CN110538189A - 一种治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药提取领域,具体涉及一种治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物及其应用。包括桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、槲皮素、绿原酸组分,经过提取、分离、提纯等步骤,制成杜仲提取物的组合物,可以进一步制剂,制备方法简单高效,制成的杜仲提取物组合物具有较好的治疗肾纤维化的效果。
Description
技术领域
本发明属于中药提取领域,具体涉及一种治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物及其应用。
背景技术
肾脏纤维化是一种病理生理改变,是肾脏的功能由健康到损伤,再到损坏,直至功能丧失的渐进过程。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍,以及免疫反应等多种致病因素刺激,其固有细胞受损,发展到后期出现大量胶原沉积和积聚,造成肾实质逐渐硬化,形成瘢痕,直至肾脏完全丧失脏器功能。肾脏内固有细胞纤维化、硬化的过程也就是肾脏纤维化的过程。肾脏纤维化是以细胞外基质(ECM)的异常沉积为特征的。
现代医学治疗慢性肾衰竭治疗已经取得一定进展成果,特别是肾脏替代治疗的发展,已使患者存活率和生活质量得到显著的提高。但受限于高昂的医疗费用、治疗不良反应、肾源短缺等原因,在进行早期预防,延缓慢性肾衰竭病情进展仍存在巨大挑战。
临床治疗慢性肾功能衰竭除对症治疗、营养支持、肾移植及透析等方法外,尚无其他特效疗法,而透析治疗有一定程度的副作用,对肾组织的病理损害无法起到改善作用,肾移植又存在费用昂贵、排斥反应及肾源不足的问题。前临床上对于肾纤维化的治疗主要包括:原发病的治疗(如梗阻性肾病等)、相关危险因素的消除和干预(如感染、药物等)及针对发病机制的治疗(如非甾体类抗炎药物、降压药物)。尽管上述治疗方法能够对肾纤维化起到一定的治疗作用,但并不能完全阻止慢性肾病向终末期逐渐进展。由于纤维化疾病的发病机制复杂、涉及因素多,单分子药物、单个治疗措施等在治疗肾纤维化疾病上,存在一定的先天性不足,因此,目前对于多靶点、多通道的抗纤维化药物的研究显得尤为重要。中医药着眼于宏观过程的调控与干预,抗纤维化具有多靶点特性,这恰恰在某种程度上弥补了化学合成药物单一靶点的不足。从单味药到复方制剂,从水煎剂到有效成分提取物,单味药如大黄、黄芪、冬虫夏草、丹参等,复方制剂如尿毒清(大黄、黄芪、桑白皮、苦参、白术、茯苓、白芍、制何首乌、丹参、车前草等组成)、抗纤灵冲剂(制大黄30g,丹参30g,牛膝15g,当归15g,桃仁12g等组成)等,均显示了良好的抗纤维化作用。但是,在中药防治纤维化疾病的研究过程中,仍然存在组方复杂,处方剂量大,抗纤维化作用有限等特点。
中国专利申请CN 107198713A公开了一种治疗肾纤维化的中药组合物,包括如下重量份的组分:杜仲5-20份,黄芩3-15份,大黄0-25份,丹参0-20份,莪术0-20份。该中药组合物适应于正虚邪实,浊毒内蕴所致食欲不振,恶心,腰膝酸软,心烦寐差为主要表现的肾纤维化患者。该专利申请中所用原料较多,并不能很好地发挥药材的有效价值,且由于其他组分的存在使该组合物制成份药物具有一定的副作用。
其次,中国专利申请CN 103479711 A公开了一种杜仲木脂素提取物在制备治疗肾间质纤维化药物中的应用所述杜仲木脂素提取物中木脂素占杜仲木脂素提取物总重量的30%-90%,且木脂素中有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量占杜仲木脂素提取物总重量的1%-15%。其由于制备方法的局限性,并不能很好的提取有效成分,且在治疗肾纤维化中的效果还有待提高,有效成分的提取还有待进一步优化。
发明内容
为克服以上技术问题,本发明提供了一种疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,该组合物具有较好的治疗肾纤维化的效果,其制备方法简单高效,减少了杂质含量,并降低了副作用。
为实现以上目的,本发明提供的技术方案如下:
一种治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:30-80份桃叶珊瑚苷、30-66份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、1-5份槲皮素、5-15份绿原酸。
优选地,按照重量份数计,所述组合物包括:50-70份桃叶珊瑚苷、35-50份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、2-3份槲皮素、5-10份绿原酸。
本发明的另一目的在于,提供所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎,加入水中,酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入蒸馏水并冷却,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,加入卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
优选地,步骤(1)中,所述粉碎的目数为20-40目;
优选地,步骤(1)中,所述酶解用酶为:纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物;
优选地,所述纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的质量比为1:1-3;
优选地,步骤(2)中,所述加热的温度为60-70℃;
优选地,步骤(2)中,所述蒸馏水的加入量为乙醇体积的1-2倍;
优选地,步骤(2)中,所述冷却为冷却至温度为1-5℃;
优选地,步骤(3)中,所述XDA-1型大孔树脂所用洗脱液乙醇的浓度为30-50%的乙醇水溶液;优选为40%;
优选地,步骤(3)中,所述NKA-Ⅱ型大孔树脂所用洗脱液乙醇的浓度为60-80%的乙醇水溶液;优选为80%;
优选地,步骤(4)中,所述卵磷脂的加入量为槲皮素质量的5-10%;
优选地,步骤(5)中,所述pH值为3-5。
本发明的目的还在于提供所述杜仲提取物组合物的制剂,所述制剂为片剂、胶囊、丸剂或口服液中的任一种。
本发明的目的还在于提供所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物或所述杜仲提取物组合物的制备方法所制成的杜仲提取物组合物在制备治疗肾纤维化药物中的应用。
与现有技术比,本发明的技术优势在于:
(1)本发明有效利用了杜仲中有限的有效成分,各组分协调作用,使其对治疗治疗肾纤维化具有较好的效果,并减少了药物副作用。
(2)本发明中通过加入卵磷脂并调节pH值为酸性有效增加了槲皮素醇溶液与水溶液互溶作用,使槲皮素与其它有效成分协同作用,有效提高了该组合物治疗肾纤维化的效果,并增强了组合物的稳定性。
(3)本发明将杜仲中有效成分有效地进行了分离、提纯,得到的各有效成分具有较高的纯度,减少了其他杂质的含量。
(4)本发明中提取后的剩余的杜仲有效成分还可以根据需要进一步提取分离,用于制备其他药物,有效节约了原料,有效提高了杜仲的应用价值。
具体实施方式
