CN114292346A - 一种茯苓总多糖及其提取方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种茯苓总多糖及其提取方法与应用，属于中药提取技术领域。本发明的提取方法包括如下步骤：将茯苓菌核粉置于乙醇中回流1～3次，得滤渣1；将滤渣1与KOH溶液混合，反应0.5～3h后，得到碱提取液，调节所述碱提取液的pH至6～7后，得到凝胶状固形物；利用水将凝胶状固形物洗涤3～6次，合并滤液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖；将水洗液进行微滤，收集透过液和截留液1，将所述透过液进行超滤，收集截留液得到截留液2；将截留液1、截留液2与茯苓碱溶多糖合并，干燥得到茯苓总多糖。按照本发明的提取工艺得到的茯苓多糖的得率达65.72～88.94％，含量达76.20～96.14％。

Description

一种茯苓总多糖及其提取方法与应用

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，尤其涉及一种茯苓总多糖及其提取方法与应用。

背景技术

茯苓多糖约占茯苓菌核总重70～90％，其中水溶性多糖约占3％左右，其余为水不溶性的碱溶性多糖。茯苓碱溶性多糖在中医临床使用中因其水不溶性未被利用。现有技术在提取茯苓多糖时是将水溶性多糖和碱溶性多糖分开提取的，得率不高，损失过多，或是将碱溶性多糖进行衍生化处理后提取，分子量和结构多发生了变化，生产过程繁琐且复杂，还存在化学试剂残留，目前没有公开报道过将茯苓碱溶性多糖和水溶性多糖合并制备的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种茯苓总多糖及其提取方法与应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种茯苓总多糖的提取方法，包括如下步骤：

(1)将茯苓菌核粉置于乙醇中回流1～3次，过滤，得滤渣1；

(2)将所述滤渣1与KOH溶液混合，反应0.5～3h后，过滤，得到碱提取液，调节所述碱提取液的pH至6～7后，过滤，得到凝胶状固形物；

(3)利用水将所述凝胶状固形物洗涤3～6次，过滤，合并滤液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖；

(4)将水洗液进行微滤，收集透过液和截留液1，将所述透过液进行超滤，收集截留液得到截留液2；

(5)将截留液1、截留液2和所述茯苓碱溶多糖合并，干燥得到茯苓总多糖。

作为优选，每次回流时茯苓菌核粉与乙醇的质量体积比为1g：6～10mL；

所述乙醇的浓度为75～85vt％；

每次回流的时间为1～2h。

作为优选，步骤(2)所述滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g:8～30mL；

所述KOH溶液的浓度为0.2～0.7mol/L；

所述反应过程中伴随搅拌；

所述搅拌的转速为100～130r/min；

步骤(2)调节所述碱提取液的pH的试剂为盐酸、磷酸或柠檬酸。

作为优选，步骤(3)所述水与凝胶状固形物的质量比为2.5～5:1。

作为优选，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)所述过滤为滤布过滤；

所述滤布的型号为150～250目。

作为优选，步骤(4)所述微滤时滤膜的孔径为0.15～0.25μm；

步骤(4)所述超滤时滤膜截留分子量大小为8～12KD。

作为优选，步骤(5)所述干燥的方法为：先在-46～-44℃条件下预冻4.5～5.5h后，升华干燥，最后在25～35℃条件下解析干燥4～6h；

所述升华干燥为：-25℃5h，-15℃5h，-5℃8h，5℃12～15h，20℃5～7h。

本发明还提供了所述的提取方法制备得到的茯苓总多糖。

本发明还提供了所述的茯苓总多糖在制备治疗和/或预防糖尿病、焦虑症以及抑郁症的药物、保健品或食品中的应用。

本发明提供了一种茯苓总多糖及其提取方法与应用。茯苓多糖可分为水溶性多糖和碱溶性多糖，其中碱溶性多糖占茯苓多糖的90％以上，而含量低的水溶性多糖也具有很好的药理活性。本发明采用碱溶酸沉的方式提取茯苓多糖，水洗脱盐纯化以除去无机盐。由于茯苓多糖为生物大分子，分子量较大，水溶性多糖及低分子量的碱溶性多糖在水洗脱盐过程中留在水层，若直接将水洗液丢弃则会造成大量的浪费；而直接选择所需截留分子量的超滤膜，则大分子多糖及微小悬浮物易沉积在膜表面，堵塞膜孔，增加跨膜阻力，造成通量下降，于是本发明采用多级膜分离技术，水洗液先用微滤膜过滤，可截留低分子的碱溶性多糖，透过液再用截留分子量为8～12KD的超滤膜超滤，可截留水溶性多糖。本方法可同时得到水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖，具有操作简便、分离效率高、超滤膜重复使用率高、生产成本低、无化学试剂引入、制备工艺可进行产业化等优点，符合中药现代化的要求。

