CN104666369A - 一种茯苓皮的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种茯苓皮的提取方法。所述方法包括以下步骤：取中药茯苓皮，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；取所得茯苓皮颗粒，加入pH值7.5～8.0的碱水溶液，100～110℃下回流提取，过滤，得药渣和碱水提取液；所得碱水提取液可作为原料进一步制备得到茯苓多糖；所得药渣可作为原料进一步制备得到富含三萜类化合物的茯苓皮醇提取物。本发明进一步保护所述方法在提取茯苓皮中的应用，以及所述方法制备而成的茯苓多糖、茯苓皮醇提取物以及所述物质的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药的提取方法，具体涉及一种茯苓皮的提取方法。
背景技术
茯苓皮为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf.菌核的干燥外皮。具有渗湿利水，益脾和胃，宁心安神。。功能。用于治小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，呕哕，泄泻，遗精，淋浊，惊悸，健忘。现代研究表明茯苓皮具有利水，消肿，安神，美白，抗肿瘤功能。文献报道茯苓皮提取物中含有蛋白质，多肽、氨基酸、多糖及其苷类、有机酸、皂苷、植物甾醇和三萜类物质、强心苷,可能含有鞣质、生物碱,未检测到酚性成分、黄酮及其苷类、蒽醌及其苷类,其中三萜类物质总含量为2.06％，表明其中含有丰富的有效物质,具有较高的开发潜力。
目前茯苓皮药材较少得到开发、利用，药用量仅2000～3000吨/年，2～3元/kg，而中药茯苓年需求量约40000吨，产生近10000吨茯苓皮，一皮、二皮基本上不作药材用，大量地被废弃，一些公司和企业在开发利用茯苓皮，多数是提取茯苓多糖，少数提取茯苓三萜类化合物，或者二者兼顾，但总的开发力度不大，文献及有关专利对茯苓皮药材的提取方法均采用乙醇提取，但产物的收率、纯度不高，提取效果不佳。
发明内容
本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种新的茯苓皮提取方法，所述方法可以高效、简便地提取得到茯苓多糖和茯苓皮醇提取物。
本发明提供的方法具体包括以下步骤：
(1)取中药茯苓皮，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得茯苓皮颗粒，加入pH值7.5～8.0的碱水溶液，100～110℃下回流提取，过滤，得药渣和碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得碱水提取液，调节pH值至6.2～6.8，减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为70～75％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用少量水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
所述步骤(2)中，为了使有效物质提取充分，所述提取的次数可以为多次，优选为在相同的温度下、使用相同pH值的碱水提取3次。
所述步骤(2)优选为：取步骤(1)所得颗粒，加入8～10倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取2～3小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入7～9倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取1.5～2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入6～8倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取1～2小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，合并滤液即得碱水提取液。
所述步骤(2)进一步优选为：取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，将三次提取所得滤液合并即得碱水提取液。
本发明所述碱水溶液优选为氢氧化钠水溶液。
本发明提供的方法中，茯苓皮经碱水提取后，得到大量药渣；所述药渣作为原料，经过进一步的乙醇提取后，可获得富含三萜类化合物的茯苓皮醇提取物；具体的，本发明所述方法可以进一步包括以下步骤：
(5)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入90～95％乙醇，75～80℃保持沸腾回流提取，过滤，将滤液减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏；
(6)在步骤(5)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.30～1.35，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
所述步骤(5)中，为了使有效物质提取充分，所述提取的次数可以为多次，优选为在相同的温度下、使用相同浓度的乙醇提取3次。
所述步骤(5)优选为：取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入5～7倍体积的90～95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5～2.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4～6倍体积的90～95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1～2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入3～5倍体积的90～95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取0.5～1.5小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏。
所述步骤(5)进一步优选为：取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入6倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏。
所述步骤(6)中，所得滤渣可以进一步利用，用少量水洗涤后干燥，可得茯苓多糖。
本发明同时保护以所述方法制备而成的茯苓多糖和茯苓皮醇提取物。
本发明进一步保护所述茯苓多糖和茯苓皮醇提取物的应用。
本发明所得茯苓多糖具有增强免疫及抗肿瘤作用；且可用于制备羧甲基茯苓多糖，还可以用于进一步分离、纯化得到更高纯度的茯苓多糖。
本发明所得茯苓皮醇提取物中富含三萜类化合物，具有增强免疫及抗肿瘤、利尿、安神、美白作用；还可以作为原料进一步分离、纯化得到高纯度的茯苓皮三萜类化合物及其单体。
