KR102589938B1 - 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물 - Google Patents
금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 현저하므로, 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장품 또는 건강기능식품의 소재로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 금화규 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물에 관한 것이다.
피부는 기본적인 신진대사 과정을 통하여 우리 몸의 항상성을 저해하는 다양한 외부 요인으로부터 위해를 막아주는 일차적인 기능을 담당하고 있다. 즉, 피부는 신체 가장 바깥쪽에 위치함으로써 물리적, 화학적, 생물학적 장벽기능을 통한 보호작용, 체온 조절작용, 감각작용, 분비 및 배설작용, 흡수작용, 저장작용, 재생작용 등의 다양한 역할을 수행하고 있지만, 지속적인 외부 스트레스가 가해지는 경우 손상을 가장 받기 쉽다.
이러한 외부 스트레스의 주요 원인으로는 자외선 노출, 배기가스, 황사, 환경오염물, 중금속, 온도변화, 미생물을 대표적인 예로 들 수 있다. 이들은 주로 산화적 스트레스(oxidative stress)를 통하여 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 생성함으로써, 항산화 방어체계를 붕괴시켜 세포 손상 및 사멸을 야기하게 된다. 따라서, 외부 스트레스로부터 피부 세포를 보호하고 노화를 예방하기 위해서는 활성산소로 인한 산화적 스트레스를 억제하고, 활성산소를 효율적으로 제거할 수 있는 항산화 방어 강화가 중요하며, 최근에는 인체에 무해하고 더욱 강력한 항산화력을 가진 천연 물질에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다.
콜라겐은 피부의 진피층에 존재하며 전체 피부 건조중량의 약 70%를 차지한다. 피부의 탄력은 이 콜라겐과 엘라스틴(elastin, 탄력섬유)에 의해서 유지되는 것으로 알려져 있다. 이러한 콜라겐은 자연 노화에 의한 세포 활성의 감소 및 콜라게나아제(collagenase)의 활성으로 인한 내적 요인 및 공해, 자외선, 스트레스 등의 외적 요인에 의한 활성산소 및 자유 라디칼의 증가로 인해 감소하게 된다. 콜라겐은 주름 형성과 관련이 있다.
염증이란 세균 유래의 농양으로서 조직에 침입하여 증식된 화농균류를 백혈구가 왕성히 탐식하여, 그 결과 생기는 백혈구의 사해, 균에 의해 장해를 받은 조직, 세포파괴물 등이 조직 내 융해하여 농이 축적된 곳의 병리적 상태를 말하며, 소염작용이라 함은 침입균의 증식을 항균제 등에 의하여 억제한다든지, 혹은 농양중에 축적된 이물을 탐식하는 마크로파지(macrophage)를 활성화하여 그것들을 소화, 배설하는 기능을 높여서 농양의 치료과정이 촉진되는 것을 말한다. 일반적으로 염증 반응은 생체의 세포나 조직에 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상부위를 수복 재생하려고 하는 생체의 방어 반응과정이다. 따라서, 이러한 일련의 반응에는 국소의 혈관, 체액의 각종 조직세포, 면역관여 세포 등이 포함된다고 한다.
멜라닌은 머리카락 및 피부의 색상을 결정하는 주요 인자로, 자외선으로부터 피부세포를 보호하는 역할을 하지만 과도한 멜라닌의 축적은 주근깨 또는 기미 등과 같은 색소 과다 침착 현상을 유발한다. 표피층의 기저층(basal layer)에 존재하는 멜라닌 형성 세포는 멜라노솜이라고 불리는 특정한 구조로 되어 있으며, 이곳에서 멜라닌 형성 효소(melanogenic enzyme)의 작용으로 인해 멜라닌이 생성된다. 멜라닌은 검은색 및 갈색계열의 유멜라닌(eumelanin)과 노란색 및 붉은 계열의 페오멜라닌(pheomelanin)이 있으며, 멜라닌의 합성은 티로시나아제(tyrosinase)에 의해 티로신(tyrosine)이 도파(DOPA) 및 도파 퀴논(DOPA quinone)으로 전환되면서 시작된다.
