KR100614467B1 - 멜라닌 생성을 억제하는 등대풀, 목단피, 알로에혼합추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명의 혼합추출물은 멜라닌 생합성에 관여하는 티로시나제에 대한 탁월한 저해활성을 가져 멜라닌 생성을 억제하고, 또한 탁월한 자유라디칼 소거능을 가지므로 미백용 화장료 조성으로 유용하게 이용될 수 있다.

등대풀, 목단피, 알로에 ,미백, 멜라닌, 티로시나제, 화장료 조성물

Description

멜라닌 생성을 억제하는 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the extract mixture of Euphorbia helioscopia L., Paeonia suffruticosa Andr. and Aloe vera L. having inhibition activity of melanin synthesis}

본 발명은 등대풀, 목단피, 알로에를 동시에 적용하여, 세 원료의 시너지 효과에 의한 미백효과를 나타내는 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌, 카로틴, 헤모글로빈의 양에 따라 결정되며, 그 중 멜라닌이 가장 결정적인 요소이다. 멜라닌은 표피 내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라닌세포(melanocyte)에서 합성되고, 주변의 각질세포로 전이되어 피부색을 결정짓는다. 멜라닌이 비정상적으로 과잉 생산되면 기미나 주근깨를 생성하며, 이와 반대로 적게 생산되면 백반등과 같은 피부 병변이 유발된다. 색소 침착은 외부로부터 자외선, 염증 등의 각종 자극에 의해 발생되며, 이 색소침착의 정도는 표피 기저층에 존재하는 멜라닌세포가 반응한 양이다. 자외선에 의한 색소침착 메커니즘의 중심이 되는 것은 티로시나제(tyrosinase)이다. 외부의 여러 자극들은 티로시나 제 발현 촉진 인자로서 주목받고 있는 멜라닌세포 활성화 인자 및 염증계의 화학적 중개자로 있는 아라키돈산(arachidonic acid)의 단계적 연쇄반응 관련물질의 항진을 촉진시켜 색소침착을 유도한다. 또한 자외선 조사에 의해 생산이 항진되는 활성산소가 색소 생성 증진에 관여한다는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 멜라닌세포내의 멜라노솜(melanosome)이 케라틴세포(keratinocyte)로 이송되는 것이 멜라닌 배설구조로써 잘 알려져 있다. 최근, 색소침착은 이 멜라노솜이 케라틴세포로 이송되었을 때 색소침착으로 작용한다는 메카니즘이 보고 되어있다.

멜라닌세포의 활성화 인자는 케라틴세포로부터 α-MSH(melanocyte-stimulating hormone)와 ACTH(adrenocorticotrophin)가 멜라노코르틴 수용체(melanocortin receptor)를 중개하여 멜라닌세포의 활성화에 기여한다(Suzuki I. et al., J. Endocrinol., 137, p1627, 1996). 그리고 혈관내피 세포에서 생성되어 혈관수축작용을 하는 ET-1(Endothelin-1)이 PKC(protein kinase C)와 아데닐씨클라제(adenylcyclase)계를 활성화하여 멜라닌세포의 증식 및 티로시나제 활성의 항진에 작용하여 색소침착을 생성시키며(Imokawa G. et al., J. Invest. Dermatol., 105, p32, 1995), 최근 ET-1이 케라틴세포에서 UVB조사에 의해 생성된다는 것이 보고 되었다(Yada Y. et al., J. Biol. Chem., 266, p18352, 1991). 또 다른 인자로서 SCF(Stem cell factor)와 그 수용체로 있는 c-kit는 태생기의 멜라닌세포의 유주와 증식에 중요하게 작용한다는 것이 알려져 있다(Grabbe J. et al., Arch. Dermatol. Res., 287, p78, 1994).

염증계의 색소침착에 관해서는 아라키돈산 단계적 연쇄반응의 산물인 LTC4(LeukotrieneC4)가 멜라닌세포의 증식 촉진작용이 있다는 것이 보고 되어있고(Yoshida M. et al., J. Invest. Dermatol., 114, p334, 2000), 또 다른 염증계 중개자로써 히스타민에 의한 색소침착 야기작용이 있다는 것이 보고 되어있다(Tomita Y. et al., J. Dermatol. Sci., 6, p146, 1993).

