CN101755923B

CN101755923B - 一种具有辅助降血糖功能的奶粉

Info

Publication number: CN101755923B
Application number: CN201010107617A
Authority: CN
Inventors: 王利; 王青云; 杨晓波; 马景友; 李凯锋
Original assignee: WANDASHAN MILK PRODCTS CO Ltd HEILONGJIANG PROV
Current assignee: Beidahuang Wandashan Dairy Co.,Ltd.
Priority date: 2010-01-29
Filing date: 2010-01-29
Publication date: 2012-10-03
Anticipated expiration: 2030-01-29
Also published as: CN101755923A

Abstract

本发明涉及一种具有辅助降血糖功能的奶粉，其相对于作为原料的260～700重量份鲜牛奶或30～80重量由牛奶直接获得的奶粉，含有灵芝提取物0.01～8重量份，百合提取物0.01～8重量份，麦冬提取物0.01～4重量份，知母提取物0.01～4重量份，以及木糖醇3～15重量份。经动物试验证实，本发明的产品具有辅助降血糖的保健作用，适用于广大糖尿病及血糖偏高人群。

Description

一种具有辅助降血糖功能的奶粉

技术领域

本发明涉及功能性奶粉及其制备方法，尤其涉及一种以鲜牛乳为原料，辅以具有降血糖功效的药食同源中草药提取物制备的具有辅助降血糖功能的奶粉及其制备方法。

背景技术

近年来糖尿病的发生率和致死率都比较高，而且发生率还呈明显上升趋势，患病人群越来越年轻化。糖尿病是人类疾病的第三大杀手，它是一种十分常见的疾病，世界上多数国家的发病率为(1-2)％，发达国家的发病率相对较高，如美国为(6-7)％。随着物质文明的发达和人口老龄化的加剧，糖尿病的发病率还有明显的上升趋势。根据世界卫生组织(WHO)报道，1995年全球已确诊的糖尿病患者约1.35亿，2000年大约1.5亿，进入21世纪以来，糖尿病以迅猛的速度在全世界蔓延，预计到2025年糖尿病患者将增加到3亿，成为社会的重大负担。目前，发达国家糖尿病的患病率已达较高水平，日本：7.5％，新加坡：8.6％，墨西哥：12.6％，太平洋岛国瑙鲁患病率为34％，在美国比马印地安族，30岁以上居民糖尿病患病率高达40％，个别印地安人社区，糖尿病患病率竟高达57％。我国原属于糖尿病低患病率国家，但近10多年来，糖尿病的患病率正以每年0.1％的速度递增。在1980年以前尚无确切的统计资料，1980年调查显示患病率为0.67％，1994年上升至2.51％。1996年采用WHO诊断标准，严格按照流行病学调查方法，随机抽样调查全国11个省市42000人，结果显示为3.21％，与1980年相比增加了4.79倍，同时40岁以上年龄组的糖尿病和糖耐量低减患病率明显上升，并分别达到7.1％和8.4％。目前，中国每年约增加100万新的糖尿病患者。据专家估计目前我国糖尿病患者至少5000万，绝对患病人数居世界首位。城市患者：2600万人；乡镇患者：2400万人。患者主要集中在发达城市，糖尿病患者中78％的人属于中高收入阶层，有较强的消费能力。据估计，我国60岁以上脑力工作者中糖尿病发病率高达11.2％。

糖尿病是一种由于体内胰岛素绝对或相对不足以及靶组织细胞(胰岛B细胞)对胰岛素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要共同标志，久病可引起多个系统损害。糖尿病分为以下几种类型：(1)胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)，即I型糖尿病，临床表现为多饮、多食、多尿、体重减轻等，有发生酮症酸中毒的倾向，必须依靠胰岛素治疗维持生命，大约占总发病人数的5％左右；(2)非胰岛素依赖型(NIDDM)，即II型糖尿病，临床症状相对较轻或缺如，无酮症酸中毒的倾向，治疗时不依赖胰岛素，饮食和口服降糖药物可达到控制血糖的目的，在治疗效果欠佳的情况下，有时亦需要用胰岛素控制高血糖，此种类型的糖尿病占总发病人群的95％左右；(3)营养不良相关糖尿病(MRDM)，有营养缺乏病史；(4)继发性糖尿病，胰腺疾病和内分泌疾病引起的糖尿病。

糖尿病目前是不能根治的，但它是可以控制的一种疾病。实践证明，糖尿病的治疗不能只靠药物，尤其要特别注意患者的饮食，食补胜过一切药补，通过食品途径来达到调节、稳定和控制糖尿病患者的血糖水平是完全可以做到的，这样还可以减少甚至不用降糖药物，避免药物对病人所带来的精神伤害。《中华人民共和国药典》和卫生部公布的“药食同源”的原料中有很多中草药中的多糖组分都具有消渴降血糖的功效。

