KR101744579B1 - 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현의 혼합 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물의 경우, 티로시나아제 활성을 저해하고 멜라닌 생합성을 억제하여 시너지 효과를 나타냄으로써 단독 추출물보다 더 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

Description

수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현의 혼합 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising mixture extract of Nymphaea tetragona, Chamomilla recutita flower, Moringa, Portulace oleracea for skin-whitening}

본 발명은 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

기미, 주근깨 등 피부에 생기는 색소 침착은 표피 내 멜라닌의 증가에 기인하고, 피부색을 결정하는 중요 요인도 멜라닌에 의한 것이다. 멜라닌은 표피 기저층에 존재하는 멜라노사이트 (Melanocyte) 내의 멜라노좀 (Melanosom)이라는 소기관에서 만들어진다. 즉, 자외선에 의하여 멜라노사이트의 유사분열이 일어나고 이어서 멜라노사이트가 활성화된다. 활성화된 멜라노사이트에서는 티로시나아제 (Tyrosinase)의 합성이 촉진되고 멜라닌의 생성이 항진되어 이를 표피 밖으로 운반, 배출하게 된다 (V. J. Hearing, M. Jimenez., Int. J. Biochem., 19(20), p1141, 1987; I. Koiso., Fragrance J., 6, p39, 1990).

자연적으로 생성되는 멜라닌은 알칼리 난용성의 흑색 멜라닌 (뉴멜라닌)과 알칼리 가용성의 황색 내지는 적색 멜라닌 (페오멜라닌)의 혼합물이다 (Y. Tomita., Fragrance J., 6, p20, 1990). 일반적으로 멜라닌 중합체라고 하면 뉴멜라닌을 지칭할 때가 많으며, Prota (G. Prota., J. Invest. Dermatol ., 75, p122, 1980)와 Pavel (S. Pavel., Cancer Detection and Prevention, 6, p311, 1983) 등의 연구에서 뉴멜라닌은 이제껏 생각되어 왔던 5,6-디하이드록시인돌 (5,6-Dihydroxyindole) 뿐만 아니라, 별개의 멜라닌 단량체인 5,6-디하이드록시인돌-2-카르보산 (5,6-Dihydroxyindole-2-carboxylic acid)이나 각종 멜라닌 중간 대사산물로부터 생성된다는 것이 밝혀졌다. 멜라노좀 내에서의 멜라닌의 생성과정은 티로신이 효소 티로시나아제에 의해 산화되어 도파 (DOPA) → 도파퀴논 (Dopaquinone) → 도파크롬 (Dopachrome) → 5,6-디하이드록시인돌 (5,6-Dihydroxyindole) → 인돌-5,6-퀴논 (Indole-5,6-quinone)이 되고, 이어서 인돌-5,6-퀴논의 중합에 의해 멜라닌이 생성되는 것으로 알려져 있다. 그 중에서 티로신-도파퀴논까지는 효소 티로시나아제가 관여하고, 그 이후는 자동산화의 기여가 크다고 알려져 있다. 일광욕 등에서 생기는 색소침착 즉, 흑화현상은 태양광선 중의 자외선에 의해 멜라닌 생성이 증가한 결과라는 것이 잘 알려져 있다.

현재까지 분명히 밝혀져 있는 멜라노사이트 내에서의 멜라닌 생성과정으로부터 멜라닌 생성억제의 작용기전을 살펴보면, 멜라노사이트에 대한 세포독성에 의해서 결과적으로 멜라닌 생성을 억제하는 기전, 멜라노사이트 내의 멜라닌 생성을 저해함으로서 멜라닌 생성 억제작용을 나타내는 기전의 두 가지로 대별된다. 최근에 발표된 사실에 의하면 티로시나아제뿐만 아니라 티로시나아제-릴레이티드 프로테인 1 (Tyrosinase related protein 1, TRP-1) 및 티로시나아제-릴레이티드 프로테인 2 (TRP-2, Dopachrome tautomerase)에 의해서도 멜라닌이 생성된다는 것이 새로이 밝혀져 이것들 역시 멜라닌의 생합성에 관여하는 중요한 효소인바, 이러한 효소들을 저해할 수 있는 물질을 개발하는 것도 피부 색소침착을 방지할 수 있는 방법이 될 수 있다 (Marmol V., FEBS Letter, 327, p307, 1993; Winder A.J., Pigment Cell Research, 7, p305, 1994).

