KR102244585B1 - 피부 노화 개선 복합 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 노화 과정에서 활성화되는 콜라겐 분해효소, 엘라스틴 분해효소 및 히알루론산 분해효소의 작용을 억제하고, 피부 노화과정에서 감소하는 콜라겐 성분을 증진시키며, 항산화 효능 및 항염 효능 등 여러 가지 피부 노화 발생 원인들에 대한 개선 효능을 가진다. 이에 따라, 피부 노화를 통해 약해진 결합조직 강화를 유도하고 피부를 보호하여, 피부 보습, 탄력, 주름 개선을 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선에 효과적이다.

Description

피부 노화 개선 복합 화장료 조성물 {Complex cosmetic composition for improving skin-aging}

본 발명은 피부 노화 개선을 위한 복합 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 또한, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 구체적으로, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨난다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응이 일어나고, 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부가 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. 노화에는 활성산소종뿐만 아니라 MMP(Matrix metallopretease)라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 노출에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 자외선에 의해 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 지금까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 MMP 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 항산화, 주름완화, 미백, 가려움 완화 등의 기능을 가진 기능성 화장료(functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

피부가 노화되면서 결합조직이 느슨해지고 피부 수분결합 인자들이 약해지게 되면, 피부 탄력저하, 주름발생, 건조함 및/또는 윤기저하 등이 유발된다. 이를 방지 또는 개선하기 위한 종래 기술은 콜라겐 합성 촉진 혹은 분해와 같이 하나의 효능을 조절하는 물질을 적용하였다. 그러나, 노화 현상은 한 가지 원인에 의해서 발생되지 않고 여러 원인들이 동시에 유발되어 일어나는 피부 현상이므로 종래의 문제해결 방법처럼 단일 효능 소재로 문제를 해결하는 데에는 한계가 존재한다.

따라서, 본 발명에서는 전술한 문제를 해결하기 위하여, 화장료에 적용 가능하고, 화장료에 함유시 피부 노화 과정에서 활성화되는 콜라겐, 엘라스틴 및 히아루론산 분해효소의 작용을 억제하고, 피부 노화과정에서 감소하는 콜라겐 성분을 증진시키며, 항산화 및 항염 효능 등 여러 가지 피부 노화 발생 원인들에 대한 개선 효능을 가지는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 의약, 화장료 또는 식품 제조를 위한 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명에서는 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물은 피부 노화 과정에서 활성화되는 콜라겐 분해효소, 엘라스틴 분해효소 및 히알루론산 분해효소의 작용을 억제하고, 피부 노화과정에서 감소하는 콜라겐 성분을 증진시키며, 항산화 효능 및 항염 효능 등 여러 가지 피부 노화 발생 원인들에 대한 개선 효능을 가진다. 이에 따라, 피부 노화를 통해 약해진 결합조직 강화를 유도하고 피부를 보호하여 피부 보습, 탄력, 주름 개선을 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선에 효과적이다.

이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.

본 발명의 조성물은 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물로서, 상기 피부 노화 예방 또는 개선은 피부 탄력 증진, 피부 주름 개선, 항산화 및/또는 항염증을 의미한다.

피부 노화 예방 또는 개선용 성분이 실제 피부에 적용 시 우수한 효과를 발휘하기 위해서는 저농도에서 고활성의 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 활성을 나타내고, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 우수하며, 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 효과를 나타내기에 충분한 시간 동안 머무를수 있도록 휘발성이 낮고, 조성물이나 피부 상에서 활성 성분이 안정하게 유지되며, 의약, 화장료 또는 식품 등으로의 제조가 용이하고, 또한 피부에 안전한 것이 바람직하다. 그러나, 공지의 성분 중 상기 특성을 모두 만족시키는 성분은 흔치 않다. 예를 들어, 몇몇 피부 노화 예방 또는 개선용 성분들은 시험관 내 실험 시 저농도에서도 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 활성은 우수하나, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 떨어져 실제 피부에 적용하기엔 어렵다. 또 다른 활성 성분들은 친수성이 낮아 의약이나 화장품, 식품으로 제형화가 어렵다. 또한, 몇몇 피부 노화 예방 또는 개선용 성분들은 열, 광, 또는 산소에 노출되었을 때 상기 활성 성분이 분해되거나 다른 화합물로 변형되어 피부에 적용하기 전에 이미 효과가 사라지는 경우도 있다.

