KR101971679B1 - 데스모디움 스컥스(Desmodium sequax Wall) 용매 추출물 또는 이의 분획물의 티로시나아제 저해 및 미백활성 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 데스모디움 스컥스 (Desmodium sequax) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는, 미백용 화장료 조성물, 건강기능식품, 의약외품 조성물, 및 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 데스모디움 스컥스 (Desmodium sequax Wall) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 조성물 또는 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색은 피부 내 멜라닌의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다.
피부의 색을 결정하는 멜라닌 생성에 대한 화학적 작용은 현재까지 여러 논문 등을 통해 많이 보고되고 있는데, 멜라닌 생성세포인 멜라노사이트 (melanocyte)가 멜라노좀(melanosome)이라는 세포내 소기관 내에서 자외선으로부터 세포를 보호하는 기능을 가지는 멜라닌을 합성한 후, 상기 멜라닌은 멜라노사이트에서 각질형성세포(keratinocyte)로 이동하는 것으로 알려져 있으며, 이렇게 각질형성세포로 이동된 멜라닌이 피부색을 결정하는 것으로 보고되고 있다.
상기 멜라닌 생합성 과정에서 필요한 전구물질은 티로신(tyrosine)이라는 아미노산으로, 이 티로신은 디히드록시페닐알라닌(dihydroxyphenylalanine, DOPA)으로 전환되고, 그 후 도파퀴논(dopaquinone)이라는 물질 등을 거쳐 최종적으로 멜라닌으로 전환된다고 알려져 있다.
이와 관련하여, 멜라닌 형성 효소로는 티로시나아제(tyrosinase; TYR), 티로시나아제 관련 단백질 1(tyrosinase-related protein 1; TRP-1) 및 티로시나아제 관련 단백질 2(tyrosinase-related protein 2, TRP-2/DOPA, chrome tautomerase) 등이 알려져 있으며, 상기 멜라닌 형성 효소는 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)라 불리는 전사인자에 의해 조절된다고 알려져 있다. 멜라닌 합성 경로에 중요한 역할을 수행하는 티로시나아제는 L-티로신을 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine)로 전환하고, 생성된 L-DOPA를 L-도파퀴논으로 신속하게 전환하며, 이후의 여러 반응을 통해 결국 멜라닌을 형성한다. 티로시나아제에 의해 합성된 멜라닌은 피부색을 짙게 만드는데, 건강 또는 미용상의 요구로 인해 상기 멜라닌 합성을 억제하여 피부색을 밝게 하려는 피부 미백 방법에 관한 연구가 활발히 진행 중이다.
일반적으로 알려진 미백 성분으로서, 티로시나아제 효소 활성을 억제하는 알부틴, 코지산(코직산), 아젤라익산, 알로에신, 4-부틸레소시놀, 레스베라트롤, 세라마이드, 스핑고신-1-인산, 스핑고실포스포릴콜린 등과 같은 물질이나, 하이드로퀴논(대한민국 공개특허공보 2016-0014271)등이 있다. 이러한 미백 성분들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현하거나, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선이 가능하다. 그러나 일부 미백성분들은 피부 적용 시, 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다. 특히 하이드로퀴논의 경우 비가역적 백화현상 등의 원치 않는 부작용으로 그 사용이 금지 되었고(European Committee 24th Dir 2000/6/EC), 하이드로퀴논의 구조 유사체인 알부틴 등으로 대체된 바 있다. 이와 같이 미백분야에서는 티로시나아제 활성 저해 효과를 보유하여 미백 효과를 지니는 것뿐만 아니라 안정성 확보가 특히 중요하여, 상기와 같은 요건을 모두 충족하는 물질의 개발이 여전히 요구되고 있다.
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본 발명의 하나의 목적은 데스모디움 스컥스(Desmodium sequax Wall) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피부 미백 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 피부과색소 침착성 질환 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.
이하에서는, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
한편, 본원에서 개시되는 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술되는 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 할 수 없다.
