CN103265493A - 波叶山蚂蝗提取物及提取方法和提取物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明波叶山蚂蝗提取物及提取方法和提取物的新用途,涉及中草药提取物及其应用,以波叶山蚂蝗植物全草为原料,经乙醇提取得乙醇总提物浸膏,总提物浸膏依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收萃取剂得各自萃取物浸膏,从正丁醇浸膏中分离得到尿囊素,研究发现波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和尿囊素具有较好的止凝血活性,可用于制备止凝血药物。
Description
技术领域
本发明涉及中草药提取物及其应用,具体地说是波叶山蚂蝗提取物及提取方法和提取物的新用途。
背景技术
波叶山蚂蝗Desmodium sequax Wall又名瓦子草,野豆子,牛巴嘴,山蚂蝗,过路黄,檀草,长波叶山蚂蝗,为豆科山蚂蝗属植物波叶山蚂蝗的全株。具有清热泻火,活血祛瘀,敛疮之功效。民间用于治疗风热目赤,胞衣不下,血瘀经闭,烧伤、内伤出血等症。
临床上各种原因引起的出血较为常见。如不及时有效的制止,致使血液耗损,而造成机体衰弱,甚至危及生命。止血药可通过收缩小动脉及毛细血管,或增强血小板功能,或加速、加强血液凝固过程,或抑制血块溶解过程而产生止血作用。
尿囊素(Allantoin),中文别名:5-尿基乙内酰胺、脲基醋酸内酰胺、脲基海因、脲咪唑二酮,分子式C4H6O3N4,分子量:158.12 ,CAS No.:97-59-6,可以乙醛酸、尿素为原料人工合成制得。
尿囊素纯品是一种无毒、无味、无刺激性、无过敏性的白色晶体,能溶于热水、热醇和稀氢氧化钠溶液。微溶于常温的水和醇,难溶于乙醚和氯仿等有机溶剂;其饱和水溶液PH为5.5。在PH值为4-9的水溶液中稳定。在非水溶剂和干燥空气中亦稳定;在强硷性溶液中煮沸及日光曝晒下可分解。尿囊素具有促进细胞生长,加快伤口愈合,软化角质蛋白等生理功能,是皮肤创伤的良好愈合剂和抗溃疡药剂。尿囊素是一种两性化合物,能结合多种物质形成复盐,具有避光、杀菌防腐、止痛、抗氧化作用,能使皮肤保持水份,滋润和柔软,是美容美发等化妆品的特效添加剂,尿囊素对消化道溃疡及炎症,对骨髓炎、糖尿病、肝硬化、痤疮均有较好疗效。根据文献查阅,尚未发现将应用尿囊素止血凝血药物的记载和报道。
发明内容
本发明的目的在于提供波叶山蚂蝗的提取物及提取物中尿囊素。
同时,本发明的目的还在于提供波叶山蚂蝗的提取物及提取物中尿囊素制备方法。
本发明的目的还在于提供波叶山蚂蝗的提取物及提取物中尿囊素在制备止血凝血药物方面的应用。
本发明的目的还在于提供波叶山蚂蝗的提取物和提取物中尿囊素的制备方法。
本发明波叶山蚂蝗提取物,其特征是以波叶山蚂蝗植物全草为原料,经70~90%/v乙醇水回流或冷浸提取,回收溶剂乙醇,得乙醇总提物浸膏;总提物浸膏用水分散,依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收萃取剂得石油醚萃取物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和正丁醇萃取物浸膏。波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏皆为为褐色胶状浸膏,波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏的乙醇溶液用紫外分光光度扫描,在250-340nm间有吸收峰,从波叶山蚂蝗提取物、正丁醇萃取物浸膏中分离得到尿囊素;波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和尿囊素具有止血凝血活性。
上述波叶山蚂蝗提取物的提取方法:其特征是依次按下列步骤在一定条件下进行提取:
(1) 干燥的波叶山蚂蝗全草用70%-90%v/v乙醇回流或冷浸提取得乙醇提取液;
(2) 乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后,得乙醇总提物浸膏;
(3) 乙醇总提物浸膏溶于水得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4) 水分散液用石油醚萃取,弃有机相,保留水相1;
(5) 水相1用乙酸乙酯萃取,得有机相乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6) 乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏;
(7) 水相2用正丁醇萃取,得有机相正丁醇萃取液和水相3;
(8) 正丁醇萃取液蒸馏回收正丁醇得正丁醇萃取物浸膏;
