CN104321345B - 用于癌症诊断的针对密蛋白18.2的抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及针对位于CLDN18.2的C端部分中之表位的抗体，其可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18.2。

Description

用于癌症诊断的针对密蛋白18.2的抗体
密蛋白(claudin)是位于上皮与内皮的紧密连接内的整合膜蛋白(integralmembrane protein)。预测密蛋白具有四个跨膜区段，有两个胞外环，并且N端和C端均位于细胞质中。跨膜蛋白质密蛋白(CLDN)家族在上皮与内皮紧密连接的维持中发挥关键作用，并且还可能在细胞骨架的维持中以及在细胞信号转导中发挥作用。
密蛋白18(CLDN18)分子是整合跨膜蛋白(四次跨膜蛋白，tetraspanin)，其具有四个跨膜疏水区和两个胞外环(环1由疏水区1和疏水区2环绕而成；环2由疏水区3和疏水区4环绕而成)。CLDN18以两种不同剪接变体存在，这两种变体描述于小鼠和人中(Niimi，Mol.Cell.Biol.21：7380-90，2001)。所述剪接变体(Genbank登记号：剪接变体1(CLDN18.1)：NP_057453，NM_016369，和剪接变体2(CLDN18.2)：NM_001002026，NP_001002026)的分子量为约27.9/27.72kD。剪接变体CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一个跨膜(TM)区和环1的N端部分中存在差异，而C端的蛋白质一级序列相同。参见图1。
CLDN18.1在正常肺的细胞中选择性表达，而CLDN18.2仅在胃细胞上表达。但是，CLDN18.2在正常胃中的表达局限于已分化的胃上皮短寿细胞中。已确认，CLDN18.2在多种肿瘤组织中表达。例如，已发现，CLDN18.2在胰腺癌、食管癌、胃癌、支气管癌、乳腺癌以及ENT肿瘤中表达。CLDN18.2是有预防和/或治疗原发肿瘤之价值的靶标，所述原发肿瘤例如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC))、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌及其转移癌，特别是胃癌转移例如Krukenberg肿瘤、腹膜转移和淋巴结转移。
CLDN18.2在癌细胞和正常细胞之间的差异表达、其膜定位、其在大多数毒性相关正常组织中不存在、其在胃中的表达局限在可通过胃的靶阴性干细胞来补充的非必要的细胞群体-已分化的胃细胞，使得CLDN18.2成为癌症免疫治疗的有吸引力的靶标，并且在癌症治疗中使用靶向CLDN18.2的基于抗体的治疗剂(therapeutics)使高水平的治疗特异性成为可能。
CLDN18.2靶向抗体的临床应用面临人CLDN18.2与人CLDN18.1高度同源这一问题。可以成功地构建靶向CLDN18.2之示出人CLDN18.2与人CLDN18.1之间的序列差异的N端胞外结构域的CLDN18.2特异性抗体。为产生靶向CLDN18.2之N端部分并且具有使其能够在临床上用于诊断目的(例如，用于检测癌组织切片的细胞中CLDN18.2的表达)之特性的抗体而作出的尝试以失败告终。
本发明人出乎意料地发现，针对位于CLDN18.2的C端部分内的特定表位的抗体满足了用于抗体诊断应用之标准，特别是用于检测和鉴定表达CLDN18.2的细胞。最出乎意料地，这些抗体虽然针对CLDN18.1与CLDN18.2之间相同的序列，但并不靶向非癌肺细胞。
本发明的抗体可用于例如诊断癌症和/或确定癌细胞是否表达CLDN18.2。优选地，癌疾病或癌细胞以CLDN18.2在表面表达为特征。表达CLDN18.2的癌细胞是靶向CLDN18.2之治疗的合适的靶标，例如，使用针对CLDN18.2之抗体的治疗。在一个实施方案中，癌细胞表达或异常表达CLDN18.2，而相应的正常细胞不表达CLDN18.2或以较低水平表达CLDN18.2。表达CLDN18.2的细胞优选地选自致瘤性胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。
发明内容
本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其
(i)与具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ IDNO：6)的肽相结合，和/或
(ii)与密蛋白18.2(CLDN18.2)相结合，其中所述抗体或其抗原结合片段通过至少与CLDN18.2中具有氨基酸序列TEDEVQSYPSKHDYV(SEQ ID NO：5)或EVQSYPSKHDYV(SEQ IDNO：6)的表位相结合从而与CLDN18.2相结合。
在一个实施方案中，所述CLDN18.2是细胞表面膜结合CLDN18.2。在一个实施方案中，所述CLDN18.2存在于癌细胞上，其中所述癌细胞优选为表达CLDN18.2的癌细胞。在一个实施方案中，所述癌细胞选自胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段不与除胃上皮细胞以外的非癌细胞相结合。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段不与非癌肺细胞相结合。在一个实施方案中，本发明的抗体是嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体。
在这些和另一些方面，本发明涉及一种抗体，其包含：
(I)抗体重链，所述抗体重链包含：
(i)根据SEQ ID NO：7的抗体重链序列或其变体，
(ii)根据SEQ ID NO：7的抗体重链序列之CDR序列中的至少一个、优选两个、更优选全部三个，或其变体，或者
(iii)根据SEQ ID NO：10的CDR3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ IDNO：8的CDR1序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO：9的CDR2序列或其变体，
和/或
(II)抗体轻链，所述抗体轻链包含：
(i)根据SEQ ID NO：11的抗体轻链序列或其变体，
(ii)根据SEQ ID NO：11的抗体轻链序列之CDR序列中的至少一个、优选两个、更优选全部三个，或其变体，或者
(iii)根据SEQ ID NO：14的CDR3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ IDNO：12的CDR1序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO：13的CDR2序列或其变体。
在上述和另一些方面，本发明还涉及一种抗体，其包含：
(I)抗体重链，所述抗体重链包含：
(i)根据SEQ ID NO：15的抗体重链序列或其变体，
(ii)根据SEQ ID NO：15的抗体重链序列之CDR序列中的至少一个、优选两个、更优选全部三个，或其变体，或者
(iii)根据SEQ ID NO：18的CDR3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ IDNO：16的CDR1序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO：17的CDR2序列或其变体，
和/或
(II)抗体轻链，所述抗体轻链包含：
(i)根据SEQ ID NO：19的抗体轻链序列或其变体，
(ii)根据SEQ ID NO：19的抗体轻链序列之CDR序列中的至少一个、优选两个、更优选全部三个，或其变体，或者
(iii)根据SEQ ID NO：22的CDR3序列或其变体，并且优选地还包含根据SEQ IDNO：20的CDR1序列或其变体，和/或根据SEQ ID NO：21的CDR2序列或其变体。
在一些优选实施方案中，本发明的抗体包含抗体重链和/或抗体轻链，所述抗体重链包含γ-1重链恒定区，优选人γ-1重链恒定区，所述抗体轻链包含κ轻链恒定区。
在上述和另一些方面，本发明涉及由杂交瘤细胞产生的或可从其获得的抗体，所述杂交瘤细胞保藏在DSMZ(Inhoffenstr.7B，38124，布伦瑞克(Braunschweig)，德国)，并且具有以下命名和登记号之一：
1.muAB 43-14A，登记号DSM ACC3144，保藏于2011年10月6日，或
2.muAB 35-22A，登记号DSM ACC3143，保藏于2011年10月6日。
本文中通过参照抗体的命名和/或通过参照产生抗体的克隆来命名本发明的抗体，例如muAB 43-14A。
另一些优选的抗体是具有由上述杂交瘤产生或可从其获得之抗体特异性的抗体，并且特别是包含与由上述杂交瘤产生的和可从其获得的抗体的抗原结合部分或抗原结合位点(特别是可变区)相同或高度同源之抗原结合部分或抗原结合位点(特别是可变区)的抗体。预期优选其CDR区与由上述杂交瘤产生的和可从其获得的抗体的CDR区相同或高度同源的抗体。“高度同源”意指可以在每个CDR区中进行1至5(优选1至4，例如1至3或者1或2)个替换。特别优选的抗体是由上述杂交瘤产生的及可从其获得的抗体的嵌合形式和人源化形式。
因此，本发明的抗体可选自：(i)由以如下登记号保藏之克隆产生的或可从其获得的抗体：DSM ACC3144(muAB 43-14A)或DSM ACC3143(muAB 35-22A)；(ii)为(i)中抗体的嵌合形式或人源化形式的抗体；(iii)具有(i)中抗体之特异性的抗体；以及(iv)包含(i)中抗体之抗原结合部分或抗原结合位点的抗体。(i)中所述抗体的抗原结合部分或抗原结合位点可包含(i)中抗体的可变区。此外，本发明还包括本文所述抗体的抗原结合片段。
本发明的抗体优选地能够与天然状态的(即天然存在或非变性状态的)CLDN18.2或其变性状态的CLDN18.2相结合。
在一个实施方案中，本发明的抗体可通过包括以下步骤的方法获得：用包含SEQID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列优选地由所述氨基酸序列组成的肽、或免疫等效肽、或表达所述肽的核酸或宿主细胞来免疫接种动物。优选地，所述肽包含CLDN18.2的不多于110、100、90、80、70、60、50、40、30、或20个连续氨基酸。
在一个实施方案中，本发明的抗体可通过包括以下步骤的方法获得：用包含SEQID NO：24或SEQ ID NO：25的氨基酸序列并且优选地由所述氨基酸序列组成的肽、或免疫等效肽、或表达所述肽的核酸或宿主细胞来免疫接种动物。优选地，所述肽包含CLDN18.2的不多于110、100、90、80或75个连续氨基酸。
本发明的抗体或抗原结合片段可与其他部分(例如可检测标记物)相偶联，即共价连接或非共价连接。
本发明还涉及产生如本文所述之抗体的细胞，例如杂交瘤细胞。
优选的杂交瘤细胞是保藏于DSMZ(Inhoffenstr.7B，38124布伦瑞克，德国)的杂交瘤细胞，并且其具有以下命名和登记号之一：
1.muAB 43-14A，登记号DSM ACC3144，保藏于2011年10月6日；或
2.muAB 35-22A，登记号DSM ACC3143，保藏于2011年10月6日。
本发明还涉及包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列并且优选由所述氨基酸序列组成的肽或免疫等效肽。优选地，所述肽包含CLDN18.2的不多于110、100、90、80、70、60、50、40、30、或20个连续氨基酸。
本发明还涉及包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的氨基酸序列并且优选由所述氨基酸序列组成的肽或免疫等效肽，或表达所述肽的核酸或宿主细胞。优选地，所述肽包含CLDN18.2的不多于110、100、90、80或75个连续氨基酸。
本发明还涉及核酸，所述核酸包含编码本文所述抗体或其部分(例如，抗体链、或抗原结合片段、或肽)的基因或核酸序列。优选地，本发明的核酸与允许在真核或原核细胞中表达的表达控制元件有效连接。确保在真核或原核细胞中表达的控制元件为本领域技术人员所公知。
本发明的核酸可以包含在载体中，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者例如在遗传工程中常规使用的其他载体。所述载体可包含另外的基因，例如标记物基因，其允许在合适的宿主细胞和在合适的条件下选择所述载体。此外，所述载体可包含表达控制元件，其允许在合适的宿主中正确表达编码区。这样的控制元件是技术人员已知的，并且可包括启动子、剪接盒(splice cassette)和翻译起始密码子。
用于构建核酸分子、构建包含核酸分子的载体、将载体引入适当地选择的宿主细胞、或者引起或实现核酸分子之表达的方法在本领域中是公知的。
本发明的另一方面涉及包含本文所公开的核酸或载体的宿主细胞。
本发明的另一方面涉及使用本发明的抗体或抗原结合片段检测CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞或测定CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量。通过检测CLDN18.2与本发明的抗体或抗原结合片段之间的复合物或测定该复合物的量来检测CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞或测定CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量。所述复合物的形成表明存在CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞。这样的检测或量的测定可以以多种方式实施，包括但不限于，使用本发明的抗体或抗原结合片段进行免疫检测。使用抗体来检测肽或蛋白质的方法是公知的，包括ELISA、竞争结合测定等。一般而言，这样的测定使用特异性结合靶肽或靶蛋白的抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段直接或间接与提供用于检测的标记物相结合，所述标记物例如指示酶、放射性标记物、荧光团或顺磁性颗粒。本发明的方法允许对CLDN18.2水平或表达CLDN18.2之细胞的水平进行定量和/或定性评价，例如绝对评价和/或相对评价。
在一个方面，本发明涉及用于在样品中检测CLDN18.2或测定CLDN18.2的量的方法，该方法包括以下步骤：
(i)使样品与本发明的抗体或抗原结合片段或本发明的缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体、抗原结合片段或缀合物与CLDN18.2之间复合物的形成，或测定其量。
在一个实施方案中，所述样品是细胞样品，即包含细胞(例如癌细胞)的样品。在该实施方案中，优选地，所述复合物是由所述抗体、抗原结合片段或缀合物与所述样品中的细胞所表达的CLDN18.2之间形成的。
在一个方面，本发明涉及用于确定细胞是否表达CLDN18.2的方法，其包括以下步骤：
(i)使细胞样品与本发明的抗体或抗原结合片段或本发明的缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体、抗原结合片段或缀合物与所述样品中的细胞所表达的CLDN18.2之间复合物的形成。
在一个实施方案中，样品中的细胞是癌细胞。优选地，所述复合物是抗体、抗原结合片段或缀合物与所述样品中的细胞所表达的CLDN18.2之间形成的。
本发明的另一些方面涉及通过使用本发明的抗体或抗原结合片段来靶向CLDN18.2从而对疾病进行诊断或分类的方法。这些方法提供对表达CLDN18.2之细胞的选择性检测，从而将这些细胞与不表达CLDN18.2的正常细胞或不表达CLDN18.2的患病细胞区分开。可以通过靶向CLDN18.2的疗法来治疗以表达CLDN18.2的患病细胞为特征的疾病，所述疗法例如使用针对CLDN18.2的治疗性抗体的疗法。优选的用来治疗或诊断的疾病是其中表达或异常表达CLDN18.2的那些疾病，特别是癌疾病，例如本文所述的那些癌疾病。
在一方面，本发明涉及用于诊断、检测或监测癌疾病(即，确定消退、发展、进程(course)和/或发病)的方法，其包括：使用本发明的抗体或抗原结合片段检测从患者分离的生物样品中的CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞和/或测定CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量。可以使用该方法来检测对象是否患有癌疾病或者是否处于发生癌疾病的(升高的)风险中，或者例如，治疗方案是否有效。
因此，在一个方面，本发明涉及用于诊断、检测或监测癌症的方法，其包括以下步骤：
(i)使生物样品与本发明的抗体或抗原结合片段或本发明的缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体、抗原结合片段或缀合物与CLDN18.2之间复合物的形成和/或测定该复合物的量。
在一个实施方案中，生物样品是细胞样品，即包含细胞(例如癌细胞)的样品。在该实施方案中，优选地，所述复合物是抗体、抗原结合片段或缀合物与所述样品中的细胞所表达的CLDN18.2之间形成的。
根据本发明的监测方法优选地包括在第一时间点检测第一样品中和在第二时间点检测另一样品中的CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞和/或测定其量，其中可以通过对两个样品进行比较来确定肿瘤疾病的消退、发展、进程和/或发病。
通常，将生物样品中CLDN18.2的水平或表达CLDN18.2的细胞的水平与参照水平进行比较，其中与所述参照水平的偏差指示癌疾病在对象中的存在和/或阶段。所述参照水平可以是在对照样品(例如，来自健康的组织或对象，特别是无癌疾病的患者)中测定的水平或者健康对象的中位水平。与所述参照水平的“偏差”表示任何显著改变，例如升高至少10％、20％或30％，优选至少40％或50％或者甚至更高。
优选地，存在CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞和/或与参照水平相比(例如，与无癌疾病的患者相比)CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量增加表示患者中存在癌疾病或者存在发生癌疾病的风险(即，产生癌疾病的可能性)。
与较早前从患者获取的生物样品相比，CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量降低可指示患者中癌疾病的消退、积极的进程(例如，成功的治疗)或发病风险降低。
与较早前从患者获取的生物样品相比，CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量提高可指示所述患者中癌疾病的进展、消极的进程(例如，不成功的治疗)、复发或转移行为、发病或发病风险。
在一个方面，本发明涉及用于确定是否可以用靶向CLDN18.2的癌症疗法来治疗癌症的方法，其包括以下步骤：
(i)使包含癌细胞的样品与本发明的抗体或抗原结合片段或本发明的缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体、抗原结合片段或缀合物与CLDN18.2之间复合物的形成。
优选地，所述复合物是所述抗体、抗原结合片段或缀合物与所述样品中的癌细胞所表达的CLDN18.2之间形成的。