한편, 금화규(Hibiscus manihot)는 쌍떡잎식물 아욱목 아욱과의 한해살이풀로 닥풀이라고도 한다. 중국이 원산지이며 밭에서 재배한다. 전체에 털이 있고, 줄기는 둥근 기둥 모양이며 곧게 서고 가지를 치지 않으며 높이가 1~1.5m이다. 잎은 어긋나고 잎자루가 길며, 잎몸은 손바닥 모양으로 5~9개로 깊게 갈라진다. 갈라진 조각은 바소 모양 또는 거꾸로 선 바소 모양이고 가장자리에 거친 톱니가 있다. 턱잎은 바소 모양으로 가늘고 작다. 꽃은 8~9월에 가운데 부분이 짙은 자주색을 띠는 노란색으로 피고 줄기 끝에 총상 꽃차례를 이루며 달린다. 꽃 밑에 있는 작은 포는 4~5개로 넓은 바소 모양이다. 꽃의 지름은 10~15cm이고, 화관은 종 모양이며, 꽃잎은 5개이고 서로 겹쳐지며 세로 맥이 있다. 수술은 여러 개의 수술대가 합쳐진 단체수술이며, 암술머리와 꽃받침은 5개로 갈라진다. 열매는 삭과이고 긴 타원 모양이며 5개의 모가 난 줄과 굳센 털이 있고 10월에 익는다. 뿌리는 점액이 많다.
닥풀의 식물명은 종이제조와 관련이 있다. 자고로 우리나라 종이인 한지는 닥나무 껍질을 벗겨서 제조했는데 종이를 채로 뜰 때 닥나무 분말이 서로 잘 붙게 하기 위해서 닥풀 뿌리에서 얻은 진액을 풀 대신에 접착제로 사용했다는 것이다.
한방에서는 꽃을 황촉규화, 뿌리를 황촉규근(黃蜀葵根), 종자를 황촉규자(黃蜀葵子)라는 약재로 쓴다. 황촉규화는 통증 때문에 소변을 잘못 보는 증세를 치료하고 종기, 악창, 화상에 외용하며, 황촉규근은 임질, 유즙 분비 부족, 볼거리염, 종기에 효과가 있고 이뇨 작용이 있으며, 황촉규자는 소변을 잘 통하게 하고 유즙 분비를 촉진하며 타박상에 가루를 내어 술에 타서 마신다.
한편, 한국공개특허 제2018-0137151호에는 강황잎 및 황촉규(Hibiscus manihot)의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 억제용 화장료 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1178594호에 하수오 추출물, 대추 추출물 및 황촉규(Hibiscus manihot) 추출물을 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물을 제공하고, 상기 유효성분이 금화규 추출물에 비해 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 현저한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 물에 금화규(Hibiscus manihot) 분말 및 글루코오스를 첨가한 후 100~150℃, 1.3~1.7 기압하에 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후 락토코쿠스 락티스 배양물을 1~10%(v/v) 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물을 제공한다.
본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 제조방법으로 제조된 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 현저하므로, 본 발명의 유효성분인 금화규 발효물은 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물 내의 콜라겐 함량을 확인한 결과이다. *은 금화규 발효물 내 콜라겐 함량이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 2는 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 항산화 효과를 확인한 결과이다. ***은 금화규 발효물의 DPPH 라디칼 소거활성이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 3은 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 항염 효과를 NO 함량 변화(A) 및 리폭시게나아제 저해 활성(B)으로 확인한 결과이다. LPS(Lipopolysaccharide)는 NO 생성 유발 물질이다. -은 시료 무첨가 군이다. ###은 금화규 발효물의 NO 함량이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. ***은 금화규 발효물의 리폭시게나아제 저해 활성이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 4는 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 미백 효과를 확인한 결과이다. *은 금화규 발효물의 티로시나아제 억제 효과가 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
도 2는 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 항산화 효과를 확인한 결과이다. ***은 금화규 발효물의 DPPH 라디칼 소거활성이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 3은 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 항염 효과를 NO 함량 변화(A) 및 리폭시게나아제 저해 활성(B)으로 확인한 결과이다. LPS(Lipopolysaccharide)는 NO 생성 유발 물질이다. -은 시료 무첨가 군이다. ###은 금화규 발효물의 NO 함량이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다. ***은 금화규 발효물의 리폭시게나아제 저해 활성이 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.001이다.
도 4는 본 발명의 금화규 발효물 또는 금화규 추출물의 미백 효과를 확인한 결과이다. *은 금화규 발효물의 티로시나아제 억제 효과가 금화규 추출물에 비해 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.05이다.
본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 금화규는 금화규의 뿌리, 줄기, 잎, 꽃을 포함하는 어느 부위라도 상관없고, 바람직하게는 금화규 꽃을 사용하는 것이지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 금화규 발효물은 금화규 추출물에 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis)를 이용하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 발효한 것일 수 있고, 바람직하게는 금화규 추출물에 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) Ntr-LL1(KCTC 14593BP)를 이용하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 발효한 것이며, 더 바람직하게는 금화규 추출물에 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) Ntr-LL1(KCTC 14593BP)를 이용하여 37℃에서 24시간 동안 발효한 것이지만, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액, 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광 물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은
1) 물에 금화규(Hibiscus manihot) 분말 및 글루코오스를 첨가한 후 100~150℃, 1.3~1.7 기압하에 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후 락토코쿠스 락티스 배양물을 1~10%(v/v) 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물의 제조방법에 관한 것이다.
