KR100696294B1 - 멜라닌 생성을 억제하는 녹나무 추출물을 함유하는 미백용화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 녹나무(Cinnamomum camphora Sieb.) 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명의 녹나무 추출물 및 극성용매 분획물은 멜라닌 생합성에 관여하는 타이로시나제에 대한 탁월한 저해활성을 가지며 멜라닌 생성을 억제하므로 미백용 화장료 조성으로 유용하게 이용될 수 있다.

녹나무, 미백, 멜라닌, 타이로시나제, 화장료 조성물

Description

멜라닌 생성을 억제하는 녹나무 추출물을 함유하는 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the extract of Cinnamomum camphora Sieb. having inhibition activity of melanin synthesis}

도 1은 녹나무 추출물 및 분획물 제조공정을 나타낸 도이며,

도 2는 농도별 녹나무 극성용매분획물이 멜라닌 생성세포의 멜라닌 생성량과 세포 생존율에 미치는 영향을 나타낸 도이며,

도 3은 녹나무 분획물의 TLC 패턴을 나타낸 도이다.

본 발명은 녹나무 조추출물 및 극성용매분획물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부흑화(melanogenesis)는 피부 세포내에 있는 멜라닌 색소생성세포 (melanocyte)에서 자외선 등의 자극에 대한 방어 기작으로 멜라닌 생성활동이 증가되고 이로 말미암아 만들어진 다량의 멜라닌이 각질형성세포(keratinocyte)로 전이 되어 피부표피층(epdermis)에 축척된 결과이다. 비록 멜라닌이 피부보호작용을 하나 피부의 과색소침착은 기미, 주근깨, 피부염증 후의 피부흑화, 노인성 색소반점 등을 일으키며 이로 인해 당사자에게 미용상 불편뿐만 아니라 정신적으로 부정적인 영향을 미쳐 사회활동에 불편을 초래하기도 한다. 따라서 최근에는 이러한 문제점을 예방 및 개선하기 위한 여러 미백용 화장품, 의약품 등이 개발되어 시판되고 있다.

화장품으로서의 미백제의 연구는 최근 정서적으로 흰 피부를 선호하는 동양권의 생활수준 향상과 더불어 피부흑화가 자외선에 의한 피부노화로 인식되면서 그 필요성이 점차 증대되고 있다. 90년도 이후, 아르부틴, 코지산, 비타민 C 및 그 유도체 등이 개발되어 이를 함유한 미백화장품이 시판되고 있으나 실질적인 임상효과는 만족스럽지 못한 실정이다.

또한, 한편으로는 독성이 상대적으로 적고 자연친화적인 미백화장품을 개발하기 위하여 미백작용을 갖는 생약을 탐색하고 이를 이용하려는 연구도 시행되고 있다. 이러한 연구를 통하여 수종의 생약들이 도출되어 있으며 그 예로, 한국특허공고번호 제 1991-8660호에는 닥나무 추출물을 함유한 미백화장료가 공개되었고, 한국특허공고번호 제 1991-11645호에는 호장근 추출물을 함유한 미백화장료가 공개되었으며, 한국특허공고번호 제 1993-28783호에는 상백피 추출물을 함유한 미백조성물 등이 공개되어 있고, 최근에는 뽕나무로부터 분리된 멜베린을 함유하는 미백화장료가 한국특허 공개공보 제 1997-47260호에 공개되어 있다.

미백제 개발에 있어서 멜라닌 색소생성 과정의 첫 단계인 타이로시나제에 의한 타이로신의 산화 억제기능에 대한 부분이 하나의 주요한 초점으로 여겨지고 있다. 따라서 시험관내 실험(in vitro)에서 타이로시나제 활성 억제제를 선별하는 것이 중요한 미백제 개발수단이다. 현재 사용되고 있는 아르부틴, 코지산, 비타민 C 등 또한 타이로시나제 억제제로써 도출되어 폭넓게 사용되고 있다.

따라서 본 발명에서는 타이로시나제 활성억제효과를 기초로 하여 동시에 멜란-에이(melan-A) 세포주를 이용한 세포독성과 멜라닌 생성억제도 측정 등의 방법으로써 위와 같은 문제점을 보완하여 새로운 신기능성 미백제를 선별하고자 하였다.

