KR20080104760A

KR20080104760A - 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 ４-ｏ-메틸호노키올을유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물

Info

Publication number: KR20080104760A
Application number: KR1020070052003A
Authority: KR
Inventors: 김기호; 김영희; 한창성; 김경태; 이수희; 최현진; 고지현
Original assignee: 주식회사 바이오랜드
Priority date: 2007-05-29
Filing date: 2007-05-29
Publication date: 2008-12-03
Also published as: KR101179589B1

Abstract

본 발명은 후박(Magnolia officinalis Rehd . et Wils .) 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 미백용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 후박 추출물 및 이로부터 분리된 4-O-메틸호노키올(4-O-methylhonokiol)은 티로시나제 저해 효과 및 B16 멜라노마 세포에서 멜라닌 생합성 저해 효과를 나타내므로 피부 미백 효과를 갖는 피부외용 약학조성물 및 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

후박추출물, 4-O-메틸호노키올, 미백

Description

후박 추출물 또는 이로부터 분리된 ４-Ｏ-메틸호노키올을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물{Composition comprising an extract of Magnolia officinalis Rehd. et Wils. or 4-O-methylhonokiol compound isolated therefrom for skin whitening}

본 발명은 피부 미백 효과를 나타내는 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌, 케라틴 및 헤모글로빈의 양에 따라 결정되어 지는데 이중 멜라닌이 가장 결정적인 요소이다. 멜라닌은 피부내의 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트에서 합성되며 주변 각질세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다(Kubo M. et al., Fragrance Journal, 8, p48, 1995).

멜라닌이 외부 환경 요인에 의해 비정상적으로 많이 생산되면 기미, 주근깨와 같은 색소 침착을 일으키기도 하고, 피부암을 유발하기도 한다. 특히, 자외선에 의해 피부 세포가 자극되면 멜라닌합성에 있어서 중요한 효소인 티로시나제에 의해 멜라닌 색소 생성을 위한 신호가 생성되고, 이들은 멜라노사이트에 직접 또는 간접 적 영향을 주어 멜라닌 색소의 생성을 유발한다(Seiji M et al., Ann . N.Y. Acad . Sci ., 100, p497, 1963). 이러한 멜로닌 색소 생성은 티로시나제 기질 유사체를 사용함으로서 저해할 수 있다. 최근에는 멜라닌의 생합성에 관여하는 중요한 효소로 티로시나제 뿐만 아니라 티로시나제-릴레이티드 프로테인 1(Tyrosinase related protein 1 ; TRP-1) 및 티로시나제-릴레이티드 프로테인 2(TRP-2, Dopachrome tautomerase)에 의해서도 멜라닌이 생성된다는 사실이 새롭게 밝혀졌으며, 이러한 효소들을 저해할 수 있는 물질을 개발하는 것도 피부색소침착을 방지할 수 있는 방법이 될 수 있다(Marmol V. et al., FEBS Letter, 327, p307, 1993 ; Winder A.J. et al., Pigment Cell Research, 7, p305, 1994).

멜라닌 합성 저해제는 의약품, 화장품, 식품 등에서 피부질환 치료제, 피부 미백제, 식품 갈변방지제 등에 적용되고 있고, 최근 그 수요가 급증하고 있으며, 그 결과 다양한 미백제가 개발되어 사용되고 있으나, 여러 가지 문제점이 제기되고 있다.