또한, 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 통상의 실험만을 사용하여 본 출원에 기재된 본 발명의 특정 양태에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있다. 또한, 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 하나의 양태로서, 본 발명은 데스모디움 스컥스 (Desmodium sequax Wall) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 "데스모디움"은 콩과(Fabaceae)에 속하는 속(genus)으로 열대 및 아열대 지역에 분포되어 있으며 데스모디움 스컥스 (Desmodium sequax)등을 포함하여 약 350여개의 종을 존재한다. 주로 눈에 띄지 않는 콩과 식물로 밝은 색과 큰 꽃을 가지며 녹색비료, 사료 및 일부 약초로 쓰인다.
본원에서는 데스모디움 (Desmodium) 속에서도 데스모디움 스컥스가 피부 미백효과를 보유하며, 안정성을 보유할 수 있음을 확인하였다.
본원의 데스모디움 스컥스의 추출물은 본원의 데스모디움 스컥스 추출물 자체 및 이의 희석액, 농축액, 건조물, 조정제물, 정제물 또는 이들의 혼합물 등 추출액을 이용하여 형성가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
또한, 상기 데스모디움 스컥스 추출물은 데스모디움 스컥스의 뿌리, 줄기, 잎 또는 꽃 중 어느 하나 이상에서 추출하여 제조되는 것일 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.
또한, 본원의 데스모디움 스컥스 추출물은 피부 미백 효과 또는 피부과색소침착성 질환의 예방, 개선 또는 치료효과를 갖는 한 어떠한 방법에 의하여서도 데스모디움 스컥스로부터 수득할 수 있으며, 비제한적인 예로 데스모디움 스컥스를 용매에 침지하고, 10 내지 25℃의 상온에서 추출하는 냉침추출법, 40 내지 100℃로 가열하여 추출하는 가열추출법, 초음파를 가하여 추출하는 초음파추출법, 환류냉각기를 이용한 환류추출법 등의 방법을 사용할 수 있다. 이들 방법은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본원의 추출에 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 본원의 추출용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산(hexane), 에틸 아세테이트(ethyl acetate), 클로로포름(chloroform), 디클로로메탄(dichloromethane) 및 이들의 혼합 용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매를 들 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 용어 "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본원의 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 다양한 용매를 처리하여 수행하는 용매 분획법, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법, 및 이의 조합 등이 될 수 있다.
본원의 분획물을 수득하는데 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 본원의 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 (예, 탄소수 1 내지 4) 등의 극성 용매; 헥산(hexane), 에틸 아세테이트(ethyl acetate), 클로로포름(chloroform), 디클로로메탄(dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있다.
본원의 데스모디움 스컥스의 추출물 또는 분획물은 본원의 조성물의 총 중량에 대하여 100 중량부 당 0.000001 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 일 구현예에 따르면, 본원의 조성물은 티로시나아제 활성을 억제 및/또는 멜라닌 합성을 저해할 수 있다.
본 발명에서 용어 "피부 미백"은 멜라닌 색소의 합성을 저해하고/하거나 티로시나아제 활성을 억제시킴으로써 피부 톤을 밝게 하는 것을 말한다. 또한 상기 피부 미백은 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨, 검버섯, 잡티 또는 흑색종 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 포함한다.
본원의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이, 및 팩으로 이루어지는 군에서 선택되는 형태로 제형화되어 제공될 수 있다.
본원의 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본원의 화장품학적으로 허용 가능한 담체의 종류는 본원 화장료 조성물의 활성 및 특성을 저해하지 않는 한 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 화장품학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 화장품학적으로 허용되는 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤 및 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다. 본원의 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다.
본원의 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하이드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물의 제형이 팩인 경우에는, 폴리비닐알코올 등을 함유하는 필오프 팩, 일반유화형 화장료에 카올린, 탈크, 산화아연, 또는 이산화티탄 등의 안료가 함유된 워시오프(wash off) 팩, 또는 마스크 시트 팩의 형태를 모두 포함하며, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.