현재까지 개발된 티로시나아제 활성 저해제로는 티로시나아제 활성자리의 구리이온에 대한 킬레이트 형성물질, 퀴논류를 페놀류로 환원시키는 비타민 C 또는 코직산 (Kojic acid) 등의 환원제, 그리고 티로시나아제 자체를 변형시키는 바이설파이트 (Bisulfite) 제제 등이 알려져 있다. 그 밖에도 하이드로퀴논 (Hydroquinone), 레티놀 (Retinol) 또는 하이드로코르티솔 (Hydrocortisol) 등이 티로시나아제 활성을 저해하여 미백 효과를 나타내는 물질로 알려져 있다. 이중 화학적 합성에 의해 얻어진 피부 미백물질은 피부에 미치는 독성으로 인한 부작용을 일으킬 가능성이 높다.

따라서 최근에는 천연물에서 추출하고 분리한 물질들이 보통 피부에 자극이 적고 수렴작용, 항균 작용과 같은 기타의 약리작용을 가지고 있다는 사실이 널리 알려짐에 따라 천연물을 이용하여 화장료 조성물을 제조하는 다양한 시도가 연구되고 있다.

상기와 같은 시도의 일환으로 본 발명자들은 자연의 여러 가지 천연물질들 중에서 피부 미백 효과를 갖는 물질을 탐색하였고, 수련, 캐모마일꽃, 모링가, 마치현을 이용하여 혼합 추출물을 제조하였다.

수련 (Nymphaea tetragona)은 진흙 속에서 자라면서도 청결하고 고귀한 식물로 알려져 있으며 원래 연못에서 자라지만 논밭에다 재배하기도 한다. 활성산소 소거능을 보여 피부의 과산화를 억제하는데 도움을 주고 피부 과민 반응의 진정 관리에 도움을 준다.

캐모마일꽃 (Chamomilla recutita (Matricaria) flower)은 쌍떡잎식물 국화과의 한해살이 풀로 영국이 원산지이며 전 세계에 분포되어 있다. 캐모마일의 이름은 땅에서 나는 사과라는 뜻을 가지고 있다. 캐모마일은 추위를 잘 견디며 햇빛이 잘 드는 양지바르고 배수가 좋은 사질토에서 잘 자라난다. 달콤하고 상쾌한 사과향을 지녀 차로 즐기거나 목욕, 미용 등에 이용된다. 피부에 컨디셔닝을 부여하고 피부 속 수분증발을 차단하여 건강하고 촉촉한 피부로 가꾸는데 도움을 주고 과도한 피지 분비를 조절하여 지성 피부를 깨끗한 피부로 가꾸는데 도움을 준다. 또한 외부의 유해한 물질로 인한 피부 과민반응을 완화 시키는데 관여하고 화장품에 자연의 향을 부여하는 역할도 한다.

모링가 (Moringa) 나무는 인도 북부지방이 원산지여며 인도에서는 일반화되어 있는 나무이다. 아연, 아미노산, 미네랄 등 다양한 영양소 (90종 이상)를 풍부하게 지녀 생명의 나무라고 불린다. 모링가 나무에는 46가지 이상의 항산화제 및 36가지 이상의 항염증 혼합물이 자연적으로 발생하기 때문에 최고의 천연 항산화 원천으로 꼽힌다. 높은 칼슘의 함유로 폐경이 이후의 중년 여성의 뼈를 강화시켜 주는데 상당히 도움을 주며, 마그네슘은 정서를 안정시키고 불안 증상 및 과민성, 기타 조울증에 도움이 된다.

마치현 (Portulace oleracea)은 쇠비름의 전초를 말린 것으로 여름부터 가을 사이에 전초를 채취하여 사용한다. 전통적으로 피부 연고 원료로 많이 이용되어 왔을 정도로 피부를 진정시키고 자극을 줄여주는 효과가 뛰어나다. 독성이 전혀 없는 식품으로서 옛 조상들이 즐겨먹던 음식 (장명채)이었다.

