CN104292357B - 一种灵芝多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种灵芝多糖的提取方法。一种灵芝多糖的提取方法，包括下述的步骤：选择晒干的灵芝，粉碎后过40‑80目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：5‑10，在水中浸泡8‑16小时，加入纤维素酶酶解，再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心，采用乙醇清洗沉淀，冷冻干燥后并粉碎，得灵芝多糖。采用本发明的方法从灵芝中提取多糖，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将灵芝中的脂肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高了灵芝的利用率，采用本发明的方法得到多糖不仅得率高，而且纯度也高。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种灵芝多糖的提取方法。
背景技术
灵芝多糖能防止肿瘤和抑制肿瘤的生长，并已用于临床治疗肿瘤，实验证明，大多数灵芝多糖的抗肿瘤作用是作为一种生物反应调节剂，通过增强宿主免疫调节功能即宿主介导抗肿瘤活性来实现的，灵芝多糖并无细胞毒作用，即不能直接杀死肿瘤细胞，而是通过增强M的吞噬功能，促进T淋巴细胞增殖，增强T细胞的细胞毒作用，诱导某些免疫因子产生等途径来抑制肿瘤生长。
灵芝碱溶性多糖有较强的抑制小鼠移植性肉瘤S-180实体瘤细胞生长的能力，动物实验亦表明，灵芝发酵孢外多糖对小鼠S-180实体瘤有较好的抗肿瘤作用，能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和杀菌能力，与化疗药物相比显示了其抗肿瘤的优越性。
近代的科学研究表明，灵芝菌丝体和子实体中含有的高分子多糖类生物活性物质除具有增强机体免疫功能和抑制肿瘤生物的活性外，还有延缓衰老的作用。
灵芝多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜的延缓衰老的作用。
除此之外，灵芝多糖还具有降血脂、抗辐射、活血化瘀、增强机体耐缺氧能力、保护肝脏、提高骨髓和血液合成DNA、RNA、蛋白质的能力，能使人体产生抗体及干扰素。
由于灵芝多糖有许多保健作用和药理作用，因此可用于开发健康人、肿瘤患者、肝病患者、高血压、高血脂、糖尿病患 者所需的保健食品。
灵芝多糖具有多种生物活性，特别是调节免疫功能和抑制肿瘤的作用，近年来倍受研究人员的关注，已得到了学术界的普遍认可。
现有的灵芝多糖的提取方法主要有水提发和微波法，水提法提取率低，且步骤复杂，耗时长，有效成分损失较多。
CN102766221A公开了一种灵芝多糖的提取方法。该方法步骤包括复合酶酶解灵芝子实体、超声波处理和灵芝多糖提取。本发明具有溶剂安全，避免了传统方法中采用氯仿、甲醇等有机溶剂对环境的污染。与超临界二氧化碳萃取法相比，具有提取设备简单、操作方便、成本低、速度快、收效高等特点。采用生物酶酶解原料后再提取相对于传统的热水浸提法，可使灵芝多糖的提取率和含量得到较大提高的效果。其多糖的得率为3.3%左右。
上述的方法中多糖的得率并不高，因此需针对上述的方法进行改进，设计一种高得率的灵芝多糖的提取方法。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种得率较高的灵芝多糖的提取方法。
本发明灵芝多糖的提取方法是通过下述的技术方案来实现的：
一种灵芝多糖的提取方法，包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过40-80目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5-0.9％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，菠萝蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度50℃、pH值6.8-7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭；
离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70℃下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的灵芝的重量百分比。
优选的，灵芝与水的重量比例为1：9；
优选的，碱性蛋白酶的用量是0.45%；
菠萝蛋白酶的添加量为0.4%。
优选的，一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过60目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：7.5，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度45℃、pH值6.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的灵芝的重量百分比。
因此，本发明中采用冷冻粉碎的方法对提取得到的多糖，保持了多糖的质量不受影响。
本发明的有益效果在于，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将灵芝中的脂肪、纤维素酶解，同时从灵芝中提取多糖，最大限度的利用灵芝，而且采用本发明的方法得到的多糖，其得率和纯度高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
以下的检测方法，如无特殊说明，采用苯酚-硫酸法测多糖的含量。
实施例1
一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过60目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：7.5，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度50℃、pH值7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的灵芝的重量百分比。
多糖的提取率为：5.23%。
实施例2
一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过40目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：5，在水中浸泡8小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2%，菠萝蛋白酶的加入量为0.2%，酶解温度50℃、pH值6.8，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶5min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的灵芝的重量百分比。
多糖的提取率为：5.05%。
实施例3
一种灵芝多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过80目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1： 10，在水中浸泡16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.9％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.6%，菠萝蛋白酶的加入量为0.5%，酶解温度50℃、pH值7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%左右后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的灵芝的重量百分比。
多糖的提取率为：5.16%。
Claims (4)
1.一种灵芝多糖的提取方法，包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过40-80目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5-0.9％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHz，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，菠萝蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度50℃、pH值6.8-7.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHz，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得灵芝粗多糖浓缩液；
在灵芝粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占灵芝粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭；
离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70℃下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占粉碎后的灵芝的重量百分比。
2.如权利要求1所述的一种灵芝多糖的提取方法，其特征在于，所述的碱性蛋白酶的用量是0.45%。
3.如权利要求1所述的一种灵芝多糖的提取方法，其特征在于，所述的菠萝蛋白酶的添加量为0.4%。
4.如权利要求1-3中任一项所述的一种灵芝多糖的提取方法，其特征在于，所述的方法包括下述的步骤：
选择晒干的灵芝，粉碎后过60目筛，得灵芝粉，在灵芝粉中加水并搅拌均匀，灵芝粉与水的重量比例为1：7.5，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.75％、酶解温度45℃、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHz，酶解0.1-0.5h；
再加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度50℃、pH值7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHz，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Niu Muyuan Inventor after: Wang Yanan Inventor before: Chi Zonglei Inventor before: Cang Weigong Inventor before: Ding Zhenyang |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20161209 Address after: 266500 Qingdao Changjiang Road, Huangdao District, Shandong, No. 66 Applicant after: Niu Muyuan Address before: Watson Road, Licheng District 250100 in Shandong city of Ji'nan province No. 389 building 401. Applicant before: JINAN CAVIN BIOTECHNOLOGY CO., LTD. |
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170125 Termination date: 20171111 |