KR101857528B1 - 금화규 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

금화규 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 금화규 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 금화규 추출물을 함유함으로써, 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제, 멜라닌 생합성 억제 및 멜라닌 합성 유전자의 발현을 저해하여, 피부 미백에 우수한 효과를 발휘한다.

Description

금화규 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 {Cosmetic composition with the extract of Aurea Helianthus for skin-whitening}
본 발명은 금화규(Aurea Helianthus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안 되는 자외선 방어제이며, 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는데 효과적인 프리 라디칼 소거제의 역할을 담당한다. 하지만, 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나 피부병변 및 노화에 따른 피부의 생리기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 및 다양한 색소침착을 유발하게 된다.
일반적으로, 멜라닌은 피부가 자외선에 노출됨으로 인해 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트 (Melanocyte) 내의 멜라노좀 (Melanosom)이라는 소기관에서 만들어진다.
즉, 자외선에 의하여 멜라노사이트의 유사분열이 일어나고 활성화되고, 활성화된 멜라노사이트에서는 티로시나아제 (Tyrosinase)의 합성이 촉진되며, 멜라닌의 생성이 항진되어 이를 표피 밖으로 운반 및 배출하게 된다 (V. J. Hearing, M. Jimenez., Int . J. Biochem ., 19(20), p1141, 1987; I. Koiso., Fragrance J., 6, p39, 1990). 구체적으로, 멜라닌의 생성과정은 멜라노좀 내에서, 티로신이 티로시나아제에 의해 산화되어 도파(DOPA)를 생성시키고, 다시 도파퀴논(Dopaquinone)을 생성시킨다. 이후에는 자동산화에 의해, 도파크롬(Dopachrome)이 생성되고, 5,6-디하이드록시인돌(5,6-Dihydroxyindole), 인돌-5,6-퀴논(Indole-5,6-quinone)이 생성되며, 이어서 인돌-5,6-퀴논의 중합에 의해 멜라닌이 생성되는 것으로 알려져 있다.
티로시나아제 뿐만 아니라, 티로시나아제-릴레이티드 프로테인 1 (Tyrosinase related protein 1, TRP-1) 및 티로시나아제-릴레이티드 프로테인 2 (TRP-2, Dopachrome tautomerase)에 의해서도 멜라닌이 생성된다는 것이 밝혀져, 이러한 효소들을 저해할 수 있는 물질을 개발하는 것도 피부 색소침착을 방지할 수 있는 방법이 될 수 있다고 알려져 있다 (Marmol V., FEBS Letter, 327, p307, 1993; Winder A.J., Pigment Cell Research, 7, p305, 1994).
이렇듯, 멜라닌 생성 원인 및 기작이 밝혀지면서, 이에 관여하는 티로시나제(Tyrosinase)의 활성 저해효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 피부 흑화를 방지하기 위해 일반적으로 사용되고 있다. 이러한 목적으로 사용되고 있는 대표적인 물질로는 알부틴, 아스코르빈산, 히드로퀴논, 상백피추출물 및 감초추출물 등의 식물 추출물이 있다.
그런데, 알부틴의 경우, 우수한 티로시나제 활성 저해작용을 갖는 반면, 화장품에 배합시 변색 및 경시변화에 따른 역가 저하 등 안정성에 문제점이 있으며, 피부자극이 커 사용상 한계가 있다. 아스코르빈산은 티로시나제 활성 저해효과가 낮고, 분자 자체의 안정성이 낮아 멜라닌 생성 억제제로 적합하지 않은 문제가 있다. 히드로퀴논은 피부에 대한 자극이 높아 안전성 문제로 현재 화장품 배합시에 그 사용성이 제한되는 문제가 있다.
따라서, 최근에는 천연물에서 추출하고 분리한 물질들이 보통 피부에 자극이 적고 수렴작용, 항균 작용과 같은 기타의 약리작용을 가지고 있다는 사실이 널리 알려짐에 따라 천연물을 이용하여 화장료 조성물을 제조하는 다양한 시도가 연구되고 있다.
한편, 금화규(Aurea Helianthus)는 진귀한 약용식물로 일년생 초본식물이며 일명 야생부용이라고도 불리워 진다. 금화규의 꽃과 잎은 물론 꽃대와 뿌리에도 콜라겐이 풍부하고 해열, 해독, 항염증, 진통 효과 등 다양한 악성 통증 치료에 이용된다고 한다. 또한 천연 식물성 에스트로겐이 풍부하여 갱년기 증후군을 감소시키거나 연장하는데 도움을 준다.
그러나, 아직까지 금화규 추출물의 우수한 피부 미백 효능에 대해서 연구된 바는 없다.
대한민국 등록특허 제10-0576653호(등록일자 2006. 04. 27)에는, 피부흑화 과정에 관여하는 티로시나제를 억제함과 동시에 멜라닌 생성을 억제하여 미백효능이 우수할 뿐만 아니라, 피부에 자극이 없는 물질로서 제품의 안정성 및 피부 안전성도 우수한 청자목(Excoecaria bicolor) 추출물을 함유하는 미백화장료 조성물에 대해 기재되어 있다. 대한민국 등록특허 제10-1217704호(등록일자 2012. 12. 26)에는, 백미 또는 갈색미에 비하여 보다 효과적으로 티로시나제의 효소활성을 억제하여 멜라닌 생성을 차단하는, 미백활성이 매우 우수한 적색미 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 대해 기재되어 있다.