该方法可用于检测患者是否适合涉及靶向表达CLDN18.2的细胞的治疗，例如使用发挥一种或更多种免疫效应功能的抗体的治疗，所述抗体例如细胞毒性CLDN18.2特异性抗体，例如用细胞毒性物质(例如毒素)或放射性标记物来标记的抗体，或者诱导细胞杀伤机制(例如CDC或ADCC)的抗体。可以用靶向CLDN18.2的疗法来治疗以表达CLDN18.2的患病细胞为特征的疾病，例如癌疾病，特别是本文所述的那些癌疾病。
在上述任意方面的一个实施方案中，所述样品、细胞样品或生物样品来自患有癌疾病，怀疑患有癌疾病或具有患癌疾病之风险的患者。在一个实施方案中，所述样品、细胞样品或生物样品来自在组织或器官未患癌症时其中的细胞基本不表达CLDN18.2的组织或器官。优选地，所述组织是除胃组织以外的组织。优选地，所述组织是肺组织、食管组织、胰腺组织或乳腺组织，并且所述组织或器官任选地已例如通过对所述组织或器官的细胞进行目视检查或培养测试而被诊断为被癌疾病影响。在该实施方案中，存在CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞和/或与参照水平相比(例如与无肿瘤疾病的患者相比)CLDN18.2或表达CLDN18.2的细胞的量增加可指示患者适于涉及靶向表达CLDN18.2的细胞的治疗。
在一个方面，本发明提供了组合物(例如，诊断组合物)或试剂盒，其包含本文所述的抗体或抗原结合片段或者抗体和/或抗原结合片段的组合。该诊断组合物或测试试剂盒可用于本发明的方法，例如本发明的用于诊断、检测或监测的方法。这些试剂盒可任选地包含可检测标记物，例如指示酶、放射性标记物、荧光团或顺磁性颗粒。所述试剂盒可包含信息手册，例如，用于说明如何使用试剂来实施本文所公开的方法的手册。
通过以下的详细描述和权利要求，本发明的另一些特征和优势将是明显的。
发明详述
虽然在下文中对本发明进行了详细描述，但是应理解，本发明不局限于本文所述的具体方法、方案和试剂，这些方法、方案和试剂可以改变。还应理解，本文使用的术语只出于描述具体实施方案的目的，而无意于限制本发明的范围，本发明的范围将由所附权利要求限定。除非另有指明，否则本文使用的全部技术和科学术语的含义与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同。
在下文中，将对本发明的要素进行描述。这些要素伴随具体实施方案列举，但是，应理解，它们可以以任何方式及任何数目组合从而形成另外的实施方案。多方面描述的实施例及优选实施方案不应被解释为将本发明仅局限于明确描述的实施方案。该描述应理解为支持和涵盖组合明确描述的实施方案与任何数目的所公开的和/或优选的要素的实施方案。此外，应认为本申请所述全部要素的任何排列和组合均由本申请说明书所公开，上下文中另有指明除外。
优选地，本文使用的术语按照“A multilingual glossary of biotechnologicalterms：(IUPAC Recommendations)”，H.G.W.Leuenberger，B.Nagel和H.编著，Helvetica Chimica Acta，CH-4010Basel，Switzerland，(1995)中所述来定义。
除非另有指明，否则本发明的实施将采用化学、生物化学、细胞生物学、免疫学和重组DNA技术的常规方法，其在本领域文献中有所解释(参见，例如，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第2版，J.Sambrook等编著，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor1989)。
在本说明书和所附的权利要求书通篇中，除非上下文中另外要求，否则词语“包括/包含(comprise)”及其变化形式将理解为意指包括所陈述的成员、整数(integer)或步骤或者成员、整数或步骤的组，但不排除任何其他成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组，尽管在一些实施方案中，这样的其他成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组可以被排除，即，主题在于包括所陈述的成员、整数或步骤或者成员、整数或步骤的组。除非本文中另外指明或者与上下文明显矛盾，否则描述本发明的上下文中(尤其是在权利要求书的上下文中)使用的没有数量词修饰的名词要解释为涵盖单数和复数两者。本文中数值范围的叙述仅意在作为单独地指代落入该范围内的各独立的值的便捷方法。除非本文中另外指明，否则各单独的值均并入说明书中，如同其在本文中单独引用。除非本文中另外指明或者与上下文明显相矛盾，否则可以以任何合适的顺序进行本文中所描述的所有方法。除非另外要求，否则本文中提供的任意和全部实施例或示例性语言(例如，“例如”)的使用仅意在更好地举例说明本发明，并不对本发明的范围进行限制。本说明书中的任何语言都不应当被解释为表示对实施本发明而言必要的任何非要求保护之要素。
在本说明书通篇中引用了若干篇文献。本文所引用的每篇文献(包括全部专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、指南等)，无论是在上文中的还是在下文中的，均通过引用整体并入本文。本文中的任何内容都不应当被解释为承认本发明无权作为在先发明而先于这些公开内容。
在本发明上下文中，术语“重组”意指“通过基因工程制备”。优选地，在本发明上下文中，“重组物质(recombinant object)”例如重组细胞不是天然的。
本文所用术语“天然的”指对象可见于自然界这一事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中并可从自然界来源分离，并且在实验室中未有意进行人工修饰的肽或核酸是天然存在的。
术语“抗原”涉及包含表位，并且针对所述表位可引起和/或产生免疫应答的物质。优选地，在本发明上下文中，抗原是这样的分子，其任选地在加工后诱导优选地特异性针对抗原的免疫反应。特别地，术语“抗原”包括蛋白质、肽、多糖、核酸(尤其是RNA和DNA)和核苷酸。
术语“表位”指分子中的抗原决定簇，即指分子中被免疫系统识别(例如被抗体识别)的部分。例如，表位是被免疫系统识别的抗原上不连续的三维位点。表位通常由分子的化学活性表面基团(例如氨基酸或糖侧链)组成，并通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象表位与非构象表位的区别在于在变性溶剂存在下前者丧失结合，而后者则不然。蛋白质(例如，CLDN)的表位优选地包含所述蛋白质的连续或不连续部分，并且长度优选地是5至100、优选5至50、更优选8至30、最优选10至25个氨基酸，例如，所述表位的长度可优选地是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。
本文使用的术语“不连续表位”指蛋白质抗原上由蛋白质一级序列中至少两个独立的区域形成的构象表位。
在一个优选的实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原(例如CLDN18.2)，即癌细胞的成分，其可来自细胞质、细胞表面和细胞核，特别是优选地在胞内或作为癌细胞的表面抗原大量产生的那些抗原。
在本发明的上下文中，术语“肿瘤相关抗原”或“肿瘤抗原”涉及在正常条件下在有限数目的组织和/或器官中或者在特定发育阶段中特异性表达的蛋白质，例如，肿瘤相关抗原可以在正常条件下于胃组织中特异性表达，优选地在胃粘膜中、在生殖器官(例如，睾丸)中、在滋养层组织(例如，胎盘)中或者在生殖系细胞中，以及在一种或更多种肿瘤组织或癌组织中表达或异常表达。在本上下文中，“有限数目”优选地指不大于3，更优选不大于2。在本发明的上下文中，肿瘤相关抗原包括例如分化抗原，优选细胞类型特异性分化抗原，即，在正常条件下在处于特定分化阶段的特定细胞类型中特异性表达的蛋白质；癌/睾丸抗原，即，在正常条件下在睾丸中并且有时在胎盘中特异性表达的蛋白质，以及生殖系特异性抗原。在本发明的上下文中，肿瘤相关抗原优选地与癌细胞的细胞表面缔合，并且优选地在正常组织中不表达或仅很少表达。优选地，肿瘤相关抗原或肿瘤相关抗原的异常表达可鉴定癌细胞。在本发明的上下文中，对象(例如，患有癌疾病的患者)中的癌细胞表达的肿瘤相关抗原优选地为所述对象中的自体蛋白。在一些优选实施方案中，本发明上下中的肿瘤相关抗原在正常条件下在非必需的组织或器官(即，在对象受到免疫系统损伤时不导致死亡的组织或器官)或者机体的免疫系统无法接近或免疫系统很难接近的器官或结构中特异性表达。优选地，在正常组织中表达的肿瘤相关抗原的氨基酸序列与在癌组织中表达的肿瘤抗原的氨基酸序列相同。
理想地满足作为肿瘤免疫治疗(特别是肿瘤疫苗接种)中的靶结构之肿瘤相关抗原标准的分化抗原的实例是密蛋白家族的细胞表面蛋白质，例如CLDN18.2。密蛋白是紧密连接中最重要组分的一个蛋白质家族，在紧密连接中，密蛋白构成了细胞旁屏障，所述细胞旁屏障控制上皮细胞之间的细胞间隙中的分子流动。密蛋白是四次跨膜的跨膜蛋白，其N端和C端均位于细胞质中。
术语“密蛋白18”或“CLDN18”优选地涉及人CLDN18并且包括任何剪接变体，例如CLDN18的CLDN18.1和CLDN18.2。CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一个跨膜(TM)区和环1的N端部分存在差异，而C端的蛋白质一级序列相同。
术语“CLDN18.1”优选地涉及人CLDN18.1，并且特别地涉及包含根据序列表的SEQID NO：1的氨基酸序列或所述氨基酸序列之变体的蛋白质。
术语“CLDN18.2”优选地涉及人CLDN18.2，并且特别地涉及包含根据序列表的SEQID NO：2的氨基酸序列或所述氨基酸序列之变体的蛋白质。
根据本发明的术语“变体”特别地指突变体、剪接变体、构象、同种型、等位基因变体、种变体(species variant)和种同源物(species homolog)，特别是天然存在的变体。等位基因变体涉及基因正常序列中的改变，其显著性通常不明显。全基因测序通常鉴定出给定基因的大量等位基因变体。种间同源物是与给定核酸或氨基酸序列具有不同物种起源的核酸或氨基酸序列。
术语“CLDN”、“CLDN18”、“CLDN18.1”和“CLDN18.2”应涵盖任何翻译后修饰的变体和构象变体。
CLDN18.2在正常组织中分化的胃粘膜上皮细胞中选择性表达。CLDN18.2在不同来源的癌中表达并且由于其选择性表达(在毒性相关的正常组织中不表达)和定位于质膜而特别适合作为用于开发抗体介导的癌症免疫疗法的靶结构。例如，已发现，CLDN18.2在胰腺癌、食管癌、胃癌、支气管癌、乳腺癌及ENT肿瘤中表达。CLDN18.2是在预防和/或治疗原发肿瘤及其转移中有价值的靶标，所述原发肿瘤例如胃癌、食管癌、胰腺癌、肺癌例如非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌和胆囊癌，所述转移特别是胃癌转移例如Krukenberg肿瘤、腹膜转移和淋巴结转移。表达CLDN18.2的细胞优选为癌细胞，并且特别地选自致瘤性胃癌细胞、食管癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞和胆囊癌细胞。
根据本发明，表达CLDN18.2的细胞优选特征在于细胞表面膜结合的CLDN18.2，即，CLDN18.2与细胞表面缔合。此外，根据本发明，细胞CLDN18.2优选地为细胞表面膜结合的CLDN18.2。表达CLDN18.2的细胞或特征在于CLDN18.2与其细胞表面缔合的细胞优选为癌细胞，优选为来自本文所述之癌症的癌细胞。
术语“与细胞表面缔合”指肿瘤相关抗原(例如CLDN18.2)与细胞的质膜缔合并且定位于细胞的质膜，其中肿瘤相关抗原的至少一部分面向所述细胞的细胞外间隙并且从所述细胞的外部可接近(accessible)，例如被位于细胞外部的抗体。在本上下文中，所述一部分优选地为至少4个、优选至少8个、优选至少12个、更优选至少20个氨基酸。该缔合可以是直接的，也可以是间接的。例如，该缔合可以是通过一个或更多个跨膜结构域，一个或更多个脂质锚，或者通过与任何其他蛋白质、脂质、糖类或可见于细胞质膜外叶(leaflet)上的其他结构的相互作用。例如，与细胞表面缔合的肿瘤相关抗原可以是具有胞外部分的跨膜蛋白质或者可以是通过与作为跨膜蛋白质的另一蛋白质相互作用而与细胞表面缔合的蛋白质。
“细胞表面”或“细胞的表面”根据其在本领域中的常规含义使用，因此包括易于被蛋白质和其他分子结合的细胞外部。
根据本发明，如果表达和缔合的水平与除胃以外的非癌组织中的表达和缔合水平相比超出不大于2倍，优选1.5倍，并且优选地不超过在所述非癌组织中的表达和缔合水平，则CLDN18.2在细胞中基本不表达并且基本不与细胞表面缔合。优选地，如果表达或缔合的水平低于检出限和/或如果表达或缔合的水平太低而不能被加至细胞的CLDN18.2特异性抗体结合，则CLDN18.2在细胞中基本不表达并且基本不与细胞表面缔合。
根据本发明，如果表达和缔合的水平超出在除胃以外的非癌组织中表达和缔合的水平，优选大于2倍，优选10倍、100倍、1000倍或10000倍，则CLDN18.2在细胞中表达并与细胞表面缔合。优选地，如果表达和缔合的水平高于检出限和/或如果表达和缔合的水平足够高从而可以与被加至细胞的CLDN18.2特异性抗体结合，则CLDN18.2在细胞中表达并与细胞表面缔合。
术语“抗体”指包含通过二硫键互联的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，并且包括任何包含其抗原结合部分的分子。术语“抗体”包括单克隆抗体及抗体片段或衍生物，包括但不限于人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体(例如，scFv′s)和抗原结合的抗体片段(例如，Fab和Fab′片段)，术语“抗体”还包括抗体的所有重组体形式，例如在原核细胞中表达的抗体、未糖基化的抗体以及本文所述的任何与抗原结合的抗体片段及衍生物。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区构成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区构成。VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，它们散布在称为构架区(FR)的更保守区域中。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导该免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一成分(C1q)。
本文所述的抗体可以是人抗体。本文使用的术语“人抗体”旨在包括具有来自人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可包含不是由人生殖系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机诱变或定点诱变或者通过体内体细胞突变引入的突变)。
术语“人源化抗体”指具有基本来自非人物种免疫球蛋白的抗原结合位点的分子，其中所述分子其余的免疫球蛋白结构是基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。所述抗原结合位点可包含融合到恒定结构域上的完整可变结构域，或者仅包含移接(graft)到可变结构域中适当构架区上的互补决定区(CDR)。抗原结合位点可以是野生型的，或者通过一个或更多个氨基酸替换进行修饰，例如进行修饰以与人免疫球蛋白更为类似。某些形式的人源化抗体保留了全部CDR序列(例如含有来自小鼠抗体的全部六个CDR的人源化小鼠抗体)。其他形式具有一个或更多个相对于原始抗体而言发生了改变的CDR。
术语“嵌合抗体”指这样的抗体，其中每个重链和轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种或者属于特定类别的抗体中相应序列同源，而该链的其余区段则与另一物种或属于另一类别的相应序列同源。一般地，轻链和重链的可变区均模拟来自一个哺乳动物物种之抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种的抗体序列同源。这种嵌合形式的一个明显优点是可使用易于获得的B细胞或来自非人宿主生物体的杂交瘤从目前已知的来源方便地产生可变区，而与其组合的恒定区来自例如人细胞制备物。所述可变区具有易于制备的优点，并且特异性不受来源的影响，而由于恒定区为人类的，因此该抗体在注射时引发人类对象免疫应答的可能性将比恒定区来自非人来源时更低。然而，定义不限于此具体实例。
术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“结合部分”)或抗体的“抗原结合片段”(或简称为“结合片段”)指抗体中保留特异性结合抗原之能力的一个或更多个片段。已经显示，抗体的抗原结合功能可通过全长抗体的片段来实现。术语抗体的“抗原结合部分”所涵盖的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH结构域组成的一价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)，和(vii)可任选地通过合成接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但可使用重组方法通过合成接头将它们连接在一起，所述接头使它们成为单个蛋白质链，其中VL和VH区配对形成一价分子(称为单链Fv(scFv)，参阅例如Bird等(1988)Science 242：423-426；以及Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体还旨在涵盖于术语抗体的“抗原结合片段”中。另一实例为包含以下部分的结合结构域免疫球蛋白融合蛋白：(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的结合结构域多肽，(ii)与该铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区，和(iii)与CH2恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。所述结合结构域多肽可以是重链可变区或轻链可变区。所述结合结构域免疫球蛋白融合蛋白在US 2003/0118592和US 2003/0133939中进一步公开。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的效用。
本文所述的抗体可以是单克隆抗体。本文使用的术语“单克隆抗体”指具有单分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体显示单一结合特异性和亲和性。在一个实施方案中，单克隆抗体通过杂交瘤产生，所述杂交瘤包括与无限增殖化(immortalized)细胞融合的得自非人动物(例如小鼠)的B细胞。
本文所述的抗体可以是重组抗体。本文使用的术语“重组抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有抗体，例如(a)从免疫球蛋白基因为转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或由其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)从经转化以表达所述抗体的宿主细胞(例如转染瘤)分离的抗体，(c)从重组的组合抗体文库分离的抗体，和(d)通过涉及将免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列的任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体。