实施例1
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:
50份桃叶珊瑚苷、35份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、3份槲皮素、10份绿原酸。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎至30目,加入水中,质量比为1:2的纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热至65℃,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入1倍体积的蒸馏水并冷却至2℃,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经质量浓度为40%的乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经质量浓度为80%的乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,以槲皮素的质量计,加入8%的卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至4后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
实施例2
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:
70份桃叶珊瑚苷、50份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、2份槲皮素、5份绿原酸。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎至20目,加入水中,质量比为1:1的纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热至60℃,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入1倍体积的蒸馏水并冷却至1℃,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经质量浓度为50%的乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经质量浓度为60%的乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,以槲皮素的质量计,加入10%的卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至5后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
实施例3
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:30份桃叶珊瑚苷、66份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、1份槲皮素、15份绿原酸。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎至40目,加入水中,质量比为1:3的纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热至70℃,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入2倍体积的蒸馏水并冷却至5℃,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经质量浓度为30%的乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经质量浓度为80%的乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,以槲皮素的质量计,加入5%的卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至3后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
实施例4
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:
80份桃叶珊瑚苷、30份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、5份槲皮素、5份绿原酸。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎至20目,加入水中,质量比为1:2的纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热至60℃,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入2倍体积的蒸馏水并冷却至3℃,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经质量浓度为50%的乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经质量浓度为70%的乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,以槲皮素的质量计,加入6%的卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至3后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
对比例1
与实施例1相比,区别仅在于制备过程中不加入卵磷脂。
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,组分同实施例1。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)-(3)同实施例1的步骤(1)-(3);
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至4后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
对比例2
与实施例1相比,区别仅在于卵磷脂的加入量不同。
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,组分同实施例1。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)-(3)同实施例1的步骤(1)-(3);
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,以槲皮素的质量计,加入15%的卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至4后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
对比例3
与实施例1相比,区别仅在于pH值不同。