미백제로서 발표된 선행 발명의 예를 보면, 아스코르빈산(일본 특개평 4-9320)의 사용으로 미백 효과를 볼 수 있는 방법이 제시되어 있다. 그러나 아스코르빈산 자체가 처방계 중에서 상 안정성의 문제로 시간이 경과하면서 그 유효 성분의 활성도가 떨어지므로 최근에는 캡슐 및 리포좀으로 안정화시키는 등의 다양한 방법이 제기되고 있으나 아직 뚜렷한 안정화 방법을 제시하지 못하고 있다. 하이드로퀴논(일본 특개평 6-192062)은 기미, 주근깨, 반점 및 임신기의 과잉색소증과 같은 과잉 색소증 치료에 국부적으로 사용되고 있다. 이들 화합물은 강력한 멜라닌 생성 저해활성을 보이지만 색소 세포의 변성 또는 치사를 일으키고 세포 본래의 기능을 손상시키는 등의 부작용을 인해 일부 국가에서만 사용이 허가되고 있으며, 발암성 물질이여서 화장품으로서의 사용에 제한을 받고 있다. 코직산(일본 특개평 56~7710)은 티로신이 도파와 도파크롬으로 변해 가는 중간에 관여하는 유일한 효소인 티로시나제의 저해능이 탁월하여 미백 효과가 우수하게 나타나지만 처방계 중에서 갈색으로 변화하는 등 안전성 측면에서 재고되고 있다. 알부틴(일본 특개평 4~9315)은 코지산과 마찬가지로 티로시나제에 대한 억제 능력이 검증되고 있으나, 알부틴 자체가 하이드로퀴논에 당이 붙어있는 상태로 화장료로 적용시 피부 효소에 의해 당이 분리된 후 하이드로퀴논에 의한 피부자극이 우려되기도 하며, 낮은 저해활성, 사용중의 변색, 물질 자체의 불안정성 등의 문제점이 있다.

이에 따라 부작용 없이 안전하며, 어느 한 가지 요소에만 관여하는 물질이 아닌 실제 생체 임상실험에서 복합적으로 그 효과를 나타낼 수 있는 신규 미백제가 절실히 요구되고 있다.

후박(厚朴, Magnolia officinalis Rehd . et Wils.)은 한국과 일본, 그리고 중국에서 오랜 기간 건위제로 사용되어 왔으며, 후박 잎은 한국과 일본에서 식용으로도 사용되어져 왔으며(정보섭, 신민교, 향약대사전, 영림사, p.469, 1998), 후박나무에는 알파, 베타-유데스몰(α,β-eudesmol), 마그놀올(magnolol), 호노키올(honokiol), 오보바톨(obovatol) 등이 포함되어져 있는 것으로 알려져 있다(생약학연구회, 현대생약학, 학창사, p.567, 2003). 현재 국내에서 쓰이고 있는 후박은 목련과에 속하는 중국산 후박(Magnolia officinalis Rehd. et Wils., Magnolia officinalis var. biloba)과 목련과(Magnoliaceae)에 속하는 낙엽 교목인 일본산 후박(Magnolia obovata ), 그리고 녹나무과(Lauraceae)에 속하는 상록 교목인 한국산 후박(Machilus thunbergii , Machilus thunbergii var. obovata)이 있으며 이것은 각각 산지에 따라 후박 또는 후박의 대용품으로 사용된다(Lee S. R. et al., Kor. J. Pharmacogn., 17, p199, 1986). 최근 국내에서 후박을 이용한 연구가 진행되어 마그놀올 성분의 효능을 활용한 당뇨억제제 특허(김진숙 외, 대한민국특허 출원번호 제2003-0039241호)가 출원된 바 있으며, 오보바톨 성분을 활용한 항불안 억제제 특허(홍진태 외, 대한민국특허 출원번호 제2005-0037854호)가 출원된바 있다. 1978년에 후박으로부터 4-O-메틸호노키올이 처음으로 분리 되었으며(El-Feraly, F. S. et al., Lloydia, 41, p493, 1978), 4-O-메틸호노키올은 마그놀올과 함께 항균효과가 있고, 모기 유충 및 브라인 슈림프(brine shrimp)에 살충효과가 있는 것으로 알려져 있으며(Nitao J. K. et al., Phytochemistry, 30, p2193, 1991), 신경보호 효과 및 신경영양 효과(neurotrophic effect)가 있는 것으로도 알려져 있다(Tomoyuki E. et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14, p2621, 2004). 대한민국특허 출원번호 제2003-0027093호는 녹나무과에 속하는 국내산 후박인 토후박(Machilus thunbergii)의 조추출물 또는 비극성용매가용추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 그러나, 아직까지 목련과에 속하는 중국산 후박나무(Magnolia officinalis )와 4-O-메틸호노키올에 의한 미백효과나 티로시나제 저해활성에 대해서는 보고된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 후박 추출물 및 이로부터 분리된 화합물이 티로시나제 저해 효과 및 B16 멜라노마 세포에서 멜라닌 생합성 저해 효과를 통한 피부 미백에 탁월한 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부외용 약학조성물 및 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 하기 화학식(I)로 표기되는 4-O-메틸호노키올(4-O-methyl honokiol)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부외용 약학조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 하기 화학식(I)로 표기되는 4-O-메틸호노키올(4-O-methyl honokiol)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 후박 추출물은 후박의 줄기껍질, 종자, 잎 또는 뿌리, 바람직하게는 줄 기껍질 또는 잎, 보다 바람직하게는 줄기껍질로부터 추출됨을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 추출물은 조추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 75 내지 100% 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 상기 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 또는 에테르로부터 선택된 용매, 바람직하게는 헥산, 클로로포름 또는 에틸아세테이트, 보다 바람직하게는 헥산에 가용한 추출물을 포함한다.