(9) 正丁醇浸膏经水分散后用大孔树脂分离,用甲醇-水梯度洗脱得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压回收溶剂后得尿囊素。
上述波叶山蚂蝗提取物的提取方法的各步骤工艺条件为:
(1) 每次乙醇重量为干燥的波叶山蚂蝗全草的2-4倍,乙醇回流提取时间为2小时或乙醇冷浸7天,反复提取三次,合并三次提取液得乙醇提取液;
(2) 乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后得波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏;
(3) 乙醇总提物浸膏用10~12倍重水溶解分散,得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4) 水分散液用2~4倍体积的石油醚反复萃取5次,保留水相1;
(5) 水相1用2~4倍体积的乙酸乙酯反复萃取5次,得乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6) 乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏;
(7) 水相2用2~4倍体积的正丁醇反复萃取5次,合并萃取液得正丁醇萃取液,弃水相3;
(8) 正丁醇萃取减压蒸馏回收正丁醇后得正丁醇萃取物浸膏;
(9) 正丁醇萃取物浸膏经水分散后,经大孔树脂柱色谱分离,大孔树脂为HPD-100,依次用水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、100%甲醇洗脱。取水洗脱液得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压蒸馏,减压回收溶剂后得产品。
本发明所得尿囊素:白色结晶,mp 234~235℃,E1-MS(m/z): 158 [M]+ ,130 (M+ -CO),115,87,70,60,44;1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6,) δ ppm :10.54(1H,brs,NH-1),8.06 (1H,s,NH-3), 6.89(1H,d,J=8.5 Hz,NH-6) ,5.80(2H,s,NH2-8) ,5.25(1H,d,J=8.5 Hz,H-4);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm : 174.1(C-5),157.8(C-7) ,157.2(C-2),62.9(C-4)。以上数据与文献(邹忠杰等. 泥胡菜化学成分研究[J]. 广东药学院学报. 2007, 23 (5): 492-493)报道的尿囊素一致。
本发明的技术方案采用了二种波叶山蚂蝗提取物应用,是指上述波叶山蚂蝗全草乙醇总提物浸膏或乙酸乙酯萃取物及提取物中尿囊素在制备用于止血凝血药物的应用。
以波叶山蚂蝗全草乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏及提取物中尿囊素,进行凝血作用实验,结果表明:波叶山蚂蝗乙酸乙酯萃取物、波叶山蚂蝗总浸膏及提取物中尿囊素凝血时间与维生素K1组接近,具有止血活性。
通过采用本发明的方法处理所得的波叶山蚂蝗提取物及提取物中尿囊素,可以制成各种制剂,包括:栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液和注射剂。本发明所提供的波叶山蚂蝗提取物及提取物中尿囊素具有显著的止血活性,可作为用于止血凝血药物使用,这是本发明人新的发现,从波叶山蚂蝗中提取尿囊素也是本发明人首先提出。
附图说明:
图1. 本发明提取方法工艺流程示意图;
图2. 乙醇总浸膏的乙醇水溶液紫外分光扫描图。在250-340nm间有吸收峰;
图3. 乙酸乙酯萃取物浸膏的乙醇水溶液紫外分光扫描图。在250-340nm间有吸收峰,说明乙酸乙酯萃取物浸膏与乙醇总浸膏有相同的化学成分。
具体实施方式
实施例1
制备方法按下列方法和条件制备:
(1) 干燥的波叶山蚂蝗全草22kg,用70%-90%v/v乙醇回流或冷浸提取得乙醇提取液;
(2) 乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后,得乙醇总提物浸膏;
(3) 乙醇总提物浸膏溶于水得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4) 水分散液用石油醚萃取,弃有机相,保留水相1;
