CN101961353B - 一种蚯蚓抽提物、其制备方法、应用及含其的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蚯蚓抽提物，其为蚯蚓的水抽提物，分子量为3000道尔顿以下。本发明还公开了其制备方法、其应用及含其的药物组合物和保健食品。本发明的蚯蚓抽提物具有明显的降低血压的功能，且其制备方法操作简单，可以实现大规模的制备。

Description

一种蚯蚓抽提物、其制备方法、应用及含其的药物组合物

技术领域

本发明具体的涉及一种蚯蚓抽提物、其制备方法、应用及含其的药物组合物。

背景技术

蚯蚓俗称地龙，具有解热、镇惊、降压、抑菌、抑癌及活血化瘀等功效，正广泛应用于中医中治疗多种疾病，特别在治疗高血压的过程中，地龙通常已成为中医中药中的一味不可或缺的药材。迫切需对其进行基础及开发应用研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了具有降血压作用的一种蚯蚓抽提物、其制备方法、应用和含其的药物组合物和保健食品。本发明的蚯蚓抽提物具有明显的降低血压的功能，且其制备方法操作简单，可以实现大规模的制备。

本发明人经过大量研究发现，在蚯蚓的中药汤剂中能起到降血压作用的物质是小分子量的蚯蚓抽提物，而不是蚯蚓中的蛋白之类的物质。然而，在这些小分子的蚯蚓化合物中能起到降血压作用的有效成份究竟是什么以及它的作用机理如何，是一个亟待解决的课题。本发明人经过研究，首先发现了一类新的小分子量蚯蚓抽提物以及一套大规模制备该蚯蚓抽提物的方法。

因此本发明涉及一种蚯蚓抽提物，其为蚯蚓的水抽提物，分子量为3000道尔顿以下。

本发明进一步涉及上述蚯蚓抽提物的制备方法，其包含下列步骤：将蚯蚓的水抽提物经过3000分子量滤膜超滤，收集滤液，即可。

其中，所述的蚯蚓可为本领域中能够入药使用的各种蚯蚓，较佳的为威廉腔环蚓、赤子爱胜蚓和锯齿远蚓中的一种或多种。

本发明的制备方法中，所述的蚯蚓的水抽提物可由本领域常规的用水对蚯蚓中有效成分进行提取的方法制得，较佳的，其由下列方法制得：将经吐泥、水洗处理后的蚯蚓捣碎成浆状，加水混匀后浸泡，然后用1000-3000(优选1000-2000，更优选1500)转/分的离心机离心，得上清液1，将上清液1用10000-20000(优选15000-17000，更优选16000)转/分的离心机离心，得上清液2，即可。

其中，所述的加水的量较佳的为浆状蚯蚓体积的0.8-1.5倍(优选1倍)；浸泡的时间较佳的为3-10小时(优选3-5小时，更优选3小时)；浸泡的温度较佳的为4-10℃；在得到上清液2之后，较佳的还包含干燥步骤，如真空冷冻干燥。

本发明的制备方法中，较佳的，在用3000分子量滤膜超滤之前还包括下列步骤：将蚯蚓的水抽提物加水溶解后，再用离心机以10000-20000(优选15000-17000，更优选16000)转/分离心，得上清液；所述的蚯蚓的水抽提物为干燥物。其中，所述的加水的量较佳的为蚯蚓的水抽提物体积的1-5倍(优选2倍)。所述的干燥物为蚯蚓的水抽提液干燥后的物质。

在用3000分子量滤膜超滤后，还可包含下列步骤：将所得物质干燥，即可。所述的干燥较佳的为真空冷冻干燥。

本发明进一步涉及一种包含上述蚯蚓抽提物及药学上可接受的载体的药物组合物或者食品学上可接受的载体的药物组合物或保健食品。

本发明的药物组合物中，上述蚯蚓抽提物可以作为单一的活性成分发挥作用，也可以按照本领域常识与具备降血压等功能，且不与蚯蚓抽提物发生不良反应的药物活性成分一起作为活性成分发挥作用。