이하, 본 발명의 후박 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 후박 조추출물은 후박의 잎 또는 줄기껍질을 건조하여 그 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 2 내지 5배 부피의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 약 75 내지 100% 에탄올로 약 0 내지 100℃, 바람직하게는 약 10 내지 30℃의 추출 온도에서 약 1시간 내지 15일, 바람직하게는 약 2내지 7일 동안 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법, 바람직하게는 환류냉각추출 방법으로 추출한 추출액을 감압 여과하여 얻은 추출물을 약 20 내지 100℃, 바람직하게는 약 50 내지 70℃에서 감압 농축한 후 본 발명의 후박 조추출물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 후박 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 후박 조추출물 중량의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 1 내지 10배 부피의 물을 분산시킨 후, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린 또는 프로필렌글리콜, 바람직하게는 헥산, 클로로포름 또는 에틸아세테이트, 보다 바람직하게는 헥산을 물의 0.1 내지 0.5배 정도의 부피를 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 본 발명의 후박 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 하기와 같이 분리될 수 있다.

상기 수득 방법으로 얻어진 비극성용매 추출물 중 헥산 용매 추출물을 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하게는 메탄올에 녹이고, C18 컬럼에 흡착시킨 후 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하게는 메탄올 : 물이 약 10:1 내지 4:1이 되도록 혼합하여 분획물을 얻어 실리카겔에 흡착시킨 다음, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 2회 내지 5회 수행하여 활성분획을 분리하고, 최종적으로 고성능액체크로마토그래피를 이용하여 본 발명의 4-O-메틸호노키올을 수득할 수 있다.

본 발명의 4-O-메틸호노키올은 시중 구입 가능하거나, 상기 방법으로 수득될 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 얻어지는 후박 추출물 또는 이로부터 분리되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부외용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 미백용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 0.1 내지 50% 중량으로 포함한다.

본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부외용 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부외용 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된 다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 외용투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으 로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 후박은 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이들로부터 추출된 본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없으며, 피부 자극 시험에서 무자극 시료임이 입증되었으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 조성물은 피부 미백 효과를 위한 화장품 및 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를들어, 각종 크림, 로션, 스킨, 에센스 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 팩, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배 양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프 로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸 헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염 형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불 화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 헤어로션, 헤어토닉, 헤어에센스, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동 물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 후박 조추출물(cm-1)의 제조

경동시장에서 구입한 후박(Magnolia officinalis Rehd . et Wils .)나무를 건조 및 세절하여 얻은 줄기껍질 3kg에 95% 에탄올 9L를 가하여 실온에서 3회 반복 추출한 후 여과하여 얻은 여과액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)로 감압농축하여 건조된 조추출물 450g을 얻었고, 하기 실험예에 사용하였다(이하, cm-1이라 명명함).

실시예 2. 후박 비극성 용매 가용 추출물( cm -2)의 제조

상기 실시예 1에서 수득한 후박 조추출물 중 200g을 2L 증류수로 현탁시킨 다음, 500ml의 헥산을 가하여 용해한 다음, 이를 분별 추출하였고, 이러한 과정을 2회 반복 수행하여 헥산층에 녹는 부분을 모은 뒤 헥산층을 감압농축하여 후박 헥산 가용 추출물 70g을 수득하였고, 하기 실험예에 사용하였다(이하, cm-2라 명명함).

