CN106046192A - 一种从茯苓中提取多糖的工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从茯苓中提取多糖的工艺，包括以下步骤：(1)选取茯苓原料超细粉碎得茯苓粉；(2)向上述茯苓粗粉中加水浸泡，再置于40000Hz超声波中处理20‑25min；(3)水浴后离心分离；(4)采用复合酶酶解分离获得滤液；(5)进行蛋白质沉淀、过滤，离心收集上清液；(6)将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10‑20％，得茯苓多糖浓缩液，喷雾干燥得到茯苓多糖；(7)超滤后进行柱层析得纯化茯苓多糖，冷冻干燥，得到茯苓多糖。本发明利用超声辅助提取的方法，工艺步骤简单，能显著提高茯苓多糖的浸出率，不仅提取的茯苓多糖立体结构不易被破坏、生物活性高，而且具有浸提时间缩短，提取条件温和的优点，反应产物无毒、无副作用等优点。

Description

一种从茯苓中提取多糖的工艺
技术领域
本发明涉及茯苓加工技术领域，具体涉及一种从茯苓中提取多糖的工艺。
背景技术
茯苓(Poria coccus wolf)为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，是常用的传统中药，具有渗湿、健脾、利尿等功能。茯苓多糖(pachyman)具有抑制肿瘤生长，调节机体免疫等功能。近年来茯苓多糖的提取一般用热水浸提法、碱液浸提法、酸液浸提法等先得到茯苓多糖的粗品再通过纯化工艺得到茯苓多糖的精品。热水浸提法时间长且多糖提取率低，而酸碱液浸提法浸提程序较繁琐，浸提条件较剧烈，极易破坏多糖的立体结构，使其生物活性受到限制。以上传统的提取方法中，提取时间较长，工艺条件难以控制使得茯苓多糖立体结构易破坏、生物活性较低，提取效果不好。
发明内容
本发明旨在提供了一种从茯苓中提取多糖的工艺。
本发明提供如下技术方案：
一种从茯苓中提取多糖的工艺，包括以下步骤：
(1)选取质量好的茯苓原料置于60℃烘箱内干燥8-10h，再进行超细粉碎得茯苓粉，过20-40目筛，加入30-60℃的石油醚至粉碎后的茯苓粉中浸润，静置10-18min后按液固比5-10ml/g加入50℃的无水乙醇，6-10min后在1000r/min的条件下离心烘干，得茯苓粗粉；
(2)向上述茯苓粗粉中加4-6倍水浸泡煮沸30min，再置于40000Hz超声波中处理20-25min，放置于70℃水浴中2h，并不时振荡；
(3)将水浴后的混浊液在300-500r/min条件下离心分离10min，收集离心后的上清液至于4℃条件下冷藏25-30min；
(4)采用复合酶在合适的条件下酶解上述上清液获得酶解液，而后酶解液灭酶活，采用回流法提取有效成分后固液分离获得滤液；
(5)向上述酶解处理后的滤液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，在20℃下静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，离心收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取至少3-4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
(6)采用旋转蒸发仪在60-80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10-20％，得茯苓多糖浓缩液，再在4-25℃乙醇溶液中沉降24h以上，离心10-15min，弃上淸液并室温挥发干乙醇，喷雾干燥得到茯苓多糖；
(7)用茯苓多糖质量5-15倍的蒸馏水进行溶解，利用超滤膜将茯苓多糖提取液进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行葡聚糖凝胶SephadexG-100于25℃以下进行柱层析得纯化茯苓多糖，收集茯苓多糖组分，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
所述步骤(2)中超声波处理的温度为65-72℃。
所述步骤(4)中复合酶包含有纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和木瓜蛋白酶，所述纤维素酶：半纤维素酶：淀粉酶：木瓜蛋白酶的重量比为5:3:3:2。
所述步骤(6)中乙醇溶液浓度为体积百分比95％的乙醇。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明工艺条件容易控制，利用超声辅助提取的方法，工艺步骤简单，能显著提高茯苓多糖的浸出率，不仅提取的茯苓多糖立体结构不易被破坏、生物活性高，而且具有浸提时间缩短，提取条件温和的优点，反应产物无毒、无副作用等优点。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种从茯苓中提取多糖的工艺，包括以下步骤：
(1)选取质量好的茯苓原料置于60℃烘箱内干燥8-10h，再进行超细粉碎得茯苓粉，过20-40目筛，加入30-60℃的石油醚至粉碎后的茯苓粉中浸润，静置10-18min后按液固比5-10ml/g加入50℃的无水乙醇，6-10min后在1000r/min的条件下离心烘干，得茯苓粗粉；