본 발명의 수련 추출물, 캐모마일꽃 추출물, 모링가 추출물, 마치현 추출물은 우수한 미백 효과를 나타내었고, 이들의 혼합 추출물은 각 원료별 추출물보다 더욱 우수한 미백 효과를 나타내어, 이에 본 발명을 완성하게 되었다. 각 원료별 추출물 보다 이들의 혼합 추출물이 더욱 우수한 미백 효과를 나타내는데 대하여, 혼합된 원료의 피부 진정 및 항염 효과로 인하여 미백 효과가 극대화된 것으로 생각된다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물의 경우, 티로시나아제 활성을 저해하고 멜라닌 생합성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 나타낼 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 티로시나아제 활성을 저해하고 멜라닌 생합성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 갖는 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 수련(Nymphaea tetragona), 캐모마일꽃(Chamomilla recutita (Matricaria) flower), 모링가(Moringa) 및 마치현(Portulace oleracea) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

종래에 상기 수련, 캐모마일꽃, 모랑가 및 마치현 각각 추출물의 미백 효과에 대해서 알려져 있으나, 본 발명자들은 상기 수련, 캐모마일꽃, 모랑가 및 마치현을 일정 비율로 혼합한 혼합 추출물의 경우, 단독 추출물보다 더 우수한 시너지 효과를 나타내는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 있어서, 상기 혼합 추출물은 종래에 사용되어진 어떠한 용매로도 추출할 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콘, 부틸렌글리콜, 글리세린 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것을 특징으로 한다.

또는, 상기 혼합 추출물은 조추출물의 고형분을 핵산, 메틸렌클로라이드, 에틸렌클로라이드 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 비극성 용매 또는 물, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 극성 용매로 추출한 가용추출물인 것을 특징으로 한다.

본원에서 사용된 용어, “조추출물”은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매로부터 추출되는 추출물을 포함한다.

본원에서 사용된 용어, “비극성용매 가용추출물”에는 헥산, 메틸렌클로라이드 또는 초산에틸 등으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 비극성 용매로 추출되는 추출물이 포함된다.

본원에서 사용된 용어, “극성용매 가용추출물”에는 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매 등으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 극성 용매로 추출되는 추출물이 포함된다.

이하, 본 발명의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 및 비극성 용매 가용 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

조추출물은 추출용매로서 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 군으로부터 선택되는 한 가지 이상의 용매를 이용하여 추출할 수 있다.

극성용매 가용 추출물은 상기 조추출물의 고형분로부터 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 한 가지 이상의 가용용매를 이용하여 추출할 수 있다. 바람직하게는 부탄올을 이용하여 추출할 수 있다.

비극성용매 가용 추출물은 상기 조추출물의 고형분로부터 핵산, 메틸렌클로라이드 또는 에틸렌클로라이드 등을 포함하는 비극성 용매를 이용하여 추출할 수 있다.

하나의 구체적 실시예에서, 조추출물은 이하 단계를 거쳐 수득할 수 있다. 건조된 원료에 그 부피의 1 내지 30배, 바람직하게는 10 내지 20배의 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 군으로부터 선택되는 한 가지 이상의 용매; 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 20 내지 100℃, 바람직하게는 20 내지 60℃의 추출 온도; 1 내지 30시간, 바람직하게는 3 내지 20시간; 1 내지 7회, 바람직하게는 1 내지 3회 추출; 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출, 바람직하게는 열수추출법을 이용하여 추출; 수득한 추출액을 여과하고 감압 농축한 뒤 동결 건조나 분무 건조하여 건조 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 하나의 구체적 실시예에서, 본 발명의 극성용매 및 비극성용매 가용추출물은 상기 실시예 과정을 통해 얻은 조추출물, 바람직하게는 원료의 에탄올 가용 조추출물에 그 부피의 2 내지 20배, 바람직하게는 10 내지 20배의 물을 분산시킨 후, 물과 동량의 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획시킴으로써 수득할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 혼합 추출물은 수련 : 캐모마일꽃 : 모링가 : 마치현을 다양한 혼합비율로 혼합하여 추출하여도 무방하나, 바람직하게는 1~2 : 1~5 : 1~2 : 1~2, 더욱 바람직하게는 1 : 2 : 1 : 1 중량비로 혼합하는 것을 특징으로 한다. 상기 혼합 비율로 추출하였을 때 피부 미백 효과가 더욱 우수하다는 것을 확인하였다.