실시예 3. 후박 추출물로부터 4-O- 메틸호노키올의 분리

상기 실시예 2에서 수득한 후박 헥산 가용 추출물 70g을 300ml의 메탄올에 녹이고 300g의 C18 컬럼에 흡착시킨 후, 메탄올:물=4:1(v/v)의 혼합용액을 사용하여 분획물을 수득하였으며, 용리액을 감압농축하여 황갈색의 농축액 40g을 얻었고, 이것을 메틸렌클로라이드에 용해시켰다. 그런 후, 헥산:초산에틸=9:1인 혼합 용액을 사용하여 칼럼(4.5x40cm)에 충진한 실리카겔(머크사, 상품명: 9385) 1kg에 분획물을 흡착시키고 헥산과 초산에틸의 비율을 9:1에서 6:4로 변환시키면서 총 2회의 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 분획물을 분리한 다음, 최종적으로 하기 표 1에 기재된 조건의 고성능 액체크로마토그래피를 이용하여 하기 물성치를 갖는 4-O-메틸호노키올 2g을 수득하였고, 하기 실험예에 사용하였다.

NMR 기기로 ¹H-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 400 MHz), ¹³C-NMR은 바리안사(Varian, GEMINI, 100 MHz)로 그 구조를 분석하였으며, CDCl₃(Chloroform-d, 알드리치사)를 용매로 사용하였고, 내부표준물질로는 트리메칠실란을 사용하여 δ값(ppm)으로 나타내었으며, NMR 결과는 이미 발표된 자료와 일치함을 확인할 수 있었다(Shoji Y. et al., Chem . Pharm . Bull. 39, p2024, 1991).

¹H-NMR (400MHz, CDCl₃): δ ppm 3.45(2H, d, J=6.0Hz, H-7'), 3.45(2H, d, J=6.0Hz, H-7), 3.90(3H, s, OMe), 5.10(4H, m, H-9 and H-9'), 6.01(2H, m, H-8 and H-8'), 6.95(1H, dd, J=8, 1.5Hz, H-3'), 6.97(1H, dd, J=8.0, 1.5Hz, H-3), 7.05(2H, m, H-2 and H-6'), 7.23(1H, dd, J=8.5, 1.6Hz, H-6), 7.30(1H, dd, J=8.5, 1.6Hz, H-4');

¹³C-NMR (100MHz, CDCl₃): δ ppm 129.09(C-1), 130.67(C-2), 128.67(C-3), 156.94(C-4), 115.53(C-5), 127.86(C-6), 34.22(C-7), 136.48(C-8), 115.47(C-9), 127.83(C-1'), 150.79(C-2'), 110.88(C-3'), 129.64(C-4'), 132.09(C-5'), 130.46(C-6'), 39.36(C-7'), 137.77(C-8'), 115.77(C-9'), 55.47(OMe).

컬럼(column)	심팍 프렙-ODS(Shim-Pak prep-ODS) 컬럼,시마츄사
컬럼 온도 (column temperature)	30℃
유속(flow rate)	18 mL/min
측정기(detector)	UV 254 nm
주입 부피 (injection volume)	400 ㎕
이동상(mobile phase)	80% 메탄올

참고예 1. 순도 분석

상기 실시예 1 내지 3에서 수득한 후박추출물 및 4-O-메틸 호노키올의 순도를 알아보기 위해, 하기 표 2에 기재된 조건의 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 순도 분석을 하였고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

컬럼(column)	캅셀팍 C₁₈ 4.6 X 250mm, 시세이도사
컬럼 온도 (column temperature)	30 ℃
유속(flow rate)	1.0 mL/min
측정기(detector)	UV 254 nm
주입 부피 (injection volume)	20㎕
이동상(mobile phase)	80% 메탄올

실험물질	4-O-메틸호노키올의 함량 (%)
실시예 1의 cm-1	12.50
실시예 2의 cm-2	30.28

분석결과, 상기 표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 2의 cm-2는 30.28%로 12.50%인 실시예 1의 cm-1보다 4-O-메틸호노키올 함량이 훨씬 높았다.