麦冬味甘、微苦，性寒。含多种甾体皂甙、β-谷甾醇和氨基酸。有对抗心肌梗死，改善心肌营养血流，耐缺氧，提高机体的免疫功能，降低血糖，抗菌等多种药理作用。麦冬能降低血糖、血脂、并能改善球结膜微循环。其机制是促进β细胞的再生或增加组织对糖的转化利用，降低血糖峰值，加快回落速度，并有对抗肾上腺素，升高血糖，增加肝糖元合成的作用。

知母清热、除烦、滋阴。治烦热口渴、肺热燥咳、消渴、午后潮热。

百合味甘、微苦，性寒。入肺、心经。具有清热养阴，润肺宁神的作用。百合既是一种富有营养的食品，又是一味滋补强壮药物，历代食疗方书一向颇为推崇。本品甘寒，能清热润肺，对肺虚有热、干咳少痰之症，常与沙参、麦冬、贝母、甘草等配合应用。百合清热养阴，能入心经，具有宁心安神作用，故可治疗热病后期余热未清而致的虚烦惊悸，神思恍惚，常与知母、地黄等配伍应用。

灵芝味淡、微苦，性温。入心、肺、脾、肝、肾经。具有补肺肾，止咳喘，补肝肾，安心神，健脾胃等功效。灵芝益气养阴、补脾益肾、活血化瘀。可有效降低血糖，改善糖耐量，促进血清胰岛素的释放，同时能降低血浆胰高血糖素的含量，并能促进肝糖元、肌糖元的合成等，能明显降低肾上腺素引起的小鼠血糖升高。

发明内容

本发明是以鲜牛乳为原料，辅以具有降血糖功效的药食同源的中草药，采用中草药煎制技术进行中草药多糖组分的提纯，主要针对糖尿病患者的生理特点及健康需要，进行的功能性奶粉的研制与开发。

本发明提供一种具有辅助降血糖功能的奶粉，以鲜牛奶或由牛奶直接获得的奶粉为主要原料，每原料的260～700重量份鲜牛奶或30～80重量份由牛奶直接获得的奶粉，含有灵芝提取物0.01～8重量份、优选0.1～6重量份，百合提取物0.01～8重量份、优选0.1～6重量份，麦冬提取物0.01～4重量份、优选0.05～4重量份，知母提取物0.01～4重量份、优选0.05～4重量份，以及木糖醇3～15重量份、优选5～12重量份。

由于依据《中华人民共和国药典》第二部和卫生部公布《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》(卫法监发[2002]51号)的规定，山药、百合、葛根、枸杞、黄精、玉竹、桑叶等植物药材属《既是食品又是药品》，“药食同源”的原料，另外，生地、麦冬、人参、熟地、黄芪、知母、丹参、刺五加、五味子、太子参等植物药材属《可用于保健食品》的原料，以上这些都具有消渴降血糖的功效，还有灵芝也被公认为具有降血糖的功效，以上均可用于保健食品中。综合查找的相关文献，结合上述文件规定，确定以麦冬、知母、百合、灵芝四种中药为原料，对这四种中草药的合理配比进行正交实验设计，并最终确定。药典中规定了各种中药材的安全食用剂量，分别为灵芝：6-12g；百合：6-12g；知母：6-12g；麦冬：6-12g，其有效成分为粗多糖提取物。

本发明中的中草药提取物，即灵芝提取物、百合提取物、麦冬提取物、知母提取物是通过水提醇沉工艺提取，经工艺提取后，保证灵芝多糖水溶液中干物质含量在5～12％，百合多糖水溶液中干物质含量在5～12％，知母多糖水溶液中干物质含量在5～12％，麦冬多糖水溶液中干物质含量在5～12％。

所以根据本发明，由于药食同源中草药的筛选以及中草药的配伍关系是影响最终降血糖效果的关键技术，所以本发明利用鲜牛乳为主要原料，辅以具有降血糖功效的药食同源的中草药，采用中草药煎制技术进行中草药多糖组分的提纯，经科学配比生产出具有辅助降血糖功能的保健奶粉，使产品具有丰富营养的同时，又增加了辅助降血糖的保健功能。并且，还含有糖尿病人可食用的不参与能量代谢的甜味剂-木糖醇成份，所以其风味也甜美。因此，这种新型的保健功能食品可以说是一种天然的绝对安全的功能性降血糖佳品，它的开发具有巨大的经济效益和理论意义。