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,组分同实施例1。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)-(4)同实施例1的步骤(1)-(4);
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值至8后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
对比例4
与实施例1相比,区别仅在于冷却温度不同。
本实施例中所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,组分同实施例1。
所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)同实施例1的步骤(1);
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热至65℃,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入1倍体积的蒸馏水并冷却至15℃,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)-(5)同实施例1的步骤(3)-(5)。
效果例
(1)急性肾损伤试验
健康成年C57BL/6雄性小鼠,12周龄,体重20±2g,36只,分为6组,其中1组为模型对照组,其余5组分别为实施例1和对比例1-4组;其中,模型对照组每天喂食5g鼠粮;将实施例1和对比例1-4制得的组合物进行干燥后,按照0.5g/kg BW加入其余5组的鼠粮中,与模型对照组每天同一时间喂食,连续3天。
小鼠用戊巴比妥锅注射液麻醉,然后将小鼠固定在温控手术操作台,沿着小鼠腹部正中线开口,轻柔的避开其他脏器将小鼠双侧肾动静脉分离暴露,然后用无创动脉夹分别夹闭双侧肾动脉或肾蒂纽织或肾静脉,缺血30min,然后移除动脉夹,恢复血流,会看到肾脏的颜仓会从黑色恢复为血红色;缝合伤口后观察小鼠的存活时间,如表1:
表1小鼠的存活时间
注:不同字母间,P<0.05
由数据可知,本发明的杜仲提取物对急性肾损具有较好的缓解作用,且组合物中有效成分的含量和制备过程也对其疗效具有一定的影响。
(2)血清中BUN水平的影响
取雄性SD大鼠100只,常规喂养1周以适应实验环境后,随机分为10组分别为:空白对照组,模型组,实施例1-4组,对比例1-4组。
建立肾纤维化模型:按6mL/kg的用量,先以5%的水合氯醛麻醉大鼠,常规消毒。无菌条件下,将模型组、实施例1-4组和对比例1-4组的大鼠,沿腹正中打开腹腔,暴露左侧肾脏并游离左侧输尿管,用丝线在接近肾盂段,即中上1/3处,两侧结扎并从中间剪断输尿管;依次缝合肌肉层和皮肤层,关闭腹腔。空白对照组大鼠按相似的操作步骤进行手术,但仅游离左侧输尿管,不对其进行结扎和剪断。术后伤口以碘伏消毒,防止感染。术后当天开始按照30mg/kg的量给药,空白对照组与模型组大鼠均给予等量蒸馏水,术后2周处死,心脏穿刺取血,测定血清中的Scr(血肌酐)和BUN(血尿素氮),结果见表2。
表2血清中BUN水平的影响
注:同一列中,不同字母间,P<0.05
由数据可知,与空白对照组比,模型组的Scr和BUN水平显著升高;与模型组相比,实施例1-4组的Scr和BUN水平显著降低,这说明本发明的杜仲组合物对肾纤维化具有较好的治疗作用,且其制备过程对其疗效具有一定的影响。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明,该实施例并非用以限制本发明的专利范围,凡未脱离本发明所为的等效实施或变更,均应包含于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,按照重量份数计,所述组合物包括:30-80份桃叶珊瑚苷、30-66份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、1-5份槲皮素、5-15份绿原酸。
2.如权利要求1所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物,其特征在于,按照重量份数计,所述组合物包括:50-70份桃叶珊瑚苷、35-50份京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、2-3份槲皮素、5-10份绿原酸。
3.如权利要求1或2任一所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,包括以下步骤:
(1)取杜仲粉碎,加入水中,酶解,过滤,得酶解液和滤渣1;
(2)取滤渣1用石油醚洗涤后,置于乙醇中,加热,过滤,得醇溶液,向醇溶液加入蒸馏水并冷却,重结晶,得槲皮素晶体;
(3)将酶解液依次经XDA-1型大孔树脂、HZ-820型大孔树脂、NKA-Ⅱ型大孔树脂吸附;将吸附后的XDA-1型大孔树脂经乙醇洗脱,浓缩,干燥,得绿原酸;将吸附后的HZ-820型大孔树脂经正丁醇洗脱,浓缩,干燥得桃叶珊瑚苷;将吸附后NKA-Ⅱ型大孔树脂经乙醇洗脱,浓缩,干燥得京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物;
(4)将桃叶珊瑚苷、京尼平苷和京尼平苷酸的混合提取物、绿原酸溶于水中,制得水溶液;将槲皮素晶体溶于乙醇中,加入卵磷脂,搅拌得槲皮素的醇溶液;
(5)取步骤(4)的水溶液,用醋酸调节pH值后,加入槲皮素的醇溶液,搅拌,即得治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物。
4.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述粉碎的目数为20-40目;所述酶解用酶为:纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的混合物。
5.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,所述纤维素酶和聚甲基半乳糖醛酸酶的质量比为1:1-3。
6.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述加热的温度为60-70℃;所述蒸馏水的加入量为乙醇体积的1-2倍;所述冷却为冷却至温度为1-5℃。
7.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,所述XDA-1型大孔树脂所用洗脱液乙醇的浓度为30-50%的乙醇水溶液;所述NKA-Ⅱ型大孔树脂所用洗脱液乙醇的浓度为60-80%的乙醇水溶液。
8.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)中,所述卵磷脂的加入量为槲皮素质量的5-10%。
9.如权利要求3所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物的制备方法,其特征在于,步骤(5)中,所述pH值为3-5。
10.如权利要求1-2任一所述治疗肾纤维化的杜仲提取物组合物或权利要求3-9任一所述杜仲提取物组合物的制备方法所制成的杜仲提取物组合物在制备治疗肾纤维化药物中的应用。
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