하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물은 저농도에서 월등히 우수한 콜라겐 성분 증진 효과, 콜라겐 분해효소, 엘라스틴 분해효소 및 히알루론산 분해효소의 작용 억제 효과, 항산화 및 항염증 효과를 가져 피부 노화 예방 또는 개선을 위한 의약, 화장료 또는 식품 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있다.

따라서, 본 발명은 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.

구체적으로, 본 발명의 조성물은 붉나무 추출물; 및 은매화 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함할 수 있으며, 네 성분 모두를 포함할 수 있다.

본 발명에서 은매화꽃(Myrtus Communis)은 이른 여름에 흰색 꽃이 약 2cm의 크기로 작게 피며 매화꽃을 닮아 “은매화”라고 불리우며 강력한 소독작용, 수렴작용 및 여드름, 지성피부, 모공수축에 도움이 된다 (염생식물로부터 Peroxynitrite와 DPPH 라디칼 소거 활성 검색. 한국생물공학회지. 19(1), :57-61(2004)).

붉나무(Rhusjavanica Linne)는 무환자나무목 옻나무과에 속하지만 독성이 없다. 잎은 가을에 가장 먼저 빨갛게 단풍이 들며 가지를 불사르면 폭음이 난다. 잎자루 날개에 진딧물의 일종이 기생하여 벌레혹(충영)을 만드는데 이것을 오배자라고 한다. 한국 원산으로 일본, 대만, 중국, 히말라야 등지에 분포하는 낙엽활엽 소교목이며, 우리나라 전국 각지의 야산에서 흔하게 자란다. 이러한 붉나무는 교통이 불편한 산지 사람들의 소금 대용으로 쓰였다고 한다. 또한 설사가 있을 때 붉나무 가지 하나만 달여 먹으면 설사가 멈추는 제사제로 사용가능하며, 기침이나 입병 편도선염 치료제로도 이용한다.

플로레틴(2',4',6'-Trihydroxy-3-phydroxyphenylpropiophenone)은 플라보노이드의 찰콘 클래스에 속하고, 사과, 딸기 및 배 등에서 글루코사이드 플로리드진(phloretin 2'-0-glucose)으로 존재한다. 이러한 플로레틴은 플라보노이드와 같이 항산화 특성을 나타낸다. 플로레틴은 인간 백혈병 세포 성장을 저해하고 흑색종의 자멸을 유도하는 것으로 나타났다(Devi and Das, 1993; Kobori et al.,1997). 또한 생체실험을 통해 방광암 및 쥐 유방 선암종세포의 성장을 저해하는 것으로 조사되었다(Nelson and Falk, 1993). 플로레틴은 배양 상태 및 종양을 지니고 있는 SCID 쥐를 통해 확인한 바, 간암 세포에서 자멸을 유도하여 항종양 활성을 나타내는 것으로 조사되었다. 여러 연구들을 통해 플로레틴이 항산화 성질 및 항종양활성을 나타내는 것으로 조사되었다(Rezk et al.,2002; Yang et al.,2009).

상기 플로레틴은 하기 화학식 1로 표시될 수 있으며, CAS No는 60-82-2이다. 이하에서 별도의 설명이 없는 한, 상기 플로레틴은 화합물 그 자체, 약제학적으로 허용되는 그것의 염, 수화물, 용매화물, 이성질체 및 프로드럭을 모두 포함하는 개념으로 사용된다.

[화학식 1]

치옥틱산(Thioctic acid)은 알파-리포산(α-lipoic acid), 6,8-디티옥탄산, 1,2-디에틸렌-3 펜타노산 등의 다양한 이름으로 불린다. 치옥틱산은 당뇨병에 수반되는 증상들을 치료하는 효과를 가질 뿐 아니라, 체내에서 항산화 물질들의 수치를 건강한 상태로 유지시키는 데에도 중요한 역할을 수행하는 것으로 알려져 있다. 또한, 글루타치온과 비타민 C, E 등의 생성을 촉진하는 작용도 지닌 것으로 알려졌다. 최근에는 세포내 에너지 증가제(대한민국 특허등록 10-0427637), 지방세포 분화 억제(The Journal of Biological Chemistry, α-lipoic acid inhihits adipocyte differentiation by regulating pro-adipogenic transcription factors via mitogen-activated protein kinase pathways, vol. 278, No. 37, 2003, 34823-34833), 혈관 내 지질류 증가 억제(대한민국 특허공개 10-2004-0067312)로 혈관 질환의 예방 및 치료제로서, 그리고 체중 감소용 식품, 비만 치료 식품으로도 주목받고 있다.