本发明的具有辅助降血糖功能的奶粉中，还可以根据需要含有其它奶粉制造惯用辅助原料，如脱盐乳清粉、大豆油、大豆分离蛋白碳酸钙、柠檬酸钾、牛磺酸、乙基香兰素以及维生素及微量元素等。这些其它奶粉制造惯用辅助原料优选配比如下：脱盐乳清粉0～20重量份、大豆油0～6重量份、大豆分离蛋白0～4重量份、碳酸钙0～2重量份、柠檬酸钾0.01～2重量份、牛磺酸0～2重量份、乙基香兰素0～1重量份、维生素及微量元素0～1重量份。其中维生素包括维生素A、维生素B6、维生素C、维生素D等。微量元素包括锌、铁、镁等，它们可以常规用量存在。

另外，本发明还提供所述的具有辅助降血糖功能奶粉的制备方法，以鲜牛奶或由牛奶直接获得的奶粉为主要原料制取，每260～700重量份鲜牛奶或30～80重量份由牛奶直接获得的奶粉，添加灵芝提取物0.01～8重量份、优选0.1～6重量份，百合提取物0.01～8重量份、优选0.1～6重量份，麦冬提取物0.01～4重量份、优选0.05～4重量份，知母提取物0.01～4重量份、优选0.05～4重量份，以及木糖醇3～15重量份、优选5～12重量份。

对于本发明的制备方法无特别限定，只要能够实现上述组方即可。可以按本领域的常规方法加工成奶粉，优选为，包括中草药的分离提纯，原料牛乳净化，预热杀菌，调配各种原料，均质，真空浓缩，喷雾干燥，冷却，包装。

因此，以中草药功能性多糖组分分离提纯技术和乳制品喷雾干燥技术的科学合理的结合，达到通过食疗的方法来控制和预防糖尿病患者的血糖情况的目的，同时降低单纯使用降血糖药物对患者的不良影响。并且，由于药食同源中草药的筛选以及中草药的配伍关系是影响最终降血糖效果的关键技术，所以本发明的制备方法通过利用鲜牛乳为主要原料，辅以具有降血糖功效的药食同源的中草药，采用中草药煎制技术进行中草药多糖组分的提纯，经科学配比生产出具有辅助降血糖功能的保健奶粉，使产品具有丰富营养的同时，又增加了辅助降血糖的保健功能，以此来带动我省乃至我国相关领域的研究达到国际先进水平，促进新型具有保健功能的降血糖产品的研制开发。

本发明的组方根据糖尿病人群的生理特点和营养需求，用分离提纯技术将中草药中对糖尿病人血糖控制有益的多糖组分提纯出来，用鲜牛奶作为载体加工成奶粉后方便糖尿病人食用并预防控制糖尿病人的血糖升高。本品中所含有的多糖成分并不是某一种单一的多糖物质，而是从灵芝、百合、麦冬、知母经分离提纯后取得的多糖混合物质。这些多糖混合物可有效降低血糖，改善糖耐量，促进血清胰岛素的释放，同时能降低血浆胰高血糖素的含量，并能促进肝糖元、肌糖元的合成等，能明显降低肾上腺素引起的血糖升高。

而此种产品不利于低血糖的人群食用。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步阐述本发明。应该理解的是，这些实施例决不构成对本发明的任何限制。本领域的技术人员清楚，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以做出一些变化和修改，这些变化和修改意图包括在本发明的范畴内。

实施例1

一、中草药提取

1、麦冬、知母提取

将1重量份麦冬和1重量份知母用90％的酒精浸泡3小时后，晾干。

将晾干后的麦冬和知母用10倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

将上清液调整酒精度至80％，放置沉淀48小时。去掉上层酒精，得到醇沉物。过滤。

2、百合提取

将2重量份百合用90％的酒精浸泡3小时后，晾干。

将晾干后的百合用10倍水煎煮40分钟，过滤，再煎煮两次，每次30分钟。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

3、灵芝提取

将4重量份灵芝用水浸泡变软。

用15倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

将沉淀溶于水，按水溶液的0.2％加入已活化的活性炭，煮沸30分钟，趁热抽滤，重复抽滤一次。

二、奶粉加工

1、原料乳的收购

对原料乳的质量应进行严格的检验，检验内容包括：

A、感官指标：

B、理化指标：

C、微生物指标：

各项指标及检验方法应按GB/T 6914-1986《生鲜牛乳收购标准》执行。

2、净乳

550重量份牛乳经过净乳机净化后杂质度小于0.25ppm。

3、预热杀菌

净乳后的乳经过三段式换热器进行73℃杀菌15秒，使乳中细菌达到规定的范围。

4、配料

将上述配比的中草药提取物用水完全溶解，加热到80℃，剪切80分钟。将8.4重量份木糖醇、0.25重量份维生素和微量元素、0.8重量份碳酸钙、0.8重量份的柠檬酸钾和0.05重量份的乙基香兰素分别用温水化开。用杀菌后经热回收段降温到(40-45)℃的乳进行配料，此方法可降低浓缩前的杀菌温度，还可以保证配方粉的冲调性及产品中维生素及微量元素的保存。