본 실험예에 따르면, 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현의 단독 추출물보다 상기 중량비로 혼합한 혼합 추출물의 피부 미백 효과가 더욱 우수하다는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 혼합 추출물은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 20 중량% 포함되는 것을 특징으로 하나 이게 한정되지 않는다.

상기 화장료 조성물은 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성 용매 가용 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.

상기 추출물은 추출물의 유효 성분이 파괴되지 않거나 파괴가 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 용매에 따라 추출물의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로 알맞은 용매를 선택하여 사용하도록 한다.

추출 방법은 특별히 제한되지 않고 추출물의 종류와 추출하는 방법에 따라 예를 들어, 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 상온 추출, 열수 추출 등을 이용할 수 있다.

여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로 면, 나일론, 종이 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 이용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 크로마토그래피)에 의한 분리 과정을 추가로 포함할 수 있다.

여액을 건조하는 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 혼합 추출물은 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 본 발명의 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현의 혼합 추출물이 각각의 단독 추출물보다 티로시나아제 활성 제해 및 멜라닌 생합성 억제 효과가 더 우수한 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때, 본원발명의 혼합 추출물이 멜라닌 합성을 억제하는 시너지 효과로 인하여 단독 추출물보다 더 우수한 피부 미백 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다(실험예 1-4 참조).

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 추가로 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료 조성물에 배합되는 다른 성분을 배합할 수도 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B (중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜 (중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B (중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 중량%로 배합될 수 있다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 수련, 캐모마일꽃, 모링가 및 마치현 혼합 추출물은 멜라닌 생합성 과정에서 핵심으로 작용하는 효소인 티로시나아제 활성을 효과적으로 저해하고, 멜라노마 세포의 멜라닌 생합성을 억제하여 시너지 효과를 나타냄으로써 단독 추출물보다 우수한 피부 미백 효과를 나타낸다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1 내지 4: 각 원료별 추출물의 제조

하기 표 1의 원료 100 g을 50% 에탄올 1 kg에 넣고, 환류냉각장치를 연결하고 40℃에서 5 h 중탕 추출한 후, 2500 메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛ 필터로 여과하였다. 이후 여과액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거시켜 파우더 상태의 추출물을 수득하였다.

	원료	수득량 (g)
실시예 1	수련	6.2
실시예 2	캐모마일꽃	7.5
실시예 3	모링가	8.0
실시예 4	마치현	8.2

실시예 5: 원료의 혼합 및 조추출물 제조

실시예 5-1 내지 5-8: 혼합 추출물의 제조

하기 표 2의 혼합 원료 1 kg을 50% 에탄올 10 kg에 넣고, 환류냉각장치를 연결하고 40℃에서 5 h 중탕 추출한 후, 2500 메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛ 필터로 여과하였다. 이후 여과액을 감압회전증발기에서 용매를 완전히 제거시켜 파우더 상태의 혼합 추출물을 수득하였다.

	원료 혼합비 (수련:캐모마일꽃:모링가:마치현)	수득량 (g)
실시예 5-1	1 : 1 : 1 : 1	67
실시예 5-2	1 : 1.5 : 1 : 1	74
실시예 5-3	1 : 2 : 1 : 1	62
실시예 5-4	1 : 1.5 : 1.5 : 1	73
실시예 5-5	1 : 2 : 2 : 1	63
실시예 5-6	2 : 1 : 1 : 1	78
실시예 5-7	1 : 1 : 2 : 1	69
실시예 5-8	1 : 1 : 1 : 2	60

실시예 6: 비극성용매 가용 추출물 제조

6-1: 핵산 추출물의 제조

상기 실시예 5-3에서 수득한 혼합 추출물 10 g을 증류수 200 g에 현탁 시킨 후, 동량의 핵산 200 g을 사용하여 진탕 추출한 후 분획한다. 이후 2회 반복하고 핵산 층을 감압 농축하여 핵산 가용추출물 0.3 g (건조중량)을 수득하였다.