본 발명은 천연 소재 추출물을 이용한 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 좀 더 구체적으로, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해하고, 멜라닌 생성을 억제하여 미백효능이 우수하며, 피부자극이 없는 피부 미백용 화장료 조성물을 개발하여 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 금화규 추출물은 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제, 멜라닌 생합성 억제 및 멜라닌 합성 유전자의 발현을 저해하여, 피부 미백에 우수한 효과를 발휘할 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 추출물은 바람직하게 추출용매로 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린, 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 용매를 이용하여 수득된 것이 좋은데, 일 예로 금화규에 에탄올을 가하여 에탄올 추출물을 수득하고 건조시키는 단계 (a); 및 상기 건조된 에탄올 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산을 가하여 분획하는 단계 (b); 로부터 회수되는 헥산 분획 추출물일 수 있고,
금화규에 에탄올을 가하여 에탄올 추출물을 수득하고 건조시키는 단계 (a); 상기 건조된 에탄올 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산을 가하여 분획하는 단계 (b); 및 상기 단계 (b)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 메틸렌클로라이드를 가하여 분획하는 단계 (c); 로부터 회수되는 메틸렌클로라이드 분획 추출물일 수 있고,
금화규에 에탄올을 가하여 에탄올 추출물을 수득하고 건조시키는 단계 (a); 상기 건조된 에탄올 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산을 가하여 분획하는 단계 (b); 상기 단계 (b)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 메틸렌클로라이드를 가하여 분획하는 단계 (c); 및 상기 단계 (c)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 에틸아세테이트를 가하여 분획하는 단계 (d); 로부터 회수되는 에틸아세테이트 분획 추출물일 수 있으며,
금화규에 에탄올을 가하여 에탄올 추출물을 수득하고 건조시키는 단계 (a); 상기 건조된 에탄올 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산을 가하여 분획하는 단계 (b); 상기 단계 (b)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 메틸렌클로라이드를 가하여 분획하는 단계 (c); 상기 단계 (c)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 에틸아세테이트를 가하여 분획하는 단계 (d); 및 상기 단계 (d)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 n-부탄올을 가하여 분획하는 단계 (e); 로부터 회수되는 n-부탄올 분획 추출물 또는 물 분획 추출물 중 선택되는 하나일 수 있다.
한편, 본 발명의 상기 금화규 추출물은 유효 성분이 파괴되지 않거나 파괴가 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있으며, 상기 금화규 추출물의 추출 방법은 특별히 제한되지 않으나, 일 예로, 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 상온 추출, 열수 추출 중 선택되는 하나일 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 금화규 추출물은 바람직하게 20~100℃ 온도에서, 1~30시간 동안 1~7회 반복 추출하는 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 20~60℃ 온도에서, 3~20시간 동안 1~3회 반복 추출하는 것이 좋다.
또한, 본 발명의 상기 금화규 추출물은 추출 후, 여과 및 감압 농축하고, 건조된 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 상기 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론, 종이 중 선택되는 하나를 이용하여 입자를 걸러 내거나, 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 크로마토그래피)에 의한 분리 과정을 추가로 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 상기 건조는 일 예로, 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조 및 적외선건조일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가로 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 추출물은 바람직하게 화장료 조성물 전체 중량에 대하여, 고형분 함량 기준으로 0.1~20중량% 함유되는 것이 좋으며, 더욱 바람직하게는 0.1~10중량% 함유되는 것이 좋다. 0.1 중량% 미만일 경우, 피부 미백 효과가 미미하고 20중량% 이상일 경우, 경제적이지 못하다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물에 있어서, 상기 금화규는 금화규의 모든 부위일 수 있으나, 바람직하게는 금화규 줄기 부위인 것이 좋다. 이 경우, 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제, 멜라닌 생합성 억제 및 멜라닌 합성 유전자의 발현을 우수하게 저해하여, 피부 미백에 탁월한 효과를 발휘할 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 중 선택되는 하나 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다.
상기 수용성 비타민은 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 수용성 비타민일 수 있으나, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 중 선택되는 하나 이상일 수 있고, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염) 중 선택되는 하나 이상일 수도 있다. 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등 당업계의 통상적인 방법에 의해 수득할 수 있다.
상기 유용성 비타민은 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 유용성 비타민일 수 있으나, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 중 선택되는 하나 이상일 수 있고, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르) 중 선택되는 하나 이상일 수도 있다. 상기 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등 당업계의 통상적인 방법에 의해 수득할 수 있다.
상기 고분자 펩티드는 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 고분자 펩티드일 수 있으나, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 중 선택되는 하나 이상일 수 있다. 상기 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 돼지, 소 등의 진피, 누에의 견섬유와 같은 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.
상기 고분자 다당은 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 고분자 다당일 수 있으나, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 및 그 염 중 선택되는 하나 이상일 수 있다. 상기 고분자 다당은 포유동물 또는 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.
상기 스핑고 지질은 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 스핑고 지질일 수 있으나, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 중 선택되는 하나 이상일 수 있다. 상기 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.
상기 해초 엑기스는 당업계에서 통상적으로 화장료에 배합 가능한 모든 해초 엑기스일 수 있으나, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 중 선택되는 하나 이상일 수 있다. 또한, 상기 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨도 해초 엑기스로 포함될 수 있으며, 상기 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 당업계 통상적으로 사용되는 성분을 추가 배합할 수 있는데, 일 예로, 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 중 선택되는 하나 이상을 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 유지 성분은 일 예로, 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 및 식물 유지일 수 있다.
상기 에스테르계 유지는 일 예로, 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴일 수 있다.
상기 탄화 수소계 유지는 일 예로, 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린일 수 있다.
상기 실리콘계 유지는 일 예로, 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유일 수 있다.
상기 불소계 유지는 일 예로, 퍼플루오로폴리에테르일 수 있다.
상기 동물 또는 식물 유지는 일 예로, 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유일 수 있다.
상기 보습제는 일 예로, 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자일 수 있다. 상기 수용성 저분자 보습제는 일 예로, 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B (중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B (중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염일 수 있다.
상기 지용성 저분자 보습제는 일 예로, 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르일 수 있다.
상기 수용성 고분자는 일 예로, 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린일 수 있다.
상기 지용성 고분자는 일 예로, 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘일 수 있다.
상기 에몰리엔트제는 일 예로, 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르일 수 있다.
상기 계면 활성제로서는 일 예로, 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제일 수 있다.
상기 비이온성 계면 활성제는 일 예로, 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질일 수 있다.
상기 음이온성 계면 활성제는 일 예로, 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르일 수 있다.
상기 양이온성 계면 활성제는 일 예로, 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염일 수 있다.
상기 양성 계면 활성제는 일 예로, 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형일 수 있다.
상기 유기 및 무기 안료는 일 예로, 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체 등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료일 수 있다.
상기 유기 분체는 일 예로, 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌일 수 있다.