상기 치옥틱산은 하기 화학식 2로 표시될 수 있으며, CAS No는 1077-28-7이다. 이하에서 별도의 설명이 없는 한, 상기 치옥틱산은 화합물 그 자체, 약제학적으로 허용되는 그것의 염, 수화물, 용매화물, 이성질체 및 프로드럭을 모두 포함하는 개념으로 사용된다.

[화학식 2]

본 발명에서 추출물, 즉 은매화 추출물 또는 붉나무 추출물은 당업계에서 공지된 방법에 의해 추출될 수 있으며, 그 방법은 특별히 한정되지 않는다. 또는 시판되고 있는 추출물을 이용할 수 있다.

예를들어, 은매화 또는 붉나무를 물 및/또는 유기용매로 추출하여 수득한 추출물을 사용할 수 있으며, 상기 유기용매는 극성 유기용매, 비극성 유기용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 극성 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 저급 알코올, 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜 등의 다가 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤일 수 있으며, 비극성 유기용매는 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있다. 예를 들어, 상기 탄소수 1 내지 5의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 이소프로판올일 수 있다.

일 구체예에서, 상기 은매화 추출물 또는 붉나무 추출물은 전술한 추출용매를 이용하여 추출된 1차 추출물을 극성이 다른 추출용매를 이용하여 분획한 분획물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 은매화 추출물 또는 붉나무 추출물은 탄소수 1 내지 5의 알코올로 추출한 후, 에테르, 벤젠, 헥산 등의 극성이 다른 용매로 다시 분획한 분획물 일 수 있다. 상기 분획 시 용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 용매 추출물을 제조할 수 있다.

본 발명에서, 상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물에 대해 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 상기 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있고, 농축은 감압 농축기 등을 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 건조는 동결건조법을 수행할 수 있다.

또한, 상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물에 대해 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography) 또는 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등의 다양한 크로마토그래피를 이용하여 정제함으로써 추가로 정제된 분획을 얻을 수 있다.

본 발명의 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산 으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물에서, 임의의 두 성분을 사용할 경우 그 혼합 비율(중량비)은 1:0.2 내지 1:5 또는 1:1일 수 있다. 또한, 네 성분을 모두 포함할 경우, 그 혼합 비율(중량비)은 1:0.2~5: 0.2~5: 0.2~5, 또는 1:1:1:1일 수 있다.

본 발명의 조성물은 의약 제형 제조를 위해 사용할 수 있다.

상기 의약 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액의 형태이거나, 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제의 형태일 수 있다.

또한, 상기 조성물은 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 피부 노화 예방 또는 개선용 성분, 즉 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증을 가지는 성분을 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 성분을 포함하게 되면, 본 발명의 조성물의 피부 재생, 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 개선 효과는 더욱 증진되며, 피부 노화가 개선될 수 있다. 상기 성분 추가 시에는 복합사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 본 발명의 일 구체예에서, 상기 조성물은 당업계에 공지된 피부 재생 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물, 당업계에 공지된 항산화 성분으로서, 토코페롤, 셀레늄, 비타민 C 및 페놀성 화합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있으며, 상기 함량 범위는 피부 안전성, 상기 유효성분의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 담체는 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 수크로스, 히스티딘, 염 및 폴리솔베이트 등과 같은 여러 성분을 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 일반 약학 제제의 형태, 예를 들어, 임상 투여 시 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여할 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 고형제제는 본 발명의 의약 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다.

단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당 되는데 흔히 사용하는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등을 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, '주름 개선 효과'라 함은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, '탄력 증진 효과'라 함은 피부에 대한 탄력성이 증가되는 것으로, 피부 탄력의 손실을 억제 또는 저해하거나, 이미 감소된 탄력을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, '항산화 효과'라 함은 세포내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성산소종(reactive oxygen species;ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.

본 발명에 있어서, '항염증 효과'라 함은 염증을 억제하는 것을 말한다. 상기 염증은 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환 장애와 삼출 및 조직 증식의 세 가지를 병발하는 복잡한 병변을 말한다.

