计玉米低聚肽粉2.4份、葛根提取物1.2份、枳椇子提取物1.2.份、枸杞提取物0.7份、党参提取物0.2份、百合提取物0.7份、败酱草提取物1.3份、乌梅提取物0.7份和甘草提取物1.1份。

4.根据权利要求1-3之一所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，其特征在于：所述葛根提取物为乙醇回流提取物，枳椇子提取物为水煎煮提取物，枸杞提取物为乙醇回流提取物，党参提取物为甲醇热回流提取物，百合提取物为醇提—正丁醇萃取提取物，败酱草提取物为乙醇提取物，乌梅提取物为乙醇提取物，甘草提取物乙醇回流提取物。

5.根据权利要求1所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物，其特征在于：还可以根据实际需要加入功能甜味剂、高倍甜味剂和/或食用胶，其中，所述功能甜味剂是麦芽糖醇、赤藓糖醇、低聚麦芽糖醇、聚葡萄糖中的一种或几种；所述高倍甜味剂是三氯蔗糖、安赛蜜、甜菊糖苷中的一种或两种；所述食用胶是结冷胶、卡拉胶、黄原胶、瓜尔豆胶中的一种或几种，添加量在上述组方的基础上按其重量份数计功能甜味剂1-20份、高倍甜味剂0.01-0.12、食用胶0.01-0.1份。

6.权利要求1所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)按组方用量称取玉米低聚肽粉、葛根提取物、枳椇子提取物、枸杞提取物、党参提取物、百合提取物、败酱草提取物、乌梅提取物和甘草提取物为原料；

(2)将各原料进行均匀混合，即得。

7.根据权利要求6所述的对化学性肝损伤有辅助保护功效的组合物的制备方法，其特征在于：可在步骤(2)混合均匀的原料中根据需要加入组方量的功能甜味剂、高倍甜味剂和/或食用胶。