본원의 화장료 조성물은 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료 등의 통상적인 피부 외용제 성분에 포함되는 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 양태는 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물 및 미백에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 용어 "건강기능식품"은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다.
여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 피부 미백 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강식품 100 중량부 당 0.000001 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 용어 "피부과색소 침착성 질환"은 피부에 색소가 과다하게 침착되는 증상을 가진 질환을 의미하는 것으로, 구체적으로 상기 피부과색소 침착성 질환은 기미, 주근깨, 검버섯, 잡티 또는 흑색종일 수 있다.
본 발명에서 용어 "예방"이란, 본 발명의 조성물이 피부과색소 침착성 질환의 발생을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어 "치료"는 본 발명의 약학 조성물이 피부과색소 침착성 질환의 증상을 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 생물체를 자극하지 않고 본 발명 조성물의 피부과색소 침착성 질환 증상 예방 또는 치료 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약학적 담체로는, 멸균, 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 하나 이상의 성분을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적으로 허용가능한 담체는 비자연적 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 단일 또는 다중 투여될 수 있다.
본 발명에서 용어 "약학적으로 유효가능한 양"은 의학적 예방 또는 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 예방 또는 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 대한민국 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
본 발명의 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 형태로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 본 발명의 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.
본원의 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본원은 데스모디움 스컥스의 추출물, 또는 이의 분획물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부를 미백하는 방법을 제공한다.
본원의 피부를 미백하는 방법에 있어, 데스모디움 스컥스의 추출물 또는 이의 분획물 및 미백에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다.
본원의 데스모디움 스컥스의 추출물 또는 이의 분획물은 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다.
유효용량의 수준은 목적하는 피부 미백 효과가 나타나는 정도로 당업자가 통상적인 상식에 기초하여 결정할 수 있다.
본 발명의 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 피부과색소 침착성 질환 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본원의 피부를 미백하는 방법에 있어, 데스모디움 스컥스의 추출물 또는 이의 분획물 및 투여에 대해서는 앞서 설명한 바와 같다.
본원의 데스모디움 스컥스의 추출물 또는 이의 분획물은 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다.
유효용량의 수준은 피부과색소 침착성 질환 예방 또는 치료효과가 나타나는 정도로 당업자가 통상적인 상식에 기초하여 결정할 수 있다.
본 발명의 조성물은 티로시나아제 저해 효능 및 멜라닌 생성 저해 효능을 가질 뿐만 아니라, 안정성을 보유하여 미백용 조성물 또는 피부 과색소 침착질환에 대한 치료적 조성물로서 안전하고 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에서 천연추출물 SD018의 티로시나아제 저해 활성을 나타낸다.
도 2은 본 발명의 천연추출물 SD018의 실리카 컬럼 크로마토그래피를 통한 활성 분획을 확보하는 것을 나타낸다.
도 3은 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 배아를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 분석하기 위한 픽셀 분석을 나타낸다.
도 4는 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 배아를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 나타낸다.
도 5는 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 치어를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 나타낸다.
도 2은 본 발명의 천연추출물 SD018의 실리카 컬럼 크로마토그래피를 통한 활성 분획을 확보하는 것을 나타낸다.
도 3은 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 배아를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 분석하기 위한 픽셀 분석을 나타낸다.
도 4는 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 배아를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 나타낸다.
도 5는 본 발명에서 천연추출물 SD018이 갖는 제브라피쉬 치어를 이용한 멜라닌 생성 저해 효능을 나타낸다.
이하, 하기 실시예에 의하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들로 한정되는 것은 아니다.
실시예
1.
데스모디움
스컥스
(
Desmodium
Sequax
Wall) 추출물의 제조
데스모디움 스컥스(Desmodium sequax Wall)를 채취하여 상온에서 건조하였다. 건조물은 적당한 크기로 절단하여 블렌더(blender mixer)를 이용하여 분쇄하여 분쇄물을 확보하였다. 이러한 데스모디움 분쇄물로부터 추출물을 확보하기 위하여 다음과 같이 용매의 조건에 따라 데스모디움 스컥스 추출물(SD018)을 확보하였다.