본 발명자들은 천연에 존재하는 천연자원들로부터 미백작용이 탁월한 활성이 기대되는 식물을 탐색하던 중, 녹나무 추출물이 미백작용 관련 효소인 타이로시나제의 활성 저해물질일 뿐만 아니라 멜라닌 색소의 생성을 억제한다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

녹나무(Cinnamomum camphora Sieb.)는 우리나라에서도 제주도에서만 자라는 나무로(Lee, N. H. et al., Kor. J. Pharmacogn., 32(3), pp175 - 180, 2001) 장목 또는 예장 나무라고도 부르며 겨울에도 잎이 떨어지지 않는 상록활엽수이다. 녹나무과에 속하는 식물로서 높이 20 m, 흉고 직경 2 m에 이르며 병해충이 없고 생육이 좋고 수명이 긴 특징이 있다. 녹나무에 들어 있는 향기 성분은 캄파, 사프롤, 씨네올 등의 정유성분으로 녹나무 목질과 잎, 열매에 1 % 가량 들어 있으며 정유는 나무줄기를 토막내어 수증기로 증류하여 얻는다(Miyazawa, M. Y. et al., Nat. Prod. Lett., 15(1), pp63 - 69, 2001; Yang, Y. H. et al., Korean J. Medicinal. Crop. Sci., 10(2), pp20 - 66, 2002). 이렇게 해서 얻은 정유를 '장뇌'라 부르며, 민간에서는 신경쇠약, 간질, 방광염, 신우신염 등에 치료약으로 쓰이고 흥분제나 강심제로도 널리 알려져 있다. 특히 일본에서는 장뇌를 매우 귀중히 여겨 우리나라의 인삼처럼 국가 전매품으로 취급하고 있으며, 제주도에서는 녹나무가 민간에서 암 치료약으로 사용되어 왔다. 그러나 녹나무의 이러한 성분의 생리 활성에 대한 보고는 거의 없는 실정이다.

따라서, 본 발명에서는 녹나무 조추출물 및 극성용매분획물이 멜라닌 생합성에 관여하는 타이로시나제에 대한 탁월한 저해활성을 가지며 멜라닌 생성을 억제효과를 나타냄으로써 화장품 천연소재로서의 활용 가능성을 확인하여 본 발명을 완성하였다

본 발명의 목적은 타이로시나제 활성을 저해하여 멜라닌 생성에 탁월한 억제효과를 나타내는 녹나무(Cinnamomum camphora Sieb.) 추출물을 포함하는 미백용 화장료 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 녹나무 조추출물 및 극성용매분획물 및 비극성용매분획물을 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 조추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 부터 선택된 극성 용매에 가용한 추출물을 의미한다.

상기 극성용매분획물은 물, 메탄올, 부탄올, 메틸렌클로라이드 또는 이들의 혼합용매로 선택되어진 용매, 바람직하게는 부탄올 및 메틸렌클로라이드-메탄올 혼합용매로부터 선택된 분획물이고, 상기 비극성용매분획물은 에틸아세테이트, 헥산 및 클로로포름과 같은 비극성용매로부터 선택된 분획물이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 녹나무 추출물은 물로 세척하여 음건후, 그 중량의 약 1 내지 30배, 바람직하게는 약 10 내지 20배 부피의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:0.2 내지 1:3의 혼합비를 갖는 혼합용매, 바람직하게는 80% 메탄올로 10 내지 100 ℃, 바람직하게는 20 내지 50 ℃의 추출 온도에서 약 0.5 내지 48시간, 바람직하게는 2 내지 36시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법으로, 바람직하게는 냉침추출법으로 수회 반복 추출한 후 추출액을 원심분리 및 여과, 농축한 다음 동결건조기로 건조하여 본 발명의 녹나무 조추출물을 얻는 제 1단계;

상기의 조추출물을 물에 현탁하여 순차적으로 헥산, 클로르포름, 에틸아세테이트와 같은 비극성용매, 바람직하게는 헥산과 에틸아세테이트에 용해시킨 후, 분액 깔대기로 분획 및 여과하여 헥산 가용추출물 및 에틸아세테이트 가용추출물을 얻는 제 2단계;

이어서 순차적으로 수층을 부탄올, 물 등과 같은 극성 용매를 사용하여 분획 및 여과하고, 부탄올 가용추출물 및 물 가용추출물을 얻는 제 3단계;

상기 극성용매가용부를 메틸렌클로라이드-메탄올 혼합용매를 용출용매로 하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 용출물을 박층 크로마토그래피(TLC 실리카 겔)의 패턴에 따라 1 내지 7개, 바람직하게는 2내지 5개의 분획으로 분리하여 그 분획물을 얻는 제 4단계로 구성된 분리공정을 포함한다.

또한 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다(Harborne, J.B., Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed., pp6-7, 1998).

본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 및 분획물을 0.01 내지 10 % 중량 백분율, 바람직하게는 0.1 내지 8 % 중량 백분율, 가장 바람직하게는 0.5 내지 5 % 중량 백분율로 포함한다.