本发明提供的方法能使廉价的茯苓皮药材得到充分开发利用。碱水提取使茯苓皮药材组织解离，使碱水溶性成分和大量茯苓多糖与醇溶性成分分开，便于茯苓三萜类成分醇提时更好地溶出，同时达到了简单的溶剂分离，达到使有效成分富集的目的，可以直接得到高纯度的茯苓三萜类成分提取物，所得醇提取物可用于进一步分离、纯化得到茯苓三萜类成分单体。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的pH 7.8氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾下回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的pH 7.8氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的pH 7.8氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，将三次提取所得滤液合并即得碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得碱水提取液，调节pH值至6.5，减压浓缩至相对密度1.33，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为75％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用少量水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
经检测，茯苓多糖得率为15.4％。
实施例2
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入10倍体积的pH 7.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取3小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入9倍体积的pH 7.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入8倍体积的pH 7.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，合并滤液即得碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得碱水提取液，调节pH值至6.2，减压浓缩至相对密度1.30，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为70％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用水洗涤后干燥，即得茯苓多糖，
经检测，茯苓多糖得率为12.8％。
实施例3
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入8倍体积的pH 8.0氢氧化钠水溶液，110℃下回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入7倍体积的pH 8.0氢氧化钠水溶液，110℃下回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入6倍体积的pH 8.0氢氧化钠水溶液，110℃下回流提取1小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，合并滤液即得碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得碱水提取液，调节pH值至6.8，减压浓缩至相对密度1.35，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为73％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用少量水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
经检测，茯苓多糖得率为18.3％。
一般而言，氢氧化钠水溶液pH值越高，茯苓多糖得率越高，但氢氧化钠水溶液的pH值越高，对设备的要求越高，三萜类化合物损失加大，茯苓含93％以上的β-茯苓聚糖，茯苓皮提取茯苓多糖不是主要目的，提取三萜类化合物为主，因此，氢氧化钠水溶液pH值选择为7.5～8.0为佳。
实施例4
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)～(4)同实施例1；
(5)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入6倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.32，即得醇浸膏；
(6)在步骤(5)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.35，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
经检测，提取产物滤渣少，所述茯苓皮醇提取物中三萜化合物得率为5.0％，纯度高，茯苓多糖等杂质少。
实施例5
按照以下步骤提取茯苓皮，得到茯苓皮醇提取物：
(1)～(4)同实施例2；
(5)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入7倍体积的90％乙醇，78～80℃保持沸腾下回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入6倍体积的90％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的90％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取0.5小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.30，即得醇浸膏；
(6)在步骤(5)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.32，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
经检测，提取产物滤渣多，所述茯苓皮醇提取物中三萜化合物得率为6.3％，纯度略低于实施例4所得产物。
实施例6
按照以下步骤提取茯苓皮，得到茯苓皮醇提取物：
(1)～(4)同实施例3；
(5)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入3倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.35，即得醇浸膏；
(6)在步骤(5)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.35，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
经检测，提取物滤渣少，所述茯苓皮醇提取物中三萜化合物得率为4.5％，纯度高，茯苓多糖等杂质少。
对比例1
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，将三次提取所得滤液合并即得水提取液；
(3)取步骤(2)所得水提取液，减压浓缩至相对密度1.34，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为75％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用少量水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
经检测，茯苓多糖得率为3.4％，β-茯苓聚糖不溶于水，水提收率低，β-茯苓聚糖和三萜类化合物都没有提取出来，没有达到将两者分离的目的。
对比例2
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的pH 8.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的pH 8.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的pH 8.5氢氧化钠水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，将三次提取所得滤液合并即得碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得水提取液，调节pH值至6.5，减压浓缩至相对密度1.32，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为75％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