按照本发明的提取工艺提取得到的茯苓总多糖的产率高，含量高，得率达65.72～88.94％，含量达76.20～96.14％。

本发明制备得到的茯苓总多糖可以用于制备治疗或预防糖尿病和抑郁症的药物、保健品、食品中。

附图说明

图1为茯苓多糖对大鼠自主活动的影响(其中上左为对运动距离的影响、上中为对运动速度的影响、上右为对移动持续时间的影响，下左为对休息持续时间的影响、下中为对休息次数的影响、下右为对穿越中央区域的次数的影响；每个柱形图从左到右分别代表空白对照组、模型组、Estazolam组、茯苓多糖低剂量组、茯苓多糖高剂量组)。

图2为茯苓多糖对大鼠下丘脑内主要神经递质的影响(其中上左为对5-HT的影响、上右为对DA的影响、下左为对GABA的影响、下右为对NE的影响，柱形图从左到右分别代表空白对照组、模型组、Estazolam组、茯苓多糖低剂量组、茯苓多糖高剂量组)。

图3为茯苓多糖对大鼠下丘脑病的影响(其中，上左为空白对照组、上中为模型组、上右为Estazolam组，下左为茯苓多糖低剂量组、下右为茯苓多糖高剂量组)。

具体实施方式

本发明提供了一种茯苓总多糖的提取方法，包括如下步骤：

(1)将茯苓菌核粉置于乙醇中回流1～3次，过滤，得滤渣1；

(2)将所述滤渣1与KOH溶液混合，反应0.5～3h后，过滤，得到碱提取液，调节所述碱提取液的pH至6～7后，过滤，得到凝胶状固形物；

(3)利用水将所述凝胶状固形物洗涤3～6次，过滤，合并滤液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖；

(4)将水洗液进行微滤，收集透过液和截留液1，将所述透过液进行超滤，收集截留液得到截留液2；

(5)将截留液1、截留液2和所述茯苓碱溶多糖合并，干燥得到茯苓总多糖。

在本发明中，每次回流时茯苓菌核粉与乙醇的质量体积比为1g：6～10mL，优选为1g：8mL；

所述乙醇的浓度为75～85vt％，优选为80vt％；

每次回流的时间为1～2h，优选为1.5h。

在本发明中，步骤(1)所述回流次数优选为2次。

步骤(2)调节所述碱提取液的pH的试剂为盐酸、磷酸或柠檬酸。

在本发明中，步骤(2)所述滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g:8～30mL，优选为1g:13～25mL，进一步优选为19mL；

所述KOH溶液的浓度为0.2～0.7mol/L，优选为0.45mol/L；

所述反应过程中伴随搅拌；

所述搅拌的转速为100～130r/min，优选为120r/min；

步骤(2)调节所述碱提取液的pH的试剂为盐酸、磷酸或柠檬酸。

在本发明中，步骤(2)所述反应的时间优选为1～2.5h，进一步优选为1.75h。

在本发明中，步骤(2)所述碱提取液的pH优选为6.5。

在本发明中，步骤(3)所述水与滤渣2的质量比为2.5～5:1，优选为3.75:1。

在本发明中，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)所述过滤为滤布过滤；

所述滤布的型号为150～250目，优选为200目。

在本发明中，步骤(3)所述洗涤的次数优选为4～5次。

在本发明中，步骤(4)所述微滤的滤膜的孔径为0.15～0.25μm，优选为0.2μm；

步骤(4)所述超滤的滤膜截留分子量大小为8～12KD，优选为10KD。在本发明中，步骤(5)所述干燥的方法为先在-46～-44℃条件下预冻4.5～5.5h后，升华干燥，最后在25～35℃条件下解析干燥4～6h；