상기 단계 2)의 락토코쿠스 락티스 배양물은 락토코쿠스 락티스를 유산균용 액상 배지에 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양한 것일 수 있고, 바람직하게는 락토코쿠스 락티스 Ntr-LL1(KCTC 14593BP)를 유산균용 액상 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 것이지만, 이에 제한하는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 발효물은 구체적으로
1) 0.5~1.5%(w/v) 금화규(Hibiscus manihot) 꽃 분말 및 0.5~4%(w/v) 글루코오스가 포함된 물을 121℃, 1.5 기압하에 5~30분 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후, 유산균용 액상 배지에 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양한 락토코쿠스 락티스 배양물을 1~10%(v/v) 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있고,
더 구체적으로는
1) 1%(w/v) 금화규(Hibiscus manihot) 꽃 분말 및 0.5~2%(w/v) 글루코오스가 포함된 물을 121℃, 1.5 기압하에 10~20분 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후, 유산균용 액상 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 락토코쿠스 락티스 Ntr-LL1(KCTC 14593BP) 배양물을 1~2%(v/v) 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있으며,
더욱더 구체적으로는
1) 1%(w/v) 금화규(Hibiscus manihot) 꽃 분말 및 1%(w/v) 글루코오스가 포함된 물을 121℃, 1.5 기압하에 15분 동안 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후, 유산균용 액상 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 락토코쿠스 락티스 Ntr-LL1(KCTC 14593BP) 배양물을 1~2%(v/v) 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하여 제조될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물에 관한 것이다.
상기 금화규 발효물은 발효물 내 콜라겐 함량이 금화규 추출물에 비해 증진되는 효과가 있고, 항산화, 항염 및 미백 효과 또한 금화규 추출물에 비해 증진된다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예 1. 금화규 발효물의 제조
1) 금화규 발효물의 제조
1g의 금화규(Hibiscus manihot) 꽃 건조 분말 및 1g의 글루코오스에 물을 첨가하여 총 100mL로 맞춘 혼합물을 121℃, 1.5 기압하에 15분 동안 고온고압 처리하여 추출한 후, 실온까지 냉각시킨 다음, 유산균용 액상 배지에 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양된 락토코쿠스 락티스 Ntr-LL1(KCTC 14593BP) 배양물(660nm에서 OD 값이 1.0)을 1~2mL 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양액은 여과하여 금화규 발효물의 시료로 사용하였다.
2) 금화규 추출물의 제조(대조군)
1g의 금화규(Hibiscus manihot) 꽃 건조 분말에 물을 첨가하여 총 100mL로 맞춘 후 121℃, 1.5 기압하에 15분 동안 고온고압 처리하여 추출하고, 실온까지 냉각시킨 후, 추출액을 여과한 다음 금화규 추출물의 시료로 사용하였다.
실시예 1. 콜라겐 함량 분석
콜라겐 함량 분석을 위해, 평편한 바닥의 검은색 96웰 플레이트에 금화규 발효물 또는 추출물을 20㎕ 분주한 다음, 30㎕의 다이제스트 믹스(digest mix)를 혼합한 후 37℃, 암 조건에서 60분 동안 반응시켰다. 반응 후, 염색시약 40㎕를 분주하여 37℃에서 10분 동안 반응시킨 다음, 10㎕의 디벨로퍼(developer)를 추가한 후 37℃에서 10분 동안 반응시켰다. 그 후 흡수파장 375nm, 발광파장 465nm에서 형광강도를 측정하였다. 콜라겐 함량은 측정값을 하기 식 1에 대입하여 계산하였다.
[식 1]
콜라겐 함량(㎍/mL)=(시료 첨가구 형광강도-시료 무첨가구 형광강도)/표준 곡선 기울기
그 결과, 도 1에 개시된 바와 같이 본 발명의 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 콜라겐 함량이 현저히 증진되었다.
실시예 2. 항산화 효과 확인
항산화 효과는 DPPH(2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) 라디칼 소거활성 실험을 통해 확인하였다. 0.008g의 DPPH 시약을 에탄올과 증류수가 1:1 부피 비로 혼합된 100mL의 용매에 용해한 후 여과한 다음, 상기 여과된 DPPH 시약 용해물 2.5mL에 제조예 1의 금화규 발효물 또는 추출물 0.5mL를 혼합한 후 실온에서 30분 동안 반응시켰다. 그 후 528nm에서 흡광도를 측정하여 하기 식 2에 대입하여 라디칼 소거활성을 계산하였다.
[식 2]
DPPH 자유 라디칼 소거활성(%)=[1-(A/B)]×100
A: 528nm에서 시료 첨가된 DPPH 용액의 흡광도
B: 528nm에서 시료 무첨가 DPPH 용액의 흡광도
그 결과, 도 2에 개시된 바와 같이 본 발명의 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 DPPH 라디칼 소거활성이 현저히 증진되었다.