本文使用的术语“转染瘤”包括表达抗体的重组真核宿主细胞，例如CHO细胞、NS/0细胞、HEK293细胞、HEK293T细胞、植物细胞或真菌(包括酵母)细胞。
本文使用的术语“异源抗体”以产生这种抗体的转基因生物体进行定义。该术语指这样的抗体，其具有对应于不由该转基因生物体组成的生物体中可见的氨基酸序列或编码核酸序列的氨基酸序列或编码核酸序列，并且通常来自与该转基因生物体不同的物种。
本文使用的术语“异源杂合抗体(heterohybrid antibody)”指具有不同生物来源的轻链和重链的抗体。例如，具有与鼠类轻链连接的人重链的抗体是异源杂合抗体。
本发明包括本文所述的为了本发明的目的由术语“抗体”涵盖的所有抗体和抗体衍生物。术语“抗体衍生物”指抗体的任何修饰形式，例如抗体与另一物质(agent)或抗体的缀合物或抗体片段。
本文所述抗体优选是分离的。本文使用的“分离的抗体”旨在指基本不含具有不同抗原特异性之其他抗体的抗体。此外，分离的抗体可基本不含其他细胞材料和/或化学物质。
根据本发明，在标准测定中，如果抗体对预定靶标具有显著的亲和力并且与所述预定靶标结合，则所述抗体能够与所述预定靶标结合。通常通过平衡解离常数(KD)来测量“亲和力”或“结合亲和力”。优选地，术语“显著的亲和力”指以10-5M或更低、10-6M或更低、10-7M或更低、10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M或更低、10-11M或更低或者10-12M或更低的解离常数(KD)与预定靶标结合。
在标准的测定中，如果抗体对靶标不具有显著的亲和力并且不与所述靶标显著地结合，特别是不与之可检测地结合，则所述抗体(基本)不能与所述靶标结合。优选地，如果以高达2μg/ml、优选10μg/ml、更优选20μg/ml、特别是50μg/ml或100μg/ml或者更高的浓度存在，则所述抗体不与所述靶标可检测地结合。优选地，如果抗体与所述靶标以与预定之靶标(所述抗体能够与其结合)结合之KD相比高至少10倍、100倍、103倍、104倍、105倍或106倍的KD结合，则抗体对靶标不具有显著的亲和力。例如，如果抗体与所述抗体能够与之结合的靶标相结合的KD是10-7M，则抗体与对其不具有显著亲和力的靶标相结合的KD可以是至少10- 6M、10-5M、10-4M、10-3M、10-2M或10-1M。
如果抗体能够与预定靶标结合而不能与其他靶标结合(即，在标准测定中对其他靶标没有显著的亲和力并且不与其他靶标显著地结合)，则所述抗体对所述预定靶标具有特异性。根据本发明，如果抗体能够与CLDN18.2结合但(基本)不能与其他靶标(特别是除密蛋白之外的蛋白质，优选除CLDN18之外的蛋白质，特别是除CLDN18.2之外的蛋白质)结合，则所述抗体对CLDN18.2具有特异性。优选地，如果与这些其他靶标的亲和力和结合没有显著超过与密蛋白不相关的蛋白质(例如，牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)、酪蛋白、人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)或非密蛋白跨膜蛋白质(例如，MHC分子或转铁蛋白受体)或任何其他指定的多肽)的亲和力或结合，则所述抗体对CLDN18.2具有特异性。优选地，如果抗体与所述靶标以与抗体对其不具有特异性的靶标结合之KD相比低至少10倍、100倍、103倍、104倍、105倍或106倍的KD结合，则所述抗体对预定靶标具有特异性。例如，如果抗体与对其具有特异性之靶标结合的KD是10-7M，则与对其非特异性的靶标结合的KD可以是至少10-6M、10-5M、10-4M、10-3M、10-2M或10-1M。
可使用任何合适的方法实验性测定抗体与靶标的结合；参见例如Berzofsky等，″Antibody-Antigen Interactions″In Fundamental Immunology，Paul，W.E.编，RavenPress New York，N Y(1984)，Kuby，Janis Immunology，W.H.Freeman and Company NewYork，N Y(1992)和本文中描述的方法。可使用常规技术容易地测定亲和力，例如，通过平衡透析；通过使用BIAcore 2000仪器，使用制造商所描述的通用方法；通过使用放射标记的靶抗原的放射免疫测定；或通过技术人员已知的其他方法。例如，可通过Scatchard等，AnnN.Y.Acad.ScL，51：660(1949)的方法分析亲和力数据。如果在不同条件(例如，盐浓度、pH)下测量，则所测量的具体抗体-抗原相互作用的亲和力可以不同。因此，亲和力和其他抗原-结合参数(例如，KD、IC50)的测量优选地用抗体与抗原的标准化溶液以及标准化缓冲液进行。
本文使用的术语“同种型”指重链恒定区基因所编码的抗体类别(例如，IgM或IgG1)。根据本发明的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体，并包括IgG2a(例如，IgG2a、κ、λ)、IgG2b(例如，IgG2b、κ、λ)、IgG3(例如，IgG3、κ、λ)和IgM抗体。然而，本发明还涵盖其他抗体同种型，包括IgG1、IgA1、IgA2、分泌性IgA、IgD和IgE抗体。
本文使用的术语“同种型转换(isotype switching)”指抗体的类别或同种型由一个Ig类别变成另一Ig类别的现象。
本文使用的术语“重排”指重链或轻链免疫球蛋白基因座的构型，其中V区段在编码基本完整VH或VL结构域的构象中分别位于紧邻D-J或J区段的位置。重排的免疫球蛋白(抗体)基因座可通过与生殖系DNA的比较来鉴定，重排的基因座将具有至少一个重组的七聚体/九聚体同源性元件。
涉及V区段时，本文使用的术语“未重排的”或“生殖系构型”指其中V区段未重组从而未与D或J区段紧邻的构象。
根据本发明，抗体可来自不同物种，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、豚鼠和人。抗体还包括嵌合分子，其中来自一个物种(优选人)的抗体恒定区与来自另一物种的抗原结合位点组合。此外，抗体包括人源化分子，其中来自非人物种的抗体的抗原结合位点与人来源的恒定区和构架区组合。
抗体可通过多种技术产生，包括常规单克隆抗体法，例如Kohler和Milstein，Nature 256：495(1975)的标准体细胞杂交技术。尽管原则上优选体细胞杂交方案，但也可以采用产生单克隆抗体的其他技术，例如B淋巴细胞的病毒或致癌性转化，或者使用抗体基因文库的噬菌体展示技术。
用于制备分泌单克隆抗体的杂交瘤的优选动物系统是小鼠系统。小鼠中杂交瘤的产生是已经非常成熟的方案。分离用于融合的免疫化的(immunized)脾细胞的免疫操作和技术为本领域所已知。融合伴侣(fusion partner)(例如小鼠骨髓瘤细胞)和融合方案也是已知的。
用于制备分泌单克隆抗体的杂交瘤的其他优选动物系统为大鼠和兔系统(例如Spieker-Polet等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92：9348(1995)所述，还可参阅Rossi等，Am.J.Clin.Pathol.124：295(2005))。
在另一优选的实施方案中，针对CLDN18.2的人单克隆抗体可使用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因或转染色体小鼠来产生。这些转基因和转染色体小鼠包括分别称为HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，在本文中统称为“转基因小鼠”。可按照WO2004035607中对CD20的详细描述在这些转基因小鼠中产生人抗体。
产生单克隆抗体的另一策略是从产生确定特异性抗体的淋巴细胞中直接分离编码抗体的基因，参阅例如Babcock等，1996；A novel strategy for generatingmonoclonal antibodies from single，isolated lymphocytes producing antibodiesof defined specificites。重组抗体工程的细节还可参阅Welschof和Kraus，Recombinantantibodes for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8和Benny K.C.Lo AntibodyEngineering ISBN1-58829-092-1。
为了产生针对CLDN18.2的抗体，可以如所述的，用来自CLDN18.2序列的载体缀合肽、重组表达的CLDN18.2抗原或其片段的富集制备物和/或表达CLDN18.2或其片段的细胞来免疫接种小鼠。或者，可以用编码全长人CLDN18.2或其片段的DNA免疫接种小鼠。在使用纯化或富集的CLDN18.2抗原制备物进行的免疫接种未产生抗体的情况中，还可以用表达CLDN18.2的细胞(例如细胞系)免疫接种小鼠，以促进免疫应答。
可以用由尾静脉或眶后取血获得的血浆和血清样品在免疫方案的全程中监测免疫应答。可将效价足够的抗CLDN18.2免疫球蛋白小鼠用于融合。可以在处死并摘除脾之前3至5天用表达CLDN18.2的细胞腹腔内或静脉内对小鼠进行加强免疫，以提高分泌特异性抗体的杂交瘤的比率。
为了产生生产CLDN18.2单克隆抗体的杂交瘤，可从免疫接种的小鼠的淋巴结、脾或骨髓分离细胞，并与适当的无限增殖细胞系(如小鼠骨髓瘤细胞系)融合。接着可针对抗原特异性抗体的产生筛选得到的杂交瘤。接着可以通过ELISA对单个孔筛选分泌抗体的杂交瘤。通过使用表达CLDN18.2的细胞进行的免疫荧光和FACS分析，可以鉴定对CLDN18.2具有特异性的抗体。可将分泌该抗体的杂交瘤重新铺板，再次筛选，并且如果抗CLDN18.2单克隆抗体仍为阳性则可以通过有限稀释进行亚克隆。接着可以体外培养稳定的亚克隆，以在组织培养基中产生抗体用于表征。
本发明的抗体还可以在宿主细胞转染瘤中产生，例如使用本领域公知的重组DNA技术与基因转染方法的组合来进行(Morrison，S.(1985)Science 229：1202)。
例如，在一个实施方案中，可将目的基因(如抗体基因)连接进表达载体(例如真核表达质粒)中，例如所用的通过WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338 841中所公开的GS基因表达系统或本领域公知的其他表达系统。可将带有所克隆抗体基因的纯化质粒引入真核宿主细胞中，例如CHO细胞、NS/0细胞、HEK293T细胞或HEK293细胞，或者其他真核细胞，例如来自植物的细胞、真菌或酵母细胞。用于引入这些基因的方法可以是本领域已描述过的方法，例如电穿孔、lipofectine、lipofectamine或其他。将这些抗体基因引入宿主细胞后，可以鉴定并选择表达该抗体的细胞。这些细胞代表其后可扩增其表达水平并扩大规模以生产抗体的转染瘤。重组抗体可从这些培养物上清液和/或细胞中分离和纯化。
或者，克隆的抗体基因可以在其他表达系统中表达，包括原核细胞例如微生物，例如大肠杆菌(E.coli)。此外，抗体也可以在非人转基因动物中产生，例如在绵羊和兔的乳汁中或在鸡蛋中产生，或者在转基因植物中产生，参阅例如Verma，R.，等(1998)J.Immunol.Meth.216：165-181；Pollock，等(1999)J.Immunol.Meth.231：147-157以及Fischer，R.，等(1999)Biol.Chem.380：825-839。
嵌合抗体是不同部分来自不同动物物种的抗体，例如具有来自小鼠抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。抗体的嵌合通过将小鼠抗体重链和轻链可变区与人重链和轻链恒定区连接在一起来实现(例如Kraus等，Methods in Molecular Biology series，Recombinant antibodies for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8所述)。在一个优选的实施方案中，嵌合抗体通过将人κ轻链恒定区与小鼠轻链可变区连接来产生。在另一优选的实施方案中，嵌合抗体可通过将人λ轻链恒定区与小鼠轻链可变区连接来产生。用于产生嵌合抗体的优选重链恒定区为IgG1、IgG3和IgG4。用于产生嵌合抗体的另一些优选的重链恒定区为IgG2、IgA、IgD和IgM。
抗体主要通过位于六个重链及轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。因此，在单个抗体之间CDR中的氨基酸序列比CDR外的序列更为多样。由于CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，因此有可能通过构建表达载体来表达模拟特定天然抗体之特性的重组抗体，所述表达载体包含来自所述特定天然抗体的CDR序列，其移接到来自具有不同特性的不同抗体的框架序列上(参阅例如Riechmann，L.等(1998)Nature 332：323-327；Jones，P.等(1986)Nature 321：522-525以及Queen，C.等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86：10029-10033)。这样的框架序列可得自包含生殖系抗体基因序列的公共DNA数据库。这些生殖系序列将不同于成熟的抗体基因序列，因为它们将不包含完整装配的可变基因，其是在B细胞成熟过程中通过V(D)J连接形成的。生殖系基因序列还将在均匀跨可变区的个别位置不同于高亲和力次级全套抗体(secondary repertoireantibody)的序列。例如，体细胞突变在框架区1的氨基端部分和框架区4的羧基端部分中相对少见。此外，许多体细胞突变不显著改变抗体的结合特性。因此，为了重建具有与原始抗体相似的结合特性的完整重组抗体，没有必要获得特定抗体的全部DNA序列(参阅WO 99/45962)。跨越CDR区的部分重链和轻链序列对于该目的而言通常是足够的。所述部分序列用于确定哪些生殖系可变，并连接对重组抗体可变基因有贡献的基因区段。接着使用生殖系序列填补该可变区中缺少的部分。重链和轻链前导序列在蛋白质成熟过程中被切割掉，并对最终抗体的特性没有贡献。为了加入缺少的序列，可通过连接或PCR扩增将克隆的cDNA序列与合成寡核苷酸组合。或者，可以将全部可变区合成为一组短的重叠寡核苷酸，并通过PCR扩增组合以产生全部的合成可变区克隆。这种方法具有一些优点，例如消除或包含特定的限制性位点，或者优化特定的密码子。
使用来自杂交瘤的重链及轻链转录本的核苷酸序列来设计合成寡核苷酸的重叠组，以产生与天然序列的氨基酸编码能力相同的合成V序列。合成的重链和κ链序列可以以三种方式不同于天然序列：中断了重复的核苷酸碱基串，以便于寡核苷酸合成和PCR扩增；根据Kozak规则掺入了最佳翻译起始位点(Kozak，1991，J.Biol.Chem.266：19867-19870)；以及翻译起始位点上游的经改造HindIII位点。
对于重链和轻链可变区而言，经优化的编码链及相应非编码链的序列在相应非编码寡核苷酸的大致中点处打断成30-50个核苷酸。因此，对于每条链，可将所述寡核苷酸装配成为跨越150-400个核苷酸的区段的重叠双链组。接着将该库用作模板产生150-400个核苷酸的PCR扩增产物。通常将单个可变区寡核苷酸组分为两个库，将它们各自扩增以产生两个重叠的PCR产物。接着通过PCR扩增来组合这些重叠产物，以形成完整的可变区。在PCR扩增中还可能期望包括重链或轻链恒定区的重叠片段，以产生可容易地克隆进表达载体构建体的片段。
接着将重建的嵌合或人源化重链及轻链可变区与克隆的启动子序列、前导序列、翻译起始序列、恒定区序列、3’非翻译序列、多聚腺苷酸化序列和转录终止序列组合，以形成表达载体构建体。可将重链及轻链表达构建体组合进单个载体，共转染、连续转染或分别转染进宿主细胞中，接着将其融合形成表达这两种链的宿主细胞。描述了用于构建人IgGκ表达载体的质粒。构建所述质粒使得PCR扩增的V重链及Vκ轻链cDNA序列可用于重建完整的重链及轻链小基因(minigene)。这些质粒可用于表达全人抗体或者嵌合IgG1κ或IgG4κ抗体。可以构建类似的质粒用于表达其他重链同种型，或者表达包含λ轻链的抗体。
因此，在本发明的另一方面，使用本文所述的抗CLDN18.2抗体的结构特征来产生结构上相关的人源化抗CLDN18.2抗体，所述人源化抗CLDN18.2抗体保留本发明抗体的至少一种功能特性，例如结合CLDN18.2。更具体地，可通过重组方式将小鼠单克隆抗体的一个或更多个CDR区与已知的人框架区和CDR组合，以产生另外的经重组改造的人源化抗CLDN18.2抗体。
抗体结合CLDN18.2的能力可使用标准结合测定进行测定，例如ELISA、Western印迹、免疫荧光和流式细胞术分析。
可以使用ELISA来证明经免疫接种的小鼠的血清中存在抗体或者证明单克隆抗体与CLDN18.2蛋白或肽的结合。可以使用用于免疫接种的肽或蛋白质来测定杂交瘤上清液的特异性或分析血清滴度。
为了证明经免疫接种小鼠的血清中存在抗体或者证明单克隆抗体结合活细胞，可以使用流式细胞术。可将天然表达或在转染后表达抗原的细胞系以及缺乏抗原表达的阴性对照(在标准生长条件下生长)与杂交瘤上清液中或含1％FBS的PBS中多种浓度的单克隆抗体混合，并可在4℃下孵育30分钟。洗涤后，可在与第一抗体染色相同的条件下使APC或Alexa647标记的抗IgG抗体与结合了抗原的单克隆抗体结合。可通过使用FACS仪器的流式细胞术分析样品，其中使用光散射和侧散射特性对单个活细胞设置门控(gate)。为了在单个测量中区分抗原特异性单克隆抗体与非特异性结合物，可以使用共转染法。可以按照上述对用编码抗原和荧光标记物的质粒瞬时转染的细胞进行染色。经转染的细胞可在与抗体染色细胞不同的荧光通道中检测到。由于大部分转染细胞同时表达两种转基因，因此抗原特异性单克隆抗体优先与表达荧光标记的细胞结合，而非特异性抗体以相当的比率与未转染细胞结合。作为流式细胞术测定的补充或替代，可以使用利用荧光显微术的替代性测定。可以完全如上所述对细胞进行染色，并通过荧光显微术来检查细胞。
为了证明免疫接种的小鼠的血清中存在抗CLDN18.2抗体或者证明单克隆抗体结合表达CLDN18.2的活细胞，可以使用免疫荧光显微术分析。例如，在标准生长条件下，在补充了10％胎牛血清(FCS)、2mM L-谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM/F12培养基中，在载玻片(chamber slide)中培养自发或在转染后表达CLDN18.2的细胞系以及缺乏CLDN18.2表达的阴性对照。接着将细胞用甲醇或多聚甲醛固定，或者不作处理。接着可在25℃下使细胞与针对CLDN18.2的单克隆抗体反应30分钟。洗涤后，可在相同条件下使细胞与Alexa555标记的抗小鼠IgG第二抗体(Molecular Probes)反应。接着通过荧光显微术检查细胞。
当细胞用甲醇固定或多聚甲醛固定并用Triton X-100进行透化后，可观察细胞中的总CLDN18.2水平。在活细胞和非透化的多聚甲醛固定细胞中，可以检查CLDN18.2的表面定位。此外，可以通过用紧密连接标记如ZO-1共染色来分析CLDN18.2对紧密连接的靶向。此外，可以检查抗体结合以及细胞膜中CLDN18.2定位的效果。