6-2: 메틸렌클로라이드 추출물의 제조

상기 실시예 6-1의 잔류 물층에 메틸렌클로라이드 400 g으로 진탕 추출한 후 분획한다. 이후 2회 반복하고 메틸렌클로라이드 층을 감압 농축하여 메틸렌클로라이드 가용추출물 0.3 g (건조중량)을 수득하였다.

6-3: 에틸아세테이트 추출물의 제조

상기 실시예 6-2의 잔류 물층을 에틸아세테이트 200 g으로 진탕 추출한 후 분획한다. 이후 2회 반복하고 에틸아세테이트 층을 감압 농축하여 에틸아세테이트 가용추출물 0.1 g (건조중량)을 수득하였다.

실시예 7: 극성용매 가용 추출물 제조

7-1: n-부탄올 추출물의 제조

상기 실시예 6-3의 잔류 물층을 수포화 n-부탄올 200 g으로 진탕 추출한 후 분획한다. 이후 2회 반복하고 n-부탄올층을 감압 농축하여 n-부탄올 가용추출물 2.2 g (건조중량)을 수득하였다.

7-2: 정제수 추출물의 제조

상기 실시예 7-1의 잔류 물층을 감압 농축하여 정제수 가용추출물 7.8 g (건조중량)을 수득하였다.

실험예 1: 티로시나아제 활성 저해 효과

본 실험예에서는 실시예 1 내지 실시예 7에 대하여 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하였다. 티로시나아제의 저해는 일반적으로 분광학적인 방법으로 측정하는데, 본 실험에서는 바니 등의 방법으로 실시하였다 (Vanni A., Annali di Chimica, 80(35), 1990). 티로시나아제는 감자나 버섯으로부터 정제되는 효소로서, 본 실험에서는 버섯류로부터 추출한 것을 사용하였다. 1 ㎖의 0.1 M 포타슘 포스페이트 (Potassium phosphate) 완충액 (pH 6.8), 1 ㎖의 0.3 ㎎/㎖ L-티로신 수용액 및 0.1 ㎖의 1250 unit/㎖ 머쉬룸 티로시나아제 (Mushroom tyrosinase)(시그마알드리치, USA)를 혼합한 후, 시료용액을 농도에 따라 각각 0.2 ㎖씩 첨가하여 37℃에서 10분간 효소 반응시켰다. 그 후 반응용액의 흡광도를 480㎚에서 측정 하고 (JASCO V-550, Japan), 하기 식 1에 따라 계산하여 시료의 효소 저해 정도를 계산하였다. 양성대조군으로는 실험군과 동일한 농도의 알부틴 (바이오랜드 사)를 사용하였으며, 실험군의 대조구로는 시료를 첨가하지 않은 반응용액을 사용하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

[식 1]

A: 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 480 ㎚에서의 흡광도

B: 시료를 첨가한 반응용액의 480 ㎚에서의 흡광도

	10 ㎍/㎖에서의 머쉬룸 티로시나아제 억제율 (%)
실시예 1	20.15
실시예 2	42.19
실시예 3	20.28
실시예 4	18.25
실시예 5-1	53.29
실시예 5-2	63.27
실시예 5-3	73.20
실시예 5-4	62.07
실시예 5-5	66.37
실시예 5-6	50.39
실시예 5-7	49.28
실시예 5-8	51.19
실시예 6-1	69.79
실시예 6-2	69.38
실시예 6-3	68.29
실시예 7-1	70.23
실시예 7-2	73.24
실시예 7-3	67.18
알부틴	40.67

상기 표 3에서 나타내는 바와 같이, 실시예 7-2의 혼합 추출물은 10 ㎍/㎖에서 73.24%로 가장 탁월한 티로시나아제 억제율을 보였다. 또한 실시예 5-3, 실시예 7-1의 10 ㎍/㎖에서 각각 73.20%, 70.23%로 40.67%인 양성대조군 보다 뛰어난 티로시나아제 억제율을 보였다. 따라서 본 발명의 혼합 추출물은 티로시나아제 억제 효과가 뛰어남을 알 수 있다.