실험예 1. 머쉬룸 티로시나제 활성 저해 효과

상기 실시예 1 내지 3에서 제조한 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물이 멜라닌 생합성 저해에 관여하는지 알아보기 위해 반니 등의 방법(A. Vanni, Annali di Chimica, 80, p35, 1990)으로 머쉬룸 티로시나제 활성 저해효과를 측정하였다.

0.1M 포타슘 포스페이트 완충액(pH 6.8) 1.0 ㎖, 0.3 ㎎/㎖ 농도의 L-티로신 수용액 1.0 ㎖ 및 1,250 U/㎖ 농도의 머쉬룸 티로시나제(시그마사, T-7755) 0.1 ㎖를 혼합한 후 여기에 상기 실시예 1 내지 3에서 제조한 시료용액을 20, 30, 50, 100, 200 또는 300 ㎍/㎖의 농도로 각각 0.2 ㎖를 첨가하여 37℃에서 10분간 효소반응을 진행시켰고, 양성대조군으로는 알부틴(시그마 사)을 사용하였다. 반응용액의 흡광도를 480 nm에서 측정하여 하기 수학식 1로 티로시나제의 활성 억제율을 구하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었으며, 티로시나제 활성을 50%를 저해하는 값을 IC₅₀값으로 구하여 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.

머쉬룸 티로시나제 억제율(%) = [(A-B)/A]×100

A : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 480nm에서 흡광도

B : 시료를 첨가한 반응용액의 480nm에서 흡광도

실험물질	농도(㎍/㎖)	티로시나제 활성 억제효과(%)
실시예 1의 cm-1	100	12.75
	200	38.45
	300	60.23
실시예 2의 cm-2	50	16.38
	100	43.15
	200	68.56
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	20	25.07
	30	49.01
	50	67.12
알부틴(대조군)	100	20.36
	200	35.89
	300	57.56

실험 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이, 4-O-메틸호노키올은 50㎍/㎖에서도 티로시나제 활성 억제율이 67.12%로 농도대비 티로시나제 활성 억제 효과가 가장 탁월함을 알 수 있었다.

실험물질	IC₅₀(㎍/㎖)
실시예 1의 cm-1	256
실시예 2의 cm-2	163
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	35
알부틴(대조군)	278

실험결과, 상기 표 5에 나타난 바와 같이, 실시예 3의 4-O-메틸호노키올에서 IC₅₀값이 35㎍/㎖으로 머쉬룸 티로시나제 억제 효과가 가장 높게 나왔으며, 실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2 모두 대조군과 비교하여 머쉬룸 티로시나제 억제 효과가 높게 나왔다. 따라서 실제 멜라닌 생성의 초기 단계에 관여하는 티로시나제 활성을 저해함으로써 본 발명의 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 4-O-메틸호노키올은 멜라닌 생성을 억제하여 미백 효과를 나타내는데 탁월한 효과가 있음을 알 수 있었다.

실험예 2. B16 멜라노마 세포를 이용한 세포 독성 실험

실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2 및 실시예 3의 4-O-메틸호노키올을 시료로 사용하여 B16 멜라노마 세포(ATCC CRL6323)의 세포 생존율을 측정함으로써, 이들이 독성이 있는지 알아보기 위해 하기와 같이 실험을 수행하였다(Maeda and Fukuda, J. Soc. Cosmetic Chem., 42, p361, 1991).

10% 소혈청을 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium) 배지에 B16 멜라노마 세포를 1x10⁵ 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO₂, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 새 DMEM 10% 배지로 갈아준 후 시료를 20, 50, 100, 200 또는 300 ㎍/㎖의 농도로 웰에 처리하여 3일간 배양한 후, 배지를 제거하고 0.33 ㎎/㎖의 MTT((3-[4,5-디메틸띠아졸-2 -일] -2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드), 시그마 M5655)를 1㎖ 처리하여 37℃에서 4시간 반응시킨 다음, MTT를 제거하고 DMSO(디메틸설폭사이드) 1㎖를 첨가하여 575nm에서 흡광도를 측정하여 발색정도를 알아보았고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

실험물질	농도(㎍/㎖)	세포 생존율(%)
실시예 1의 cm-1	100	98.67
	200	91.65
	300	90.75
실시예 2의 cm-2	100	98.56
	200	96.52
	300	94.56
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	20	99.62
	50	97.56
	100	95.12
알부틴(대조군)	50	98.58
	100	95.58
	200	96.05

실험 결과, 상기 표 6에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 cm-1 또는 실시예 2의 cm-2를 처리하여 배양한 B16 멜라노마 세포는 100㎍/㎖에서 98.56 내지 98.67%로 세포 생존율이 가장 높았으며, 실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2 또는 실시예 3의 4-O-메틸호노키올을 처리하여 배양한 B16 멜라노마 세포는 모두 세포생존율이 90%이상 이었다. 따라서 후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 독성이 거의 없는 안전한 물질임을 알 수 있었다.