활성 산소종의 색소생성에 관계되는 작용으로는 활성산소 중에서 제일 안정한 H₂O₂가 멜라노마 세포의 티로시나제의 레벨을 상승시키는 것이 확인되었다(Karg E. et al., J. Invest. Dermatol. 100, p209S, 1993). 이 작용은 H₂O₂의 전구체로 있는 ·O₂- 와 장해성이 더 큰 ·OH에 의해 티로시나제의 레벨을 상승시키는 작용이 확인되었다. 그리고 티로신 합성 율속단계에 있는 티로시나제에 의해 티로신이 도파(DOPA)로 하이드록실레이션(hydroxylation) 및 도파퀴논(DOPA quinone)으로 산화되는 과정에서 ·O2- 가 촉진작용을 하는 것이 밝혀졌다(Del Marmol V., J. Invest. Dermatol., 101, p871, 1993). 그리고 피부의 색소생성 제어인자로써 혈관확장작용이 있는 확산성 자유라디칼인 NO·가 피부순환계의 항진에 있어서 자외선 홍반에 관여하며(Warren B. et al., FASEB J., 8, p247, 1994), 또한 자외선에 의해 유도된 색소침착에 대해서도 NO·가 중요한 역할을 담당한다는 것이 보고 되어있다(Rmero-Graillet C. et al., J. Clin. Invest., 9, p635, 1997).

대극과 식물인 등대풀(Euphorbia helioscopia L.)은 다른 이름으로 택칠이라 하며 <<신농본초경>>에 오타운, 오봉초, 도독산, 양산초, 유장초, 묘아안정초라고도 한다. 원식물은 우리나라에 경기도 이남에 분포되어 있으며 중국에서는 신강, 티베트 등지를 제외한 전 지역에 분포한다. 주로 골짜기, 길가, 황야, 습지에서 자란다. 키가 10~30cm이며, 줄기 끝에 작은 꽃이 많이 피며 회색의 삭과가 있다. 한방의 효능으로는 이수소종, 화담산결, 살충하며 임상에서는 복수창만, 면목부종, 담음천해, 세균성 이질, 나력, 결핵성누관, 선창, 식도암, 위암, 임파육류의 치료에 쓰인다. 주요성분으로는 쿼세틴-5(Quercetin-5), 3-디-D-갈락토시드(galactoside), 파신(Phasin), 트리테르페노이드(Triterpenoids), 부티릭산(Butyric acid), β-디하이드로퓨코스테롤(Dihydrofucosterol), 포도당, 과당, 맥아당 등이 있다(조정원, 동양의학대사전, 10, p365, 1999).

작약과 식물인 목단피(Paeonia suffruticosa Andr.)는 다년생 낙엽 소관목으로 높이 1~1.5m이다. 모란의 근피로 3~5년생을 가을에서 초봄사이에 뿌리를 캐서 물에 씻은 후 목심을 버리고 햇볕에 말린 것이다. 목단피에는 페놀(phenol), 패오노시드(paeonoside), 패오노리드(paeonolide), 패오니플로린(paeoniflorin)이 함유되어 있다. 목단피의 주요 효능, 효과는 중추에 대한 작용으로 진정, 최면, 진통작용이 있고, 체온을 내리며, 티푸스균, 파라티푸스균에 의한 해열작용이 있다. 그리고 강압작용, 백색포도구균, 고초균, 대장균, 티푸스균 등에 대한 항균작용, 항바이러스작용이 있다(조정원, 동양의학대사전, 3, p365, 1999).

백합과 식물인 알로에(Aloe vera L.)는 알로에속의 상록 다년초를 통틀어 이르는 말로 다른 말로 노회, 또는 나무노회라고도 한다. 아프리카 원산의 다육 식물(多肉植物)이며 잎은 두꺼운 칼 모양이고, 가장자리에 가시가 있다. 주요 성분으로는 알로인(Aloin), 바발로인(Barbaloin), p-코우마린산(Coumarinic acid), 소량의 α-포도당, 일종의 알도펜토스(alpentose), 단백질 및 많은 칼슘 옥살레이트(Calcium oxalate)의 결정을 함유하고 있다. 약리작용으로는 대장에 대한 사하작용, 창상 치료작용, 항암작용을 갖는다(조정원, 동양의학대사전, 2, p365, 1999).