본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 주름을 개선하거나, 탄력을 증진시키거나, 세포의 산화를 억제 또는 완화하거나, 염증을 억제할 수 있는 유효성분의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물이 유효량의 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상의 혼합물을 포함할 때 바람직한 피부 노화 예방 또는 개선 효과, 즉 피부 주름 개선 효과, 탄력 증진 효과, 항산화 효과 및/또는 항염증 효과를 제공할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 수 있다. 예를들어, 상기 조성물이 약학 제형으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 유효성분을 포함할 수 있다.

따라서, 일일 투여량은 상기 유효성분의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ∼ 6 회 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 의약 제형은 피부 외용제 제형을 포함할 수 있다.

본 발명의 유효성분을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 유효성분이 피부 외용제 제형으로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제와 같은 제형을 가질 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 화장료 제형 제조를 위해 사용될 수 있다.

상기 화장료 제형은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태일 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등과 같은 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일과 같은 메이크업 제거제, 클렌징 폼, 비누, 바디 워쉬 등과 같은 세정제 등의 제형을 가질 수 있다.

또한, 상기 화장품은 유효성분에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

상기 화장료 제형은 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워쉬-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 상기 유효성분을 포함할 수 있다. 반면, 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워쉬-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 상기 유효성분을 포함해도 무방할 것이다. 이에 제한되는 것은 아니나, 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 상기 유효성분을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%(바람직하게는 0.0001 중량% 내지 1 중량%)로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 유효성분을 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항산화 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 피부 안전성에 문제가 있을 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 식품 제형 제조를 위해 사용될 수 있다.

상기 식품 제형은 본 발명의 유효성분을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품을 의미한다.

상기 식품 제형은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 높은 피부 주름 개선, 탄력 증진, 항산화 및/또는 항염증 효과를 기대할 수 있어 매우 유용하다.

상기 유효성분을 식품첨가물로 사용하는 경우, 유효성분을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정할 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.

식품 제형이 음료인 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ∼ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ∼ 0.03 g 이다.

상기 외에 식품 제형은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 식품 제형은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합 하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예를 통해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

실시예

1. 시료 정보

은매화 추출물 및 붉나무 추출물은 코씨드바이오팜사의 제품을 사용하고, 플로레틴 및 치옥틱산은 액티브온사의 제품을 사용하였다.

상기 추출물, 화합물은 단독으로 사용하거나, 혼합하여 사용하였다.

시험예 1. 콜라겐 생성 발현 변화에 미치는 효능

피부섬유아세포를 6 well-플레이트에 4 × 10⁵ cells/mL 농도로 씨딩하고 다음날 하기 표 1의 성분 및 처리농도를 가지는 시료로 처리하고 24 시간 배양하였다. 세포로부터 총(total) RNA를 분리하고 1 ㎍의 RNA를 역전사시켜 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 이용하여 Taqman universal master mix, 제 1, 4, 7형 콜라겐에 대한 유전자 특이 primer/probe를 반응시켜 실시간 RT-PCR을 실시한 후 유전자 발현의 변화를 관찰하였다.

시료 무처리 대조군의 콜라겐 생성 발현 변화를 100으로 두고, 대조군 대비 증가율(%)로 발현 변화를 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

시료	처리농도 (mg/ml)	제1형 콜라겐	제4형 콜라겐	제7형 콜라겐
무처리 대조군	-	100	100	100
은매화 추출물	10	130	156	174
붉나무 추출물	10	115	134	146
플로레틴	10	124	120	122
치옥틱산	10	112	124	114
은매화 + 붉나무 추출물	5+5	155	194	215
은매화 추출물 + 플로레틴	5+5	145	180	206
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	139	172	198
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	135	146	160
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	128	144	155
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	138	132	142
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	190	210	260

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 무처리 대조군 대비 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산을 처리한 시료의 콜라겐 형성 효과가 우수한 것을 확인할 수 있으며, 상기 성분들을 둘 이상 포함하는 시료를 처리할 경우 단독 사용시보다 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

시험예 2. 콜라겐 분해효소( MMP -1) 억제 효능

피부 섬유아세포를 24 well-플레이트에 2×10⁵ cells/mL로 씨딩하고 다음날 하기 표 2의 성분 및 처리농도를 가지는 시료를 30 분간 전처리하였다. 그 후, 자외선에 의해서 피부에서 유도되는 대표적인 염증성 사이토카인인 TNF-α 10 ng/ml를 처리하고, 24 시간 후에 세포 배양액을 모아 분석 전까지 -70℃에서 보관하였다.