실시예 3. 항염 효과 확인
1) NO 생성 저해능
금화규 발효물의 항염 효과를 확인하기 위해, 마우스 대식세포주(RAW264.7)에 1㎍/mL의 LPS를 처리한 다음 제조예 1의 금화규 발효물 또는 추출물과 함께 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 아질산염 축적 정도를 확인하기 위해 배양 상층액을 96 웰 플레이트에 100㎕ 넣고, 그리스 시약(griess reagent)을 동량 첨가하여 10분 동안 반응시킨 후, 마이크로 플레이트 리더로 550nm에서 흡광도를 측정하였고, 배지 내 아질산염의 양은 아질산나트륨(sodium nitrite)으로 얻은 표준곡선과 비교하여 계산하였다.
그 결과, 도 3A에 개시된 바와 같이 LPS에 의해 증가된 NO 생성량은 금화규 추출물 또는 발효물 처리에 의해 감소하였고, 특히 금화규 발효물 처리군의 NO 함량이 현저히 감소하는 것으로 보아, 금화규 추출물 대비 금화규 발효물의 항염 효과가 현저하다는 것을 확인하였다.
2) 리폭시게나아제(lipoxygenase) 활성 저해능
리폭시게나아제 활성 저해능 측정을 위해, 0.2M 붕산나트륨 완충액(sodium borate buffer, pH 9) 1mL, 리폭시게나아제 효소 용액(10,000u/mL) 100㎕ 및 제조예 1의 금화규 발효물 또는 추출물 시료 100㎕를 넣고 25℃에서 10분 동안 반응시켰다. 그 후 기질로 0.6mM 리놀렌산(linoleic acid)을 2mL 첨가하여 잘 혼합한 후 10분 동안 반응시키고, 반응 종료 후 234nm에서 흡광도 측정하였다. 측정값은 하기 식 3에 대입하여 리폭시게나아제 억제율을 계산하였다.
[식 3]
리폭시게나아제 억제율(%)={1-(b'-b)/(a'-a)}×100
a: 효소 무첨가구
a': 효소 첨가구
b: 효소 무첨가 및 시료 첨가구
b': 효소 및 시료 첨가구
그 결과, 도 3B에 개시된 바와 같이 본 발명의 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 리폭시케나아제 활성을 저해하는 효과가 현저히 증진되었다.
실시예 4. 미백 효과 확인
미백 효과는 티로시나아제 억제 분석으로 진행하였다.
제조예 1의 금화규 발효물 또는 추출물 0.1mL에 0.1M 인산 완충 용액(pH6.5)을 혼합한 후, 1.5mM L-티로신(L-tyrosine) 0.1mL 및 250mM 티로시나아제 0.1mL을 첨가한 다음 37℃에서 10분 동안 반응시킨 후 490nm에서 흡광도를 측정하여 하기 식 4에 대입한 다음 티로시나아제 억제 활성을 계산하였다.
[식4]
티로시나아제 억제율(%)=(1-시료첨가구 흡광도 값/무첨가구 흡광도 값)×100
그 결과, 도 4에 개시된 바와 같이 본 발명의 금화규 발효물은 금화규 추출물에 비해 티로시나아제 억제 활성이 현저히 증진되었다.
Claims (8)
- 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis)를 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 발효한, 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 금화규는 금화규 꽃인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 락토코쿠스 락티스는 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis) Ntr-LL1(KCTC 14593BP)인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 화장료 조성물.
- 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis)를 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 발효한, 금화규(Hibiscus manihot) 발효물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선용 건강기능식품 조성물.
- 1) 물에 금화규(Hibiscus manihot) 분말 및 글루코오스를 첨가한 후 100~150℃, 1.3~1.7 기압하에 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 18~26℃로 냉각 후, 락토코쿠스 락티스를 유산균용 액상 배지에 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양한 락토코쿠스 락티스 배양물을 1~10%(v/v) 접종하여 30~40℃에서 12~48시간 동안 배양하는 단계; 및
3) 상기 단계 2) 이후에, 배양액을 여과하는 단계;를 포함하는 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물의 제조방법. - 삭제
- 제6항의 제조방법으로 제조된 항산화, 항염, 미백 및 주름개선 효과가 증진된 금화규 발효물.
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| 네이버 블로그. 워터콜라겐 메이드미 골드 히비스커스(금화규) 리스토어링 크림, 2019.10.19.* |
| 염유정. 특이환경 유래 Bacillus sp.를 활용한금화규(Abelmoschus manihot L.) 발효 산물의 항산화 및 항염증효과 연구. 신라대학교 일반대학원 바이오과학과 이학석사 학위논문, 2021년2월* |
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