所述升华干燥为：-25℃5h，-15℃5h，-5℃8h，5℃12～15h，20℃5～7h。

在本发明中，步骤(5)所述预冻的温度优选为-45℃，预冻干燥的时间优选为5h。

在本发明中，步骤(5)所述解析干燥的温度优选为30℃，解析干燥的时间优选为5h。

在本发明中，所述干燥的方法的优势在于：能够最大程度的保有茯苓多糖应有的色泽、性状，避免了高温对茯苓多糖色泽、结构的影响。

本发明还提供了所述的提取方法制备得到的茯苓总多糖。

本发明还提供了所述的茯苓总多糖在制备治疗和/或预防糖尿病、焦虑症以及抑郁症的药物、保健品或食品中的应用。

下面结合实施例对本发明提供的方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

本发明实施例中茯苓总多糖含量的测定方法采用苯酚-硫酸法进行检测。

在本发明实施例中所述茯苓总多糖得率的计算公式＝(冷冻干燥得到的茯苓多糖的质量/茯苓菌核粉的质量)×100％。

实施例1

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入80％的乙醇回流提取2次，分别提取2h和1h，150目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为30mL。

将滤渣1干燥后，置于0.3mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g:20mL，120r/min，搅拌3.0h，150目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入柠檬酸中和，调节pH至7，150目滤布过滤后，凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤3次，每次加水量为凝胶状固形物质量的3倍，150目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.2μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为8KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖、截留物1和截留物2，先在-46℃条件下干燥4.5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥12h，20℃干燥5h，之后在25℃条件下解析干燥6h，得到3.2861g茯苓总多糖，得率为65.72％。经检测含量为87.96％。

实施例2

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入75％的乙醇回流提取2次，分别提取2h和1h，200目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为50mL。

将滤渣1干燥后，置于0.4mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g：30mL，130r/min，搅拌1h，200目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入磷酸中和，调节pH至6.5，200目滤布过滤后，得凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤5次，每次加水量为凝胶状固形物质量的4倍，200目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.25μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为12KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖、截留物1和截留物2，先在-44℃条件下预冻5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥15h，20℃干燥5h，之后在30℃条件下解析干燥4h，得到3.8247g茯苓总多糖，得率为76.49％。经检测含量为76.20％。

实施例3

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入85％的乙醇回流提取3次，分别提取2h、1h和1h，250目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为40mL。

将滤渣1干燥后，置于0.7mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g:24mL，100r/min，搅拌2h，250目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入盐酸中和，调节pH至6.0，250目滤布过滤后，得凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤6次，每次加水量为凝胶状固形物质量的5倍，250目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.15μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为10KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖和截留物1和截留物2，先在-45℃条件下预冻5.5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥12h，20℃干燥7h，之后在35℃条件下解析干燥5h，得到4.4355g茯苓总多糖，得率为88.71％。经检测含量为82.49％。

实施例4

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入80％的乙醇回流提取2次，分别提取2h和1h，200目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为50mL。

将滤渣1干燥后，置于0.2mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g：12mL，120r/min，搅拌1.5h，200目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入盐酸中和，调节pH至6.7，200目滤布过滤后，得凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤3次，每次加水量为凝胶状固形物质量的2.5倍，200目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.2μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为12KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖和截留物1和截留物2，先在-45℃条件下预冻5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥15h，20℃干燥7h，之后在34℃条件下干燥5h，得到3.4985g茯苓总多糖，得率为69.97％。经检测含量为88.94％。

实施例5

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入80％的乙醇回流提取2次，分别提取2h和1h，200目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为50mL。

将滤渣1干燥后，置于0.6mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g：16mL，120r/min，搅拌0.5h，200目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入盐酸中和，调节pH至6.2，200目滤布过滤后，得凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤5次，每次加水量为凝胶状固形物质量的5倍，200目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.2μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为10KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖和截留物1和截留物2，先在-44℃条件下预冻5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥15h，20℃干燥5h，之后在30℃条件下干燥6h，得到3.9935g茯苓总多糖，得率为79.87％。经检测含量为96.14％。

实施例6

选取干燥的茯苓菌核粉5g，加入85％的乙醇回流提取2次，分别提取2h和1h，200目滤布过滤得滤渣1；每次加入乙醇的量为40mL。

将滤渣1干燥后，置于0.5mol/L的KOH溶液中，滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g：8mL，110r/min，搅拌2.5h，200目滤布过滤后，取上清液得茯苓碱提取液；向茯苓碱提取液中加入盐酸中和，调节pH至6.7，200目滤布过滤后，得凝胶状固形物。

将上述凝胶状固形物用纯水洗涤3次，每次加水量为凝胶状固形物质量的5倍，200目滤布过滤，合并上清液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖。