5、均质

在(40-45)℃、(17-20)Mpa的条件下进行均质，保证产品的均一性，提高产品的可消化性。

6、真空浓缩

均质后的物料进入真空蒸发器进行减压浓缩，除去乳中大部分水分(约65％)，以利于产品质量和降低生产成本，双效杀菌温度(88-92)℃，时间24秒，物料出口浓度16Be，。

7、喷雾干燥

工艺参数进风温度140℃、排风温度75℃。

8、筛粉凉粉

喷雾干燥好的乳粉应迅速送出干燥室外并及时冷却，避免受热时间过长，影响产品质量。震动筛风板可将大的粉块分离出去，以获得均匀的颗粒乳粉，并可迅速使乳粉温度冷却到50℃以下。

9、半成品检验

经过筛后的粉进行半成品取样，进行理化及微生物检验，在合格的情况下进入下道工序。

10、乳粉包装

乳粉包装工艺流程为：

称量→充添→排气→封口→装箱→打包入库

11、成品检验

成品要通过中心检验室的分批取样，进行严格的理化及微生物分析，并开出产品报告单。

12、出厂产品符合Q/WDS 046标准，并有产品合格报告单方可出厂。

实施例2

一、中草药提取

1、麦冬、知母提取

将0.8重量份麦冬和0.8重量份知母用90％的酒精浸泡3小时后，晾干。

将晾干后的麦冬和知母用8倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

2、百合提取

将1.6重量份百合用90％的酒精浸泡3小时后，晾干。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

3、灵芝提取

将3.2重量份灵芝用水浸泡变软。

用12倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次。

将滤液合并后浓缩，取上清液。

二、奶粉加工

1、原料乳的收购

对原料乳的质量应进行严格的检验，检验内容包括：

A、感官指标：

B、理化指标：

C、微生物指标：

2、净乳

500重量份牛乳经过净乳机净化后杂质度小于0.25ppm。

3、预热杀菌

4、配料

将上述配比的中草药提取物用水完全溶解，加热到80℃，剪切80分钟。将6.8重量份木糖醇、0.2重量份维生素和微量元素、0.65重量份碳酸钙、0.65重量份的柠檬酸钾和0.04重量份的乙基香兰素分别用温水化开。用杀菌后经热回收段降温到(40-45)℃的乳进行配料，此方法可降低浓缩前的杀菌温度，还可以保证配方粉的冲调性及产品中维生素及微量元素的保存。

5、均质

6、真空浓缩

7、喷雾干燥

工艺参数进风温度150℃、排风温度80℃。

8、筛粉凉粉

9、半成品检验

10、乳粉包装

乳粉包装工艺流程为：

称量→充添→排气→封口→装箱→打包入库

11、成品检验

试验一：奶粉辅助降血糖作用动物功能试验

1、材料和方法

1.1样品：实施例1中所制备的样品(以下称为本发明的奶粉)

人体推荐量为成人每天50g，由于推荐量过大，小鼠无法灌胃给予受试物，实验采取去掉奶粉基质用有效成分灌胃，有效成分每日服用量为12.15g/人，相当于0.2025g/kg.BW(按成人60kg体重)。

1.2动物：6周龄雄性昆明种小鼠，体重28g左右，贰级，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，许可证编号SCXK-(军)2002-001。

1.3仪器及试剂：四氧嘧啶，购自sigma；

GLUCOTREND血糖仪，购自roche公司。

1.4实验方法：

选用健康成年雄性小鼠24只，禁食5小时后(自由饮水)，取尾血测定小鼠空腹血糖，按血糖水平随机分为2组，一个对照组，一个本发明的奶粉高剂量组，每组12只小鼠，对照组每日用蒸馏水灌胃，高剂量组给予6.08/kg.bw本发明的奶粉有效成分，相当于人体每日推荐量0.2025g/kg.bw的30倍，连续灌胃30天后，禁食同前，测定空腹血糖水平，观察受试物对正常动物空腹血糖的影响。