상기 자외선 흡수제는 일 예로, 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸일 수 있다.
상기 살균제는 일 예로, 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산일 수 있다.
상기 산화 방지제는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산일 수 있다.
상기 pH 조정제는 일 예로, 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨일 수 있다.
상기 알콜은 세틸알콜 등의 고급 알콜일 수 있다.
또한, 이외에 첨가 가능한 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하나, 화장료 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01~5중량%인 것이 좋고, 더욱 바람직하게는 0.01~3중량%로 배합되는 것이 좋다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 더 포함할 수 있으며, 일 예로, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체일 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으나, 일 예로, 현탁액, 용액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 중 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물의 제형이 상기 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 중 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물의 제형이 상기 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물의 제형이 상기 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물의 제형이 상기 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 중 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다.
본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물의 제형이 상기 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 중 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다.
한편, 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수도 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 금화규 추출물을 함유함으로써, 티로시나아제(tyrosinase) 활성 억제, 멜라닌 생합성 억제 및 멜라닌 합성 유전자의 발현을 저해하여, 피부 미백에 우수한 효과를 발휘한다.
도 1은 본 발명의 금화규 추출물의 티로시나아제 활성 억제율을 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 금화규 추출물의 티로시나아제 발현 저해를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 금화규 추출물의 TRP-1 발현 저해를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예를 통해 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[ 실시예 1 : 금화규 추출물의 제조]
< 실시예 1-1 내지 실시예 1-4 : 물 추출물의 제조>
금화규 줄기, 꽃, 뿌리, 잎 100 g을 정제수 700 g에 각각 넣고, 환류냉각장치를 연결하여 60℃에서 5 시간 동안 중탕 추출하였다.
추출 후, 2500 메쉬 여과포로 여과하고, 0.3 μm 필터로 여과하였다. 그 후, 여과액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거시켜 파우더 상태의 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) 물 추출물을 각각 7 g 씩 수득하였으며, 차례대로 실시예 1-1 (금화규 줄기 물 추출물), 실시예 1-2 (금화규 꽃 물 추출물), 실시예 1-3 (금화규 뿌리 물 추출물), 실시예 1-4 (금화규 잎 물 추출물)이라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
< 실시예 1-5 내지 실시예 1-8 : 에탄올 추출물의 제조>
금화규 줄기, 꽃, 뿌리, 잎 100 g을 70% 에탄올 700 g에 넣고, 실시예 1-1과 동일한 방법으로 60℃에서 5 시간 동안 중탕 추출 및 여과하여, 파우더 상태의 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) 에탄올 추출물을 각각 7.48 g 씩 수득하였으며, 차례대로 실시예 1-5 (금화규 줄기 에탄올 추출물), 실시예 1-6 (금화규 꽃 에탄올 추출물), 실시예 1-7 (금화규 뿌리 에탄올 추출물), 실시예 1-8 (금화규 잎 에탄올 추출물)이라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
[ 실시예 2 : 금화규 비극성 용매 분획 추출물의 제조]
< 실시예 2-1 내지 실시예 2-4 : 헥산 분획추출물의 제조>
상기 실시예 1-5 내지 실시예 1-8에서 수득한 에탄올 추출물을 각각 6 g씩 증류수 40 g에 현탁시킨 후, 헥산 40 g을 사용하여 진탕 추출한 후, 분획하였다. 그 후, 2회 반복하고, 헥산 층을 감압 농축하여 금화규 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) 헥산 분획 추출물을 각각 0.3 g (건조중량)씩 수득하였다. 차례대로 실시예 2-1 (금화규 줄기 헥산 추출물), 실시예 2-2 (금화규 꽃 헥산 추출물), 실시예 2-3 (금화규 뿌리 헥산 추출물), 실시예 2-4 (금화규 잎 헥산 추출물)라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
< 실시예 2-5 내지 실시예 2-8 : 메틸렌클로라이드 분획추출물의 제조>
상기 실시예 2-1 내지 실시예 2-4의 잔류 물층에 메틸렌클로라이드 40 g을 넣고, 진탕 추출한 후 분획하였다. 그 후 2회 반복하고, 메틸렌클로라이드 층을 감압 농축하여 금화규 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) 메틸렌클로라이드 분획 추출물을 각각 0.8 g (건조중량)씩 수득하였다. 차례대로 실시예 2-5 (금화규 줄기 메틸렌클로라이드 추출물), 실시예 2-6 (금화규 꽃 메틸렌클로라이드 추출물), 실시예 2-7 (금화규 뿌리 메틸렌클로라이드 추출물), 실시예 2-8 (금화규 잎 메틸렌클로라이드 추출물)라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
< 실시예 2-9 내지 실시예 2-12 : 에틸아세테이트 분획 추출물의 제조>
상기 실시예 2-5 내지 실시예 2-8의 잔류 물층에 에틸아세테이트 40 g을 넣고, 진탕 추출한 후 분획하였다. 그 후, 2회 반복하고 에틸아세테이트 층을 감압 농축하여 금화규 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) 에틸아세테이트 분획 추출물을 각각 1.1 g (건조중량)씩 수득하였다. 차례대로 실시예 2-9 (금화규 줄기 에틸아세테이트 추출물), 실시예 2-10 (금화규 꽃 에틸아세테이트 추출물), 실시예 2-11 (금화규 뿌리 에틸아세테이트 추출물), 실시예 2-12 (금화규 잎 에틸아세테이트 추출물)라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
[ 실시예 3 : 금화규 극성 용매 분획 추출물의 제조]
< 실시예 3-1 내지 실시예 3-4 : n -부탄올 분획 추출물의 제조>
상기 실시예 2-9 내지 실시예 2-12의 잔류 물층을 수포화 n-부탄올 40 g으로 진탕 추출한 후 분획하였다. 그 후, 2회 반복하고, n-부탄올 층을 감압 농축하여 금화규 부위별(줄기, 꽃, 뿌리, 잎) n-부탄올 분획 추출물을 각각 0.8 g (건조중량)씩 수득하였다. 차례대로 실시예 3-1 (금화규 줄기 n-부탄올 추출물), 실시예 3-2 (금화규 꽃 n-부탄올 추출물), 실시예 3-3 (금화규 뿌리 n-부탄올 추출물), 실시예 3-4 (금화규 잎 n-부탄올 추출물)라고 명명하여 하기 실험예에서 사용하였다.