데스모디움 스컥스 분쇄물 10g을 100mL의 70%(v/v) 메탄올(HPLC grade, 99.9%)에 현탁하여 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 추출액은 여과지(Whatman, No. 2)를 이용하여 걸러내고, 증발기(evaporator)를 이용한 감압농축하여 건조물 함량이 약 25~50mg이 되도록 각각의 튜브에 분주하여, 30~50℃에서 완전히 감압건조하여 추출물을 얻었고 무게를 정량하였다.
상기와 같이 수득한 데스모디움 스컥스 추출물을 SD018로 명명하였다.
실시예
2. 티로시나아제 저해 효과 분석
데스모디움 스컥스 추출물의 티로시나아제 저해 효과를 분석하기 위하여, 버섯 유래의 티로시나아제 (Sigma)를 이용하여 데스모디움 스컥스 추출물이 L-티로신(Sigma)을 L-DOPA(L-3,4-dihydroxy phenylalanine)로 전환되는 것을 저해하는 효능을 분석하였다.
L-티로신에 대한 티로시나아제 저해 검정을 위하여, 120μl 0.1 M 인산 나트륨 완충용액 (pH 6.5), 20μl 1,000 unit/mL 티로시나아제, 20μl 시료를 각각 96 웰 마이크로플레이트에 첨가하여 상온에서 10분 동안 반응한 다음, 40μl 1.5mM L-티로신을 첨가하여, 25℃에서 10분 동안 490nm에서 흡광도를 측정하였다.
음성대조군(N-control)은 증류수를 이용하였고, 양성대조군(P-control)은 코직산(Sigma)를 각각 20~80 μM, 실험구는 추출물 함량으로 SD018을 각각 20~80 μg/ml 농도별로 분석하였다.
음성대조군을 기준(100%)으로, 양성대조군인 코직산(KA, Sigma)의 티로시나아제 활성은 각각 87.11±2.60%(KA20, KA 20μM), 58.65±1.35%(KA40, KA 40μM), 24.45±0.65%(KA80, KA 80μM)로 측정되었고, 실험구는 각각 95.62±4.61%(SD20, SD018 20μg/mL), 83.80±1.29%(SD40, SD018 40μg/mL), 42.24±2.05%(SD80, SD018 80μg/mL)로 측정되었다. 분석결과 티로신을 기질로 하는 티로시나아제의 활성을 각각의 농도별로 유의적으로 저해하는 것을 확인할 수 있었다(도 1).
또한, 상기의 결과를 바탕으로, 티로시나아제의 저해효능의 IC50(half maximal inhibitory concentration)을 분석한 결과, 코직산은 49.73±1.26 μM, SD018은 70.72±1.43 μg/mL로 계산되었다(표 1).
| 코직산 (μM) | SD018 (μg/mL) | |
| IC50 | 49.73±1.26 | 70.72±1.43 |
실시예
3. 실리카 크로마토그래피를 통한
데스모디움
스컥스
추출물 분획의 획득
추출물 분획을 확보하기 위하여 5g의 실리카(Merck) 레진을 100mL의 클로로포름(HPLC grade)에 현탁하여, 크로마토그래피 컬럼 (Φ14.4 X h250mm)에 충진하였다. 데스모디움 스컥스 추출물(SD018) 약 75mg을 1mL 클로로포름(HPLC grade, 99.9%)에 현탁하여, 13,000g에서 10분 동안 원심분리한 다음, 상등액을 로딩하였다. 이동상의 용매는 클로로포름:메탄올을 100:0(v/v)에서 0:100(v/v)의 비율로, 유속은 분당 0.5~0.75mL의 유속으로 흘려주었다. 용매별 각각의 분획은 튜브당 4mL씩 분취하였고, <실시예 2>와 같은 방법으로 분획별 티로시나아제 저해 활성을 분석하여, 클로로포름:메탄올 80:20(v/v) 비율의 분획물 8, 9, 10 에서 활성이 높은 분획물을 수득하였다.