상기 추출방법에 의해 얻어진 녹나무 조추출물 및 극성용매 분획물의 멜라닌 생합성에 관여하는 주요한 효소인 타이로시나제에 대한 저해활성을 측정한 결과, 녹나무 추출물이 탁월한 타이로시나제 저해활성을 나타냄으로써, 멜라닌 생성을 강력하게 억제하여 미백용 기능성 화장료 조성물로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 녹나무 조추출물 및 극성용매 분획물을 포함하는 조성물은 피부 미백 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에 틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록 산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히 드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타 우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 미백용 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로 필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 참고예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 참고예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 녹나무 추출물 제조

1-1. 녹나무 조추출물 제조

녹나무의 잎을 채취하여 음건한 다음 마쇄기로 갈아 미세 분말로 한 후, 미세 분말 시료 50g을 80% 메탄올 1ℓ로 24 ℃에서 24시간동안 추출한 후 진공 여과하여 여과액을 회수하는 과정을 2회 반복하여 여과액을 모은 후, 감압 농축하여 조 추출물로써 녹나무 메탄올 추출물 23.8g을 수득하였다.

1-2. 녹나무 용매별 분획물 제조

실시예 1-1에서 얻은 조추출물인 녹나무 메탄올 추출물 23.8 g을 계통적 추출방법을 이용하여 하기와 같이 녹나무 용매별 분획물을 수득하였다.

먼저, 조추출물인 녹나무 메탄올 추출물 23.8 g에 물 1ℓ를 첨가하여 현탁용액을 만들었다. 현탁용액에 헥산, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물을 각각 1ℓ씩 첨가하여 용해한 다음 분획여두를 통해 극성에 따른 용매별 분획물을 제조하여 헥산 분획물; 0.965g, 에틸아세테이트 분획물; 2.031g, n-부탄올 분획물; 3.987g, 물 분획물; 1.870g 을 얻었다.

1-3. n-부탄올 분획물의 소분획물 제조

상기 실시예 1-2의 녹나무 n-부탄올 분획물을 세파덱스 -LH20 (Sephadex LH20)으로 충진된 칼럼에 로딩한 후, 메틸렌클로라이드 : 메탄올 (1 : 1, v/v) 용매를 사용하여 분리하였다. 용출된 물질을 전개용매 클로로포름 : 메탄올 : 물 (10 : 5: 0.2, v/v)을 사용하여 TLC를 실시하였다. 도 3에서 보이는 바와 같이 TLC상에서 R_f치가 비슷한 분획물 B1(R_f 0.70~ 0.80), B2(R_f 0.25~ 0.35), B3(R_f 0.01~ 0.08)인 단일분획 3개의 소분획물로 나누었으며 이 소분획물을 하기 실험예의 시료로 사용하였다.

참고예 1. 실험준비

1-1. 실험 시료 및 시약

L-도파(dopa)(제품번호: D9682), TPA(phobol 12- Myristate 13- Acetate; 제품번호: P3135) 등도 시그마사로부터 구입하였으며, 코지산 (제품번호: K3125)은 알드리치(Aldrich)사에서 구입하여 사용하였다.

그 밖에 페니실린-스트렙토마이신 (제품번호: 15140-122), 소태아혈청 (FBS, 제품번호: 26140-079), RPMI1640 (제품번호: 31800-014)은 지브코 (Gibco)사에서 구입하여 실험에 사용하였다.

1-2. 기기 분석

타이로시나제 활성분석에는 분광광도계 (precision microplate reader; 모델명: E09090 , Molecular Devices사)를 이용하였다.

실험예 1. 멜라닌 생성 관련 효소 타이로시나제에 대한 저해효과 확인

멜라닌 생합성에 관여하는 타이로시나제 억제활성은 아로카 등의 문헌(Aroca et al., J. Biol. Chem. 268(34), p25650-25655, 1993) 및 토미타 등의 문헌(Tomita et al.; J. Antibiot. 43(12), pp1601-1604, 1990)에 기재된 활성실험법을 참조하였다.

본 발명은 실시예 1의 녹나무 추출물의 미백 활성을 확인하기 위하여 멜라닌 생성 유발과 연관된 효소인 타이로시나제에 대한 억제효과를 알아보았다. 8mM L-도파 120㎕ (67 mM 인산 완충액 pH 6.8에 녹임)와 메탄올 40㎕에 녹인 시험용 시료(1ppm,10ppm,100ppm)를 96-웰 마이크로플레이트에 넣고 버섯 추출 타이로시나제 (125U/㎖) 40㎕를 첨가하였다. 37℃에서 20분간 배양한 후, 생성된 도파 크롬의 양을 분광광도계 (precision microplate reader; Molecular Devices E09090)를 이용하여 492 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 타이로시나제 저해효과는 마쯔다 등의 문헌(Matsuda, et al., Biol. Pharm. Bull., 19(1), pp153-153, 1996)을 참고하여 하기 수학식 1을 사용하였고, 시료를 가하지 않는 대조군을 기준으로 하였다.