(5) 水相1用乙酸乙酯萃取,得有机相乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6) 乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏83.0g;
(7) 水相2用正丁醇萃取,得有机相正丁醇萃取液和水相3;
(8) 正丁醇萃取液蒸馏回收正丁醇得正丁醇萃取物浸膏235.0g;
(9) 正丁醇浸膏经水分散后用大孔树脂分离,用甲醇-水梯度洗脱得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压回收溶剂后得尿囊素2.8g。
上述波叶山蚂蝗提取物的提取方法的各步骤工艺条件为:
(1)每次乙醇重量为干燥的波叶山蚂蝗全草的2-4倍,乙醇回流提取时间为2小时或乙醇冷浸7天,反复提取三次,合并三次提取液得乙醇提取液;
(2)乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后得波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏;
(3)乙醇总提物浸膏用10~12倍重水溶解分散,得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4)水分散液用2~4倍体积的石油醚反复萃取5次;
(5)水相1用2~4倍体积的乙酸乙酯反复萃取5次,得乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6)乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏83.0g;
(7)水相2用2~4倍体积的正丁醇反复萃取5次,合并萃取液得正丁醇萃取液,弃水相3;
(8)正丁醇萃取减压蒸馏回收正丁醇后得正丁醇萃取物浸膏335.0g;
(9)正丁醇萃取物浸膏经水分散后,经大孔树脂柱色谱分离,大孔树脂为HPD-100,依次用水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、100%甲醇洗脱。取水洗脱液得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压蒸馏,减压回收溶剂后得产品2.8g。
本发明所得尿囊素:白色结晶,mp 234~235℃,E1-MS(m/z): 158 [M]+ ,130 (M+ -CO),115,87,70,60,44;1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6,) δ ppm :10.54(1H,brs,NH-1),8.06 (1H,s,NH-3), 6.89(1H,d,J=8.5 Hz,NH-6) ,5.80(2H,s,NH2-8) ,5.25(1H,d,J=8.5 Hz,H-4);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm : 174.1(C-5),157.8(C-7) ,157.2(C-2),62.9(C-4)。以上数据与文献(邹忠杰等. 泥胡菜化学成分研究[J]. 广东药学院学报. 2007, 23 (5): 492-493)报道的尿囊素一致。
实施例2
本实施例为提取物的凝血作用实验。
1. 样品溶液制备
使用1.5mL道夫管称取浸膏3mg,单体称取1mg,加入溶剂为乙醇:丙二醇:生理盐水=1:1:3溶液1mL,混悬,震荡超声至溶解或分散均匀,备用。
2. 实验过程
取家兔耳缘静脉取血3.6 mL,加至含38 g/L枸橼酸钠400 μL的4 mL离心管中,混匀,1 000 r/min离心15 min,取上清液备用。取1.5 mL道夫管,样品组加入血浆0.1 mL及样品溶液各0.1 mL,阳性对照组加入血浆0.1 mL及药品溶液0.1 mL,空白组加入血浆0.1 mL及空白溶剂0.1 mL于37 ℃温育1 min后分别向每管加入2.775 g/L CaCl2溶液0.1 mL,计时,直到检测到纤维蛋白丝时停止计时,维生素K1、灯盏花素对照组重复3次,样品组重复6次,求算术平均值和标准差,即为血浆复钙时间。结果采用算术平均值和标准差表示,数值统计采用SPSS17.0软件单因素方差分析法(One-Way ANOVA)比较其显著性差异。
测定结果详见表1。
由上表可以看出,波叶山蚂蝗乙酸乙酯萃取物和波叶山蚂蝗总浸膏及提取物中尿囊素凝血时间与维生素K1组接近,具有较好的止血活性。
实施例3
波叶山蚂蝗提取物片剂的制备:
制备方法:取上述波叶山蚂蝗根茎及叶乙醇总提物100 g或提取物中尿囊素5 g,加入淀粉250 g、阿拉伯胶15 g 后加入适量 80%的甲醇作润湿剂混匀制成软材,于60 ℃温度下干燥至含水量3%以下,然后将烘干的物粉碎过14目筛,最后加入硬脂酸镁5 g及滑石粉20 g混匀后,过12目筛,整粒,压片,质检、包衣,制成1000片。