还可以通过Western印迹来检测抗CLDN18.2IgG与CLDN18.2抗原的反应性。简言之，可以制备来自表达CLDN18.2之细胞的细胞提取物和合适的阴性对照，并进行十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后，将分开的抗原转移至硝酸纤维素膜，封闭并用待测试的单克隆抗体进行检测。可以使用抗小鼠IgG过氧化物酶检测IgG结合，并用ECL底物显影。
还可以按技术人员熟知的方式通过免疫组化来检测抗CLDN18.2小鼠IgG与CLDN18.2抗原的反应性，例如使用来自非癌组织或癌组织样品的多聚甲醛或丙酮固定冷冻切片或多聚甲醛固定的石蜡包埋组织切片，所述样品在常规手术过程中得自患者，或者得自接种了自主表达或在转染后表达CLDN18.2的细胞系的携带异种移植肿瘤的小鼠。为进行免疫染色，可以孵育与CLDN18.2反应的抗体，其后按照生产商的说明孵育缀合了辣根过氧化物酶的山羊抗小鼠或山羊抗兔抗体。
在本发明的方法中，用于测定CLDN18.2的一个特别优选的方法是免疫组化(IHC)。免疫组化(IHC)指检测组织切片的细胞中的抗原(例如，蛋白质)的方法，例如，本文所述组织的细胞。免疫组化染色广泛用于诊断异常细胞，例如见于癌性肿瘤中的那些。可以以多种方式实现抗体-抗原相互作用的可视化。在最常见的情况下，抗体缀合至酶，例如可催化产生颜色之反应的过氧化物酶。或者，可以为抗体加以标记荧光团，例如荧光素或罗丹明。
样品的制备对于维持细胞形态、组织结构和靶表位的抗原性是至关重要的。这要求适当的组织收集、固定和切片。通常使用多聚甲醛来固定。根据目的和实验样品的厚度，从目的组织切取薄(约4至40μm)的切片，或者如果组织不是非常厚并且可穿透，则其可整体使用。通常通过使用显微切片机来实现切片，并且将切片封片于载片上。
样品可能需要额外的步骤来使得表位可用于抗体结合，包括脱石蜡化和抗原修复(antigen retrieval)。通常，在免疫组化中使用去污剂(例如Triton X-100)来降低表面张力，使得可以使用较少的试剂来实现样品的更好且更均匀的覆盖。
免疫组化染色的直接方法是使用一种标记抗体，其直接与所染抗原相结合。更常用的免疫组化染色间接方法是使用一种针对待检测抗原的抗体和针对第一抗体的第二标记抗体。
为了减少IHC中的背景染色，用缓冲液孵育样品，所述缓冲液封闭反应位点，否则第一抗体或第二抗体可与之结合。第一抗体针对目的抗原并且通常是非缀合(未标记)的，而第二抗体针对第一抗体物质的免疫球蛋白。第二抗体通常与接头分子(例如，生物素)相缀合，其然后募集报告分子，或者第二抗体直接与报告分子本身相结合。常见的封闭缓冲剂包括正常血清、非脂奶粉、BSA或明胶以及市售封闭缓冲剂。
报告分子基于检测方法的性质而不同，并且最常用的检测方法分别是用酶介导的生色检测和荧光团介导的荧光检测。对于生色报告分子，酶标记物与底物反应产生可以用普通光学显微镜进行分析的强烈着色的产物。虽然酶底物的列表是广泛的，但是碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化物酶(HRP)是最广泛地用作蛋白质检测标记物的两种酶。一系列生色底物、荧光底物和化学致发光底物可与酶一起使用，包括DAB或BCIP/NBT。荧光报告分子是用于IHC检测的小的有机分子。对于生色和荧光检测方法，信号的光密度分析可分别提供半定量和全定量数据，以将报告分子信号的水平与蛋白表达水平或定位水平相关联。
在对靶抗原进行免疫组化染色后，通常进行第二染色以提供帮助凸显第一染色的反差。许多这些染色对离散的细胞室或抗原示出特异性，但其他染色将对整个细胞染色。生色染料和荧光染料二者均可用于IHC以提供大量的试剂从而符合每个实验设计。通常使用苏木精、Hoechst染色剂和DAPI。
可以按照Glenn E.Morris在“Epitope Mapping Protocols(Methods inMolecular Biology)”ISBN-089603-375-9中和Olwyn M.R.Westwood，Frank C.Hay在“Epitope Mapping：A Practical Approach”Practical Approach Series，248中的详细描述进行抗体所识别表位的作图(map)。
在本发明的上下文中，术语“免疫效应功能”包括免疫系统的组成所介导的任何功能，其导致抑制肿瘤生长和/或抑制肿瘤发生，包括抑制肿瘤的扩散和转移。优选地，免疫效应功能导致杀伤癌细胞。优选地，本发明上下文中的免疫效应功能是抗体介导的效应功能。这样的功能包括补体依赖的细胞毒性作用(CDC)、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)、抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(ADCP)、在携带肿瘤相关抗原的细胞中诱导凋亡(例如，通过抗体与表面抗原的结合)、抑制CD40L介导的信号转导(例如通过抗体与CD40受体或CD40配体(CD40L)相结合)，和/或抑制携带肿瘤相关抗原之细胞的增殖，优选ADCC和/或CDC。因此，能够介导一种或更多种免疫效应功能的抗体优选地能够通过诱导CDC介导的裂解、ADCC介导的裂解、凋亡、同型黏着和/或吞噬作用(优选通过诱导CDC介导的裂解和/或ADCC介导的裂解)来介导对细胞的杀伤。抗体还可简单地通过与癌细胞表面上的肿瘤相关抗原结合而发挥作用。例如，抗体可仅通过与癌细胞表面上的肿瘤相关抗原结合来阻断肿瘤相关抗原的功能或诱导凋亡。
ADCC描述了所述效应细胞(特别是淋巴细胞)的细胞杀伤能力，这优选地需要靶细胞被抗体标记。ADCC优选在抗体结合癌细胞上的抗原并且抗体Fc结构域结合免疫效应细胞表面的Fc受体(FcR)时发生。已经鉴定出若干Fc受体家族，特定的细胞群特征性地表达确定的Fc受体。ADCC可以看作是直接诱导不同程度的直接肿瘤破坏的机制，其还引起抗原呈递并诱导针对肿瘤的T细胞应答。优选地，ADCC的体内诱导将引起针对肿瘤的T细胞应答和来自宿主的进一步抗体应答。
CDC是可由抗体引导的另一细胞杀伤方法。对于补体活化，IgM是最有效的同种型。IgG1和IgG3在通过经典补体活化途径引导CDC方面也都非常有效。优选地，在这一级联中，抗原-抗体复合物的形成导致紧邻参与抗体分子(例如IgG分子)CH2结构域的多个C1q结合位点暴露出来(C1q是补体C1的三种亚组分之一)。优选地，这些暴露的C1q结合位点将先前低亲和力的C1q-IgG相互作用转变成一种高亲合力相互作用，这触发了涉及一系列其他补体蛋白的级联事件，并引起效应细胞趋化/活化剂C3a和C5a的蛋白水解释放。优选地，该补体级联最终形成膜攻击复合物，它在细胞膜中产生孔，有利于水和溶质自由穿行于细胞内外，并且可导致凋亡。
本发明上下中的术语“免疫效应细胞”涉及在免疫反应期间发挥效应功能的细胞。例如，这样的细胞分泌细胞因子和/或趋化因子、杀伤微生物、分泌抗体、识别癌细胞以及任选地清除这样的细胞。例如，免疫效应细胞包括T细胞(细胞毒性T细胞、辅助T细胞、肿瘤浸润性T细胞)、B细胞、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和树突细胞。
根据本发明的核酸优选为脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)，更优选为RNA，最优选为体外转录的RNA(IVT RNA)。根据本发明的核酸包括基因组DNA、cDNA、mRNA、重组制备的和化学合成的分子。根据本发明的核酸可以是单链或双链分子形式并且可以是线性的或者共价闭合成环。核酸可以例如以RNA形式引入(即，转染)细胞中，所述RNA可通过体外转录从DNA模板来制备。此外，在使用之前，RNA可通过稳定化序列、加帽和多聚腺苷酸化来修饰。
本文所述的核酸可包含在载体中。本文使用的术语“载体”包括本领域技术人员已知的任何载体，包括质粒载体、粘粒载体、噬菌体载体(例如λ噬菌体)、病毒载体(例如，腺病毒或杆状病毒)或人造染色体载体(例如细菌人造染色体(BAC)、酵母人造染色体(YAC)或P1人造染色体(PAC))。所述载体包括表达以及克隆载体。表达载体包括质粒载体及病毒载体，并且一般包含期望的编码序列和在特定宿主生物体(例如细菌、酵母、植物、昆虫或哺乳动物)中或在体外表达系统中有效连接的编码序列之表达所必需的合适的DNA序列。克隆载体一般用于改造和扩增某些期望的DNA片段，并且可缺少表达期望DNA片段所需要的功能序列。
可以使用其中抗体链存在于不同载体中的载体类型或者其中抗体链存在于相同载体中的载体类型作为用于抗体表达的载体。
本文中使用的术语“RNA”意为包含至少一个核糖核苷酸残基的分子。“核糖核苷酸”意为β-D-核呋喃糖部分的2’位为羟基的核苷酸。该术语包括双链RNA、单链RNA、分离的RNA(例如，部分纯化的RNA)、基本上纯的RNA、合成的RNA、重组产生的RNA以及通过添加、缺失、替换和/或改变一个或更多个核苷酸而不同于天然RNA的经改变RNA。这样的改变可包括添加非核苷酸物质，例如，添加到RNA的一个或更多个末端或内部，例如，在RNA的一个或更多个核苷酸处。RNA分子中的核苷酸也可包括非标准核苷酸，例如非天然核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些经改变的RNA可称为类似物或天然RNA之类似物。
根据本发明，术语“RNA”包括并且优选地涉及“mRNA”(即，信使RNA)，并且涉及可以使用DNA作为模板产生且编码肽或蛋白质的“转录本(transcript)”。mRNA通常包含5’非翻译区、蛋白质或肽编码区和3’非翻译区。mRNA在细胞中及在体外具有有限的半衰期。
在本发明的上下文中，术语“转录”涉及其中将DNA序列中的遗传密码转录成RNA的过程。
根据本发明所述的核酸优选是已经分离的。根据本发明，术语“分离的核酸”指该核酸是(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过切割和凝胶电泳分级纯化的，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。分离的核酸是可通过重组DNA技术操作的核酸。
根据本发明，核酸可以单独存在或与其他核酸组合存在，所述其他核酸可以是同源或异源的。在一些优选的实施方案中，核酸与表达控制序列功能性连接，所述表达控制序列对于所述核酸可以是同源或异源的。术语“同源”指核酸还功能性地天然连接，而术语“异源”指所述核酸不是功能性地天然连接。
如果核酸与表达控制序列以所述核酸的表达或转录处在所述表达控制序列的控制或影响之下的方式彼此共价连接，则它们彼此“功能性”连接。如果该核酸待翻译成功能性蛋白质，而其带有与编码序列功能性连接的表达控制序列，则所述表达控制序列的诱导引起所述核酸的转录，而不导致编码序列中的移码或导致所述编码序列不能翻译成所需蛋白质或肽。
根据本发明，术语“表达控制序列”或“表达控制元件”包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调控基因转录或mRNA翻译的其他控制元件。在本发明的一些具体实施方案中，所述表达控制序列可受到调节。表达控制序列的确切结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻译起始的5′非转录序列以及5′和3′非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。更具体地，5′非转录表达控制序列包括启动子区，启动子区包含用于转录控制功能性连接核酸的启动子序列。表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。
根据本发明，术语“启动子”或“启动子区”涉及这样的核酸序列：其位于所表达核酸序列的上游(5′)，并通过提供RNA聚合酶的识别和结合位点来控制该序列的表达。“启动子区”可包括用于参与基因转录调节的其他因子的其他识别和结合位点。启动子可控制原核或真核基因的转录。此外，启动子可以为“诱导型”，并可响应于诱导物而起始转录，或者如果转录不受诱导物的控制则可以为“组成型”。如果诱导剂不存在，则诱导型启动子控制下的基因不表达，或仅低程度地表达。存在诱导物时，该基因开始转录，或者转录水平提高。一般而言，这通过特异性转录因子的结合来介导。
根据本发明优选的启动子包括用于SP6、T3和T7聚合酶的启动子、人U6RNA启动子、CMV启动子及其人工杂合启动子(如CMV)，其中启动子的某一个或多个部分与其他细胞蛋白质(例如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因启动子的某一个或多个部分融合，并包含或不包含额外的内含子。
本文使用的术语“表达”以其最广泛的意义使用，包括产生RNA或者RNA和蛋白质/肽。就RNA而言，术语“表达”或“翻译”特别地涉及产生肽或蛋白质。表达可以是瞬时的或稳定的。根据本发明，术语表达还包括“异常表达”或“不正常表达”。
根据本发明，“异常表达”或“不正常表达”意为与参照相比(例如未患有与某些蛋白质(例如，肿瘤相关抗原)的异常表达或不正常表达相关的疾病之对象的状态)，表达改变(优选升高)。表达的升高指升高至少10％，特别是至少20％，至少50％或至少100％或者更多。在一个实施方案中，表达仅见于患病的组织，而健康组织中的表达被抑制。
术语“特异性表达”意指蛋白质基本上只在特定组织或器官中表达。例如，特异性地在胃粘膜中表达的肿瘤相关抗原意指所述蛋白质主要在胃粘膜中表达而在其他组织中不表达或者在其他组织或器官类型中不显著表达。因此，只在胃粘膜的细胞中表达并且在任何其他组织中只以显著较低的程度表达的蛋白质是在胃粘膜细胞中特异性表达的。在一些实施方案中，肿瘤相关抗原也可以在正常条件下在多于一种组织类型或器官中(例如，在2种或3种组织类型或器官中，但优选不多于3种不同的组织或器官类型中)特异性表达。在这种情况下，则肿瘤相关抗原在这些器官中特异性表达。
根据本发明的术语“翻译”涉及信使RNA链在细胞核糖体中引导氨基酸序列装配成蛋白质或肽的过程。
根据本发明，术语“核酸编码”意为如果存在于合适的环境下(优选在细胞中)，核酸可以被表达以产生其所编码的蛋白质或肽。
术语“肽”包括寡肽和多肽，指包含通过肽键共价连接的两个或更多个、优选3个或更多个、优选4个或更多个、优选6个或更多个、优选8个或更多个、优选9个或更多个、优选10个或更多个、优选13个或更多个、优选16个或更多个、优选21个或更多个以及高达优选8、10、20、30、40或50个(尤其是100个)氨基酸的物质。术语“蛋白质”指大的肽，优选指具有超过100个氨基酸残基的肽，但一般来说，术语“肽”和“蛋白质”是同义词，并可在本文中可互换使用。
优选地，根据本发明所述的蛋白质和肽是已经分离的。术语“分离的蛋白质”或“分离的肽”意指所述蛋白质或肽已从其天然环境中被分离出来。分离的蛋白质或肽可处于基本上纯化的状态。术语“基本上纯化的”意指所述蛋白质或肽基本上不含与其在自然界中或在体内相缔合的其它物质。
本文就特定氨基酸序列(例如序列表中所示的那些)而言给出的教导应理解为还涉及对所述特定序列的修饰(即，变体)，所述修饰产生与所述特定序列功能等价的序列，例如显示与该特定氨基酸序列相同或相似的特性的氨基酸序列。一个重要的特性是保留抗体与其靶标的结合。优选地，就特定序列而言进行了修饰的序列，当其在抗体中替换该特定序列时保留所述抗体与靶标的结合。
本领域技术人员将会理解，特别地是可以修饰CDR序列、高变区和可变区的序列而不丧失结合靶标的能力。例如，CDR序列将与本文所述CDR序列相同或高度同源。
“高度同源”被认为是可以产生1至5、优选1至4例如1至3或1或2个替换。
根据本发明的术语“变体”还包括突变体、剪接变体、构象、同种型、等位基因变体、种变体和种同源物，特别是天然存在的那些。等位基因变体涉及基因正常序列中的改变，其显著性通常不明显。全基因测序通常鉴定给定基因的大量等位基因变体。种间同源物是给定核酸或氨基酸序列的具有不同物种来源的核酸或氨基酸序列。
对于本发明的目的而言，氨基酸序列的“变体”包括氨基酸插入变体、氨基酸添加变体、氨基酸缺失变体和/或氨基酸替换变体。在蛋白质的N端和/或C端包含缺失的氨基酸缺失变体还称为N端和/或C端截短变体(truncation variant)。
氨基酸插入变体包括在特定氨基酸序列中插入单个或两个或更多个氨基酸。在具有插入的氨基酸序列变体的情况中，向氨基酸序列的特定位点中插入一个或更多个氨基酸残基，但是随机插入并对所产生的产物进行合适的筛选也是可能的。
氨基酸添加变体包含氨基和/或羧基端融合一个或更多个氨基酸，例如1、2、3、5、10、20、30、50或更多个氨基酸。
氨基酸缺失变体以从序列中除去一个或更多个氨基酸(例如，除去1、2、3、5、10、20、30、50或更多个氨基酸)为特征。所述缺失可以在蛋白质的任何位置。
氨基酸替换变体以序列中至少一个残基被除去并在其位置中插入另一个残基为特征。优选在氨基酸序列中同源的蛋白质或肽之间非保守的位置处修饰和/或优选将氨基酸置换为其他具有相似特性的氨基酸。优选地，蛋白质变体中的氨基酸改变是保守性氨基酸改变，即替换带有类似电荷的或不带电荷的氨基酸。保守性氨基酸改变涉及替换与其侧链相关的氨基酸家族的一个。天然氨基酸通常分为四个家族：酸性的(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性的(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性的(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电的极性的(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)氨基酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时共同分类为芳香族氨基酸。
优选地，给定氨基酸序列与所述给定氨基酸序列之变体的氨基酸序列之间的相似度优选同一性将为至少约60％、65％、70％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。优选地相似度或同一性针对氨基酸区域给出，所述氨基酸区域为参照氨基酸序列之全长的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。例如，如果参照氨基酸序列由200个氨基酸组成，优选地针对至少约20、至少约40、至少约60、至少约80、至少约100、至少约120、至少约140、至少约160、至少约180或约200个氨基酸给出相似度或同一性，优选连续的氨基酸。在一些优选的实施方案中，针对全长的参照氨基酸序列给出相似度或同一性。可用本领域已知的工具进行用于确定序列相似性(优选序列同一性)的比对，优选使用最佳序列比对，例如使用Align，采用标准设置，优选EMBOSS：：needle；Matrix：Blosum62；Gap Open 10.0；Gap Extend 0.5。
“序列相似性”指相同或表示保守性氨基酸替换的氨基酸的百分比。两条氨基酸序列之间的“序列同一性”指所述序列间相同的氨基酸的百分比。
术语“百分比同一性”意指在最佳比对之后获得的所比较的两条序列之间相同的氨基酸残基所占的百分比，这一百分比完全是统计学意义上的，且两序列之间的差异随机分布在其全长上。两条氨基酸序列之间的序列比较通过在对其进行最佳比对后比较其序列来常规地进行，所述比较通过区段或“比较窗”来进行，以鉴定和比较序列相似的局部区域。除了手工产生以外，用于比较的序列最佳比对还可通过以下手段产生：Smith和Waterman，1981，Ads App.Math.2，482的局部同源性算法，Neddleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48，443的局部同源性算法，Pearson和Lipman，1988，Proc.Natl Acad.Sci.USA 85，2444的相似性检索法或者使用这些算法的计算机程序(在Wisconsin Genetics软件包中的GAP，BESTFIT，FASTA，BLAST P，BLAST N和TFASTA，Genetics Computer Group，575ScienceDrive，Madison，Wis.)。