타이로시나제 억제효과 (%) = { ( 대조군 OD₄₉₂ - 시료 OD₄₉₂ ) / 대조군 OD₄₉₂ } × 100

실험결과, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 녹나무 극성용매분획물 B1의 1, 10, 100 ppm 농도에서 타이로시나제에 대한 억제활성을 확인할 수 있었고, 본 발명의 녹나무 극성용매분획물 미백용 화장료로 널리 사용되고 있는 코지산보다 저해효과가 뛰어남을 확인하여 미백용 화장료로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

시료	농도 (ppm)	저해율 (%)
B1	1	9.83±4.6
	10	14.7±7.4
	100	23.88±7.2
코지산	1	0.49±13.7
	10	1.75±11.4
	100	37.26±12.9
* 각 수치는 3차례 실험의 평균치임

실험예 2. 멜란-A 세포 실험

멜란-A 세포주 (melan-A cell)을 이용한 멜라닌 생성억제 효과 검증법은 베네트 등의 문헌(Bennette et al., Int. J. Cancer. 39, pp.414-418. 1987)을 참조하였다.

2-1. 세포배양

멜란-A 세포주는 RPMI배지(31800-14)에 소태아혈청(Fetal Bovine Serum, 제품번호:26140-079)과 200nm 포볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(Phorbol 12-Myristate 13-Acetate, 제품번호:P3135) 조건에서 배양하였다. 100π 조직 배양 접시에 10m l의 배양액을 넣고 약 5× 10⁵의 세포를 시딩(seeding)한다. 37℃, 5% CO₂환경에서 3~4 일 후 융합하여 생장하면 24 웰 플레이트에 10 ⁵세포/웰로 접종하여 24시간 배양하였다.

웰당 990㎕의 배양액을 매일 갈아주고, 10㎕의 시료를 3일간 처리 (용매 : 50% 프로필렌그리콜, 30% 에탄올, 20% 물)한 후 1일간 배양하였다.

2-2. 멜라닌 함량 측정

멜라닌 함량을 측정하기 위해 실시예 2-1의 방법으로 배양한 세포에서 배지를 제거한 후, 그 세포를 PBS로 세척하였다. 1N 수산화나트륨 1ml를 이용하여 멜라닌을 녹인 후, 400 내지 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.

2-3. 세포 생존율 측정

세포 생존율을 측정하기 위해 실시예 2-1의 세포에서 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, 크리스탈 바이올렛 (CV 0.1%, 10% 에탄올, 나머지 PBS) 시약 200㎕를 첨가하여 5분간 상온에서 배양한 후, 물로 2번 세척하였다. 에탄올 1 ml 첨가하여 상온에서 10분간 진탕한 후 590 nm에서 흡광도를 측정하였다.

상기 실험 결과, 하기 표 2 및 도 2에 기재된 바와 같이, 실시예 1-3의 부탄올 분획물에서 얻은 1번 소분획물(B1)이 10ppm에서 탁월하게 멜라닌 생성을 억제시키며, 세포독성 또한 낮아 미백용 화장료로 사용가능함을 확인할 수 있었다.

	농도 (ppm)	멜라닌 (%)	생존율 (%)
B1	1	100.68	94.71
	10	57.09	86.86
B2	1	92.23	97.36
	10	79.05	91.72
B3	1	106.08	97.81
	10	63.51	86.58

본 발명의 녹나무 조추출물 및 극성용매분획물은 아래와 같은 제형으로 제조할 수 있으며, 아래의 제제는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.

제제예 1. 목욕액

DL-락트산나트륨 21 중량부, 피루브산 나트륨 8 중량부, 녹나무 조추출물 5 중량부 및 에탄올 40 중량부와 정제수 26 중량부 및 적당량의 색소와 향료를 혼합하여 목욕액을 제조할 수 있다. 이 제품은 사용할 때에 목욕물중에 100-10,000 배로 희석하여 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용하기 적합하다. 이 경우에 있어서 목욕물 대신에 클렌징액, 수렴액 및 보습액을 사용할 수 있다.