실험예 3. B16 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생합성 억제 효과

실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2 및 실시예 3의 4-O-메틸호노키올의 B16 멜라노마 세포에서 멜라닌 생성 억제 효과를 알아보기 위해 마에다 및 푸쿠다의 방법 (Maeda and Fukuda, J. Soc . Cosmetic Chem., 42 , p361, 1991)을 조금 변형하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.

B16 멜라노마 세포(ATCC CRL6323)를 10% 소혈청을 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium)에 1x10⁵ 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO₂, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 α-MSH(melanocyte stimulating hormone; 멜라닌세포자극호르몬, 0.34 ㎍/㎖, 시그마사)가 처리된 DMEM 10% 배지로 갈아준 후 실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2 및 실시예 3의 4-O-메틸호노키올을 1, 5, 10, 50 또는 100 ㎍/㎖로 웰에 처리하여 3일간 배양하여, 3일 후 15㎖ 플라스크 튜브에 배지를 수거하고 세포들은 트립신을 처리하여 떼어낸 후 배지를 수거한 튜브로 옮긴 다음, 3,000 rpm에서 30분 동안 원심 분리하여 상층액을 버리고 1N 수산화나트륨 250㎖를 처리하여 끓는 물에서 10분 동안 처리한 후 가볍게 원심분리하였고, 다시 10분간 초음파 분해(sonication)하여 완전히 멜라닌을 용해한 후 475 nm에서 흡광도를 측정하여, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

실험물질	농도(㎍/㎖)	멜라닌 생성 억제 효과(%)
실시예 1의 cm-1	10	1.78
	50	37.85
	100	57.56
실시예 2의 cm-2	10	6.89
	50	68.56
	100	89.87
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	1	5.05
	5	48.07
	10	78.86
알부틴(대조군)	10	1.25
	50	6.87
	100	17.52

실험 결과, 상기 표 7에 나타난 바와 같이, 4-O-메틸호노키올은 10㎍/㎖에서 78.86%로 가장 탁월한 멜라닌 생성 저해 효과를 보였다. 또한 실시예 1의 cm-1, 실시예 2의 cm-2는 10㎍/㎖에서 1.78 내지 6.89%로 1.25%인 대조군과 비교하여 더 높은 멜라닌 생성 저해 효과를 보였다. 따라서 후박 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백에 탁월한 효과가 있음을 알 수 있었다.

실험예 4. 피부 자극성 시험

후박 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물의 피부 자극 정도를 알아보기 위하여 식품의약품안전청 고시1999-61호 "의약품의 독성 시험 기준"에 따라 본 연구소 내부적으로 뉴질랜드 화이트(New Zealand White) 수컷 토끼를 대상으로 피부자극시험을 실시하였다. 관찰은 첩포 24시간 후 첩포 부위에 대한 홍반, 가피형성, 부종형성 등의 피부자극 반응을 관찰하였다.

실시예 1의 cm-1, 실시예2의 cm-2 및 실시예 3의 4-O-메틸호노키올을 토끼의 피부에 적용한 결과, 이들에 따른 일반증상의 변화는 관찰되지 않았으며, 사망동물도 관찰되지 않았다. 또한 홍반, 가피 형성 등을 관찰한 결과 가벼운 홍조가 발견되었으나, 자극성을 평가한 결과 자극 지수가 약한 자극성 물질로 분류되어 자극성이 거의 없는 물질로 평가되어 안전하게 사용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 유연 화장수( 스킨 )