[ 실험예 1: 금화규 추출물의 티로시나아제 활성 저해 측정]
본 실험예에서는 실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물에 대하여 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하고자 하였다.
티로시나아제의 저해는 일반적으로 분광학적인 방법으로 측정하는데, 본 실험예에서는 바니(Vanni)의 방법으로 실시하였다 (Vanni A., Annali di Chimica, 80(35), 1990). 티로시나아제는 감자나, 버섯으로부터 정제되는 효소로서, 본 실험에서는 버섯으로부터 추출한 티로시나아제를 사용하였다.
0.1 M 포타슘 포스페이트 (Potassium phosphate) 완충액 (pH 6.8) 1 ㎖, 0.3 ㎎/㎖ L-티로신 수용액 1 ㎖ 및 1250 unit/㎖ 머쉬룸 티로시나아제 (Mushroom tyrosinase) 0.1 ㎖(시그마알드리치, USA)를 혼합한 후, 실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물을 1, 10, 50, 100, 300 ㎍/㎖ 농도의 용액으로 제조하여, 각각 0.2 ㎖씩 첨가하여 37℃에서 10분간 효소 반응시켰다.
그 후, 반응용액의 흡광도를 480 nm에서 측정하고 (JASCO V-550, Japan), 하기 수학식 1에 따라 계산하여 시료(실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물)의 효소 저해 정도를 계산하였고, 결과는 도 1에 나타내었다. 이때, 양성대조군으로는 실험군과 동일한 농도의 알부틴 (바이오랜드 사)을 사용하였다.
Figure 112016063959508-pat00001
A: 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 480 nm에서의 흡광도
B: 시료를 첨가한 반응용액의 480 nm에서의 흡광도
또한, 하기 표 1에는 티로시나아제 활성을 50% 저해하는데 요구되는 추출물의 농도(㎍/㎖)를 나타내었다.
IC50 (㎍/㎖)
(티로시나아제 활성을 50% 저해하는데
요구되는 추출물의 농도)
실시예 1-1 68.1
실시예 1-2 73.7
실시예 1-3 69.7
실시예 1-4 71.6
실시예 1-5 59.8
실시예 1-6 67.7
실시예 1-7 65.3
실시예 1-8 71.1
실시예 2-1 80.2
실시예 2-2 88.5
실시예 2-3 81.6
실시예 2-4 86.1
실시예 2-5 78.6
실시예 2-6 89.8
실시예 2-7 79.8
실시예 2-8 83.4
실시예 2-9 34.4
실시예 2-10 57.2
실시예 2-11 42.9
실시예 2-12 51.4
실시예 3-1 84.1
실시예 3-2 91.4
실시예 3-3 85.9
실시예 3-4 88.3
알부틴 76.4
상기 표 1에서 나타내는 바와 같이, 실시예 모두 티로시나아제 저해활성을 나타냈으며, 티로시나아제 활성을 50% 저해하는데 요구되는 추출물의 농도는 알부틴과 비교할 때 비슷하거나 더 낮은 수치를 보이는 것으로 나타났다.
따라서, 본 발명의 금화규 추출물은 티로시나아제 억제 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 2: B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 세포독성 측정]
본 실험예에서는 실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물에 대하여, B16-F1 멜라노마 세포 (CRL-6323, ATCC)의 세포생존율을 MTT assay를 통해 측정하고자 하였다.
MTT assay는 살아있는 세포의 수를 측정함으로써, 세포증식이나 독성에 많이 사용되는 실험법으로, 살아있는 세포는 미토콘드리아 내에서 수용성이고 노란색의 염인 MTT (3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)가 숙신산탈수소효소 (Succinate dehydrogenast 또는 mitochondrial dehydrogenase)에 의해 수불용성인 파란색의 포르마잔(formazan) 유도체로 환원되는 원리를 이용하는 것이다.
생성된 포르마잔 유도체는 용해제(Dimethyl sulfoxide 사용)를 넣고, 용해시킨 후 흡광도를 측정하였다. B16-F1 멜라노마 세포를 10% FBS (Fetal bovine serum, Gibco)를 첨가한 DMEM (Dulbecco's modified eagle's medium, Gibco)에 1×105 세포의 밀도로 6 well plate (Nunc)에 접종하고 5% CO2, 37℃의 인큐베이터에서 하루동안 배양하였다.
그 후, 10% FBS가 함유된 새로운 DMEM 배지로 교체 후, 상기 실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물 용액을 농도별로 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후, 기존 배지를 제거하고, 0.25 ㎎/㎖의 MTT 용액 2 ㎖을 처리하여 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다.
반응 후, MTT 용액을 제거하고, DMSO (Dimethylsulfoxide) 2 ㎖을 첨가하여 MTT 포르마잔(formazan)을 용해시켜 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 후, 수학식 2에 따라 세포 생존률을 계산하였다.
Figure 112016063959508-pat00002
A: 시료의 570 nm에서의 흡광도
B: 무처리군의 570 nm에서의 흡광도
모든 실험은 3회 반복하여 통계 처리하여 평균값을 구하였고, 그 결과는 하기의 표 2에 나타내었다.