실험예 2: B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 세포독성 측정

본 실험예에서는 실시예 1 내지 실시예 7에 대하여 B16-F1 멜라노마 세포 (CRL-6323, ATCC)의 세포생존율을 측정하였다 [MTT assay, J. Immunological Methods, 65, p55, 1983]. MTT assay는 살아있는 세포의 수를 측정함으로써 세포증식이나 독성에 많이 사용되는 실험법으로 살아있는 세포는 미토콘드리아 내에서 수용성이고 노란색의 염인 MTT (3-[4,5-dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)가 숙신산탈수소효소 (Succinate dehydrogenast 또는 mitochondrial dehydrogenase)에 의해 수불용성인 파란색의 포르마잔 (Formazan) 유도체로 환원되는 원리를 이용하는 것이다. 생성된 포르마잔 유도체는 용해제 (보통 Dimethylsulfoxide 사용)를 넣고 용해시킨 후 흡광도를 측정한다. B16-F1 멜라노마 세포를 10% FBS (Fetal bovine serum, Gibco)를 첨가한 DMEM (Dulbecco's modified eagle's medium, Gibco)에 1×10⁵ 세포의 밀도로 6 well plate (Nunc)에 접종하고 5% CO₂, 37℃의 인큐베이터에서 하루동안 배양하였다. 그 후 10% FBS가 함유된 새로운 DMEM 배지로 교체 후 시료를 농도별로 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후 기존의 배지를 제거하고 0.25 ㎎/㎖의 MTT 용액 2 ㎖을 처리하여 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 그 후 MTT 용액을 제거하고 DMSO (Dimethylsulfoxide) 2 ㎖을 첨가하여 MTT formazan을 용해시켜 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 시료를 투여하지 않고 실험하여 그것을 대조구로 하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 통계 처리하여 평균값을 구하였고, 그 결과는 하기의 표 4에 나타내었다.

[식 2]

A: 시료의 570 ㎚에서의 흡광도

B: 대조구의 570 ㎚에서의 흡광도

	실험 농도 (㎍/㎖)	세포생존율 (%)
실시예 1	10	100.37
실시예 2	10	101.07
실시예 3	10	96.35
실시예 4	10	99.32
실시예 5-1	10	100.92
실시예 5-2	10	99.99
실시예 5-3	10	100.73
실시예 5-4	10	98.27
실시예 5-5	10	94.84
실시예 5-6	10	99.83
실시예 5-7	10	95.22
실시예 5-8	10	99.83
실시예 6-1	10	101.27
실시예 6-2	10	98.12
실시예 6-3	10	99.03
실시예 7-1	10	99.58
실시예 7-2	10	100.06
실시예 7-3	10	101.43
알부틴	100	100.67
알부틴	250	95.77

그 결과, 상기 표 4에서 나타내는 바와 같이 혼합 추출물 및 각 원료별 추출물의 세포생존율은 100%에 근접하는 바, 세포독성을 나타내지 않음을 알 수 있었다.

실험예 3: B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생합성 억제 효과 측정

본 실험예에서는 실시예 1 내지 실시예 7에 대하여 멜라닌 생성 억제 효과를 측정하였다. B16-F1 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생성 (Melanogenesis) 저해 효과는 푸쿠다 등 (Fukuda, J. Soc. Cosmetic Chem., 42(361), 1991)의 방법을 변형하여 측정하였다. 모든 농도에 따른 웰 수는 3배수로 준비하였다. 구체적으로, B16-F1 멜라노마 세포를 10% FBS을 첨가한 DMEM에 1×10⁵ 세포의 밀도로 6 well plate에 접종하고 5% CO₂, 37℃의 인큐베이터에서 하루동안 배양시켰다. 그 후 10% FBS가 함유된 새로운 DMEM 배지로 교체 후 시료를 농도별로 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후 배지를 제거한 세포를 PBS (Phosphate buffer, saline) 2 ㎖로 세척하고 1N NaOH 0.5 ㎖을 처리하여 세포를 1.5 ㎖ tube로 수거하여 세포 내 멜라닌을 얻었다. 수거한 세포를 96 well plate에 옮긴 후 450 ㎚에서 흡광도를 측정하여 일정 단백질당 멜라닌양을 구하였다. 대조군으로는 100, 250 ㎍/㎖ 농도의 알부틴 (바이오랜드 사)을 사용하였으며, 실험군의 대조구로는 시료를 첨가하지 않은 반응액을 사용하였다. 그 결과는 하기의 표 5에 나타내었다.