将上述水洗液合并后用孔径为0.2μm的微滤膜过滤，收集透过液和截留液1；将所述透过液用截留分子量为8KD的超滤膜进行超滤，收集截留物2。

合并茯苓碱溶性多糖和截留物1和截留物2，先在-46℃条件下预冻4.5h，-25℃干燥5h，-15℃干燥5h，-5℃干燥8h，5℃干燥15h，20℃干燥5h，之后在25℃条件下干燥4h，得到3.940g茯苓总多糖，得率为78.8％。经检测含量为82.73％。

应用实施例1茯苓总多糖降血糖作用研究

雄性SD大鼠适应性喂养5天后，禁食4h(每次禁食均换垫料以避免垫料里遗漏有饲料，影响禁食效果)，取尾血测空腹血糖，作为该批次大鼠基础血糖值。将大鼠按照禁食4h后血糖水平以组间无显著性差异为标准，随机分为空白对照组、模型对照组、二甲双胍组(200mg/kg)和茯苓多糖低、中、高剂量组，每组8只。适应性喂养5d后，除空白对照组继续饲喂普通饲料外，其他组都饲喂高脂饲料28d，后饲喂普通饲料到实验结束，同时给药。第21d时禁食不禁水12h，根据预实验结果腹腔注射链脲霉素STZ 40mg/kg。模型对照组和空白对照组大鼠每天灌胃等量纯水，各给药组大鼠每天灌胃相应药物，灌胃体积均为0.2mL/10g，每天1次，连续42d。各组大鼠在给药结束前1d测定口服血糖FBG值。然后灌胃2.5g/kg葡萄糖，分别在第0.5、2h时测定血糖，然后计算口服糖耐量OGTT曲线下面积AUC。AUC/(mmol/L/h)＝0.25×(Glu 0h+4×Glu 0.5h+3×Glu 2h)。末次给药后大鼠腹主动脉取血，于4℃离心机内3000r/min离心15min，分离血清，取上清保存至-80℃冰箱中待用，检测血清肝生化指标。采用相应的生化试剂盒检测各组大鼠血清中糖化血红蛋白(HbA1c)。血糖FBG值的结果和AUC的结果如表1所示。血清肝生化指标的结果如表2所示。

本应用实施例1所用的茯苓多糖选择实施例1得到的茯苓多糖，所述茯苓多糖低剂量组中茯苓多糖的浓度为100mg/kg；茯苓多糖中剂量组中茯苓多糖的浓度为200mg/kg；茯苓多糖高剂量组中茯苓多糖的浓度为400mg/kg。

表1茯苓多糖对大鼠口服糖耐量的影响

所述，与空白对照组比较，^＊P＜0.05，^＊＊P＜0.01；与模型对照组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01。

表1显示，糖尿病大鼠在茯苓多糖影响下，灌胃葡萄糖溶液0、30、120min后其血糖水平和AUC均显著降低(P＜0.01)。

表2茯苓多糖对大鼠FBG和HbAlc的影响

表2显示，给药前各组大鼠FBG无显著差异，实验结束时，经茯苓多糖给药的糖尿病大鼠FBG显著降低(P＜0.01)。茯苓多糖组的HbAlc又显著回调(P<0.05，P<0.01)。

应用实施例2茯苓总多糖抗焦虑作用研究

随机取36只大鼠，每天进行多平台水环境慢性睡眠剥夺18h，睡眠剥夺时间为下午3点到次日9点，并保持12h光照，12h黑暗的环境，连续造模21d，选取9只大鼠作为空白Control组，在水平台上放一张同箱底同大的不锈钢丝网，不对其进行睡眠剥夺，其他操作同造模组。将造模成功后大鼠按照体质量随机分成：模型组Model、阳性药艾司唑仑，Estazolam组、茯苓多糖低剂量PCAPL组，茯苓多糖高剂量PCAPH组，每组9只，分别以蒸馏水、艾司唑仑0.18mg·kg^-1、茯苓多糖0.28g·kg^-1、0.56g·kg^-1，空白组给予等量蒸馏水，灌胃量为10mL·kg^-1·d^-1，连续给药10d。

在给药结束前一天，将所有大鼠放于敞箱中进行旷场实验，观测大鼠的自主活动行为。敞箱为黑色底部的40cm×40cm×50cm的测试箱，在实验开始前将其均分为4×4的正方形方格，调整敞箱上方的摄像头使其对准箱底，连接计算机，记录大鼠5min内的运动总路程、穿越中央区域次数、休息时间。结果如图1所示。实验过程中保持安静，防止噪音等人为因素对实验结果产生影响，每只大鼠测试完毕后捡拾粪便，并用75％酒精擦拭箱底及内侧，消除上只大鼠的气味，待气味散尽后进行下一只大鼠的测试。