실험 농도 (㎍/㎖) 세포생존율 (%)
실시예 1-1 1 99.9
10 106.89
100 105.9
실시예 1-2 1 100.4
10 101.7
100 99.5
실시예 1-3 1 101.5
10 104.9
100 97.7
실시예 1-4 1 104.2
10 100.1
100 98.8
실시예 1-5 1 103.0
10 101.3
100 97.8
실시예 1-6 1 99.1
10 94.7
100 101.1
실시예 1-7 1 99.2
10 100.6
100 100.1
실시예 1-8 1 98.7
10 102.7
100 99.1
실시예 2-1 1 101.3
10 99.9
100 103.1
실시예 2-2 1 102.9
10 98.0
100 101.8
실시예 2-3 1 103.2
10 98.4
100 99.5
실시예 2-4 1 104.1
10 99.6
100 102.3
실시예 2-5 1 102.7
10 97.2
100 96.5
실시예 2-6 1 103.1
10 102.3
100 100.9
실시예 2-7 1 98.2
10 101.9
100 97.2
실시예 2-8 1 102.6
10 102.3
100 101.6
실시예 2-9 1 97.6
10 102.3
100 103.4
실시예 2-10 1 101.7
10 99.5
100 102.4
실시예 2-11 1 101.5
10 99.1
100 96.8
실시예 2-12 1 104.1
10 98.1
100 99.6
실시예 3-1 1 99.2
10 101.9
100 100.2
실시예 3-2 1 102.6
10 100.3
100 102.3
실시예 3-3 1 103.7
10 100.2
100 101.2
실시예 3-4 1 98.5
10 100.8
100 99.5
알부틴 1 100.7
10 98.3
100 99.9
상기 표 2에서 나타내는 바와 같이 금화규 추출물은 세포독성을 나타내지 않음을 확인할 수 있었다.
[ 실험예 3: B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생합성 억제 효과 측정]
본 실험예에서는 실시예 1-1 내지 실시예 3-4의 금화규 추출물에 대하여 멜라닌 생성 억제 효과를 측정하고자 하였다.
B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생성(Melanogenesis) 저해 효과는 푸쿠다 (Fukuda, J. Soc . Cosmetic Chem ., 42(361), 1991)의 방법을 변형하여 측정하였다.
모든 농도에 따른 웰 수는 3배수로 준비하였다. 구체적으로, B16-F1 멜라노마 세포를 10% FBS을 첨가한 DMEM에 1×105 세포의 밀도로 6웰 플레이트(well plate)에 접종하고, 5% CO2, 37℃의 인큐베이터에서 하루 동안 배양시켰다.
그 후, 10% FBS가 함유된 새로운 DMEM 배지로 교체하고, 시료를 농도별로 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후, 배지를 제거한 세포를 PBS (Phosphate buffer, saline) 2 ㎖로 세척하고 1N NaOH 0.5 ㎖을 처리하여 세포를 1.5 ㎖ 튜브(tube)로 수거하여 세포 내 멜라닌을 얻었다.
수거한 세포를 96 웰 플레이트(well plate)에 옮긴 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 3 내지 4에 따라 단위 세포당 멜라닌 생성 억제율을 계산하였다.
Figure 112016063959508-pat00003
CVa: 시료를 처리한 반응용액의 세포생존률
Figure 112016063959508-pat00004
A: 시료를 처리하지 않은 반응용액의 450 nm에서의 흡광도
B: 시료를 처리한 반응용액(무처리군)의 450 nm에서의 흡광도
양성대조군으로는 100, 250 ㎍/㎖ 농도의 알부틴 (바이오랜드 사)을 사용하였다. 그 결과는 하기의 표 3에 나타내었다.
실험 농도 (㎍/㎖) 단위 세포당
멜라닌 생성 억제율 (%)
실시예 1-1 1 12.1
10 24.9
100 33.6
실시예 1-2 1 7.3
10 14.7
100 21.2
실시예 1-3 1 9.8
10 18.4
100 27.3
실시예 1-4 1 5.7
10 12.1
100 19.8
실시예 1-5 1 20.2
10 31.3
100 56.9
실시예 1-6 1 15.1
10 27.9
100 38.4
실시예 1-7 1 18.5
10 29.9
100 48.2
실시예 1-8 1 16.4
10 28.6
100 42.7
실시예 2-1 1 3.29
10 13.7
100 22.1
실시예 2-2 1 1.4
10 6.8
100 11.5
실시예 2-3 1 3.5
10 12.9
100 19.4
실시예 2-4 1 1.2
10 8.3
100 15.5
실시예 2-5 1 6.64
10 15.3
100 25.5
실시예 2-6 1 2.6
10 9.1
100 14.2
실시예 2-7 1 5.8
10 14.7
100 22.2
실시예 2-8 1 3.5
10 10.1
100 19.3
실시예 2-9 1 35.2
10 44.8
100 62.1
실시예 2-10 1 12.4
10 28.7
100 36.5
실시예 2-11 1 27.6
10 39.1
100 48.4
실시예 2-12 1 20.0
10 32.8
100 41.1
실시예 3-1 1 8.63
10 10.8
100 19.6
실시예 3-2 1 2.1
10 5.6
100 11.2
실시예 3-3 1 6.9
10 11.5
100 17.6
실시예 3-4 1 4.2
10 8.5
100 13.3
알부틴 1 2.43
10 10.7
100 25.4
상기 표 3에서 나타난 바와 같이, 실시예 2-9의 에틸아세테이트 추출물은 100 ㎍/㎖에서 62.1%로 가장 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내었다.
또한, 실시예 1-1, 1-3의 정제수 추출물 100 ㎍/㎖에서 각각 33.6%, 27.3%, 실시예 1-5 내지 1-8의 에탄올 추출물 100 ㎍/㎖에서 각각 56.9%, 38.4%, 48.2%, 42.7%, 실시예 2-10 내지 2-12 에틸아세테이트 추출물 100 ㎍/㎖에서 각각 36.5%, 48.4%, 41.1%로 양성대조군과 비교하여 더 높은 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내었다.
따라서, 본 발명의 금화규 추출물은 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백에 탁월한 효과가 있음을 알 수 있었다.
[ 실험예 4: B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 합성 관련 유전자 발현 저해 효과 측정]
본 실험예에서는 상기 실험예 3의 100 ㎍/㎖ 농도에서 우수한 멜라닌 생성 억제 효능을 보인 실시예 1-1 내지 1-4 (물 추추물), 실시예 1-5 내지 1-8 (에탄올 추출물) 및 실시예 2-9 내지 2-12 (에틸아세테이트 추출물) 에 대하여 멜라닌 합성 관련 유전자 발현 저해 효과를 측정하고자 하였다.
B16-F1 멜라노마 세포를 10% FBS을 첨가한 DMEM에 3×105 세포의 밀도로 60 mm 배양 접시(culture dish)에 접종하고, 5% CO2, 37℃의 인큐베이터에서 하루동안 배양시켰다.