最后所应说明的是:以上实施例仅用以说明,而非限制本发明的技术方案,尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解:依然可以对本发明进行修改或者等同替换,而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (5)
1.波叶山蚂蝗提取物,其特征是以波叶山蚂蝗植物全草为原料,经70~90%v/v乙醇水溶液回流或冷浸提取,回收溶剂乙醇,得乙醇总提物浸膏;总提物浸膏用水分散,依次分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收萃取剂得石油醚萃取物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和正丁醇萃取物浸膏;正丁醇萃取物浸膏经大孔树脂用水-甲醇100%、70%、40%、10%梯度洗脱,将100 %水部分减压回收溶剂后得到尿囊素;波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏皆为褐色胶状浸膏,波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏和乙酸乙酯萃取物浸膏乙醇溶液用紫外分光光度扫描,在250-340nm间有吸收峰,尿囊素为白色晶体,mp 234~235℃;波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和尿囊素具有较好止血凝血活性。
2.如权利要求1的波叶山蚂蝗提取物提取方法,其特征在于按下列步骤和在一定条件下制备:
(1) 干燥的波叶山蚂蝗全草用70%-90%v/v乙醇回流或冷浸提取得乙醇提取液;
(2) 乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后,得乙醇总提物浸膏;
(3) 乙醇总提物浸膏溶于水得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4) 水分散液用石油醚萃取,弃有机相,保留水相1;
(5) 水相1用乙酸乙酯萃取,得有机相乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6) 乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏;
(7) 水相2用正丁醇萃取,得有机相正丁醇萃取液和水相3;
(8) 正丁醇萃取液蒸馏回收正丁醇得正丁醇萃取物浸膏;
(9) 正丁醇浸膏经水分散后用大孔树脂分离,用甲醇-水梯度洗脱得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压回收溶剂后得尿囊素。
3.根据权利要求2所述的波叶山蚂蝗提取物的提取方法,其特征是各步骤工艺条件为:
(1)每次乙醇重量为干燥的波叶山蚂蝗全草的2-4倍,乙醇回流提取时间为2小时或乙醇冷浸7天,反复提取三次,合并三次提取液得乙醇提取液;
(2)乙醇提取液减压蒸馏回收乙醇后得波叶山蚂蝗乙醇总提物浸膏;
(3)乙醇总提物浸膏用10~12倍重水溶解分散,得乙醇总提物浸膏水分散液;
(4)水分散液用2~4倍体积的石油醚反复萃取5次,保留水相1;
(5)水相1用2~4倍体积的乙酸乙酯反复萃取5次,得乙酸乙酯萃取液和水相2;
(6)乙酸乙酯萃取液减压蒸馏回收乙酸乙酯后得波叶山蚂蝗乙酸乙酯提取物浸膏
(7)水相2用2~4倍体积的正丁醇反复萃取5次,合并萃取液得正丁醇萃取液,弃水相3;
(8)正丁醇萃取减压蒸馏回收正丁醇后得正丁醇萃取物浸膏;
(9)正丁醇萃取物浸膏经水分散后,经大孔树脂柱色谱分离,大孔树脂为HPD-100,依次用水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、100%甲醇洗脱;
取水洗脱液得尿囊素洗脱液;
(10) 尿囊素洗脱液减压蒸馏,减压回收溶剂后得产品。
4.按照权利要求1或2或3所述的波叶山蚂蝗蝗提取物的应用,其特征是指波叶山蚂蝗植物全草乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏及提取物中尿囊素在制备用于止血凝血药物或药剂方面的应用。
5.根据权利要求4所述的波叶山蚂蝗提取物的应用,其特征是指波叶山蚂蝗植物全草的乙醇总提物浸膏、乙酸乙酯提取物浸膏及提取物中尿囊素在制备用于止血凝血药物的药剂有:栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液和注射剂。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130828 |