各组大鼠取材前禁食不禁水12h，麻醉后腹主动脉取血。3500r/min，离心10min，分离上清液，保存于-80℃备用。取血后迅速断头，于冰盘上小心取出全脑组织，取其中3只大鼠全脑固定于4％多聚甲醛溶液中，用于HE染色，其余大鼠快速分离出下丘脑组织，用冰生理盐水洗去下丘脑组织表面的血液后，滤纸吸干表面水分，按1:9加入冰PBS缓冲液稀释10倍，充分匀浆后4℃，3500r/min离心10min，吸取上清，得下丘脑组织匀浆液，保存于-80℃备用。采用Elisa法检测大鼠下丘脑组织匀浆液中的神经递质-HT、GABA、DA、NE含量。结果图2所示。HE染色结果如图3所示。

本应用实施例2选用的茯苓总多糖为实施例2得到的茯苓总多糖。

图1显示，与Control组比较，Model组大鼠的运动距离、运动速度，移动持续时间、穿越中央区域次数均显著增加，休息持续时间、休息次数显著减少；与Model组比较，Estazolam组、PCAPL组、PCAPH组的运动距离、运动速度，移动持续时间、穿越中央区域次数均显著减少，Estazolam组、PCAPL组、PCAPH组的休息持续时间显著增加，Estazolam组、PCAPH组的休息次数显著增加。

图2显示，与Control组大鼠比较，Model组大鼠下丘脑内5-HT、DA、GABA、NE含量均显著下降；与Model组比较，Estazolam组、PCAPL组、PCAPH组大鼠5-HT、DA、NE的含量均显著上升，PCAPL组大鼠的GABA含量显著上升。

图3显示，与Control组比较，Model组大鼠下丘脑中神经元细胞数目明显减少，形态不规则，有不同程度的胞体肿胀，排列紊乱；与模型组比较，Estazolam组、PCAPL及PCAPH组大鼠中下丘脑神经元细胞数目明显增多，形态规则，排列有序。可知，茯苓多糖能减少大鼠下丘脑神经元细胞过度自噬，促进神经元细胞增生，改善神经元细胞形态。

由以上实施例可知，本发明提供了一种茯苓总多糖及其提取方法与应用。按照本发明的提取工艺得到的茯苓多糖的得率达65.72～88.71％，含量达76.20～96.14％。并且本申请得到的茯苓多糖可以降低血糖浓度，减少大鼠焦虑症。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种茯苓总多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将茯苓菌核粉置于乙醇中回流1～3次，过滤，得滤渣1；

(2)将所述滤渣1与KOH溶液混合，反应0.5～3h后，过滤，得到碱提取液，调节所述碱提取液的pH至6～7后，过滤，得到凝胶状固形物；

(3)利用水将所述凝胶状固形物洗涤3～6次，过滤，合并滤液得到水洗液，收集滤渣得到茯苓碱溶多糖；

(4)将水洗液进行微滤，收集透过液和截留液1，将所述透过液进行超滤，收集截留液得到截留液2；

(5)将截留液1、截留液2和所述茯苓碱溶多糖合并，干燥得到茯苓总多糖。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，每次回流时茯苓菌核粉与乙醇的质量体积比为1g：6～10mL；

所述乙醇的浓度为75～85vt％；

每次回流的时间为1～2h。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)所述滤渣1与KOH溶液的质量体积比为1g:8～30mL；

所述KOH溶液的浓度为0.2～0.7mol/L；

所述反应过程中伴随搅拌；

所述搅拌的转速为100～130r/min；

步骤(2)调节所述碱提取液的pH的试剂为盐酸、磷酸或柠檬酸。

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)所述水与凝胶状固形物的质量比为2.5～5:1。

5.根据权利要求1～4任意一项所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)所述过滤为滤布过滤；

所述滤布的型号为150～250目。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)所述微滤时滤膜的孔径为0.15～0.25μm；

步骤(4)所述超滤时滤膜截留分子量大小为8～12KD。

7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)所述干燥的方法为：先在-46～-44℃条件下预冻4.5～5.5h后，升华干燥，最后在25～35℃条件下解析干燥4～6h；

所述升华干燥为：-25℃5h，-15℃5h，-5℃8h，5℃12～15h，20℃5～7h。

8.权利要求1～7任意一项所述的提取方法制备得到的茯苓总多糖。

9.权利要求8所述的茯苓总多糖在制备治疗和/或预防糖尿病、焦虑症以及抑郁症的药物、保健品或食品中的应用。

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