한편 아스코르빈산(특개평 4-9320), 하이드로퀴논(특개평 6-192062), 코직산(특개 56-7710), 알부틴(특개평 4-9315) 및 일부의 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나, 처방계 중에서의 안정성이 좋지 못해 분해 되어 착색되거나, 이취 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되어 있다. 그리고 티로시나제의 억제 효과는 입증되었으나, 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. 따라서 생체레벨과 유사한 멜라노마 세포 배양에 의한 저해 효과가 요구되고 있는 실정이다. 또한 하이드로퀴논은 발암성 물질로 규정되어 사용이 금지되고 있다. 코직산과 아스코르빈산은 매우 불안정한 물질이다. 소량 함유한 화장료를 실온에서 수주일동안 보관하면 갈변 현상이 발생한다. 식물성 천연물들은 합성원료에 비하여 안전성이 뛰어나고 여러 가지 유익한 성분들을 가지고 있을 뿐만 아니라 그 이미지가 좋아서 화장료 조성물 원료의 좋은 검색대상이 되고 있다.

본 발명은 한방제로 사용되고 있는 생약, 야채, 과일, 꽃 등의 식물 추출물 가운데 안정성이 뛰어나고 멜라닌 생성을 억제할 수 있어 미백효능을 가진 원료를 찾고자 하는 노력을 계속 해오는 가운데 등대풀, 목단피, 알로에를 동시에 적용할 경우 각각의 원료를 적용할 경우보다 월등히 증가된 미백효능을 갖는 조성을 발견하여 미백을 위한 화장품 천연소재로서의 활용 가능성을 확인하여 본 발명을 완성 하였다.

본 발명의 목적은 티로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 생성에 탁월한 억제효과를 나타내는 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유하며 안정성에 문제가 없는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 멜라닌 생성 억제효과를 갖는 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물의 바람직한 혼합 중량비(%)는 등대풀 1~20 : 목단피 1~10 : 알로에 1~5, 보다 바람직하게는 등대풀 5~15 : 목단피 1~4 : 알로에 1~2, 더욱더 바람직하게는 등대풀 6~8 : 목단피 2 : 알로에 : 1 로 혼합된 것이다.

상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜, 초산에칠, 부틸렌글리콜, 에테르, 클로로포름으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매에 가용한 추출물을 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 추출물은 등대풀 10 내지 70%, 목단피 10 내지 70%, 알로에 10 내지 20%를 건조중량비로 혼합한 후, 추출 용매로 정제수와 에탄올을 1 내지 30배, 바람직하게는 5~10배 부피량을 10 내지 100℃, 바람직하게는 40 내지 95℃의 추출 온도에서 0.5 내지 48시간, 바람직하게는 4 내지 20시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 냉침추출법으로 추출하거나, 또는 10 내지 100℃, 바람직하게는 5 내지 40℃의 추출 온도에서 0.5 내지 20일간, 바람직하게는 1 내지 15일간 침적, 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 침적시켜 추출한 후 추출액을 원심분리 및 여과, 농축하는 단계로 구성된 공정을 포함한다.

본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.01 내지 10 % 중량 백분율, 바람직하게는 0.1 내지 8 % 중량 백분율, 가장 바람직하게는 0.5 내지 5 % 중량 백분율로 포함한다.

상기 추출방법에 의해 얻어진 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물의 멜라닌 생합성에 관여하는 주요한 효소인 티로시나제에 대한 저해활성을 측정한 결과, 단독 추출물의 티로시나제 저해활성보다 탁월히 뛰어난 활성을 나타냈으며, 자유라디칼 소거 효능이 탁월하여 미백용 기능성 화장료 조성물로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. 또한 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유한 유연 화장수(스킨), 영양로션, 영양크림의 경우, 다양한 온도 조건에서도 안정성을 가지고 첩포 검사를 통해 안전성에도 문제가 없음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 포함하는 조성물은 피부 미백 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스 틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리 카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합 체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테 르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살 리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 피부 미백용 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파 운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정 성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 추출물 제조

1-1. 등대풀추출물 제조

등대풀 1kg을 70% 에탄올 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과하였다. 이 추출물을 50℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여 추출 파우더 45.8g을 수득하였다.

1-2. 목단피추출물 제조

목단피 1kg을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 2.6g을 수득하였다.

1-3. 알로에추출물 제조

알로에 1kg을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 53.4g을 수득하였다.