经检测，茯苓多糖得率为21.8％，β-茯苓聚糖不溶于水，碱水提收率高，pH值越高，β-茯苓聚糖提取越完全，但三萜类化合物也会被提取出来，没有达到将两者分离的目的，pH值越高，对设备的影响越大。
对比例3
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，干燥后，加入6倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.35，即得醇浸膏；
(3)在步骤(2)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.32，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
经检测，所得产物滤渣多，三萜化合物得率为6.5％，纯度低，茯苓多糖等杂质多，直接醇提，β-茯苓聚糖、茯苓多糖、水溶性杂质回部分溶于热的95％乙醇，杂质多，没有达到将分离的目的，提取时茯苓皮药材中大量β-茯苓聚糖的存在，药材致密，影响三萜化合物的溶出，除杂过程中会进一步损失，三萜化合物的得率偏低。
对比例4
按照以下步骤提取茯苓皮：
(1)取中药茯苓皮0.3kg，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的水，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液，保留药渣；
(3)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入6倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.34，即得醇浸膏；
(4)在步骤(3)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.35，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
经检测，提取产物中滤渣多，三萜化合物得率为6.0％，纯度低，茯苓多糖等杂质多，β-茯苓聚糖不溶于水，水提去杂质作用不大，没有达到将多糖与三萜类化合物分离的目的，提取时茯苓皮药材中大量β-茯苓聚糖的存在，药材致密，影响三萜化合物的溶出，除杂过程中会进一步损失，三萜化合物的得率偏低。
由上述实施例可知，本发明先适当浓度的碱水提，药材经干燥后高浓度醇提，再无水乙醇醇沉，β-茯苓聚糖、茯苓多糖、水溶性杂质等基本上被除去，三萜类化合物很干净，同时，药材经适当浓度的碱水提，组织解离、β-茯苓聚糖、茯苓多糖、水溶性杂质等基本上被除去，药材经干燥后质地松泡，有利于三萜化合物的溶出，达到了将多糖与三萜类化合物分离的目的，三萜化合物纯度高，进一步除杂容易，三萜化合物损失少。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种茯苓皮的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)取中药茯苓皮，清洗后粉碎，过8目筛，即得茯苓皮颗粒；
(2)取步骤(1)所得茯苓皮颗粒，加入pH值7.5～8.0的碱水溶液，100～110℃下回流提取，过滤，得药渣和碱水提取液；
(3)取步骤(2)所得碱水提取液，调节pH值至6.2～6.8，减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得浸膏；
(4)在步骤(3)所得浸膏中加入乙醇，使乙醇终浓度为70～75％，搅拌均匀后放置过夜，过滤，将滤渣用少量水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：取步骤(1)所得颗粒，加入8～10倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取2～3小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7～9倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取1.5～2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入6～8倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃下回流提取1～2小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，合并滤液即得碱水提取液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：取步骤(1)所得颗粒，加入9倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2.5小时，过滤得药渣和滤液；在药渣加入8倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得药渣和滤液；在药渣中加入7倍体积的pH值7.5～8.0碱水溶液，100～110℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得药渣和滤液；保留药渣，将三次提取所得滤液合并即得碱水提取液。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(5)取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入90～95％乙醇，75～80℃下回流提取，过滤，将滤液减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏；
(6)在步骤(5)所得醇浸膏中加入无水乙醇，搅拌均匀后放置过夜，过滤，得滤渣和滤液；将滤液减压浓缩至相对密度1.30～1.35，干燥，即得茯苓皮醇提取物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入5～7倍体积的90～95％乙醇，75～80℃下回流提取1.5～2.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4～6倍体积的90～95％乙醇，75～80℃下回流提取1～2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入3～5倍体积的90～95％乙醇，75～80℃下回流提取0.5～1.5小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：取步骤(2)所得药渣，干燥后，加入6倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取2小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入5倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1.5小时，过滤得滤渣和滤液；在滤渣中加入4倍体积的95％乙醇，78～80℃保持沸腾回流提取1小时，过滤得滤渣和滤液；将三次提取所得滤液合并后减压浓缩至相对密度1.30～1.35，即得醇浸膏。
7.根据权利要求4～6任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)还包括：将所得滤渣用水洗涤后干燥，即得茯苓多糖。
8.权利要求1、2、3或7所述方法制备而成的茯苓多糖。
9.权利要求4～6任意一项所述方法制备而成的茯苓皮醇提取物。
10.权利要求1～7任意一项方法在提取茯苓皮中的应用。
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