그 후, 10% FBS가 함유된 새로운 DMEM 배지로 교체하고, 실시예 1-1 내지 1-4 (물 추추물), 실시예 1-5 내지 1-8 (에탄올 추출물) 및 실시예 2-9 내지 2-12 (에틸아세테이트 추출물)의 금화규 추출물을 농도별로 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후, 배지를 제거한 세포를 PBS (Phosphate buffer saline) 2 ㎖로 세척하고, 트리졸(TriZol)을 1 ㎖ 처리하여 1.5 ㎖ 튜브(tube)에 옮기고 페놀/클로로포름 추출법과 에탄올 침전으로 순수 RNA를 얻었다.
그 후, 정량된 RNA와 'High Capacity RNA-to-cDNA kit (Applied Biosystems)'을 사용하여 cDNA 합성과 리얼타임(Realtime) PCR을 실시하였다. 대조군으로 GAPDH를 사용하였으며 리얼타임(Realtime) PCR에 사용된 티로시나아제(Tyrosinase)의 프라이머(primer)는 서열번호 1 및 서열번호 2, TRP-1의 프라이머는 서열번호 3 및 서열번호 4로 구성되어 있고, GAPDH의 프라이머는 서열번호 5 및 서열번호 6으로 구성되어 있으며. 이는 하기 표 4에 나타내었다.
또한, 티로시나아제 발현량 결과는 표 5 및 도 2에, TRP-1 발현량 결과는 표 6 및 도 3에 나타내었다.
서열번호 1 5'-TATAAACTCAGTGTTTCCCTTTATCACAA-3'
서열번호 2 5'-TCTATGATGACATGAAGTGGCAAA-3'
서열번호 3 5'-GTTCAATGGCCAGGTCAGGA-3'
서열번호 4 5'-CAACGCAGCCACTACAGCA-3'
서열번호 5 5'-GGCATCTTGGGCTACACTGAG-3'
서열번호 6 5'-GGAAGAGTGGGAGTTGCTGTTG-3'
실험 농도 (㎍/㎖) 티로시나아제(Tyrosinase) 발현량 (%)
실시예 1-1 1 91.8
10 77.6
100 64.4
실시예 1-2 1 99.2
10 89.1
100 75.3
실시예 1-3 1 93.5
10 74.2
100 71.7
실시예 1-4 1 98.8
10 87.6
100 72.4
실시예 1-5 1 82.0
10 65.3
100 50.5
실시예 1-6 1 91.0
10 83.8
100 67.9
실시예 1-7 1 87.6
10 68.1
100 55.9
실시예 1-8 1 99.2
10 86.7
100 75.1
실시예 2-9 1 71.9
10 58.2
100 45.9
실시예 2-10 1 80.6
10 74.4
100 54.8
실시예 2-11 1 77.1
10 60.7
100 56.7
실시예 2-12 1 89.9
10 75.8
100 61.3
알부틴 1 92.6
10 78.7
100 65.1
실험 농도 (㎍/㎖) TRP-1 발현량 (%)
실시예 1-1 1 84.5
10 70.3
100 61.8
실시예 1-2 1 99.7
10 84.1
100 73.1
실시예 1-3 1 94.3
10 89.9
100 66.5
실시예 1-4 1 97.1
10 82.9
100 69.5
실시예 1-5 1 81.4
10 62.3
100 52.1
실시예 1-6 1 94.3
10 94.1
100 68.5
실시예 1-7 1 89.1
10 76.3
100 61.8
실시예 1-8 1 99.9
10 79.7
100 75.4
실시예 2-9 1 74.9
10 61.2
100 50.4
실시예 2-10 1 82.7
10 79.5
100 64.1
실시예 2-11 1 79.6
10 68.1
100 54.5
실시예 2-12 1 91.2
10 76.3
100 59.9
알부틴 1 84.2
10 70.5
100 63.8
상기 표 5, 6에서 나타내는 바와 같이 본 발명의 금화규 추출물은 양성대조군으로 사용된 알부틴보다 티로시나아제(Tyrosinase) 및 TRP-1 발현 저해능이 더 우수한 것으로 확인되었다 (도 2 및 도 3). 도 2는 본 발명의 금화규 추출물의 티로시나아제 발현 저해를 나타내는 그래프이고, 도 3은 본 발명의 금화규 추출물의 TRP-1 발현 저해를 나타내는 그래프이다.
이러한 결과는, 금화규 추출물이 티로시나아제(Tyrosinase)와 TRP-1 발현량을 감소시키는데 우수한 효과가 있음을 보여주었다.
[ 제형예 1 내지 28: 유연 화장수( 스킨 )의 제조]
하기 표 7의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 1-1 내지 1-8에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수(스킨)를 제조하였고, 하기 표 8의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 2-1 내지 2-12에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수(스킨)를 제조하였으며, 하기 표 9의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 3-1 내지 3-4에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화장수(스킨)를 제조하였다.
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 1 제형예 2 제형예 3 제형예 4 제형예 5 제형예 6 제형예 7 제형예 8
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 1-1 3.0 - - - - - - -
실시예 1-2 - 3.0 - - - - - -
실시예 1-3 - - 3.0 - - - - -
실시예 1-4 - - - 3.0 - - - -
실시예 1-5 - - - - 3.0 - - -
실시예 1-6 - - - - - 3.0 - -
실시예 1-7 - - - - - - 3.0 -
실시예 1-8 - - - - - - - 3.0
글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
프로필렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
에탄올 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
트리에탄올아민 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
색소 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 9 제형예 10 제형예 11 제형예 12 제형예 13 제형예 14 제형예 15 제형예 16 제형예 17 제형예 18 제형예 19 제형예 20
함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)
실시예 2-1 3.0 - - - - - - - - - - -
실시예 2-2 - 3.0 - - - - - - - - - -
실시예 2-3 - - 3.0 - - - - - - - - -
실시예 2-4 - - - 3.0 - - - - - - - -
실시예 2-5 - - - - 3.0 - - - - - - -
실시예 2-6 - - - - - 3.0 - - - - - -
실시예 2-7 - - - - - - 3.0 - - - - -
실시예 2-8 - - - - - - - 3.0 - - - -
실시예 2-9 - - - - - - - - 3.0 - - -
실시예 2-10 - - - - - - - - - 3.0 - -
실시예 2-11 - - - - - - - - - - 3.0 -
실시예 2-12 - - - - - - - - - - - 3.0
글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
프로필렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
에탄올 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
트리에탄올아민 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
색소 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 21
 제형예 22 제형예 23 제형예 24
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 3-1 3.0 - - -
실시예 3-2 - 3.0 - -
실시예 3-3 - - 3.0 -
실시예 3-4 - - - 3.0
글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0
프로필렌글리콜 2.0 2.0 2.0 2.0
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유 1.0 1.0 1.0 1.0
에탄올 10.0 10.0 10.0 10.0
트리에탄올아민 0.1 0.1 0.1 0.1
방부제 미량 미량 미량 미량
색소 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
[ 제형예 25 내지 48: 영양 화장수(로션)의 제조]
하기 표 10의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 1-1 내지 1-8에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양 화장수(로션)를 제조하였고, 하기 표 11의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 2-1 내지 2-12에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양 화장수(로션)를 제조하였으며, 하기 표 12의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 3-1 내지 3-4에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양 화장수(로션)를 제조하였다.