通过以下方法计算百分比同一性：测定进行比较的两个序列之间相同的位置数，用该数除以进行比较的位置数，并用所得结果乘以100，从而得到这两个序列之间的百分比同一性。
根据本发明的同源氨基酸序列表现出至少40％、特别是至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％以及优选至少95％、至少98或至少99％的氨基酸残基同一性。
本文所述的氨基酸序列变体可由本领域技术人员例如通过重组RNA操作容易地制备。例如，Sambrook等(1989)中详细描述了用于制备具有替换、添加、插入或缺失的蛋白质和肽的DNA序列操作。此外，本文所述的肽和氨基酸变体可以借助于已知的肽合成技术(例如，固相合成和类似方法)容易地制备。
本发明包括本文所述的肽或蛋白质的衍生物，其涵盖于术语“肽”和“蛋白质”的范围内。根据本发明，蛋白质和肽的“衍生物”为蛋白质和肽的经修饰形式。这样的修饰包括任何化学修饰并且包括与蛋白质或肽相关之任何分子(例如碳水化合物、脂质和/或蛋白质或肽)的单个或多个替换、缺失和/或添加。在一个实施方案中，蛋白质或肽的“衍生物”包括得自糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、棕榈酰化、豆蔻酰化、异戊二烯化、脂化、烷化、衍生化、引入保护/封闭基团、蛋白质水解切割或与抗体或者其他细胞配体相结合的那些经修饰的类似物。术语“衍生物”还延伸至所述蛋白质和肽的全部功能性化学等同物。优选地，经修饰的肽具有提高的稳定性和/或提高的免疫原性。
根据本发明，氨基酸序列、肽或蛋白质的变体、衍生物、经修饰形式、片段、部件(part)或部分(portion)优选地分别具有其所源于的氨基酸序列、肽或蛋白质的功能特性，即其为功能上等同的。在一个实施方案中，氨基酸序列、肽或蛋白质的变体、衍生物、经修饰形式、片段、部件或部分分别与其所源于的氨基酸序列、肽或蛋白质在免疫学上等同。在一个实施方案中，功能特性是免疫学特性。
根据本发明的术语“衍生的”意指特定实体(特别是，特定序列)存在于得出该实体的物质(特别是生物体或分子)中。在氨基酸序列的情况下(尤其是特定的序列区)，“衍生的”特别意指相关氨基酸序列来自该序列存在于其中的氨基酸序列。
术语“细胞”或“宿主细胞”优选地为完整细胞，即具有完整膜的尚未释放其正常的细胞内组分(例如，酶、细胞器或遗传物质)的细胞。完整细胞优选地是有活力的细胞(viable cell)，即能够进行其正常代谢功能的活细胞(living cell)。根据本发明，术语“细胞”包括原核细胞(例如，大肠杆菌(E.coli))或真核细胞(例如，树突细胞、B细胞、CHO细胞、COS细胞、K562细胞、HEK293细胞、HELA细胞、酵母细胞和昆虫细胞)。特别优选为哺乳动物的细胞，例如来自人、小鼠、仓鼠、猪、山羊和灵长类的细胞。所述细胞可以源自大量组织类型，并且包括原代细胞和细胞系。术语“细胞”包括非癌细胞和癌细胞，例如本文所公开的癌类型的细胞。
包含核酸分子的细胞优选地表达所述核酸所编码的肽或蛋白质。
“靶细胞”应指作为免疫应答之靶标(例如抗体)的细胞。靶细胞包括任何非期望的细胞，例如本文所述的癌细胞。在一些优选的实施方案中，所述靶细胞为表达CLDN18.2的细胞。表达CLDN18.2的细胞通常包括癌细胞。
术语“转基因动物”指具有包含一个或更多个转基因(优选抗体重链和/或轻链转基因)或转染色体(transchromosome)(整合或不整合到动物的天然基因组DNA中)的基因组的动物，并且其优选能够表达所述转基因。例如，转基因小鼠可具有人轻链转基因以及人重链转基因或人重链转染色体，以使当用CLDN18.2抗原和/或表达CLDN18.2的细胞免疫接种时，所述小鼠产生人抗CLDN18.2抗体。可将人重链转基因整合到小鼠的染色体DNA中(如转基因小鼠(例如，HuMAb小鼠(例如，HCo7或HCol2小鼠))的情况那样)，或者可以染色体外维持人重链转基因(如WO 02/43478中描述的转染色体(例如，KM)小鼠的情况那样)。通过进行V-D-J重组和同种型转换，这样的转基因和转染色体小鼠可能能够产生针对CLDN18.2的人单克隆抗体(例如，IgG、IgA和/或IgE)的多个同种型。
术语“免疫等效”意为例如对于免疫作用的类型(例如诱导体液免疫反应)、所诱导的免疫反应的强度和/或持续时间或者免疫反应的特异性而言，免疫等效分子(例如免疫等效氨基酸序列)表现出相同或基本相同的免疫特性和/或发挥相同或基本相同的免疫作用。在本发明的上下文中，术语“免疫等效”优选地相对于用于免疫接种的肽或肽变体或者抗体的免疫作用或特性而使用。特定的免疫特性是与抗体结合和(在适当情况下)产生免疫应答(优选地通过刺激抗体的产生)的能力。例如，如果所述氨基酸序列在暴露于对象的免疫系统时诱导免疫反应(优选抗体)，其具有与参照氨基酸序列(例如，形成CLDN18.2的一部分的参照氨基酸序列)反应的特异性，则所述氨基酸序列与参照氨基酸序列免疫等效。
本发明提供了用于检测样品中CLDN18.2抗原之存在或者测量CLDN18.2抗原之量的方法，其包括在允许抗体与CLDN18.2之间形成复合物的条件下使所述样品(和任选地，对照样品)与结合CLDN18.2的本发明抗体相接触。随后检测复合物的形成，其中所述样品与对照样品相比，复合物形成之间的差异指示所述样品中CLDN18.2抗原是否存在。
上文中描述的方法可特别地用于诊断CLDN18.2相关疾病，例如癌疾病。优选地，样品中CLDN18.2的量高于参照或对照样品中CLDN18.2的量指示所述样品所来源的对象(特别是人)中CLDN18.2相关疾病的存在。
当用于上文所述的方法中时，可为本文所述的抗体提供发挥以下功能的标记物：(i)提供可检测信号；(ii)与第二标记物相互作用以修饰所述第一或第二标记物所提供的可检测信号，例如FRET(荧光共振能量转移，Fluorescence Resonance Energy Transfer)；(iii)通过电荷、疏水性、形状或其他物理参数影响迁移率(例如，电泳迁移率)，或者(iv)提供捕获部分，例如亲和力、抗体/抗原或离子络合。适合作为标记物的为以下结构：例如荧光标记物、发光标记物、发色团标记物、放射性同位素标记物、同位素标记物，优选稳定的同位素标记物、同量异位素标记物(isobaric label)、酶标记物、颗粒标记物(特别是金属颗粒标记物、磁性颗粒标记物、聚合物颗粒标记物)、小有机分子(例如，生物素、受体的配体或结合分子(例如，细胞黏附蛋白或凝集素))、可通过使用结合剂检测的包含核酸和/或氨基酸残基的标记物序列等。标记物非限制性地包括硫酸钡、碘西他酸、碘番酸、胺碘苯丙酸钙(calcium ipodate)、泛影酸钠、泛影葡胺、甲泛葡胺、酪泮酸钠和放射诊断剂(包括正电子发射体，(例如氟-18和碳-11)、γ发射体(例如，碘-123、锝-99m、碘-131和铟-111)、核磁共振核素(例如，氟和钆))。
根据本发明，“参照”(例如参照样品或参照生物体)可用于与通过本发明方法获得的来自受试样品或受试生物体的结果进行关联和比较。所述参照生物体一般是健康生物体，尤其是未患有疾病(例如，癌疾病)的生物体。“参照值”或“参照水平”可通过测量足够大量的参照物而根据参照物来经验性地确定。优选地，通过测量至少2个、优选至少3个、优选至少5个、优选至少8个、优选至少12个、优选至少20个、优选至少30个、优选至少50个或优选至少100个参照物来确定参照值。
本文中使用的“降低”或“抑制”意为引起总体水平降低优选5％或更高、10％或更高、20％或更高、更优选50％或更高并且最优选75％或更高的能力。术语“抑制”或类似的短语包括完全或基本完全的抑制，即降低至0或基本降低至0。
术语例如“升高”或“增强”优选地涉及升高或增强约至少10％、优选至少20％、优选至少30％、更优选至少40％、更优选至少50％、甚至更优选至少80％并且最优选至少100％。
本文所述的试剂、组合物和方法可用于诊断对象是否患病。可被诊断的疾病涵盖所有表达CLDN18.2的疾病。特别优选的疾病是癌疾病，例如本文所述的癌疾病。
根据本发明，术语“疾病”指任何病理状态，包括癌疾病，特别是本文所述的那些癌疾病形式。
例如术语“正常组织”或“正常条件”中所用的术语“正常”指健康组织或者健康对象中的条件，即，非病理条件，其中“健康”优选地意为非癌性的。
根据本发明，“涉及表达CLDN18.2的细胞的疾病”意为与健康组织或器官中的状态相比，患病的组织或器官之细胞中的CLDN18.2的表达优选地提高。所述提高指提高至少10％，特别是至少20％、至少50％、至少100％、至少200％、至少500％、至少1000％、至少10000％或者甚至更高。在一个实施方案中，表达仅见于患病组织，而健康组织中的表达被抑制。根据本发明，涉及或与表达CLDN18.2的细胞相关的疾病包括癌疾病，特别是本文所述的那些癌形式。
根据本发明，术语“肿瘤”或“肿瘤疾病”指由细胞的异常生长造成的膨胀或病变(称为赘生性细胞(neoplastic cell)或肿瘤细胞)。“肿瘤细胞”意为通过迅速的、不受控的细胞增殖而生长并且在引起该新生长的刺激停止之后继续生长的异常细胞。肿瘤表现为部分或完全缺乏结构性组织(structrual organization)和与正常组织的功能性协调，并且通常形成独特的组织团块，其可以是良性的、恶化前的或恶性的。
良性肿瘤是缺乏癌症的所有三种恶性特性的肿瘤。因此，按照定义，良性肿瘤不会以无限制的侵略性方式生长，不会侵袭周围组织，并且不会扩散至非邻近组织(转移)。良性肿瘤的一般实例包括痣和子宫肌瘤。
术语“良性”意味着温和且非进展性的疾病，事实上很多类型的良性肿瘤对健康无害。然而，一些由于其缺乏癌症的侵袭特性而被定义为“良性肿瘤”的瘤(neoplasm)仍然可产生负面的健康影响。其实例包括产生“占位效应(mass effect)”(压迫重要器官(例如血管))的肿瘤或者可过度产生某些激素的内分泌组织的“功能性”肿瘤(实例包括甲状腺腺瘤、肾上腺皮质腺瘤和垂体腺瘤)。
良性肿瘤通常被抑制其能够以恶性方式表现的外表面所围绕。在一些情况中，某些“良性”肿瘤由于肿瘤之瘤细胞的亚群中另外的遗传改变而在后期可引起恶性癌症。该现象显著的一个实例是管状腺瘤，一种普通类型的结肠息肉，其是结肠癌的重要先兆。管状腺瘤中的细胞，如频繁发展成癌症的大部分肿瘤一样，显示细胞成熟和外观的某些异常，统称为发育异常。这些细胞异常在很少或从不转变为癌性的良性肿瘤中未见，但是见于其他不形成离散团块的癌前组织异常(例如子宫颈的癌前病变)中。一些机构倾向将发育异常的肿瘤称为“恶化前的(pre-malignant)”，而对于很少或从不引起癌症的肿瘤保留术语“良性”。
瘤是由于瘤形成(neoplasia)产生的异常组织团块。瘤形成(希腊语，新生长)是细胞的异常增殖。细胞生长过度并且与其周围的正常组织缺乏协调。生长持续以相同的过度方式进行，甚至在刺激停止之后仍然如此。这通常引起肿块(lump)或肿瘤。瘤可以是良性的、恶化前的或恶性的。
根据本发明的“肿瘤的生长”或“肿瘤生长”涉及肿瘤尺寸增加的趋势和/或肿瘤细胞增殖的趋势。
癌症(医学术语：恶性瘤)是一类疾病，其中一组细胞展现出不受控制的生长(超过正常限制的分裂)、侵袭(侵入并且破坏邻近组织)并且有时转移(通过淋巴或血液扩散至身体中的其他位置)。癌症的这三种恶性特性将它们与良性肿瘤区分开，良性肿瘤有自限性，并且不会侵袭或转移。大部分癌症形成肿瘤，但是有一些(如白血病)不是。
根据本发明，术语“癌”和“肿瘤”或“癌疾病”和“肿瘤疾病”在本文中一般可互换用于指其中细胞表现出不受控生长和任选地侵袭和/或转移的疾病。
优选地，根据本发明的“癌疾病”以表达CLDN18.2的细胞为特征。表达CLDN18.2的细胞优选地为癌细胞，优选为本文所述的肿瘤和癌。优选地，该细胞是除胃细胞之外的细胞。
将癌症通过类似肿瘤的细胞类型和由此假定肿瘤来源之组织进行分类。它们分别是组织学和位置。
根据本发明的术语“癌”包括白血病、精原细胞瘤、黑色素瘤、畸胎瘤、淋巴瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾上腺癌、甲状腺癌、血液癌症、皮肤癌、脑癌、宫颈癌、肠癌、肝癌、结肠癌、胃癌、肠癌、头颈癌、胃肠癌、淋巴结癌、食管癌、结肠直肠癌、胰腺癌、耳鼻喉(ENT)癌、乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、卵巢癌和肺癌，及其转移。其实例有肺癌、乳癌(mamma carcinomas)、前列腺癌、结肠癌、肾细胞癌、宫颈癌或上述各类癌或肿瘤的转移。根据本发明的术语癌还包括癌转移。
肺癌的主要类型是小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。有三种主要亚型的非小细胞肺癌：鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。腺癌占肺癌的约10％。与小细胞肺癌和鳞状细胞肺癌(二者均倾向于位于更中心的位置)相反，这种癌通常见于肺的外周。
根据本发明，“癌(carcinoma)”是源于上皮细胞的恶性肿瘤。该组表示最常见的癌症，包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌和结肠癌的常见形式。
“转移”指癌细胞从其原始部位扩散到身体的其他部位。转移的形成是非常复杂的过程，并依赖于恶性细胞从原发肿瘤中脱离、侵袭胞外基质、透过内皮基底膜以进入体腔和血管以及其后由血液转运后浸润靶器官。最后，新肿瘤(即继发性肿瘤或转移性肿瘤)在靶部位的生长依赖于血管发生。肿瘤转移经常甚至在切除原发肿瘤后发生，因为肿瘤细胞或组分可能残留并发展出转移潜力。在一个实施方案中，根据本发明的术语“转移”涉及“远端转移”，这涉及远离原发肿瘤和局部淋巴结系统的转移。
继发性或转移性肿瘤的细胞与原始肿瘤中的细胞类似。这意味着例如如果卵巢癌转移至肝，则所述继发性肿瘤由异常的卵巢细胞(而不是异常的肝细胞)构成。则肝中的肿瘤被称为转移性卵巢癌(而不是肝癌)。
当某人再次被过去所患病症影响时，则发生再发(relapse)或复发(recurrence)。例如，如果患者已经患有癌疾病，并已接受所述疾病的成功治疗，而再次发生所述疾病，则所述新发疾病可被认为是再发或复发。然而，根据本发明，癌疾病的再发或复发可以(但不是必须地)发生在原始癌疾病的部位。因此，例如，如果患者已患有卵巢肿瘤，并已接受成功的治疗，则再发或复发可以是发生卵巢肿瘤或发生非卵巢部位的肿瘤。肿瘤的再发或复发还包括其中肿瘤发生在不同于原始肿瘤的部位以及发生在原始肿瘤的部位的情况。优选地，原来的肿瘤(患者已针对其接受了治疗)是原发肿瘤，而在不同于原始肿瘤部位之部位的肿瘤是继发性或转移性肿瘤。
“治疗”意为向对象施用化合物或组合物以预防或消除疾病，包括使对象中的肿瘤的尺寸或肿瘤的数目降低；阻滞或减缓对象中的疾病；抑制或减缓对象中新疾病的发展；降低目前患有或先前曾患有疾病之对象中的症状和/或复发的频率或严重程度；和/或延长(即，提高)所述对象的寿命。
特别地，术语“疾病的治疗”包括疾病或其症状的治愈、缩短持续时间、减轻、预防、减缓或抑制进展或恶化，或者预防或延缓发病。
“处于风险”意为被鉴定为与一般人群相比具有高于疾病(特别是癌症)发生正常几率的对象(即，患者)。此外，已患有或目前患有疾病(特别是癌症)的对象是具有升高的疾病发生风险的对象，因为该对象可能继续发生疾病。目前已患有或曾患有癌症的对象还具有升高的癌转移风险。
术语“免疫治疗”涉及与特异性免疫反应相关的治疗。在本发明的上下文中，术语例如“保护”、“预防”、“预防性的(prophylactic)”、“预防的(preventive)”或“保护性的(protective)”涉及在对象中预防或治疗或者预防并治疗疾病的发生和/或传播，特别地减少对象将发生疾病的机会或者延迟疾病的发展。例如，有处于患如上所述肿瘤之风险的人可以是预防肿瘤之治疗的候选者。免疫治疗可以使用任意多种技术进行，其中药剂起到去除患者中表达抗原之细胞的作用。
在某些实施方案中，免疫治疗可以是主动免疫治疗，其中治疗依赖于通过施用免疫应答调节剂(例如，免疫反应肽和核酸)在体内刺激内源宿主免疫系统针对患病细胞产生反应。
在另一些实施方案中，免疫治疗可以是被动免疫治疗，其中治疗涉及递送具有成熟的肿瘤免疫反应性的药剂(例如，抗体)，其可直接或间接介导抗肿瘤效应并且不必依赖于完整的宿主免疫系统。
术语“体内”涉及对象中的情况。
可互换地使用术语“对象”、“个体”、“生物体”或“患者”，其涉及脊椎动物，优选哺乳动物。例如，在本发明的上下中，哺乳动物是人、非人灵长类、家养动物(domesticatedanimal)(例如，犬、猫、绵羊、牛、山羊、猪、马等)、实验动物(例如，小鼠、大鼠、兔、豚鼠等)以及圈养的动物(例如，动物园的动物)。本文使用的术语“动物”还包括人。术语“对象”还可包括患者，即，患病的动物，优选人，所述疾病优选本文所述的疾病。
根据本发明，“样品”可以是根据本发明可用的任何样品，特别是生物样品，例如组织样品(包括体液)和/或细胞样品，并可以以常规方式获得，例如通过组织活检(包括钻孔活检)和通过采集血液、支气管抽出物、痰、尿、排泄物或其他体液。根据本发明，术语“样品”还包括经加工的样品，例如生物样品的级分或分离物，例如核酸和肽/蛋白质分离物。优选地，样品包含待检测(例如，待进行癌症诊断)器官的细胞或组织。例如，如果待诊断癌症为肺癌，则样品可包含从肺获得的细胞或组织。
根据本发明，样品可以是例如来自含有肿瘤细胞或癌细胞或者怀疑含有肿瘤细胞或癌细胞之患者的身体样品的样品。所述身体样品可以是任何组织样品，例如血液、从原发肿瘤或从肿瘤转移获得的组织样品，或者任何其他包含肿瘤细胞或癌细胞的样品。
通过下文的附图和实施例对本发明进行了详细描述，其仅用于说明目的并且无意于进行限制。由于该描述和实施例，同样包括于本发明中的其他实施方案对于本领域技术人员而言是明显的。
附图：
图1：密蛋白18蛋白质(人/小鼠)的序列比对
该序列比对示出人与小鼠密蛋白18.2之间和人密蛋白18.1与密蛋白18.2之间的高同源性。
图2：用于对小鼠进行免疫接种的包含CLDN18.2的C-端部分(aa191-261)的重组蛋白
图3：43-14A和35-22A抗体的序列分析
实施例
本文中描述或以本身已知的方式和例如在Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第2版(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，N.Y.中所描述的方式实施本文中使用的技术和方法。除非具体指明，否则根据制造商说明实施所有包括试剂盒和试剂之使用的方法。
实施例1：单克隆抗体的产生
该项目的目的是产生小鼠CLDN-18特异性单克隆抗体，其能够在胃CA、食管CA、胰腺CA和肺CA FFPE组织中检测表达CLDN18.2的肿瘤细胞。
为了产生高特异性，高亲和力诊断性CLDN18.2抗体，有必要用变化广泛的不同免疫原和佐剂开始免疫接种方案。在该项目期间，采用多种免疫接种策略对约100只小鼠(C57B1/6和Balb/c)进行接种，以引发α-CLDN18免疫应答。
为了引发小鼠免疫系统并克服免疫耐受，我们采用病毒样颗粒(VLP)、肽缀合物和重组蛋白，所述重组蛋白编码人CLDN18.2的不同部分，其表达为与不同表达伴侣(标签)的重组融合蛋白。
在13种不同的免疫接种策略中，用带有HIS-标签的CLDN18C端重组蛋白(参见图2；免疫接种#20)与多种佐剂的组合处理小鼠得到了最佳结果(参见表1，下文，融合35)。