雄性小鼠禁食24小时后，尾静脉注射四氧嘧啶溶液45mg/kg.bw，注射量为02ml/20g.bw。5天后禁食5小时，取尾血测定小鼠的空腹血糖，选取血糖值大于10mmol/l的小鼠，按血糖水平分为模型对照组和三个本发明的奶粉剂量组，以人体推荐量的5、10、30倍本发明的奶粉有效成分给小鼠灌胃，分别为1.01、2.03、6.08g/kg.bw剂量。连续灌胃30天后，进行糖耐量试验，禁食5小时，剂量组给予不同浓度受试物，模型对照组给予同体积的水，20分钟后，灌胃25％葡萄糖溶液2.5g/kg.bw，灌胃量为0.1ml/10g.bw，服用葡萄糖后，取尾血测定血糖水平分别测定0小时，0.5小时，2小时血糖值。观察模型对照组与受试样品组给葡萄糖后各时间点血糖曲线下面积的变化。

1.5实验数据spss软件进行方差分析，方差齐，P＞0.05表面各组均数间无显著差异；对照组与实验组间均数比较统计P≤0.05，表明差异有显著性。

1.6结果判定：空腹血糖和糖耐量两项指标中一项指标阳性，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品辅助降血糖功能动物实验结果阳性。

2、结果

2.1本发明的奶粉对正常小鼠体重的影响：

由表1结果表明，高剂量组动物体重与正常对照组相比，未有统计学上的差异(P＞0.05)。

表1正常小鼠的初期体重、中期体重、末期体重

组别	动物数(只)	初期体重	中期体重	末期体重
					正常剂量组	12	28.2±1.3	39.1±2.5	45.9±2.9
高剂量组	12	28.2±1.3	39.5±2.9	46.5±3.3

2.2本发明的奶粉对正常小鼠空腹血糖的影响：

由表2可见，试验前、后高剂量组小鼠的空腹血糖与正常对照组相比没有统计学的差异(P＞0.05)。

表2本发明的奶粉对正常小鼠空腹血糖的影响

2.3本发明的奶粉对四氧嘧啶引起的高血糖小鼠体重的影响：

由表3可见，各剂量本发明的奶粉组小鼠体重与模型对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。

表3本发明的奶粉对高血糖模型小鼠体重的影响

2.4本发明的奶粉对四氧嘧啶引起的高血糖小鼠空腹血糖的影响：

由表4可见，实验前各组小鼠的血糖水平没有统计学上的差别(P＞0.05)。实验后，与模型对照组比较本发明的奶粉低、中、高剂量组能明显降低四氧嘧啶所致高血糖小鼠的空腹血糖(P＜0.05或P＜0.01)。低、中、高剂量组小鼠血糖前后差值与模型对照组相比均有统计学上明显差异(P＜0.01)。

表4本发明的奶粉对高血糖小鼠空腹血糖的影响

与模型对照组相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.5本发明的奶粉对四氧嘧啶引起的高血糖小鼠糖耐量的影响：

由表5结果可见，与模型对照组比本发明的奶粉低、中、高剂量能明显降低四氧嘧啶高血糖小鼠口服2.5g/kg.bw葡萄糖后0.5、2小时的血糖值，经统计学检验有明显差异(P＜0.05或P＜0.01)

表5本发明的奶粉对高血糖小鼠给糖后血糖的影响

与模型对照组相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表6可见，灌胃葡萄糖后本发明的奶粉低、中、高剂量组葡萄糖曲线下面积均小于模型对照组，差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

表6本发明的奶粉对四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠葡萄糖曲线下面积影响

组别	剂量(g/kgBW)	动物只数(只)	峰面积
				模型对照组	0.00	12	51.4±7.7
低剂量组	1.01	12	44.1±9.0^*
				中剂量组	2.03	12	42.6±6.6^**
高剂量组	6.08	12	41.0±7.1^**

与模型对照组相比：^*P＜0.05，^**P＜0.01

3小结

本实验结果表明，本发明的奶粉对正常小鼠空腹血糖无影响(P＜0.05)。实验前各组高血糖小鼠的血糖水平没有统计学上的差别(P＞0.05)。实验后，与模型对照组比较本发明的奶粉低、中、高剂量能明显降低四氧嘧啶所致高血糖小鼠的空腹血糖(P＜0.05或P＜0.01)；低、中、高剂量组小鼠血糖前后差值与模型对照组相比均有统计学上的差异(P＜0.01)。与模型对照组比本发明的奶粉低、中、高剂量能明显降低四氧嘧啶高血糖小鼠口服2.5g/kg.bw葡萄糖后0.5、2小时的血糖值，经统计学检验有明显差异(P＜0.05或P＜0.01)。灌胃葡萄糖后本发明的奶粉低、中、高剂量组葡萄糖曲线下面积均小于模型对照组，差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。实验结果表明：认为本发明的奶粉辅助降血糖功能动物实验结果阳性。