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 25 제형예 26 제형예 27 제형예 28 제형예 29 제형예 30 제형예 31 제형예 32
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 1-1 1.0 - - - - - - -
실시예 1-2 - 1.0 - - - - - -
실시예 1-3 - - 1.0 - - - - -
실시예 1-4 - - - 1.0 - - - -
실시예 1-5 - - - - 1.0 - - -
실시예 1-6 - - - - - 1.0 - -
실시예 1-7 - - - - - - 1.0 -
실시예 1-8 - - - - - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
콜레스테롤 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
카르복시비닐폴리머 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
산탄검 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)
 제형예 33
 제형예 34 제형예 35 제형예 36 제형예 37 제형예 38 제형예 39 제형예 40 제형예 41 제형예 42 제형예 43 제형예 44
함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)
실시예 2-1 1.0 - - - - - - - - - - -
실시예 2-2 - 1.0 - - - - - - - - - -
실시예 2-3 - - 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2-4 - - - 1.0 - - - - - - - -
실시예 2-5 - - - - 1.0 - - - - - - -
실시예 2-6 - - - - - 1.0 - - - - - -
실시예 2-7 - - - - - - 1.0 - - - - -
실시예 2-8 - - - - - - - 1.0 - - - -
실시예 2-9 - - - - - - - - 1.0 - - -
실시예 2-10 - - - - - - - - - 1.0 - -
실시예 2-11 - - - - - - - - - - 1.0 -
실시예 2-12 - - - - - - - - - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2 1.2
콜레스테롤 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
카르복시비닐폴리머 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
산탄검 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 45 제형예 46 제형예 47 제형예 48
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 3-1 1.0 - - -
실시예 3-2 - 1.0 - -
실시예 3-3 - - 1.0 -
실시예 3-4 - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스 1.2 1.2 1.2 1.2
콜레스테롤 1.5 1.5 1.5 1.5
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 10.0 10.0 10.0 10.0
카르복시비닐폴리머 0.2 0.2 0.2 0.2
산탄검 0.3 0.3 0.3 0.3
방부제 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
[ 제형예 49 내지 72: 영양크림의 제조]
하기 표 13의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 1-1 내지 1-8에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양크림을 제조하였고, 하기 표 14의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 2-1 내지 2-12에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양크림을 제조하였으며, 하기 표 15의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 3-1 내지 3-4에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 영양크림을 제조하였다.
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 49 제형예 50 제형예 51 제형예 52 제형예 53 제형예 54 제형예 55 제형예 56
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 1-1 5.0 - - - - - - -
실시예 1-2 - 5.0 - - - - - -
실시예 1-3 - - 5.0 - - - - -
실시예 1-4 - - - 5.0 - - - -
실시예 1-5 - - - - 5.0 - - -
실시예 1-6 - - - - - 5.0 - -
실시예 1-7 - - - - - - 5.0 -
실시예 1-8 - - - - - - - 5.0
시토스테롤 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
폴리글리세릴 2-올레이트 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
세라마이드 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 57 제형예 58 제형예 59 제형예 60 제형예 61 제형예 62 제형예 63 제형예 64 제형예 65 제형예 66 제형예 67 제형예 68
함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)
실시예 2-1 5.0 - - - - - - - - - - -
실시예 2-2 - 5.0 - - - - - - - - - -
실시예 2-3 - - 5.0 - - - - - - - - -
실시예 2-4 - - - 5.0 - - - - - - - -
실시예 2-5 - - - - 5.0 - - - - - - -
실시예 2-6 - - - - - 5.0 - - - - - -
실시예 2-7 - - - - - - 5.0 - - - - -
실시예 2-8 - - - - - - - 5.0 - - - -
실시예 2-9 - - - - - - - - 5.0 - - -
실시예 2-10 - - - - - - - - - 5.0 - -
실시예 2-11 - - - - - - - - - - 5.0 -
실시예 2-12 - - - - - - - - - - - 5.0
시토스테롤 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
폴리글리세릴 2-올레이트 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
세라마이드 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 69 제형예 70 제형예 71 제형예 72
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 3-1 5.0 - - -
실시예 3-2 - 5.0 - -
실시예 3-3 - - 5.0 -
실시예 3-4 - - - 5.0
시토스테롤 4.0 4.0 4.0 4.0
폴리글리세릴 2-올레이트 3.0 3.0 3.0 3.0
세라마이드 0.7 0.7 0.7 0.7
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
[ 제형예 73 내지 96: 에센스의 제조]
하기 표 16의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 1-1 내지 1-8에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 에센스를 제조하였고, 하기 표 17의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 2-1 내지 2-12에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 에센스를 제조하였으며, 하기 표 18의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 3-1 내지 3-4에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 에센스를 제조하였다.