[식 3]

CVa: 시료를 처리한 반응용액의 세포생존률

MCa: [(A-B)/A] x 100

A: 시료를 처리하지 않은 반응용액의 450 ㎚에서의 흡광도

B: 시료를 처리한 반응용액의 450 ㎚에서의 흡광도

	실험 농도 (㎍/㎖)	단위 세포당 멜라닌 생성 억제율 (%)
실시예 1	10	20.83
실시예 2	10	35.14
실시예 3	10	18.70
실시예 4	10	5.08
실시예 5-1	10	39.36
실시예 5-2	10	46.47
실시예 5-3	10	64.79
실시예 5-4	10	43.98
실시예 5-5	10	50.87
실시예 5-6	10	42.16
실시예 5-7	10	39.35
실시예 5-8	10	38.67
실시예 6-1	10	62.65
실시예 6-2	10	61.79
실시예 6-3	10	60.67
실시예 7-1	10	59.67
실시예 7-2	10	67.98
실시예 7-3	10	63.38
알부틴	100	26.88
알부틴	250	39.55

상기 표 5에서 나타난 바와 같이, 실시예 7-2의 혼합 추출물은 10 ㎍/㎖에서 67.98%로 가장 탁월한 멜라닌 생성 저해 효과를 보였다. 또한 실시예 5-3, 실시예 7-3의 10 ㎍/㎖에서 각각 64.79%, 63.38%로 39.55%인 양성대조군 보다 뛰어난 멜라닌 생성 저해 효과를 보였다. 따라서 본 발명의 혼합 추출물은 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백에 탁월한 효과가 있음을 알 수 있었다.

실험예 4: 혼합 추출물의 미백 임상실험

본 실험예에서는 실시예 1 내지 실시예 7 까지의 추출물 중 in vitro 에서의 미백 효과가 가장 좋았던 실시예 7-2에 대하여 in vivo 미백 효과를 확인하기 위하여 하기 표 6의 실시 제형예 1 (실험군) 및 비교 제형예 1 (대조군)의 로션을 건강한 피부를 가진 19~22세의 여성을 대상으로 인공색소 침착을 유도한 뒤 이중맹검법과 무작위화된 인체시험 방법을 적용하여 6주간 시험 제형을 사용하게 한 후 피부 미백 효과를 평가하였다.

구체적으로, 제형 사용 전과 사용 1주, 2주, 4주, 6주 후 시점에서 피부 미백 효과를 평가하였다. 평가 기준은 1~7점 척도를 사용하여 2명의 관찰자가 평가하였다. 표 7은 관찰자 1에 의한 육안 평가 결과이고, 표 8는 관찰자 2에 의한 육안 평가 결과이다. 시험군과 대조군을 시점별로 반복 평가하였고 시험 결과를 반복측정 분산분석법을 적용하여 군간, 시점별 차이를 검정하였다 (p<0.05).

<평가기준>

0 : 색소침착 없음 1 : 없거나 가벼운 색소침착

2 : 가벼운 색소침착 3 : 가볍거나 보통의 색소침착

4 : 보통의 색소침착 5 : 보통이거나 심한 색소침착

6 : 심한 색소침착 7 : 매우 심한 색소침착

원료	실시 제형예 1 (g)	비교 제형예 1 (g)
실시예 7-2	1.0	-
시토스테롤	1.7	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5	1.5
세테아레스	1.2	1.2
콜레스테롤	1.5	1.5
디세틸포스페이트	0.4	0.4
농글리세린	5.0	5.0
선플라우어오일	10.0	10.0
카르복시비닐폴리머	0.2	0.2
산탄검	0.3	0.3
방부제	미량	미량
향료	미량	미량
정제수	잔량	잔량

	주	N	평가값	S.E.Mean	S.D
대조군	0 주	10	6.47	0.1446	0.7672
	1 주	10	6.53	0.2142	0.8573
	2 주	10	5.98	0.1434	0.8373
	3 주	10	5.82	0.1756	0.8774
	4 주	10	5.79	0.1642	0.8671
시험군	0 주	10	6.45	0.1634	0.7258
	1 주	10	6.21	0.1267	0.7604
	2 주	10	5.34	0.1467	0.7437
	3 주	10	5.06	0.1519	0.7545
	4 주	10	4.29	0.1567	0.8344