本发明的蚯蚓抽提物可与药学上各种常用添加剂(如稀释剂和赋形剂等)制成药物组合物。根据治疗目的，可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)等。

为了使片剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知的并广泛使用的赋形剂。例如，载体，如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素和硅酸等；粘合剂，如水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液，羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素和磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干淀粉、藻酸钠、琼脂粉和海带粉，碳酸氢钠、碳酸钙、聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘酯、淀粉和乳糖等；崩解抑制剂，如白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氢化油；吸附促进剂，如季胺碱和十二烷基硫酸钠等；润湿剂，如甘油、淀粉等；吸附剂，如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和胶体硅酸等；以及润滑剂，如纯净的滑石，硬脂酸盐、硼酸粉和聚乙二醇等。如果需要的话，还可以用通常的涂渍材料使片剂作为糖衣片剂、涂明胶膜片剂、肠衣片剂、涂膜片剂、双层膜片剂及多层片剂。

为了使丸剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知的并广泛使用的赋性剂，例如，载体，如乳糖，淀粉，椰子油，硬化植物油，高岭土和滑石等；粘合剂，如阿拉伯树胶粉，黄著胶粉，明胶和乙醇等；崩解剂，如琼脂和海带粉等。

为了使栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋性剂，例如，聚乙二醇，椰子油，高级醇，高级醇的酯，明胶和半合成的甘油酯等。

为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液和悬浮液消毒，并最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油等，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可使用本领域内任何常用的载体。例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化的异硬脂醇，聚氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可加入通常的溶解剂、缓冲剂和止痛剂等。根据需要，在治疗精神分裂症期间，也可加入着色剂、防腐剂、香料、调味剂、香化剂和其它药物等。

本发明的蚯蚓抽提物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择。

本发明中，所述的药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据病人年龄、性别和其它条件及症状，选择不同剂型的制剂给药。例如，片剂、丸剂、溶液、悬浮液、乳液、颗粒剂和胶囊是口服给药；针剂(较佳的为水针剂或冻干粉针剂)可以单独给药，或者和注射用输送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合进行静脉注射，如有必要可以单纯用针剂进行肌肉、皮内、皮下或腹内注射；栓剂为给药到直肠。

本发明中，可以根据服药方法、病人年龄、性别和其它条件以及症状适当地选择用药剂量。

本发明还涉及上述蚯蚓抽提物在制备降血压的药物中的应用。

本发明还涉及上述蚯蚓抽提物在制备治疗或预防高血压的保健食品或功能性食品中的应用。

除特殊说明外，本发明涉及的原料和试剂均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明的蚯蚓抽提物具有明显的降低血压的功能，且其制备方法操作简单，可以实现大规模的制备。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

实施例1：威廉腔环蚓水抽提物的提取

1、新鲜的威廉腔环蚓(1千克)经吐泥，水清洗后放入冷库冰冻，备用。

2、将冰冻的威廉腔环蚓从冷库取出，经自然化冻后机械捣碎成浆状。加1倍体积的水混匀，浸泡3小时后用1500转/分的离心机离心10分钟，留下上清液，弃掉沉淀。

3、将2的上清液经离心机16000转/分离心后留下上清液。

4、将3的上清液真空冷冻干燥，即可得到威廉腔环蚓水抽提物。

实施例2：威廉腔环蚓抽提物的提取

1、取实施例1制得的蚯蚓水抽提物加2倍的水溶解后用离心机16000转/分离心。留下上清液。

2、将1的上清液用3000分子量超滤膜的超滤器超滤，可得到两种组分，分别为3000分子量膜以下的水溶液物质(以下称为“混合物A”)(29.8克)和3000分子量膜以上的水溶液物质(以下称为“混合物B”)。