1-4. 혼합추출물(1)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 66.1g을 수득하였다.

1-5. 혼합추출물(2)

등대풀 200g, 목단피, 700g, 알로에 100g을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 82.7g을 수득하였다.

1-6. 혼합추출물(3)

등대풀 450g, 목단피, 450g, 알로에 100g을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 82.5g을 수득하였다.

1-7. 혼합추출물(4)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 상기 실시예 1-1과 같은 방법으로 추출 파우더 95.7g을 수득하였다.

1-8. 혼합추출물(5)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 30% 함수 1,3-BG 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성 시킨 후 와트만 여과지로 여과하여 추출물 8kg을 수득하였으며, 고형분은 1.1%였다.

1-9. 혼합추출물(6)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 30% 함수 1,2-PG 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 4℃에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 여과지로 여과하여 추출물 8kg을 수득하였으며, 고형분은 0.9%였다.

1-10. 혼합추출물(7)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 메탄올 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여 추출 파우더 37g을 수득하였다.

1-11. 혼합추출물(8)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 부탄올 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여 추출 파우더 41g을 수득하였다.

1-12. 혼합추출물(9)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 초산 에칠 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 건조하여 추출 파우더 29g을 수득하였다.

1-13. 혼합추출물(10)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 메칠렌 클로라이드 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 농축액 28g을 수득하였다.

1-14. 혼합추출물(11)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 에테르 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 농축액 15g을 수득하였다.

1-15. 혼합추출물(12)

등대풀 700g, 목단피, 200g, 알로에 100g을 클로로포름 10ℓ에 넣고 상온에서 5일간 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고, 50℃에서 회전 감압 증발기로 농축액 11g을 수득하였다.

실시예 2. 유연 화장수(스킨)의 제조

하기 표 1에서 사용한 혼합추출물은 실시예 1-4의 시료를 30% 함수 부틸렌 글리콜(butylene glycol)에 1 중량 %되게 혼화하여 사용하였다.

번 호	원 료	단위 (중량%)
1	실시예 1-4의 혼합추출물	4.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌글리콜	2.0
4	폴리옥시에칠렌(60) 경화피마자유	0.5
5	에탄올	6.0
6	향료, 방부제, 색소	적량
7	정제수	잔량
	합 계	100.0

실시예 3. 영양로션의 제조

하기 표 2에서 사용한 혼합추출물은 실시예 1-4의 시료를 30% 함수 부틸렌 글리콜(butylene glycol)에 1 중량%되게 혼화하여 사용하였다.

번호	원 료	단위 (중량%)
1	실시예 1-4의 혼합추출물	10.0
2	스쿠알란	4.0
3	유동파라핀	3.0
4	카프릴릭/카프릭 글리세라이드	4.0
5	스테아린산	1.0
6	세틸알코올	1.0
7	글리세릴모노스테아레이트	0.5
8	폴리솔베이트 60	1.5
9	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
10	글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트	1.0
11	글리세린	3.0
12	부틸렌글리콜	2.0
13	카보머	0.1
14	트리에탄올아민	0.1
15	방부제, 색소, 향료	적량
16	정제수	잔량
	합 계	100.0

실시예 4. 영양크림의 제조

하기 표 3에서 사용한 혼합추출물은 실시예 1-4의 시료를 30% 함수 부틸렌 글리콜(butylene glycol)에 1 중량%되게 혼화하여 사용하였다.

번호	원 료	단위 (중량%)
1	실시예 1-4의 혼합추출물	10.0
2	스쿠알란	5.0
3	유동파라핀	3.5
4	카프릴릭/카프릭 글리세라이드	4.5
5	스테아린산	1.5
6	세틸알코올	2.0
7	밀납	1.0
8	바셀린	2.0
9	글리세릴모노스테아레이트	1.0
10	폴리솔베이트 60	1.5
11	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
12	글리세릴스테아레이트/피이지-100 스테아레이트	1.5
13	글리세린	5.0
14	부틸렌글리콜	5.0
15	카보머	0.2
16	트리에탄올아민	0.2
17	방부제, 색소, 향료	적량
18	정제수	잔량
	합 계	100.0