콜라겐 분해효소인 MMP-1의 생성량은 MMP-1 ELISA assay (R&D Systems) 방법을 사용하여 정량하였고, TNF-α 처리군 대비 억제율을 계산하였다.

시료	처리농도 (mg/ml)	MMP-1 (pg/ml)	억제율(%)
무처리 대조군	-	199	-
TNF-a 처리군 (10 ng/ml)	-	819	-
은매화 추출물	10	710	18
붉나무 추출물	10	650	27
플로레틴	10	525	47
치옥틱산	10	600	35
은매화 +붉나무 추출물	5+5	620	32
은매화 추출물 + 플로레틴	5+5	448	60
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	580	39
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	414	65
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	565	41
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	486	54
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	325	80

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산 중 두 성분을 혼합하여 사용할 경우, MMP-1 억제 효율은 30 내지 60%로 우수한 것을 확인할 수 있다. 더욱이, 상기 네 성분을 모두 사용할 경우 MMP-1 억제율은 80% 이상으로 억제 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

시험예 3. 엘라스틴 분해효소 억제 효능

엘라스틴 분해효소(엘라스테아제) 활성을 측정하기 위해, 기질로 엘라스테아제에 의해 분해되면 발색되는 MeOsuc-Ala-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide를 사용하였다.

하기 표 3의 성분 및 처리농도를 가지는 시료 및 엘라스테아제를 함께 반응시키고, 발색정도를 분광광도계를 사용하여 405 nm에서 20 분간 측정하였으며, 측정 흡광값의 기울기로 억제 효능을 평가하였다.

무처리 대조군의 slope 기울기 (Enzyme activity =100%) 대비 물질 처리군의 slope 기울기로(하기 식 1), 각 시료의 효소활성율를 계산하였으며, 이를 사용하여 하기 식 2의 효소활성 억제율을 계산하였다.

<식 1>

효소활성율(%) = (물질 처리군 기울기/무처리 대조군 기울기) X 100

<식 2>

효소활성 억제율(%) = 100 - 효소활성율

시료	처리농도 (mg/ml)	억제율(%)
무처리 대조군	-	0
은매화 추출물	10	12
붉나무 추출물	10	54
플로레틴	10	35
치옥틱산	10	58
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	65
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	62
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	84
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	70
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	92

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산 중 두 성분을 혼합하여 사용할 경우, 엘라스틴 분해효소 억제 효율은 60% 이상으로 우수한 것을 확인할 수 있다. 더욱이, 상기 네 성분을 모두 사용할 경우 억제율은 90% 이상으로 억제 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

시험예 4. 히알루론산 분해효소 억제 효능

하기 표 4의 성분 및 처리농도를 가지는 시료와 히알루로니데이즈(히알루론산 분해효소)를 1 시간 반응시킨 후, 히알루론산(5 ㎍)이 코팅되어 있는 플레이트에 넣고 37℃, 15 분간 반응시켰다.

이때 분해되지 않고 남아있는 히알루론산의 양을 히아루로니데이즈 assay ELISA (Echelon사) 방법을 사용하여 측정함으로써 억제율을 계산하였다.

시료	처리농도 (mg/ml)	억제율(%)
무처리 대조군	-	0
은매화 추출물	10	25
붉나무 추출물	10	52
플로레틴	10	24
치옥틱산	10	36
은매화 +붉나무 추출물	5+5	64
은매화 추출물 + 플로레틴	5+5	37
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	44
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	65
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	78
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	42
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	92

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산 중 두 성분을 혼합하여 사용할 경우, 히알루론산 분해효소 억제 효율은 약 30 내지 80%로 우수한 것을 확인할 수 있다. 더욱이, 상기 네 성분을 모두 사용할 경우 억제 효율은 90% 이상으로 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

시험예 5. 항산화 효능 (카르보닐화( Carbonylation ) 억제 효능)

자외선에 의해 발생되는 활성산소(자유라디칼)는 단백질 카보닐화(-C=O-)를 유도하므로 ELSIA방법을 이용하여 카보닐화 정도를 측정하여 성분들의 항산화능을 평가하였다.

먼저, 각질형성 세포를 6 well-플레이트에 2 X 10⁵ cells/mL이 되도록 씨딩 후 다음날 하기 표 5의 성분 및 처리농도를 가지는 배양액을 농도에 맞게 처리하고, 다시 24 시간 배양하였다. 그 후에 자외선(40 mJ/cm²)을 조사하였다. 자외선 조사 후 효능 성분이 포함된 배지로 교환하여 6 시간 배양한 후에 배양액을 취하여 Carbonylation ELISA kit로 카보닐화된 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다.