试验二：本发明的奶粉毒理学安全性试验

1材料和方法

1.1样品：本发明的奶粉由黑龙江完达山乳业股份有限公司提供，暗黄色粉末，人体推荐量为每天50.0g/60kg.bw，相当于每天0.83g/kg.bw。该受试物推荐量大，根据配方去除已知的安全的部分原料(奶粉及脱盐乳清粉)，故用剩余其他成分作为试验受试物，折合人体推荐量为每天12.15g/60kg.bw，相当于每天0.2025g/kg.bw。

1.2实验动物：健康昆明种小鼠(清洁级)：购自中国医学科学院实验动物研究所繁育场，合格证号：SCXK(京)2000-0006；SD大鼠(清洁级)：购自中国人民解放军军事医学科学院动物中心和北京市实验动物研究中心，合格证号分别为SCXK(军)2002-0001和SCXK(京)2002-003。

1.3主要仪器和试剂：BECKMAN GS15R离心机；日立7080型自动生化仪；血液分析仪；NIKON生物显微镜；全自动脱水机；全自动包埋机；半自动石蜡切片机；全自动染色机；全自动封片机。库尔特电解质平衡液和库尔特溶血剂购自贝克曼库尔特实验系统有限公司；血生化检测试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.4实验方法

1.4.1大鼠急性毒性试验：采用最大耐受量法进行。选用健康SD大鼠20只(雌雄各10只)进行试验。大鼠体重为180-205g。36g受试物溶于蒸馏水至90ml，浓度为0.4g/ml(为最大溶解度)，分3次灌胃，灌胃量为20ml/kgbw，即急性毒性试验剂量为24.0g/kgbw，灌胃后，连续观察14天。记录动物中毒表现及死亡情况。

1.4.2遗传毒性试验

1.4.2.1Ames试验：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株进行试验。采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆制作的S-9作为活化系统。根据毒性测定结果，试验设0.008、0.04、0.2、1.0、5.0mg/皿5个剂量，将1g受试物以无菌水稀释至20ml作为最高剂量(5.0mg/皿浓度)，其余剂量以无菌水5倍倍比稀释，加样量均为100μl/皿。同时设未处理对照、溶剂对照和阳性对照皿。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液、0.1ml受试物溶液和0.5mlS-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。在37℃培养48h，计数每皿回变菌落数。如果受试物的回变菌落数是溶剂对照菌落数2倍以上，并具有剂量-反应关系者则定为阳性。整个试验在相同条件下重复做一次。

1.4.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。选用体重25-30g小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kgbw剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，本发明的奶粉剂量为1.33、4.00、12.00g/kgbw(最高剂量为一次最大给予剂量)，用蒸馏水配至所需浓度。末次给本发明的奶粉6h后颈椎脱臼处处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染染色。在生物学显微镜下，每只动物计数200个红细胞(RBC)中的嗜多染红细胞数(PCE)，并计算其所占比例；每只动物计数1000个嗜多染红细胞，其微核发生率以含微核的PCA千分率计，并进行统计处理。

1.4.2.3小鼠精子畸形试验：选用体重25-29g的性成熟雄性小鼠35只，随机分为5组。以40mg/kgbw剂量的环磷酰胺为阳性对照，以蒸馏水为阴性对照，本发明的奶粉剂量为1.33、4.00、12.00g/kgbw(最高剂量为一次最大给予剂量)，用蒸馏水配至所需浓度。每日灌胃一次，连续5天，末次灌胃30天后每组随机抽取5只动物颈椎脱臼处死，取两侧附睾，去脂肪，生理盐水中剪碎，1000转/分离心7分钟，去上清(留少许)，混匀滴于玻片上涂片，风干后甲醇固定，1.5％伊红染色并镜检。每只动物计数1000个精子，计算畸变精子发生率(以百分率计)，并进行统计处理。

1.4.3 30天喂养试验：选用体重62-76g断乳大量80只，随机分为4组，即对照组和3个受试组，每组20只，雌雄各半。根据受试物在饲料中掺入量最高不超过10％的原则，设最高剂量为10.00g/kgbw，相当于人体推荐量的49.38倍；中、低剂量分别为5.00和2.50g/kgbw，分别相当于人体推荐量的24.69和12.34倍。对照组喂饲基础饲料面料，各受试物组动物分别喂饲按比例添加受试物的配制饲料(进食量按体重的10％计算)，其低、中、高剂量在饲料中的比例分别为2.50％、5.00％和10.00％.配制10.00g/kgbw受试物组饲料15公斤补充酪蛋白270.0g，混匀备用。动物单笼喂养，自由饮食，每周记录大鼠进食量和体重，连续观察30天，实验结束采血测各项血液学、血生化指标及病理组织学检查。