실험예 1. 머쉬룸 티로시나제(mushroom tyrosinase) 활성 저해 실험

상기 실시예 1-1 내지 1-15를 시료로 사용하여 머쉬룸 티로시나제 활성 저해효과를 바니 등의 방법(A. Vanni, Annali di Chimica, 80, p35, 1990)을 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 0.1 M 포타슘 포스페이트(potassium phosphate) 완충액(pH 6.8) 1.0 ㎖, 0.3 ㎎/㎖ L-티로신 수용액 1.0 ㎖, 1,250 유닛/㎖ 머쉬룸 티로시나제(T-7755, 시그마사, 미국) 0.1 ㎖를 혼합한 후 여기에 시료용액을 농도에 따라 각각 0.2 ㎖를 첨가하여 37℃에서 10분간 효소반응을 진행시키고, 양성대조군으로 알부틴(바이오랜드사)을 사용하였다. 반응용액의 흡광도를 480nm에서 측정하여 하기 수학식1로 티로시나제 활성 억제 효과를 계산한 후, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

머쉬룸 티로시나제 활성 억제율(%) = [1-(A-A')/B)] x 100

(A : 시료를 첨가한 반응용액의 480nm에서 흡광도, A' : 효소를 첨가하지 않은 반응용액의 480nm에서 흡광도, B : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 480nm에서 흡광도)

머쉬룸 티로시나제 활성 억제효과

시 료	반응액중에 함유시킨 시료의 최종 농도(㎍/㎖)	머쉬룸 티로시나제 저해율(%)
알 부 틴	500	92.6
	50	25.1
실시예 1-1	500	71.5
	50	14.5
실시예 1-2	500	57.7
	50	16.8
실시예 1-3	500	26.2
	50	2.4
실시예 1-4	500	82.3
	50	28.5
실시예 1-5	500	70.5
	50	19.8
실시예 1-6	500	75.4
	50	24.3
실시예 1-7	500	56.7
	50	9.4
실시예 1-8	500	48.6
	50	8.4
실시예 1-9	500	42.3
	50	5.8
실시예 1-10	500	37.1
	50	6.1
실시예 1-11	500	40.2
	50	9.7
실시예 1-12	500	56.7
	50	16.7
실시예 1-13	500	33.0
	50	5.6
실시예 1-14	500	31.2
	50	2.4
실시예 1-15	500	30.0
	50	1.3

그 결과, 실시예 1-4와 실시예 1-6이 피부 미백제로 통상적으로 사용되는 알부틴과 유사하거나 뛰어난 머쉬룸 티로시나제 저해 활성을 나타냄을 확인하였다.

실험예 2. B16 멜라노마(melanoma) 세포를 이용한 세포 생존율 측정

상기 실시예 1-1 내지 1-15를 시료로 사용하여 B16 멜라노마 세포의 세포생존율을 측정하였다. 구체적으로, B16 멜라노마 세포(ATCC CRL6323)를 10% 소혈청과 1%의 항생제를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium) 배지에 1x105 세포의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO₂, 37℃에서 배양시켰다. 그 후 새 DMEM 10% 배지로 갈아준 후 시료를 농도별로 웰에 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후 배지를 제거하고 0.33 mg/㎖의 MTT(3-[4,5- dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide, M5655, 시그마사, 미국)를 1㎖ 처리하여 37℃에서 4시간 반응시키고, 그 후 MTT를 제거한 후 DMSO(dimethylsulfoxide)를 1㎖ 첨가하여 발색정도를 575nm에서 흡광도로 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 통계 처리하여 평균값을 사용하였으며 결과는 표 5에 나타내었다.

B16 멜라노마 세포를 이용한 세포 생존율

시 료	반응액중에 함유시킨 시료의 최종 농도(㎍/㎖)	세포 생존율(%)
알 부 틴	100	98
	50	96
실시예 1-1	100	95
	50	97
실시예 1-2	100	94
	50	98
실시예 1-3	100	99
	50	99
실시예 1-4	100	98
	50	97
실시예 1-5	100	97
	50	97
실시예 1-6	100	92
	50	90
실시예 1-7	100	89
	50	91
실시예 1-8	100	90
	50	95
실시예 1-9	100	92
	50	90
실시예 1-10	100	81
	50	83
실시예 1-11	100	86
	50	90
실시예 1-12	100	54
	50	56
실시예 1-13	100	48
	50	51
실시예 1-14	100	40
	50	56
실시예 1-15	100	34
	50	32

그 결과, 본 발명의 실시예 1-1, 실시예 1-2, 실시예 1-3, 실시예 1-4, 실시예 1-5가 피부 미백제로 통상적으로 사용되는 알부틴과 거의 균등하거나 뛰어난 세포 생존율을 나타냄을 확인하였다.