	주	N	평가값	S.E.Mean	S.D
대조군	0 주	10	6.39	0.1483	0.6413
	1 주	10	6.33	0.1432	0.6526
	2 주	10	5.67	0.1518	0.6447
	3 주	10	5.35	0.1328	0.6363
	4 주	10	5.40	0.1368	0.6652
시험군	0 주	10	6.43	0.1281	0.6234
	1 주	10	6.21	0.1273	0.6198
	2 주	10	5.31	0.1529	0.6394
	3 주	10	4.98	0.1373	0.6467
	4 주	10	4.07	0.1998	0.6732

그 결과 상기 표 7 및 8에 의하면, 본 발명의 혼합 추출물이 첨가된 제형을 사용한 경우가 사용하지 않은 대조군에 비해 유의한 개선 효과를 보였다.

제형예 1: 유연 화장수 (스킨)의 제조

하기 표 9의 조성과 같이, 실시예 7-2에서 수득한 혼합 추출물을 함유한 유연 화장수 (스킨)를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 하기 원료 구성 중 본 발명의 혼합 추출물은 실시예 7-2에 한정되지 않고 실시예 1 내지 7 중 선택되는 어느 것 일 수 있다.

원료	함량 (g)
실시예 7-2	3.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유	1.0
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔량

제형예 2: 영양 화장수 (로션)의 제조

하기 표 10의 조성과 같이, 실시예 7-2에서 수득한 혼합 추출물을 함유한 영양 화장수 (로션)를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 하기 원료 구성 중 본 발명의 혼합 추출물은 실시예 7-2에 한정되지 않고 실시예 1 내지 7 중 선택되는 어느 것 일 수 있다.

원료	함량 (g)
실시예 7-2	1.0
시토스테롤	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세테아레스	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	10.0
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.3
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제형예 3: 영양크림의 제조

하기 표 11의 조성과 같이, 실시예 7-2에서 수득한 혼합 추출물을 함유한 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다. 하기 원료 구성 중 본 발명의 혼합 추출물은 실시예 7-2에 한정되지 않고 실시예 1 내지 7 중 선택되는 어느 것 일 수 있다.

원료	?t량 (g)
실시예 7-2	5.0
시토스테롤	4.0
폴리글리세릴 2-올레이트	3.0
세라마이드	0.7
세테아레스-4	2.0
콜레스테롤	3.0
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	22.0
카르복시비닐폴리머	0.5
트리에탄올아민	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제형예 4: 에센스의 제조

하기 표 12의 조성과 같이, 실시예 7-2에서 수득한 혼합 추출물을 함유한 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 하기 원료 구성 중 본 발명의 혼합 추출물은 실시예 7-2에 한정되지 않고 실시예 1 내지 7 중 선택되는 어느 것 일 수 있다.

원료	함량 (g)
실시예 7-2	1.0
시토스테롤	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세테아레스-4	2.0
콜레스테롤	3.0
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	22.0
카르복시비닐폴리머	0.5
트리에탄올아민	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

제형예 5: 파운데이션의 제조

하기 표 13의 조성과 같이, 실시예 7-2에서 수득한 혼합 추출물을 함유한 파운데이션을 통상의 방법에 따라 제조하였다. 하기 원료 구성 중 본 발명의 혼합 추출물은 실시예 7-2에 한정되지 않고 실시예 1 내지 7 중 선택되는 어느 것 일 수 있다.

원료	함량 (g)
실시예 7-2	1.0
밀납	2.0
사이클로메치콘	2.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	5.0
스테아린산	2.0
친유성 모노스테아린산 글리세린	3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	4.0
프로필렌글리콜	3.0
부틸렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	1.0
알루미늄마그네슘실리케이트	0.5
안료	12.0
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

Claims (6)

1. 수련(Nymphaea tetragona), 캐모마일꽃(Chamomilla recutita (Matricaria) flower), 모링가(Moringa) 및 마치현(Portulace oleracea) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콘, 부틸렌글리콜, 글리세린 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 수련 : 캐모마일꽃 : 모링가 : 마치현을 1~5 : 1~10 : 1~5 : 1~5 중량비로 혼합하여 추출하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 20 중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
5. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
6. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.