제제예 2. 스킨로션

정제수에 글리세린 3 중량부, 부틸렌글리콜 2중량부, 프로필렌 글리콜 2 중량부, 방부제를 투입하여 교반하여 용해시킨 후 폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유 1 중량부를 60℃정도 가열하여 용해시킨 후 향료를 투입 교반하여 정제수 80.9 중량부에 투입한다. 마지막으로 녹나무 극성용매분획물 분말 1 중량부, 에탄올 10 중량부, 트리에탄올 아민 0.1 중량부, 색소를 투입하여 충분히 교반하여 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 고품질의 일광 차단제, 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용된다.

제제예 3. 밀크로션(영양로션)

시토 스테롤 1.7 중량부, 폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 중량부, 세라마이드 0.7 중량부, 세테아레스-4 1.2 중량부, 콜레스테롤 1.5중량부를 일정한 온도에서 균질화하고 녹나무 조추출물 분말 1 중량부 및 디세틸포스페이트 0.4 중량부, 농글리세린 5.0, 선플라우어 오일 10 중량부, 카르복시비닐폴리머 0.2중량부, 산탄검 0.3중량부, 방부제를 통상의 방법으로 가열 용해시키고 이 용액에다 정제수 76.5 중량부를 가한 후 균질화기에서 유화시키고 나서 적당량의 향료를 가하고 다시 교반 혼합하여 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 고품질의 일광 차단제, 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용된다.

제제예 4. 영양크림

시토 스테롤 4 중량부, 폴리글리세릴 2-올레이트 3 중량부, 세라마이드 0.7 중량부, 세테아레스-4 2 중량부, 콜레스테롤 3 중량부를 일정한 온도에서 균질화하고 녹나무 극성용매분획물 분말 3 중량부 및 디세틸포스페이트 0.4 중량부, 농글리세린 5.0, 선플라우어 오일 22 중량부, 카르복시비닐폴리머 0.5 중량부, 방부제를 통상의 방법으로 가열 용해시키고 이 용액에다 정제수 56.4 중량부를 가한 후 균질화기에서 유화시키고 나서 적당량의 향료를 가하고 다시 교반 혼합하여 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 고품질의 일광 차단제, 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용된다.

제제예 5. 맛사지크림

카르복시 비닐폴리머 0.2 중량부, 글리세린 5 중량부, 부틸렌글리콜 3 중량부, 프로필렌글리콜 3 중량부, 정제수 22.3 중량부, 미량의 방부제를 혼합교반하면서 80-85 ℃사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 밀납 10 중량부, 폴리솔베이트 60 1.5 중량부, 솔비탄세스퀴올레이트 0.8 중량부, 유동파라핀 40 중량부, 스쿠알란 5.0 중량부, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4 중량부, 트리에탄올아민 0.2 중량부를 80-85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃ 까지 냉각한 뒤 색소를 투입하고 45℃ 까지 냉각한 뒤 향료를 투입하고 35℃까지 냉각되면 녹나무 조추출물 5 중량부를 투입 후 다시 교반 혼합하여 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 고품질의 일광 차단제, 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용된다.

제제예 6. 영양에센스

시토 스테롤 1.7 중량부, 폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 중량부, 세라마이드 0.7 중량부, 세테아레스-4 1.2 중량부, 콜레스테롤 1.5 중량부를 일정한 온도에서 균질화하고 여기에 녹나무 극성용매분획물 분말 5 중량부 및 디세틸포스페이트 0.4 중량부, 농글리세린 5.0, 선플라우어 오일 15 중량부, 카르복시비닐폴리머 0.2 중량부, 산탄검 0.2 중량부, 방부제를 통상의 방법으로 가열 용해시키고 이 용액에다 정제수 67.6 중량부를 가한 후 균질화기에서 유화시키고 나서 적당량의 향료를 가하고 다시 교반 혼합하여 표제의 제품을 얻었다. 이 제품은 고품질의 일광 차단제, 피부 미용제 및 피부 미백제로 사용된다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 녹나무 조추출물 및 극성용매분획물은 멜라닌 생합성에 관여하는 타이로시나제에 대한 탁월한 저해활성을 가지며 멜라닌 생성을 억제하므로 미백용 화장료 조성으로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (4)

1. 녹나무 잎 메탄올 추출물을 n-부탄올로 분획하여 수득한 분획물을 세파덱스-LH20 컬럼에 적용하고 메틸렌클로라이드: 에탄올 (1: 1, v/v) 용매를 이용하여 소분획하여, TLC R_f : 0.70~ 0.80 (전개용매조건; 클로로포름: 메탄올: 물 = 10: 5: 0.2, v/v)를 나타내는 소분획물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제

Images