실험예 3. B16 멜라노마(melanoma) 세포를 이용한 멜라닌(melanin) 생합성 억제효과 측정

상기 실시예 1-1 내지 1-15를 시료로 사용하여 B16 멜라노마 세포에서 멜라노지네시스(melanogenesis) 저해 효과를 매다와 푸쿠다의 방법(Maeda, Fukuda, J. Soc. Cosmetic Chem., 42, p361, 1991)을 변형하여 측정하였다.

B16 멜라노마 세포(ATCC CRL6323)를 10% 소혈청과 1%의 항생제를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's Medium)에 1x105 세포의 밀도로 접종한 후 배양시켰다(5% CO₂, 37℃, 24시간). 그 후 α-MSH(melanocyte stimulating hormone; 멜라닌세포자극호르몬, 0.34 ㎍/㎖, 시그마사, 미국)가 처리된 DMEM 10% 배지로 갈아준 후 시료를 농도별로 웰에 처리하여 3일간 배양하였다. 3일 후 1.5 ㎖ 튜브에 배지를 수거하고 세포들을 트립신으로 처리하여 떼어낸 후 배지를 수거한 튜브로 옮겼다. 3,000 rpm에서 30분 동안 원심분리하여 상층액을 버리고 1N NaOH 250 ㎕를 처리하여 끓는 물에서 10분 처리 후 가볍게 원심분리하였다. 다시 10분간 초음파 분해(sonication)하여 완전히 멜라닌을 용해한 후 475 nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌 양을 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 통계 처리하여 평균값을 사용하였으며 결과는 표 6에 나타내었다.

B16 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생합성 억제 효과

시 료	반응액중에 함유시킨 시료의 최종 농도(㎍/㎖)	멜라닌 생합성 억제효과(%)
알 부 틴	100	41.0
	50	16.4
실시예 1-1	100	32.8
	50	5.4
실시예 1-2	100	26.8
	50	4.1
실시예 1-3	100	7.3
	50	2.8
실시예 1-4	100	76.3
	50	20.0
실시예 1-5	100	23.1
	50	3.6
실시예 1-6	100	29.8
	50	13.2
실시예 1-7	100	50.4
	50	15.0
실시예1- 8	100	49.6
	50	13.3
실시예 1-9	100	26.9
	50	11.7
실시예 1-10	100	20.9
	50	5.1
실시예 1-11	100	20.3
	50	6.0
실시예 1-12	100	23.1
	50	10.9
실시예 1-13	100	20.0
	50	3.60
실시예 1-14	100	24.9
	50	5.1
실시예 1-15	100	21.1
	50	3.9

B16 멜라노마 세포를 이용한 멜라닌 생합성 억제효과를 측정한 결과, 본 발명의 혼합추출물 중 하나인 실시예 1-4는 피부 미백제로 통상적으로 사용되는 알부틴보다 뛰어난 멜라닌 생합성 억제효과를 나타냄을 확인하였다.

실험예 4. 자유라디칼(free-radical) 소거 효능 실험

상기 실시예 1-1 내지 1-15를 시료로 사용하여 푸지타(Fujita) 등의 방법을 개선한 것으로, 안정한 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질 라디칼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)을 사용하였다. 0.2 mM 의 디페닐-2-피크릴히드라질 (DPPH) 용액 1㎖ 에 시료를 각 농도별로 2㎖ 을 첨가하고, 상온에서 10 분간 반응 시킨 후, 525 nm 에서 최대 흡광도를 측정하여 자유라디칼 소거효과(%)를 구하였다. 계산은 하기 수학식 2를 따랐으며 결과는 표 7에 나타내었다.