도 2에 도시된 것과 같은 방법으로 분획물을 수득하였다.
실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 통하여, 분취된 분획물을 감압농축하여 무게를 정량한 다음, 실시예 2와 같은 방법으로 티로시나아제 저해 효과를 분석하기 위하여, 각각의 농도별로 희석하여 IC50 값을 분석하였다(표 2).
| SD018 (μg/mL) | SD018_Si (μg/mL) | |
| IC50 | 70.72±1.43 | 9.72±0.62 |
실시예
4.
제브라피쉬
모델에서의 멜라닌 합성 저해 및 안전성 효과 확인
실험동물로 이용한 제브라피쉬(Danio rerio)는 열대성 어류로, 적정 생육 온도인 28~29인 전용 항온 시설어항에서 사육하였다. 제브라피쉬의 먹이는 시판되고 있는 INVE사의 아르테미아 시스트(Artemia sycsts), 브라인 새우(Brine shrimp)를 부화시켜 하루 2~3번씩 급이하였으며 낮과 밤 주기는 낮 14시간 밤 10시간 주기로 빛을 조절하였다. 제브라피쉬의 배아를 얻기 위하여 전날 오후 16~18시에 암수 한 쌍씩 전용 짝짓기 통에 함께 넣어주었다. 또한, 산란을 유도하기 위하여 다음 날 아침에 빛을 주어 산란을 유도하여 배아를 확보하였다.
수집한 배아는 페트리디쉬에 옮겨, 0.1% 메틸렌블루 용액에 담아 수정 유무를 판단하였다. 메틸렌블루에 염색이 되지 않는 수정된 배아를 선별하여, 0.2g/L의 바다 소금(sigma)을 포함하는 제브라피쉬 배아 배양액에 옮겨 발생시켰다. 수정 후, 9시간에 발생한 배아를 96웰 마이크로플레이트의 각각의 웰에 3개의 배아를 분주하고, 음성대조군(negative control, NCtrl), 양성대조군(positive control, PCtrl), 실험군으로 구분하였고, 각각의 실험군당 3배수로 진행하였다. 음성대조군은 배아 배양액을 이용하였고, 양성대조군 1은 0.2mM 1-페닐-2-싸이오유레아 (PTU, Sigma)를 포함하는 배아 배양액, 양성대조군 2는 20mM 코직산 (Sigma)을 포함하는 배아 배양액, 양성대조군 3은 20mM 알부틴 (Sigma)을 포함하는 배아 배양액, 실험구 1, 2는 각각의 100~200mg/mL의 시료를 포함하는 배아 배양액을 각각의 웰에 200μL/웰씩 첨가하였다.
배아의 발생의 단계는 Olympus SZ2-ILST(eXcope T1000 camera) 실체 현미경과 Optika XDS-2 (Optika 4083.13 HDMI Prof Camera) 도립 현미경을 이용하여 9~57hpf (hours post fertilization) 동안 관찰하였다.
멜라닌 생성 정도를 구분하기 위하여 57hpf에서 각각의 배아의 이미지를 확보하고, 이미지 분석 툴인 image J (https :// imagej .nih. gov) 소프트웨어를 활용하여 멜라닌 색소 생성영역의 면적을 분석하였다(도 3).
음성대조구는 100.00±14.42%, 양성대조군 PTU 처리구는 12.82±7.33%, 코직산 처리구는 63.79±23.96%, 알부틴 처리구는 39.33±13.02%, 실험구 SD018 처리구는 41.38±12.84% 로 분석되었다(도 4).
또한, 72hpf 후, 알막을 제거하여 관찰한 결과, 실험구인 SD018처리구는 알부틴과 유사한 수준의 멜라닌 생성 저해효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다(도 5).
제조예
1.
데스모디움
스컥스
추출물 또는
분획물을
포함하는 음료의 제조
상기의 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이로부터 분리된 분획물을 포함하는 음료를 다음과 같이 제조하였다.