由4步免疫接种策略(30天)得到了一个候选物(35-22A)。按照7步免疫接种方案(79天)产生了另一个候选物(43-14A)(参见表1，下文，融合43)。
在脾切除术前两天，对小鼠进行加强免疫以激活靶B细胞。
在融合当天，分离小鼠脾细胞，并与小鼠骨髓瘤细胞系Ag8.653融合。我们按照和Milstein 1975公开的标准方案进行小鼠细胞与骨髓瘤的融合。HAT选择之后，在ELISA中测试上清液是否分泌识别用于免疫接种之抗原的抗体。
对ELISA阳性上清液的杂交瘤细胞进行亚克隆，以产生单克隆杂交瘤，并且在ELISA中对亚克隆的杂交瘤细胞的上清液进行再次筛选。扩增阳性克隆的杂交瘤细胞并对上清液进行进一步分析。
实施例2：单克隆杂交瘤上清液的Western印迹筛选
为了回答上清液中的ELISA阳性抗体是否能够与来自稳定转染的表达密蛋白18之HEK293细胞之重组密蛋白18或蛋白质裂解物相结合的问题，进行Western印迹分析。扩增在Western印迹分析中能够与密蛋白18特异性结合的抗体。冻存细胞，并通过MABselect(FPLC)纯化抗体。对通过Western印迹筛选选择的抗体进行纯化并通过免疫组化评价其与福尔马林固定的石蜡包埋组织(FFPE)中的其抗原的结合能力。
实施例3：组织学分析——Western印迹阳性抗体的第一筛选
该实验的目的是检测抗体对CLDN18的特异性和灵敏度。通过使用表达CLDN18的FFPE正常胃组织来完成该实验。
在第一个实验中，在人胃FFPE切片上以0.5μg/ml的浓度分析Western印迹测试的经纯化抗体。在多种正常胃组织上将表现良好并且未产生大量背景的抗体进一步滴定至0.2&0.1μg/ml以测试灵敏度和特异性。在后来的研究阶段中，直接以0.2μg/ml的浓度对新产生的抗体进行测试，这是因为最佳抗体已在0.2μg/ml下表现得非常好并充当基准。选择在受试人胃组织的粘膜上皮上产生强信号而在相邻粘膜组织上无背景的抗体进行进一步滴定实验及特异性分析。有两种抗体表现突出：35-22A和43-14A。参见下表2和3。
在癌组织上对在受试正常胃组织上产生强信号的抗体进行进一步分析。使相应的杂交瘤细胞适应于不含血清的培养基。使用mumAb 43-14A产生的信号比使用mumAb 35-22A产生的信号稍强；参见下表4。
实施例4：组织学深度分析和抗体表征
使用无血清产生的抗体对胃CA组织微阵列(TMA)进行染色。分析染色案例的量、信号强度和阳性肿瘤细胞的量。
mumAb 35-22A和43-14A的染色强度优异。染色模式没有显著差异，并且受试抗体35-22A与43-14A之间在染色强度方面仅检测到细微的差异。
实施例5：使用正常组织组(panel)分析抗体特异性
在多种相关正常组织上对所选抗体进行检测，以确保高CLDN18靶特异性；参见下表5A和5B。
在先前的实验中，没有观察到抗体35-22A与43-14A之间在染色模式和染色强度方面的显著差异。因此，用更贴近临床的方案对抗体进行染色实验。为了模拟在标准病理学实验室中采用的染色方法，构建具有短时(1小时)第一抗体孵育步骤的一天方案。
在所有分析的案例中，mumAb 43-14A均表现极佳，并且甚至比mumAb 35-22A更好；参见下表6。
实施例6：在相关组织-呼吸系统上皮上进行的深度分析
另在多种相关呼吸系统组织上对mumAb 43-14A进行分析以确保其特异性，尤其是在肺/支气管的靶组织中。对于这些组织而言，报道了CLDN18.1的表达。为了分析诊断抗体是否与肺/支气管表达的CLDN18.1同种型交叉反应，对全部可得到的肺/支气管组织进行筛选。用肺和支气管组织未检测到信号；参见下表7。抗体43-14A不识别在这些呼吸系统组织中表达的CLDN18同种型。
实施例7：mumAb 43-14A和35-22A的表位作图
进行肽ELISA以鉴定CLDN18.2上的抗体结合表位。对每个经纯化抗体进行涵盖CLDN18.2的C端序列的重叠肽测试。35-22A和43-14A均示出与作图为肽TEDEVQSYPSKHDYV的表位特异性结合。以下序列被确定为反应序列：EVQSYPSKHDYV。
实施例8：mumAb 43-14A和35-22A的序列分析
抗体43-14A和35-22A的序列分析示于图3中。
实施例9：对不同癌组织进行染色
在4％福尔马林缓冲固定的石蜡包埋样品载片上进行免疫组化(IHC)。石蜡包埋根据标准方案进行。
在脱石蜡化之后，通过在120℃的补充有0.05％Tween-20(pH 6.0)的10mM柠檬酸中煮沸10分钟来对所有载片进行抗原修复，接着淬灭(用2％H2O2)封闭并用0.2至0.5μg/ml诊断小鼠抗CLNDN18.2单克隆抗体43-14A或35-22A在4℃下孵育过夜。使用基于聚合物的Powervision抗体(Power Vision HRP山羊抗小鼠；Immunologic，Duiven，TheNetherlands)和底物显色液(VectorRed；Vector Labs，Burlingame，USA)用辣根过氧化物酶标记的第二抗体对抗体结合进行可视化。然后，用Mayer的苏木精(Carl Roth GmbH，Karlsruhe，Germany)对切片进行复染，并由评定者进行评价。
组织学评估
考虑每个切片的阳性染色肿瘤细胞与所有可见肿瘤细胞的相对比例，分析所有样品。将染色强度分为阴性(-)、弱阳性(1+)、中度阳性(2+)和强阳性(3+)。只有膜染色被视为是阳性的。人胃组织作为每个染色的阳性对照。由于PanIN(胰腺上皮内瘤变)是频现的强阳性，也将这些区域视为强阳性(3+)的染色强度内参。
在胰腺癌组织、食管癌组织和胃癌组织中，两种抗体均产生强的膜信号(表8)，或者抗体43-14A在肺癌组织中产生强的膜信号(表9)。不同肿瘤情况之间，阳性肿瘤细胞的数目在个体之间不同。所分析的样品最大部分为2+至3+阳性。
表8：使用小鼠单克隆抗体4314A和35-22A分析CLDN18.2在食管癌组织、胰腺癌组织和胃癌组织中的表达
PDAC＝胰腺导管腺癌
表9：使用小鼠单克隆抗体434A分析CDLN18.2在肺癌组织中的表达
关于微生物保藏的说明
(细则13之二)
PCT/RO/134表(1998年7月，2004年1月再版)
生物材料附加页
其他保藏物的证明：
1)保藏物的保藏机构的名称及地址为：
DSMZ-德国微生物菌种保藏中心
Inhoffenstr.7B
38124 Braunschweig
DE
对所有上文提到保藏物的其他说明
-与小鼠(Mus musculus)脾细胞融合的小鼠(Mus musculus)骨髓瘤Ag8.653
-分泌抗人CLDN18.2抗体的杂交瘤
2)保藏人：所有上述保藏均由以下保藏人进行：
加尼梅德药物公司
Freiligrathstraβe 12
55131 Mainz
DE

Claims (8)

1.一种抗体，其选自：
(i)由以如下登记号保藏之克隆产生的或能够从其获得的抗体：DSM ACC3144(muAB43-14A)或DSM ACC3143(muAB 35-22A)；
(ii)为(i)中所述抗体的嵌合形式或人源化形式的抗体；以及
(iii)包含以下的抗体：
(a)包含SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的抗体重链和包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的抗体轻链；或者
(b)包含SEQ ID NO：15所示氨基酸序列的抗体重链和包含SEQ ID NO：19所示氨基酸序列的抗体轻链。
2.一种缀合物，其包含与至少一个可检测标记物偶联的权利要求1所述的抗体。
3.一种杂交瘤，其能够产生权利要求1所述的抗体。
4.以登记号DSM ACC3144(muAB 43-14A)或DSM ACC3143(muAB 35-22A)保藏的杂交瘤。
5.权利要求1所述的抗体或者权利要求2所述的缀合物在制造用于诊断、检测或监测癌症之诊断测试试剂盒中的用途，所述诊断、检测或监测癌症包括以下步骤：
(i)使生物样品与所述抗体或者与所述缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体或所述缀合物与CLDN18.2之间复合物的形成和/或测定复合物的量。
6.权利要求1所述的抗体或者权利要求2所述的缀合物在制造用于确定癌症是否能够通过靶向CLDN18.2的癌症疗法来治疗之诊断测试试剂盒中的用途，所述确定包括以下步骤：
(i)使包含癌细胞的样品与所述抗体或者与所述缀合物相接触，和
(ii)检测所述抗体或所述缀合物与CLDN18.2之间复合物的形成。
7.一种诊断测试试剂盒，其包含权利要求1所述的抗体或者权利要求2所述的缀合物。
8.权利要求1所述的抗体，权利要求2所述的缀合物，权利要求3或4所述的杂交瘤，或者权利要求5或6所述的用途，其中与所述抗体、所述缀合物或由所述杂交瘤产生的抗体形成复合物的CLDN18.2包含序列表的SEQ ID NO：2的氨基酸序列或所述氨基酸序列的变体。
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Families Citing this family (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
DE102004024617A1 (de) 2004-05-18 2005-12-29 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
EP1790664A1 (en) 2005-11-24 2007-05-30 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer
WO2013167153A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Antibodies useful in cancer diagnosis
WO2013174404A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
US10093736B2 (en) 2012-11-13 2018-10-09 Biontech Ag Agents for treatment of claudin expressing cancer diseases
WO2014127785A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2014146672A1 (en) 2013-03-18 2014-09-25 Ganymed Pharmaceuticals Ag Therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2016165762A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Ganymed Pharmaceuticals Ag Drug conjugates comprising antibodies against claudin 18.2
WO2016180468A1 (en) * 2015-05-11 2016-11-17 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Claudin-18.2-specific immunoreceptors and t cell epitopes
KR102046110B1 (ko) * 2015-12-04 2019-11-18 주식회사 엘지화학 유무기 혼합 페로브스카이트, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 태양 전지
BR112019000327A8 (pt) 2016-07-08 2022-10-18 Carsgen Therapeutics Co Ltd Anticorpo para anticlaudina 18a2 e uso do mesmo
KR20200129116A (ko) * 2018-03-08 2020-11-17 페인스 테라퓨틱스 인코포레이티드 항-클라우딘 18.2 항체 및 이의 용도
RU2020128013A (ru) 2018-03-14 2022-04-15 Бейцзин Сюаньи Фармасайенсиз Ко., Лтд. Антитела против клаудина 18.2
SG10202111141WA (en) * 2018-05-18 2021-11-29 Lanova Medicines Ltd Company Anti-claudin 18.2 antibodies and uses thereof
JP7468903B2 (ja) * 2018-06-17 2024-04-16 エルアンドエル バイオファーマ カンパニー リミテッド Ｃｌｄｎ１８．２を標的とする抗体、二重特異性抗体、ａｄｃ及びｃａｒならびにその使用
CN110606891B (zh) * 2018-06-17 2022-12-06 上海健信生物医药科技有限公司 一种针对人cldn18.2的抗体分子，抗原结合片段及其医药用途
WO2020018852A2 (en) * 2018-07-18 2020-01-23 Askgene Pharma Inc. Novel antibodies and methods for making and using the same
KR20210042117A (ko) * 2018-08-03 2021-04-16 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 Cldn18.2 및 cd3에 대한 항체 작제물
CN110857322A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人claudin 18.2单克隆抗体及其应用
WO2020038404A1 (zh) * 2018-08-22 2020-02-27 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人claudin 18.2单克隆抗体及其应用
KR20210050547A (ko) * 2018-08-27 2021-05-07 난징 산홈 팔마세우티칼 컴퍼니 리미티드 항-클라우딘18.2 항체 및 이의 용도
JP2022511394A (ja) * 2018-09-30 2022-01-31 カファ セラピューティクス リミテッド Ｃｌｄｎ１８の抗体及び化学療法薬の併用療法
WO2020082209A1 (zh) * 2018-10-22 2020-04-30 上海吉倍生物技术有限公司 抗cldn18.2抗体及其用途
BR112021011014A2 (pt) * 2018-12-07 2021-08-31 Zlip Holding Limited Anticorpos anti-claudina e usos destes
CN113166246A (zh) * 2018-12-28 2021-07-23 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一种抗体及其用途
JP2022516505A (ja) * 2018-12-28 2022-02-28 スパークス・セラピューティクス・インコーポレイテッド 癌および他の疾患の治療のための、クローディン１８．２に特異的な結合分子、その組成物および方法
CN116333141A (zh) * 2019-01-15 2023-06-27 浙江道尔生物科技有限公司 抗cld18a2纳米抗体及其应用
CN109762067B (zh) * 2019-01-17 2020-02-28 北京天广实生物技术股份有限公司 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途
KR20210134321A (ko) 2019-02-01 2021-11-09 노바록 바이오테라퓨틱스 리미티드 항-클라우딘 18 항체 및 이의 이용 방법
KR20210148216A (ko) * 2019-04-01 2021-12-07 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드 항-클라우딘 18.2 항체 및 이의 응용
JP2022529703A (ja) * 2019-04-19 2022-06-23 康▲諾▼▲亞▼生物医葯科技（成都）有限公司 腫瘍治療薬及びその応用
KR20220024010A (ko) * 2019-05-16 2022-03-03 치루 파머수티컬 컴퍼니 리미티드 클라우딘 18a2에 대한 항체 및 그의 용도
CN111944048B (zh) * 2019-05-16 2023-10-03 启愈生物技术(上海)有限公司 抗cldn抗体及其药物组合物和检测方法
CA3141504A1 (en) * 2019-05-24 2020-12-03 Sanyou Biopharmaceuticals Co., Ltd. Novel cldn18.2 binding molecule
CN111978402B (zh) * 2019-05-24 2022-06-28 三优生物医药(上海)有限公司 新型cldn18.2结合分子
EP3929214A4 (en) * 2019-05-30 2022-06-22 Shandong Boan Biotechnology Co., Ltd. ANTIBODY OR CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR TARGETING CLAUDIN 18.2
CN110331199B (zh) * 2019-06-28 2022-04-05 国家纳米科学中心 用于检测cldn18.2基因表达的分子探针及检测方法
WO2021003082A1 (en) * 2019-07-03 2021-01-07 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-claudin 18.2/anti-cd47 bispecific antibodies and uses thereof
BR112022003147A2 (pt) * 2019-08-20 2022-05-17 Suzhou Transcenta Therapeutics Co Ltd Novos anticorpos anti-cldn18.2
CN114981303B (zh) * 2019-09-13 2024-01-23 安徽俊义医疗管理咨询有限公司 人源化抗Claudin18.2（CLDN18.2）抗体
CN112574307B (zh) * 2019-09-29 2023-11-28 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗人Claudin18.2抗体及其应用
BR112022008653A2 (pt) * 2019-11-05 2022-07-19 Lanova Medicines Ltd Conjugado anticorpo-fármaco, método para tratar câncer, e, uso do conjugado anticorpo-fármaco
KR20220111308A (ko) 2019-12-06 2022-08-09 소티오 바이오테크 에이.에스. 인간화 cldn18.2 항체