1.4.3.1观察指标：

1.4.3.1.1动物的一般表现、体重、食物利用率

1.4.3.1.2血常规及生化指标：白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白；谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。

1.4.3.1.3脏体比：实验结束处死动物取肝、肾、脾和睾丸称重，计算相应的脏体比(以百克体重计算)。

1.4.3.1.4病理组织学：解剖进行大体观察及病理组织学检查。在对各剂量组动物做大体检查未发现明显病变和生化指标未见异常改变时，仅先对高剂量组和对照组动物进行肝、肾、胃和十二指肠、脾、睾丸或卵巢病理观察。

1.4.3.2统计方法：数据经EXCEL计算均数和标准差，经PEMS统计软件包进行方差分析，方差不齐者采用非参数分析。

2结果

2.1大鼠急性毒性试验：由表1可见，经口灌胃给予雌、雄性大鼠24.0g/kgbw剂量的本发明的奶粉，观察14天后，未见明显的中毒症状，也无死亡，结果表明该受试物对雌、雄性大鼠的急性毒性耐受剂量均大于24.0g/kgbw，即经口急性毒性的LD50均大于24.0g/kgbw。根据急性毒性分级，本发明的奶粉经口急性毒性属无毒性。

表1本发明的奶粉大鼠急性毒性试验结果【表格编号接上面】

2.2遗传毒性试验

2.2.1Ames试验：由表2和表3可见，对照皿回变菌落数在正常范围，本发明的奶粉各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数2倍，亦无剂量-反应关系，故对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，在加与不加S-9时，均未见本发明的奶粉有致基因突变作用。

表2本发明的奶粉Ames试验第1次结果

注：以上结果为三皿平均值

表3本发明的奶粉Ames试验第2次结果

注：以上结果为三皿平均值。

2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：由表4可见，各受试物剂量组嗜多染红细胞PCE/RBC比值不少于阴性对照的20％，表明受试物在实验剂量下无细胞毒性；无论雄性还是磁性小鼠环磷酰胺阳性对照组微核发生率均明显高于阴性对照组和受试物各剂量组(泊松分布检验P＜0.01)，而受试物各剂量组与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。说明该受试物对小鼠体细胞染色体无致突变作用。

表4本发明的奶粉对小鼠骨髓微核发生率的影响

a：示与各受试物处理组比较，泊松分布统计P＞0.05

b：示与各受试物处理组和阴性对照组比较，泊松分布统计P＜0.01

2.2.3小鼠精子畸形试验：由表5可见，阳性对照组精子畸变发生率明显高于阴性对照组和受试物各剂量组(X2检验P＜0.01)，受试物各剂量组与阴性对照组畸变比较均无显著性差异(X2检验P＞0.05)，说明该受试物无致小鼠生殖细胞畸变作用。

表5本发明的奶粉对小鼠精子畸形发生率的影响

剂量(g/kg.bw)	动物数(只)	受检精子数(个)	精子畸形数(个)	精子畸形率(％)
					0.00	5	5000	122	2.44^a
1.33	5	5000	137	2.74
					4.00	5	5000	121	2.42
12.00	5	5000	127	2.54
					40mg/kgbw(CP)	5	5000	286	5.72^b

a：示与各受试物处理组比较，X2检验统计P＞0.05

b：示与各受试物处理组和阴性对照组比较，X2检验统计P＜0.01

2.3 30天喂养试验

2.3.1生长状况及食物利用率

各组动物活动、生长正常，被毛浓密有光泽。由表6至9可见，以2.50、5.00、10.00g/kgbw剂量的本发明的奶粉掺入基础饲料中喂养大鼠30天，各受试物剂量组动物第4周体重、进食量、体重增重和总食物利用率与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

表6本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠体重的影响

表7本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠周进食量的影响

表8本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠周食物利用率的影响

表9本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠总食物利用率的影响

2.3.2血常规及血生化指标

由表10和表11可见，以2.50、5.00、10.00g/kgbw剂量的本发明的奶粉掺入基础饲料中喂养大鼠30天，各受试物剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白各项血液学指标与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)