액상과당(0.5 중량부), 올리고당(3 중량부), 식염(0.5 중량부), 물(76 중량부)과 같은 부재료와 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이로부터 분리된 분획물을 균질하게 혼합하여 고온(121~145℃)에서 살균 또는 멸균한 후, 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 음료를 제조하였다.
제조예
2.
데스모디움
스컥스
추출물 또는
분획물을
포함하는 화장품의 제조
하기 표 3에 기재된 조성으로 유화제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 다음과 같다.
1) 1 내지 10의 원료를 혼합한 혼합물을 65~85℃로 가열하였다.
2) 11의 원료를 상기 단계 1)의 혼합물에 투입하였다.
3) 12 내지 14의 원료의 혼합물을 65~85℃로 가열하여 완전히 분산시켰다.
4) 상기 단계 3)을 거치면서, 단계 3)의 혼합물에 상기 2)의 혼합물을 서서히 첨가하여 7,000~12,000 rpm에서 2~3분간 유화시켰다.
5) 15의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 단계 4)의 혼합물에 첨가하고 2~5분간 더 유화시켰다.
6) 16 내지 18의 원료를 각각 평량한 후 상기 단계 5)의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.
7) 상기 단계 6)의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25~35℃로 냉각시킴으로써 유화제형의 화장품을 제조하였다.
| 조성 | 제형 1 | 제형 2 | 제형 3 | |
| 1 | 스테아린 산 | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 2 | 스테알리 알콜 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 3 | 클리세릴 모노스테아레이트 | 1.2 | 1.2 | 1.2 |
| 4 | 폴리옥시에틸렌솔비탄 모노라우린산 에스테로 |
2.2 | 2.2 | 2.2 |
| 5 | 파라옥시안식향산 메틸 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 6 | 파라옥시안식향산 프로필 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 7 | 세틸에틸헥사노에이트 | 5 | 5 | 5 |
| 8 | 트리글리세라이드 | 2 | 2 | 2 |
| 9 | 호호바 오일 | 5 | 5 | 5 |
| 10 | 밀납 | 0.4 | 1.0 | 2.0 |
| 11 | 사이클로메치콘 | 3 | 3 | 3 |
| 12 | 정제수 | <100 | <100 | <100 |
| 13 | 글리세린 | 5 | 5 | 5 |
| 14 | 트리에탄올아민 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
| 15 | 폴리아크릴산 중합체 | 0.12 | 0.12 | 0.12 |
| 16 | 색소 | 0.0001 | 0.0001 | 0.0001 |
| 17 | 향 | 0.10 | 0.10 | 0.10 |
| 18 | SD018 추출물 또는 분획물 | 0.00001 | 0.0001 | 0.001 |
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (8)
- 데스모디움 스컥스 (Desmodium sequax Wall) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 데스모디움 스컥스 추출물은 데스모디움 스컥스를 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출하여 제조되는, 피부 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 데스모디움 스컥스 추출물은 데스모디움 스컥스의 뿌리, 줄기, 잎 또는 꽃 중 어느 하나 이상에서 추출하여 제조되는, 피부 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 기미, 주근깨, 검버섯 및 잡티로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 예방 또는 개선하기 위한 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
- 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 건강기능식품.
- 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제6항에 있어서, 상기 피부과색소 침착성 질환은 기미, 주근깨, 검버섯, 잡티 또는 흑색종인, 피부과색소 침착성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 데스모디움 스컥스 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 의약외품 조성물.
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| KR1020170136064A KR101971679B1 (ko) | 2017-10-19 | 2017-10-19 | 데스모디움 스컥스(Desmodium sequax Wall) 용매 추출물 또는 이의 분획물의 티로시나아제 저해 및 미백활성 |
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| KR1020170136064A KR101971679B1 (ko) | 2017-10-19 | 2017-10-19 | 데스모디움 스컥스(Desmodium sequax Wall) 용매 추출물 또는 이의 분획물의 티로시나아제 저해 및 미백활성 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019078662A2 (ko) | 2019-04-25 |
| WO2019078662A3 (ko) | 2019-06-06 |
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