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 73 제형예 74 제형예 75 제형예 76 제형예 77 제형예 78 제형예 79 제형예 80
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 1-1 1.0 - - - - - - -
실시예 1-2 - 1.0 - - - - - -
실시예 1-3 - - 1.0 - - - - -
실시예 1-4 - - - 1.0 - - - -
실시예 1-5 - - - - 1.0 - - -
실시예 1-6 - - - - - 1.0 - -
실시예 1-7 - - - - - - 1.0 -
실시예 1-8 - - - - - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당 총 중량 100 g)		 제형예 81 제형예 82 제형예 83 제형예 84 제형예 85 제형예 86 제형예 87 제형예 88 제형예 89 제형예 90 제형예 91 제형예 92
함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)
실시예 2-1 1.0 - - - - - - - - - - -
실시예 2-2 - 1.0 - - - - - - - - - -
실시예 2-3 - - 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2-4 - - - 1.0 - - - - - - - -
실시예 2-5 - - - - 1.0 - - - - - - -
실시예 2-6 - - - - - 1.0 - - - - - -
실시예 2-7 - - - - - - 1.0 - - - - -
실시예 2-8 - - - - - - - 1.0 - - - -
실시예 2-9 - - - - - - - - 1.0 - - -
실시예 2-10 - - - - - - - - - 1.0 - -
실시예 2-11 - - - - - - - - - - 1.0 -
실시예 2-12 - - - - - - - - - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 93 제형예 94 제형예 95 제형예 96
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 3-1 1.0 - - -
실시예 3-2 - 1.0 - -
실시예 3-3 - - 1.0 -
실시예 3-4 - - - 1.0
시토스테롤 1.7 1.7 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5 1.5 1.5
세테아레스-4 2.0 2.0 2.0 2.0
콜레스테롤 3.0 3.0 3.0 3.0
디세틸포스페이트 0.4 0.4 0.4 0.4
농글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
선플라워오일 22.0 22.0 22.0 22.0
카르복시비닐폴리머 0.5 0.5 0.5 0.5
트리에탄올아민 0.5 0.5 0.5 0.5
방부제 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
[ 제형예 97 내지 120: 파운데이션의 제조]
하기 표 19의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 1-1 내지 1-8에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 파운데이션를 제조하였고, 하기 표 20의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 2-1 내지 2-12에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 파운데이션를 제조하였으며, 하기 표 21의 조성 성분 및 함량에 따라, 상기 실시예 3-1 내지 3-4에서 수득한 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하는 파운데이션을 제조하였다.
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 97 제형예 98 제형예 99 제형예 100 제형예 101 제형예 102 제형예 103 제형예 104
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 1-1 1.0 - - - - - - -
실시예 1-2 - 1.0 - - - - - -
실시예 1-3 - - 1.0 - - - - -
실시예 1-4 - - - 1.0 - - - -
실시예 1-5 - - - - 1.0 - - -
실시예 1-6 - - - - - 1.0 - -
실시예 1-7 - - - - - - 1.0 -
실시예 1-8 - - - - - - - 1.0
밀납 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
사이클로메치콘 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
유동파라핀 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
스쿠알란 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
스테아린산 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
친유성 모노스테아린산 글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
글리세린 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
트리에탄올아민 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
알루미늄마그네슘실리케이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
안료 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 105 제형예 106 제형예 107 제형예 108 제형예 109 제형예
110		 제형예 111 제형예 112 제형예 113 제형예 114 제형예 115 제형예 116
함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량(g) 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)		 함량
(g)
실시예 2-1 1.0 - - - - - - - - - - -
실시예 2-2 - 1.0 - - - - - - - - - -
실시예 2-3 - - 1.0 - - - - - - - - -
실시예 2-4 - - - 1.0 - - - - - - - -
실시예 2-5 - - - - 1.0 - - - - - - -
실시예 2-6 - - - - - 1.0 - - - - - -
실시예 2-7 - - - - - - 1.0 - - - - -
실시예 2-8 - - - - - - - 1.0 - - - -
실시예 2-9 - - - - - - - - 1.0 - - -
실시예 2-10 - - - - - - - - - 1.0 - -
실시예 2-11 - - - - - - - - - - 1.0 -
실시예 2-12 - - - - - - - - - - - 1.0
밀납 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
사이클로메치콘 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
유동파라핀 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
스쿠알란 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
스테아린산 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
친유성 모노스테아린산 글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
글리세린 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
트리에탄올아민 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
알루미늄마그네슘실리케이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
안료 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
원료
(각 제형예 당
총 중량 100 g)		 제형예 117 제형예 118 제형예 119 제형예 120
함량(g) 함량(g) 함량(g) 함량(g)
실시예 3-1 1.0 - - -
실시예 3-2 - 1.0 - -
실시예 3-3 - - 1.0 -
실시예 3-4 - - - 1.0
밀납 2.0 2.0 2.0 2.0
사이클로메치콘 2.0 2.0 2.0 2.0
유동파라핀 5.0 5.0 5.0 5.0
스쿠알란 5.0 5.0 5.0 5.0
스테아린산 2.0 2.0 2.0 2.0
친유성 모노스테아린산 글리세린 3.0 3.0 3.0 3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0 4.0 4.0 4.0
글리세린 4.0 4.0 4.0 4.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0
부틸렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0
트리에탄올아민 1.0 1.0 1.0 1.0
알루미늄마그네슘실리케이트 0.5 0.5 0.5 0.5
안료 12.0 12.0 12.0 12.0
방부제 미량 미량 미량 미량
향료 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량

Claims (5)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 금화규 추출물을 유효성분으로 함유하며,
    상기 금화규 추출물은,
    금화규에 에탄올을 가하여 에탄올 추출물을 수득하고 건조시키는 단계 (a);
    상기 건조된 에탄올 추출물을 물에 현탁한 후, 헥산을 가하여 분획하는 단계 (b);
    상기 단계 (b)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 메틸렌클로라이드를 가하여 분획하는 단계 (c); 및
    상기 단계 (c)로부터 물 층을 분리한 후, 물 층에 에틸아세테이트를 가하여 분획하는 단계 (d); 로부터 회수되는 에틸아세테이트 분획 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 금화규 추출물은,
    화장료 조성물 전체 중량에 대하여, 0.1~20중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 피부 미백용 화장료 조성물은,
    현탁액, 용액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 중 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
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