음성 대조군으로는 무처리 세포 배양액을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 자외선만을 처리한 세포의 배양액을 사용하였다.

카보닐화 억제율은 하기 식 3에 의해 계산하였다.

<식 3>

카보닐 생성 억제율(%) = 1-(St-Bo)/(Bt-Bo) X 100

Bo: 음성 대조군의 카보닐양, Bt: 양성 대조군의 카보닐양, St: 시료의 카보닐 생성량

시료	처리농도 (mg/ml)	억제율(%)
무처리 대조군	-	0
은매화 추출물	10	25
붉나무 추출물	10	52
플로레틴	10	24
치옥틱산	10	36
은매화 +붉나무 추출물	5+5	64
은매화 추출물 + 플로레틴	5+5	37
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	44
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	65
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	78
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	42
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	92

상기 표 5에 나타난 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산 중 두 성분을 혼합하여 사용할 경우, 카르보닐화 억제 효율은 약 30 내지 80%로 우수한 것을 확인할 수 있다. 더욱이, 상기 네 성분을 모두 사용할 경우 억제 효율은 90% 이상으로 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

시험예 6. 항염 효능 (NO 생성 억제 효능)

항염 효능을 확인하기 위하여 대식세포를 이용한 GRIESS 법으로 산화질소(NO) 생성 억제 평가를 실시하였다.

먼저 준비한 대식세포(RAW 264.7)를 96 well-플레이트에 2 × 10⁵ cells/mL이 되도록 씨딩하고, 하기 표 6의 성분 및 처리농도를 가지는 시료로 전처리하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 30 분 동안 배양하였다. 그 후, LPS(Lipopolysaccaride)를 처리하여 대식세포에 염증반응을 유도하였다. 그 다음, 세포 배양 상등액 100 μl를 수집하고, 상기 수집한 상등액과 그리스 시약(griess reagent)을 1:1로 혼합하여 10 분 동안 반응시킨 후, NO의 부산물 nitrite를 분광광도계를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

음성 대조군으로는 무처리 대식세포(RAW 264.7)를 사용하였으며, 양성 대조군으로는 LPS만을 처리한 대식세포(RAW 264.7)를 사용하였다.

NO 생성 억제율은 하기 식 4에 의해 계산하였다.

<식 4>

NO 생성 억제율(%) = 1-(St-Bo)/(Bt-Bo) X 100

Bo: 음성 대조군의 NO 생성량, Bt: 양성 대조군의 NO 생성량, St: 성분 처리한 샘플의 NO 생성량

시료	처리농도 (mg/ml)	Nitrite (mM)	억제율(%)
무처리 대조군 (무자극)	-	4.6	-
LPS 처리군 (1 mg/ml))	-	55.8	-
은매화 추출물	10	10.3	88.6
붉나무 추출물	10	30.6	49.2
플로레틴	10	25.3	59.6
치옥틱산	10	35.9	40.3
은매화 +붉나무 추출물	5+5	5.9	97.5
은매화 추출물 + 플로레틴	5+5	6.4	96.5
은매화 추출물 + 치옥틱산	5+5	8.3	92.8
붉나무 추출물 + 플로레틴	5+5	18.6	72.7
붉나무 추출물 + 치옥틱산	5+5	19.3	71.3
플로레틴 + 치옥틱산	5+5	28.4	65.4
은매화 + 붉나무 + 플로레틴 + 치옥틱산	2.5+2.5+2.5+2.5	5.3	98.6

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥산 중 두 성분을 혼합하여 사용할 경우, 카르보닐화 억제 효율은 단독으로 사용했을 경우보다 우수한 것을 확인할 수 있다. 더욱이, 상기 네 성분을 모두 사용할 경우 억제 효율은 98.6%로 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있다.

Claims (5)

1. 은매화 추출물, 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 둘 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   은매화 추출물; 및 붉나무 추출물, 플로레틴 및 치옥틱산으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물.
   
3. 삭제
4. 제 1 항에 있어서,
   피부 노화 예방 또는 개선은 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 항산화 또는 항염증인 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물.
   
5. 제 1 항에 있어서,
   조성물은 화장료 또는 식품 제조를 위한 것인 피부 노화 예방 또는 개선용 조성물.