정제수에 부틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유, 베타인, 구연산, 구연산나트륨 및 방부제를 첨가하여 교반한 후 용해시킨 다음, 에탄올에 향료를 넣어 용해시킨 혼합물을 첨가하였다. 여기에 실시예 1에서 얻은 후박 추출물을 가하여 충분히 교반한 후, 숙성시켜 후박 추출물 함유 유연 화장수를 제조하였다. 하기 표 8에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	제제예 1 함량(w/w %)
실시예1의 cm-1	50.0
부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	5.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화 피마자유	0.2
에탄올	5.0
베타인	2.0
구연산	0.02
구연산 나트륨	0.06
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제제예 2. 로션( 에멀젼 )

상기 실시예 2에서 얻은 후박 추출물, 부티렌 글리콜, 글리세린, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 방부제 및 정제수를 70 내지 75℃에서 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 내지 80℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 소르비탄스테아레이트, 포리소르베이트 60, 글리세릴스테아레이트 및 스테아릴글리세레티네이트 혼합물을 가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반한 다음, 30℃까지 냉각한 후 숙성시켜 후박 추출물 함유 로션을 제조하였다. 하기 표 9에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	제제예 2 함량(w/w %)
실시예2의 cm-2	40.0
부틸렌글리콜	8.0
글리세린	5.0
스쿠알란	10.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.0
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시레티네이트	0.2
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제제예 3. 에센스

시토 시테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 4-O-메틸호노키올, 디세틸포스페이트, 농글리세린 및 정제수 혼합 용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 카르복시비닐폴리머, 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시켜 4-O-메틸호노키올 함유 에센스를 제조하였다. 하기 표 10에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	제제예 3 함량(w/w %)
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	10.0
시토 스테롤	1.70
폴리글리세릴 2-올레이트	1.50
세라마이드	0.7
세테아레스-4	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제제예 4. 세안제(클렌징 폼)

정제수에 N-아실글루타민산 나트륨, 글리세린, PEG-400 및 프로필렌 글리콜을 첨가하여 혼합한 후, 4-O-메틸호노키올을 소량씩 가하고 EDTA-4Na를 첨가하여 교반하면서 80℃에서 가열하여 용해시켰다. 여기에 80℃에서 가열한 POE(15)올레일알코올 에테르, 라우린 유도체 및 메틸 파라벤 혼합용액을 첨가하여 교반한 다음, 향료를 가하여 서서히 냉각하여 4-O-메틸호노키올 함유 세안제를 제조하였다. 하기 표 11에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	제제예 4 함량(w/w %)
실시예 3의 4-O-메틸호노키올	20.0
N-아실글루타민산 나트륨	20.0
글리세린	10.0
PEG-400	15.0
프로필렌 글리콜	10.0
POE(15)올레일알코올 에테르	3.0
라우린 유도체	2.0
메틸 파라벤	0.2
EDTA-4Na	0.03
향료	0.2
정제수	잔량

제제예 5. 친수성 연고제의 제조

번호	원 료	함량(중량%)	함량(중량%)
1	실시예 3의 4-O-메틸호노키올	0.5	-
2	백색 바세린	250	250
3	스테아릴 알콜	220	220
4	에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트	0.25	0.25
5	프로필렌 글리콜	120	120
6	라우릴 황산 나트륨	15	15
7	프로필 p-옥시벤조에이트	0.15	0.15

본 발명의 후박 추출물 및 이로부터 분리된 화합물은 티로시나제 저해 효과 및 B16 멜라노마 세포에서 멜라닌 생합성 저해 효과를 나타내므로 피부 미백용 피부외용 약학조성물 및 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims

후박(Magnolia officinalis Rehd . et Wils .) 추출물 또는 이로부터 분리된 4-O-메틸호노키올(4-O- methylhonokiol)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부외용 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 후박 추출물은 후박의 줄기껍질, 종자, 잎 또는 뿌리로부터 추출됨을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 조추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 3항에 있어서, 상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 3항에 있어서, 상기 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 또는 에테르로부터 선택된 용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 50 중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 약학조성물.
후박(Magnolia officinalis Rehd . et Wils .) 추출물 또는 이로부터 분리된 4-O-메틸호노키올(4-O- methylhonokiol)을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제 7항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형으로 구성된 그룹에서 선택된 제형임을 특징으로 하는 화장료 조성물.