WO2021115303A1 (zh) * 2019-12-11 2021-06-17 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 一种抗Claudin18.2单克隆抗体、其制备方法及用途
CN114901365A (zh) 2019-12-23 2022-08-12 斯迪安生物技术公司 肿瘤特异性密蛋白18.2抗体
CN113272332B (zh) * 2020-01-03 2022-11-18 上海恺兴诊断技术有限公司 抗Claudin18.2的抗体及其应用
CN111234033B (zh) * 2020-01-21 2021-05-11 南京北恒生物科技有限公司 多链嵌合抗原受体及其用途
AU2021220887A1 (en) * 2020-02-10 2022-09-29 Shanghai Escugen Biotechnology Co., Ltd. CLDN18.2 antibody and use thereof
CN115397856A (zh) * 2020-03-30 2022-11-25 生物技术公司 靶向密蛋白-18.2的rna组合物
US20230331836A1 (en) * 2020-05-25 2023-10-19 Suzhou Transcenta Therapeutics Co., Ltd. Anti-cldn18.2 antibodies and diagnostic uses thereof
WO2021239026A1 (zh) * 2020-05-29 2021-12-02 杭州邦顺制药有限公司 针对Claudin18.2的抗体及其用途
CN113854234B (zh) * 2020-06-30 2023-09-08 江苏奥赛康生物医药有限公司 一种小鼠胰腺癌模型及其构建方法和应用
WO2022011531A1 (zh) * 2020-07-14 2022-01-20 浙江道尔生物科技有限公司 一种抗cld18a2的单域抗体
CN111705085B (zh) * 2020-08-20 2020-12-25 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 构建动物模型的方法及应用
WO2022100590A1 (zh) * 2020-11-10 2022-05-19 齐鲁制药有限公司 针对密蛋白18a2的adcc增强型人源化抗体及其应用
WO2022122709A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Sotio Biotech A.S. Antibody-drug conjugates based on humanized cldn18.2 antibodies
CA3199830A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Lukas BAMMERT Tumor-specific claudin 18.2 antibody-drug conjugates
US20240117035A1 (en) * 2021-02-08 2024-04-11 Shandong Boan Biotechnology Co., Ltd. Cldn18.2/cd3 bispecific antibodies for the therapy of cldn18.2-expressing solid tumors
EP4347659A1 (en) * 2021-05-31 2024-04-10 Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd. Monoclonal antibodies against cldn18.2 and fc-engineered versions thereof
CN113687085A (zh) * 2021-08-27 2021-11-23 复旦大学附属中山医院 一种评估实体肿瘤Claudin18.2蛋白表达的方法和应用
CN113788894B (zh) * 2021-09-03 2022-08-05 深圳市先康达生命科学有限公司 靶向人Claudin18.2蛋白的单克隆抗体及其应用
CN117897403A (zh) * 2021-09-24 2024-04-16 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种抗Claudin18.2抗体及其应用
CA3235119A1 (en) * 2021-10-19 2023-04-27 Mingjiu Chen Antibodies binding cldn18.2 and uses thereof
CN114836388A (zh) * 2022-06-07 2022-08-02 江苏亲科生物研究中心有限公司 Claudin18.2单克隆抗体及其制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007027867A2 (en) * 2005-08-31 2007-03-08 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways
CN101312989A (zh) * 2005-11-24 2008-11-26 加尼梅德药物公司 用于治疗癌症的针对密蛋白-18的单克隆抗体

Family Cites Families (195)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4954617A (en) 1986-07-07 1990-09-04 Trustees Of Dartmouth College Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes
US4881175A (en) 1986-09-02 1989-11-14 Genex Corporation Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5013653A (en) 1987-03-20 1991-05-07 Creative Biomolecules, Inc. Product and process for introduction of a hinge region into a fusion protein to facilitate cleavage
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5258498A (en) 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
DE3853515T3 (de) 1987-05-21 2005-08-25 Micromet Ag Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung.
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US6020145A (en) 1989-06-30 2000-02-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
GB9019812D0 (en) 1990-09-11 1990-10-24 Scotgen Ltd Novel antibodies for treatment and prevention of infection in animals and man
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
GB9223377D0 (en) 1992-11-04 1992-12-23 Medarex Inc Humanized antibodies to fc receptors for immunoglobulin on human mononuclear phagocytes
US5589579A (en) 1994-07-19 1996-12-31 Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. Gene sequence and probe for a marker of non-small cell lung carinoma
WO2000077037A2 (en) 1999-06-15 2000-12-21 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001004311A1 (en) 1999-07-07 2001-01-18 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2000073454A1 (en) 1999-06-02 2000-12-07 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2000015796A2 (en) 1998-09-16 2000-03-23 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5677139A (en) 1995-04-21 1997-10-14 President And Fellows Of Harvard College In vitro differentiation of CD34+ progenitor cells into T lymphocytes
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
JP2001501447A (ja) 1996-01-11 2001-02-06 コリクサ コーポレイション 乳癌の処置および診断のための組成物および方法
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US7368531B2 (en) 1997-03-07 2008-05-06 Human Genome Sciences, Inc. Human secreted proteins
US20070224663A1 (en) 1997-03-07 2007-09-27 Human Genome Sciences, Inc. Human Secreted Proteins
US7411051B2 (en) 1997-03-07 2008-08-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to HDPPA04 polypeptide
WO2000078961A1 (en) 1999-06-23 2000-12-28 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20020127584A1 (en) 1997-09-18 2002-09-12 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030073129A1 (en) 1998-09-01 2003-04-17 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030022298A1 (en) 1997-09-15 2003-01-30 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20050196832A1 (en) 1997-09-18 2005-09-08 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030008352A1 (en) 1997-09-18 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030027272A1 (en) 1997-09-18 2003-02-06 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030166104A1 (en) 1997-09-18 2003-09-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030032103A1 (en) 1997-09-18 2003-02-13 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7160985B2 (en) 1997-10-29 2007-01-09 Genentech, Inc. Pro180 polypeptide
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US20030040471A1 (en) 1998-04-29 2003-02-27 Watson James D. Compositions isolated from skin cells and methods for their use
US20030022835A1 (en) 1998-04-29 2003-01-30 Genesis Research And Development Corporation Limited Compositions isolated from skin cells and methods for their use
JP3428441B2 (ja) 1998-05-15 2003-07-22 エーザイ株式会社 タイトジャンクション構成膜蛋白質クローディンファミリー
US7319008B2 (en) 1998-06-02 2008-01-15 Genentech, Inc. Nucleic acid underexpressed in melanoma
US7351543B2 (en) 1998-06-02 2008-04-01 Genentech, Inc. Antibodies to a polypeptide encoded by a nucleic acid underexpressed in melanoma
JP2002517222A (ja) 1998-06-11 2002-06-18 スミスクライン ビーチャム コーポレーション Ｇｐｒ３５ａ受容体
US7339033B2 (en) 1998-06-26 2008-03-04 Genentech, Inc. Pro1481
EP1104486A4 (en) 1998-08-04 2002-07-17 Diadexus Llc NEW METHOD FOR DIAGNOSIS, FOLLOW-UP, AND IMAGE OF LUNG CANCER
US20050181478A1 (en) 1998-09-01 2005-08-18 Baker Kevin P. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
NZ531664A (en) 1998-09-01 2005-07-29 Genentech Inc Pro1317 polypeptides and sequences thereof with homology to the semaphorin B glycoprotein family
US7038019B2 (en) 1998-09-01 2006-05-02 Genentech, Inc. Antibodies to PRO1410
US7041805B2 (en) 1998-09-01 2006-05-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030082626A1 (en) 1998-09-01 2003-05-01 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2000015659A2 (en) 1998-09-16 2000-03-23 Zymogenetics, Inc. Stomach polypeptide zsig28
CA2345377A1 (en) * 1998-10-06 2000-04-13 Curagen Corporation Novel secreted proteins and polynucleotides encoding them
US7399834B2 (en) 1998-10-07 2008-07-15 Genentech, Inc. Anti-PRO1558 antibodies
AU1450900A (en) 1998-10-21 2000-05-08 Arch Development Corporation Methods of treatment of type 2 diabetes
US7026449B2 (en) 1999-01-05 2006-04-11 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7465785B2 (en) 1999-03-08 2008-12-16 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a nucleic acid over-expressed in melanoma
KR20030002292A (ko) 1999-03-08 2003-01-08 제넨테크, 인크. 분비 및 막횡단 폴리펩티드 및 이를 코딩하는 핵산
JP2003531811A (ja) 1999-03-08 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 血管形成及び心臓血管新生の促進又は阻害
US7507404B2 (en) 1999-03-08 2009-03-24 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU764092B2 (en) 1999-03-23 2003-08-07 Genentech Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
JP2004507202A (ja) 1999-03-31 2004-03-11 キュラジェン　コーポレイション ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む核酸；「ｏｒｆｘ」
US20080286821A1 (en) 1999-05-14 2008-11-20 Eaton Dan L Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU3246100A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Genentech Inc. Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth
AU2215300A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Genentech Inc. Methods and compositions for inhibiting neoplastic cell growth
PT1185648E (pt) 1999-06-22 2007-06-29 Genentech Inc Métodos e composições para a inibição do crescimento de células neoplásicas.