(2)向上述茯苓粗粉中加4-6倍水浸泡煮沸30min，再置于40000Hz超声波中处理20-25min，放置于70℃水浴中2h，并不时振荡；
(3)将水浴后的混浊液在300-500r/min条件下离心分离10min，收集离心后的上清液至于4℃条件下冷藏25-30min；
(4)采用复合酶在合适的条件下酶解上述上清液获得酶解液，而后酶解液灭酶活，采用回流法提取有效成分后固液分离获得滤液；
(5)向上述酶解处理后的滤液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，在20℃下静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，离心收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取至少3-4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
(6)采用旋转蒸发仪在60-80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10-20％，得茯苓多糖浓缩液，再在4-25℃乙醇溶液中沉降24h以上，离心10-15min，弃上淸液并室温挥发干乙醇，喷雾干燥得到茯苓多糖；
(7)用茯苓多糖质量5-15倍的蒸馏水进行溶解，利用超滤膜将茯苓多糖提取液进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行葡聚糖凝胶SephadexG-100于25℃以下进行柱层析得纯化茯苓多糖，收集茯苓多糖组分，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
所述步骤(2)中超声波处理的温度为65-72℃。
所述步骤(4)中复合酶包含有纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和木瓜蛋白酶，所述纤维素酶：半纤维素酶：淀粉酶：木瓜蛋白酶的重量比为5:3:3:2。
所述步骤(6)中乙醇溶液浓度为体积百分比95％的乙醇。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于所述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是所述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种从茯苓中提取多糖的工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取质量好的茯苓原料置于60℃烘箱内干燥8-10h，再进行超细粉碎得茯苓粉，过20-40目筛，加入30-60℃的石油醚至粉碎后的茯苓粉中浸润，静置10-18min后按液固比5-10ml/g加入50℃的无水乙醇，6-10min后在1000r/min的条件下离心烘干，得茯苓粗粉；
(2)向上述茯苓粗粉中加4-6倍水浸泡煮沸30min，再置于40000Hz超声波中处理20-25min，放置于70℃水浴中2h，并不时振荡；
(3)将水浴后的混浊液在300-500r/min条件下离心分离10min，收集离心后的上清液至于4℃条件下冷藏25-30min；
(4)采用复合酶在合适的条件下酶解上述上清液获得酶解液，而后酶解液灭酶活，采用回流法提取有效成分后固液分离获得滤液；
(5)向上述酶解处理后的滤液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，在20℃下静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，离心收集上清液，离心后的残渣按上述方法再提取至少3-4次，合并上清液，得茯苓多糖提取液；
(6)采用旋转蒸发仪在60-80℃下将茯苓多糖提取液浓缩至原体积的10-20％，得茯苓多糖浓缩液，再在4-25℃乙醇溶液中沉降24h以上，离心10-15min，弃上淸液并室温挥发干乙醇，喷雾干燥得到茯苓多糖；
(7)用茯苓多糖质量5-15倍的蒸馏水进行溶解，利用超滤膜将茯苓多糖提取液进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行葡聚糖凝胶SephadexG-100于25℃以下进行柱层析得纯化茯苓多糖，收集茯苓多糖组分，冷冻干燥，得到茯苓多糖。
2.根据权利要求1所述的一种从茯苓中提取多糖的工艺，其特征在于：所述步骤(2)中超声波处理的温度为65-72℃。
3.根据权利要求1所述的一种从茯苓中提取多糖的工艺，其特征在于：所述步骤(4)中复合酶包含有纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和木瓜蛋白酶，所述纤维素酶：半纤维素酶：淀粉酶：木瓜蛋白酶的重量比为5:3:3:2。
4.根据权利要求1所述的一种从茯苓中提取多糖的工艺，其特征在于：所述步骤(6)中乙醇溶液浓度为体积百分比95％的乙醇。
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