자유라디칼 소거능(%) = [1-(A-A')/B)] x 100

(A : 시료를 첨가한 반응용액의 525nm에서 흡광도, A' : DPPH를 첨가하지 않은 반응용액의 525nm에서 흡광도, B : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 525nm에서 흡광도)

혼합추출물의 자유라디칼 소거작용 효과

시 료	반응액중에 함유시킨 시료의 최종 농도(㎍/㎖)	자유라디칼 소거 효과(%)
알 부 틴	100	24.3
	10	6.7
실시예 1-1	100	47.6
	10	12.4
실시예 1-2	100	68.9
	10	11.5
실시예 1-3	100	16.1
	10	2.1
실시예 1-4	100	79.3
	10	34.1
실시예 1-5	100	54.2
	10	15.8
실시예 1-6	100	68.6
	10	26.4
실시예 1-7	100	39.1
	10	5.7
실시예 1-8	100	24.6
	10	6.6
실시예 1-9	100	22.8
	10	8.1
실시예 1-10	100	24.3
	10	3.9
실시예 1-11	100	28.1
	10	5.5
실시예 1-12	100	21.8
	10	13.4
실시예 1-13	100	20.9
	10	6.3
실시예 1-14	100	22.6
	10	4.8
실시예 1-15	100	25.4
	10	3.9

상기 실험 수행의 결과, 표 7에서 보는 바와 같이 실시예 1-4에서 수득한 추출물이 다른 단독 추출물보다 우수한 자유라디칼 소거효과를 보였다.

실험예 5. 인체 첩포시험(Patch test)

본 발명에 따른 상기 조성물에 대하여 피부 자극 정도를 알아보기 위하여, 실시예 1-4에 따른 미백 화장료에 대한 피부 첩포시험을 실시하였다. 피검자는 20~50세의 시험 부위에 피부 질환이 없는 사람으로 선정하였으며 총 15명에게 실시하였다. 첩포 부위인 상박부를 70% 에탄올로 닦아내고 건조시킨 후, 핀챔버(fin chamber)를 사용하여 바셀린을 블랭크로, 실시예 2의 유연 화장수, 실시예 3의 영양 로션, 실시예 4의 영양 크림을 각각 0.02g씩 가하여 인체 상박부에 24시간 첩포하고, 첩포 제거 후 1시간 이내에 피부반응을 검사하고, 다음날(48시간 후) 다시 검사하였다. 피부 반응 판정은 표 8의 검사기준에 의해 판정하고, 피부 자극 유발 가능성의 평가는 다음 수학식 3으로부터 계산된 평균반응률로 하였으며, 실시예 1-4에 따른 미백 화장료에 대한 피부 첩포시험 결과를 표 9에 나타내었다.

평균반응률(%) = [Σ(24시간 후 반응 피검자수 × 점수) + Σ(48시간 후 반응 피검자수 × 점수)] × 100 / (총 검사횟수 × 최대점수 × 전체피검자수)

인체 첩포시험의 검사 기준

피부반응	점수
-	0	반응없음
±	1	미약한 양성 반응 (홍반)
+	2	양성 반응 (홍반)
++	3	강한 양성 반응 (홍반, 부종)
+++	4	심한 양성 반응 (홍반, 부종, 수포)

인체 첩포시험의 검사 결과

시험물질	24시간 후 반응 있는 피검자수(명)					48시간 후 반응 있는 피검자수(명)					평균반응률(%)
	0	1	2	3	4	0	1	2	3	4
처방예1	15	0	0	0	0	15	0	0	0	0	0
처방예2	15	0	0	0	0	15	0	0	0	0	0
처방예3	15	0	0	0	0	15	0	0	0	0	0

안정성 시험 결과 실시예 1-4를 포함하는 조성물은 상온, 냉장, 고온에서 안정한 물질임을 확인하였다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물은 멜라닌 생합성에 관여하는 티로시나제에 대한 탁월한 저해활성을 가져 멜라닌 생성을 억제하고, 또한 탁월한 자유라디칼 소거능을 가지므로 미백용 화장료 조성으로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (6)

1. 등대풀, 목단피, 알로에 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물.
2. 제 1항 있어서, 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜, 초산에칠, 부틸렌글리콜, 에테르, 클로로포름으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 화장료 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물의 혼합 건조 중량비(%)가 등대풀 1~20 : 목단피 1~10 : 알로에 1~5 의 배합비로 함유됨을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제 3항에 있어서, 상기 추출물의 혼합 건조 중량비(%)가 등대풀 5~15 : 목단피 1~4 : 알로에 1~2 의 배합비로 함유됨을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린 젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 ~ 5 % 중량 백분율로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.