表10本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠血常规的影响

表11本发明的奶粉30天喂养试验对大鼠WBC分类的影响

以2.50、5.00、10.00g/kgbw剂量的本发明的奶粉掺入基础饲料中喂养大鼠30天，与对照组比较，雄性大鼠5.00g/kgbw剂量尿素氮显著升高，而其指标的检测值与正常对照检测值无剂量反应关系，无生物学意义。其它雌雄各受试物剂量组的谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

2.3.3大体病理及组织学检查：以2.50、5.00、10.00g/kgbw剂量的本发明的奶粉掺入基础饲料中喂养大鼠30天，各受试物剂量组宰杀体重、肝脏、肾脏、脾脏和睾丸的重量及各脏器脏体比与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。

大体解剖肉眼观察大鼠肝、肾、胃及十二指肠、脾、睾丸(或卵巢)脏器的组织学检查结果均未发现各脏器异常。

3小结

3.1急性毒性试验：本发明的奶粉对雌、雄性大鼠经口急性毒性，LD50均大于24.0g/kgbw。根据急性毒性分级，本发明的奶粉属无毒物。

3.2遗传毒性试验：Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均未见本发明的奶粉有致突变作用。

3.330天喂养试验：以2.50、5.00、10.00g/kgbw剂量的本发明的奶粉掺入基础饲料中喂养大鼠30天，结果显示：各受试物剂量组动物活动、生长正常，各受试物剂量组动物调整、增重和食物利用率与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。各受试物剂量组的血液学检测指标与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)；血生化指标与对照组比较。雄性大鼠5.00g/kgbw剂量尿素氮显著升高，而其指标的检测值均在正常对照检测范围内，其他雌雄各受试物剂量组的学生化指标与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)；各受试物剂量组肝脏、肾脏、脾脏和睾丸的重量及各脏器脏体比对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；病理指标也未见由受试物引起的一场改变。故未见受试物对动物体重、食物利用率、血液学、血生化脏体比和病理组织学检查有不良影响。

Claims

1.一种具有辅助降血糖功能的奶粉，以鲜牛奶或由牛奶直接获得的奶粉为主要原料，其特征在于，每260～700重量份鲜牛奶或30～80重量份由牛奶直接获得的奶粉，含有灵芝提取物0.01～8重量份，百合提取物0.01～8重量份，麦冬提取物0.01～4重量份，知母提取物0.01～4重量份，木糖醇3～15重量份，以及脱盐乳清粉0～20重量份，大豆油0～6重量份，大豆分离蛋白0～4重量份，碳酸钙0～2重量份，柠檬酸钾0.01～2重量份，牛磺酸0～2重量份，乙基香兰素0～1重量份，维生素及微量元素0～1重量份；

所述麦冬提取物按照下述方法提取：将0.8重量份麦冬用90％的酒精浸泡3小时后，晾干；将晾干后的麦冬用8倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次；将滤液合并后浓缩，取上清液；将上清液调整酒精度至80％，放置沉淀48小时，去掉上层酒精，得到醇沉物，过滤；

所述知母提取物按照下述方法提取：将0.8重量份知母用90％的酒精浸泡3小时后，晾干；将晾干后的知母用8倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次；将滤液合并后浓缩，取上清液；将上清液调整酒精度至80％，放置沉淀48小时，去掉上层酒精，得到醇沉物，过滤；

所述百合提取物按照下述方法提取：将1.6重量份百合用90％的酒精浸泡3小时后，晾干；将晾干后的百合用10倍水煎煮40分钟，过滤，再煎煮两次，每次30分钟；将滤液合并后浓缩，取上清液；将上清液调整酒精度至80％，放置沉淀48小时。去掉上层酒精，得到醇沉物，过滤；

所述灵芝提取物按照下述方法提取：将3.2重量份灵芝用水浸泡变软；用12倍水煎煮3小时，过滤，重复煎煮一次；将滤液合并后浓缩，取上清液；将上清液调整酒精度至80％，放置沉淀48小时，去掉上层酒精，得到醇沉物，过滤；将沉淀溶于水，按水溶液的0.2％加入已活化的活性炭，煮沸30分钟，趁热抽滤，重复抽滤一次。

2.如权利要求1所述的具有辅助降血糖功能的奶粉，其特征在于，每260～700重量份鲜牛奶或30～80重量份由牛奶直接获得的奶粉，含有灵芝提取物0.1～6重量份，百合提取物0.1～6重量份，麦冬提取物0.05～4重量份，知母提取物0.05～4重量份，木糖醇5～12重量份，以及脱盐乳清粉0～20重量份，大豆油0～6重量份，大豆分离蛋白0～4重量份，碳酸钙0～2重量份，柠檬酸钾0.01～2重量份，牛磺酸0～2重量份，乙基香兰素0～1重量份，维生素及微量元素0～1重量份。