EP1208202A2 (en) 1999-09-01 2002-05-29 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU1205901A (en) 1999-10-14 2001-04-23 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas, The Tumor antigen derived gene-16 (tadg-16): a novel extracellular serine protease and uses thereof
CA2496312A1 (en) 1999-12-01 2001-06-07 Kevin P. Baker Colon tumour marker pro4799 polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6380362B1 (en) 1999-12-23 2002-04-30 Genesis Research & Development Corporation Ltd. Polynucleotides, polypeptides expressed by the polynucleotides and methods for their use
JP4280444B2 (ja) 2000-01-06 2009-06-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍性細胞成長阻害のための組成物及び方法
CA2396719A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. 22 human secreted proteins
WO2001055326A2 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2395295A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins and antibodies
US20040018969A1 (en) 2000-01-31 2004-01-29 Rosen Craig A. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001062920A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Corixa Corporation Compositions and methods for diagnosis and therapy of malignant mesothelioma
AU6802801A (en) 2000-03-01 2001-09-24 Genentech Inc Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001070979A2 (en) 2000-03-21 2001-09-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits, and method for identification, assessment, prevention and therapy of ovarian cancer
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
CA2747325A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
AU2001260847A1 (en) 2000-05-24 2001-12-03 Genesis Research And Development Corporation Limited Compositions isolated from skin cells and methods for their use
WO2002002621A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Zymogenetics, Inc. Mammalian secreted proteins
AU2001284703B2 (en) 2000-08-03 2007-03-22 Therapeutic Human Polyclonals Inc. Production of humanized antibodies in transgenic animals
AU2001285047A1 (en) 2000-08-16 2002-02-25 Chiron Corporation Human genes and gene expression products
WO2002018576A2 (en) 2000-08-28 2002-03-07 Diadexus, Inc. Compositions and methods relating to lung specific genes
MXPA03002049A (es) 2000-09-08 2003-07-24 Schering Corp Genes de mamiferos: reactivos y metodos relacionados.
JP2004526411A (ja) 2000-09-18 2004-09-02 トマス・ジエフアーソン・ユニバーシテイ 胃および食道癌細胞を同定および標的とするための組成物および方法
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002255478A1 (en) 2001-01-10 2002-09-12 Pe Corporation (Ny) Kits, such as nucleic acid arrays, comprising a majority of human exons or transcripts, for detecting expression and other uses thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2440008A1 (en) 2001-01-29 2002-08-29 Phase-1 Molecular Toxicology, Inc. Rat toxicologically relevant genes and uses thereof
JP2004526441A (ja) 2001-02-26 2004-09-02 アリーナ・フアーマシユーチカルズ・インコーポレーテツド 内因性および非内因性型ヒトｇタンパク質共役受容体
US20030152939A1 (en) 2001-04-09 2003-08-14 Glennda Smithson Novel secreted proteins and polynucleotides encoding them
US20060084794A1 (en) 2001-04-12 2006-04-20 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP2003000249A (ja) 2001-05-10 2003-01-07 Daiichi Fine Chemical Co Ltd クローディンによるＭＴ−ＭＭＰｓを介したｐｒｏＭＭＰ−２活性化
CA2449042A1 (en) 2001-05-30 2002-12-27 Biomedical Center In silico screening for phenotype-associated expressed sequences
JP2004533840A (ja) 2001-07-06 2004-11-11 ジェネンテック・インコーポレーテッド ファージディスプレイによるｐｄｚドメインリガンド
CA2457424A1 (en) 2001-08-03 2003-02-20 Arbor Vita Corporation Molecular interactions in cells
US20030023042A1 (en) 2001-12-06 2003-01-30 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
CA2379661A1 (en) 2002-03-28 2003-09-28 Kursad Turksen Paracellular drug delivery system
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
WO2004029629A1 (en) * 2002-09-27 2004-04-08 Janssen Pharmaceutica N.V. N-11 truncated amyloid-beta nomoclonal antibodies, compositions, methods and uses
BRPI0314814C1 (pt) 2002-09-27 2021-07-27 Xencor Inc anticorpo compreendendo uma variante de fc
NZ568769A (en) 2002-10-17 2010-04-30 Genmab As Human monoclonal antibodies against CD20
CA2505479A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Arbor Vita Corporation Molecular interactions in neurons
DE10254601A1 (de) 2002-11-22 2004-06-03 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
EP1430902A1 (en) 2002-12-20 2004-06-23 Mondobiotech Laboratories Anstalt Pharmaceutical composition of interferon gamma with molecular diagnostics for the improved treatment of asthma bronchiale
EP2368578A1 (en) 2003-01-09 2011-09-28 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
US20060019256A1 (en) 2003-06-09 2006-01-26 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
JP2007507243A (ja) 2003-10-03 2007-03-29 バイエル・フアーマシユーチカルズ・コーポレーシヨン 遺伝子発現プロファイルおよび使用方法
DE10354601B3 (de) 2003-11-21 2005-06-23 Chiropro Gmbh Gelenkprothese für Fingerglieder
WO2005052182A2 (en) 2003-11-26 2005-06-09 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem A method of analyzing plasma membrane protein content of cells
US20080119412A1 (en) 2003-12-23 2008-05-22 Nono Inc. Polypeptides for Modulating Binding of Trp Channel Proteins and Trp- Associated Proteins
WO2005076939A2 (en) 2004-02-09 2005-08-25 University Of Kentucky Research Foundation Assay and method for diagnosing and treating alzheimer’s disease
WO2005082398A2 (en) 2004-02-26 2005-09-09 Ohio University Diagnosis of hyperinsulinemia and type ii diabetes and protection against same based on genes differentially expressed in muscle cells
US20050255041A1 (en) 2004-05-13 2005-11-17 Arius Research, Inc. Cancerous disease modifying antibodies
DE102004024617A1 (de) 2004-05-18 2005-12-29 Ganymed Pharmaceuticals Ag Differentiell in Tumoren exprimierte Genprodukte und deren Verwendung
EP2093569A3 (en) 2004-05-21 2009-11-11 The Institute for Systems Biology Compositions and methods for quantification of serum glycoproteins
WO2006023121A1 (en) 2004-07-27 2006-03-02 Ohio University Diagnosis of hyperinsulinemia and type ii diabetes and protection against same based on genes differentially expressed in white adipose tissue (13)
DE102004042822A1 (de) 2004-08-31 2006-03-16 Technische Universität Dresden Verbindungen und Methoden zur Behandlung, Diagnose und Prognose bei Pankreaserkrankungen
FR2876705B1 (fr) 2004-10-19 2008-12-12 Biomerieux Sa Procede pour le diagnostic d'une intolerance a l'aspirine
US20070072175A1 (en) 2005-05-13 2007-03-29 Biogen Idec Ma Inc. Nucleotide array containing polynucleotide probes complementary to, or fragments of, cynomolgus monkey genes and the use thereof
CA2613482A1 (en) 2005-07-01 2007-02-15 Arbor Vita Corporation Methods and compositions for diagnosis and treatment of influenza
AU2006280321A1 (en) 2005-08-15 2007-02-22 Genentech, Inc. Gene disruptions, compositions and methods relating thereto
JP5405110B2 (ja) 2005-09-19 2014-02-05 ベリデックス・エルエルシー 原発不明がんの原発巣を同定するための方法および材料
AU2006304605A1 (en) 2005-10-17 2007-04-26 Institute For Systems Biology Tissue-and serum-derived glycoproteins and methods of their use
NZ569957A (en) * 2006-02-10 2012-03-30 Genentech Inc Anti-FGF19 antibodies and methods using same
CA2647430A1 (en) 2006-03-29 2007-10-11 Genentech, Inc. Diagnostics and treatments for tumors
WO2008013954A2 (en) 2006-07-27 2008-01-31 Cell Signaling Technology, Inc. Tyrosine phosphorylation sites
JP5244103B2 (ja) 2006-08-09 2013-07-24 ホームステッド クリニカル コーポレイション 器官特異的蛋白質およびその使用方法
US8450057B2 (en) 2006-08-14 2013-05-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Diagnostic tests using gene expression ratios
US20090258442A1 (en) * 2006-08-31 2009-10-15 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways
BRPI0716944A2 (pt) 2006-09-19 2013-09-17 Novartis Ag biomarcadores de modulaÇço alvo, eficÁcia, diagnàstico, e/ou prognàstico para inibidores de raf
EP2087110A2 (en) 2006-10-11 2009-08-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Influenza targets
US20090018031A1 (en) 2006-12-07 2009-01-15 Switchgear Genomics Transcriptional regulatory elements of biological pathways tools, and methods
WO2008073919A2 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Mir-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CA2677118A1 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Veridex, Llc Methods and materials for identifying the origin of a carcinoma of unknown primary origin
EP2145902A3 (en) 2007-04-19 2010-09-29 Peter Hornbeck Tyrosine phosphorylation sites and antibodies specific for them
EP1997832A1 (en) 2007-05-29 2008-12-03 Ganymed Pharmaceuticals AG Monoclonal antibodies against Claudin-18 for treatment of cancer
JP2010529966A (ja) 2007-06-08 2010-09-02 アシュラジェン インコーポレイテッド 治療的介入の標的としてｍｉＲ−３４によって調節される遺伝子および経路
WO2009015050A2 (en) 2007-07-20 2009-01-29 The Gov. Of The U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Gene expression profile for predicting ovarian cancer patient survival
WO2009035497A2 (en) 2007-08-08 2009-03-19 Savidge Tor C Disease related cysteine modifications and uses thereof
EP2036987A1 (en) 2007-09-17 2009-03-18 Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Molecular markers for tumor cell content in tissue samples
WO2009047362A2 (en) 2007-10-12 2009-04-16 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Method for opening tight junctions
WO2009102367A2 (en) 2007-11-19 2009-08-20 The Regents Of The University Of Colorado Tight junction protein modulators and uses thereof
US20090304697A1 (en) 2008-06-02 2009-12-10 Nsabp Foundation, Inc. Identification and use of prognostic and predictive markers in cancer treatment
WO2009155609A1 (en) 2008-06-20 2009-12-23 Oklahoma Medical Research Foundation IMMUNOGENIC MEMAPSIN 2 β-SECRETASE PEPTIDES AND METHODS OF USE
US20110190380A1 (en) 2008-10-23 2011-08-04 Elena Feinstein Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof
CN101381524A (zh) 2008-10-24 2009-03-11 南开大学 单层氧化石墨与水溶性高分子增强复合材料
US20110286916A1 (en) 2008-11-20 2011-11-24 Jose Miguel Aste-Amezaga Generation and characterization of anti-notch antibodies for therapeutic and diagnostic use
GB0904957D0 (en) 2009-03-23 2009-05-06 Univ Erasmus Medical Ct Tumour gene profile
US20120028816A1 (en) 2009-03-31 2012-02-02 Warren Stephen T Methods and systems for screening for and diagnosing dna methylation associated with autism spectrum disorders
CN101584860A (zh) * 2009-04-27 2009-11-25 西安杰诺瓦生物科技有限公司 重组人Claudin18.2肿瘤疫苗及其制备方法
CA2776228A1 (en) 2009-10-01 2011-04-07 Chipdx Llc System and method for classification of patients
AU2010326066A1 (en) 2009-12-01 2012-06-21 Compendia Bioscience, Inc. Classification of cancers
CA2786940C (en) * 2010-03-16 2019-09-24 Biontech Ag Tumor vaccination involving a humoral immune response, and proteins therefor including all or a portion of a hepatitis b virus core antigen protein and an epitope of claudin 18.2
EP2366709A1 (en) 2010-03-16 2011-09-21 BioNTech AG Tumor vaccination involving a humoral immune response against self-proteins
US8945847B2 (en) 2010-05-24 2015-02-03 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Methods and kits for ascertaining biosafety of an agent
WO2011154139A2 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Roche Diagnostics Gmbh Gene expression markers for predicting response to interleukin-6 receptor-inhibiting monoclonal antibody drug treatment
US8454385B2 (en) 2010-06-22 2013-06-04 John Mezzalingua Associates, LLC Coaxial cable connector with strain relief clamp
WO2012070014A2 (en) 2010-11-26 2012-05-31 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Identification of novel cell surface markers for pancreatic progenitor cells and definite endodermal cells
JP5319023B2 (ja) 2011-01-12 2013-10-16 森永乳業株式会社 免疫調節作用を有する乳を産生する食餌のスクリーニング法
DE102011005235B4 (de) 2011-03-08 2017-05-24 Sirs-Lab Gmbh Verfahren zum Identifizieren einer Teilmenge von Polynucleotiden aus einer dem Humangenom entsprechenden Ausgangsmenge von Polynucleotiden zur in vitro Bestimmung eines Schweregrads der Wirtsantwort eines Patienten
EP2833892A4 (en) 2012-04-02 2016-07-20 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS AND PEPTIDES ASSOCIATED WITH ONCOLOGY
WO2013167153A1 (en) * 2012-05-09 2013-11-14 Ganymed Pharmaceuticals Ag Antibodies useful in cancer diagnosis
WO2013174403A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2013174404A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Ganymed Pharmaceuticals Ag Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 for treatment of cancer
WO2014025198A2 (ko) 2012-08-09 2014-02-13 주식회사 한독 Lfa3 변이체 및 상기 변이체 또는 lfa3 cd2 결합영역과 이에 표적 특이적 폴리펩타이드가 연결된 융합단백질 및 그 용도
WO2014025199A2 (ko) 2012-08-09 2014-02-13 주식회사 한독 스테필로코칼 엔테로톡신 유래의 초항원 변이체 및 이에 표적 특이적 폴리펩타이드가 연결된 융합단백질 및 그 용도
US20150299797A1 (en) 2012-08-24 2015-10-22 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods relating to blood-based biomarkers of breast cancer
US20140073524A1 (en) 2012-09-07 2014-03-13 Institute For Systems Biology Markers and methods for detecting posttraumatic stress disorder (ptsd)
US9856532B2 (en) 2012-09-07 2018-01-02 Institute For Systems Biology Markers and methods for detecting posttraumatic stress disorder (PTSD)

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007027867A2 (en) * 2005-08-31 2007-03-08 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in carcinoma signaling pathways
CN101312989A (zh) * 2005-11-24 2008-11-26 加尼梅德药物公司 用于治疗癌症的针对密蛋白-18的单克隆抗体

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Publication number Publication date
MX369740B (es) 2019-11-20
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