3、将2的混合物A真空冷冻干燥，得到威廉腔环蚓精制品的提取物，亦即本发明分子量在3000道尔顿以下的威廉腔环蚓抽提物。

4、将2的混合物B真空冷冻干燥，备用。

实施例3：在实施例2中，使用3000分子量的超滤膜超滤分离得到的混合物A，故证明该超滤后得到的混合物A为分子量小于3000道尔顿的威廉腔环蚓蚓抽提物。

实施例4：赤子爱胜蚓水抽提物的提取

1、新鲜的赤子爱胜蚓(1千克)经吐泥，水清洗后放入冷库冰冻，备用。

2、将冰冻的赤子爱胜蚓从冷库取出，经自然化冻后机械捣碎成浆状。加1倍体积的水混匀，浸泡3小时后用1500转/分的离心机离心10分钟，留下上清液，弃掉沉淀。

3、将2的上清液经离心机16000转/分离心后留下上清液。

4、将3的上清液真空冷冻干燥，即可得到赤子爱胜蚓水抽提物。

实施例5：赤子爱胜蚓抽提物的提取

1、取实施例4制得的蚯蚓水抽提物制品加2倍的水溶解后用离心机16000转/分离心。留下上清液。

2、将1的上清液用3000分子量超滤膜的超滤器超滤，可得到两种组分，分别为3000分子量膜以下的水溶液物质(以下称为“混合物C”)(28.7克)和3000分子量膜以上的水溶液物质(以下称为“混合物D”)。

3、将2的混合物C真空冷冻干燥，得到赤子爱胜蚓精制品的提取物，亦即本发明分子量在3000道尔顿以下的赤子爱胜蚓抽提物。

4、将2的混合物D真空冷冻干燥，备用。

实施例6：在实施例5中，使用3000分子量的超滤膜超滤分离得到的混合物C，故证明该超滤后得到的混合物C为分子量小于3000道尔顿的赤子爱胜蚓抽提物。

实施例7：锯齿远蚓水抽提物的提取

1、新鲜的锯齿远蚓(1千克)经吐泥，水清洗后放入冷库冰冻，备用。

2、将冰冻的锯齿远蚓从冷库取出，经自然化冻后机械捣碎成浆状。加1倍体积的水混匀，浸泡3小时后用1500转/分的离心机离心10分钟，留下上清液，弃掉沉淀。

3、将2的上清液经离心机16000转/分离心后留下上清液。

4、将3的上清液真空冷冻干燥，即可得到锯齿远蚓制品水抽提物。

实施例8：锯齿远蚓抽提物的提取

1、取实施例7制得的锯齿远蚓水抽提物加2倍的水溶解后用离心机16000转/分离心。留下上清液。

2、将1的上清液用3000分子量超滤膜的超滤器超滤，可得到两种组分，分别为3000分子量膜以下的水溶液物质(以下称为“混合物E”)(29.1克)和3000分子量膜以上的水溶液物质(以下称为“混合物F”)。

3、将2的混合物E真空冷冻干燥，得到锯齿远蚓精制品的提取物，亦即本发明分子量在3000道尔顿以下的锯齿远蚓抽提物。

4、将2的混合物F真空冷冻干燥，备用。

实施例9：在实施例8中，使用3000分子量的超滤膜超滤分离得到的混合物E，故证明该超滤后得到的混合物E为分子量小于3000道尔顿的锯齿远蚓抽提物。

实施例10：威廉腔环蚓水抽提物的提取

1、新鲜的威廉腔环蚓(1千克)经吐泥，水清洗后放入冷库冰冻，备用。

2、将冰冻的威廉腔环蚓从冷库取出，经自然化冻后机械捣碎成浆状。加0.8倍体积的水混匀，浸泡10小时后(浸泡温度4℃)用1000转/分的离心机离心10分钟，留下上清液，弃掉沉淀。

3、将2的上清液经离心机10000转/分离心后留下上清液。

4、将3的上清液真空冷冻干燥，即可得到威廉腔环蚓水抽提物。

实施例11：威廉腔环蚓抽提物的提取

1、取实施例10制得的蚯蚓水抽提物加1倍的水溶解后用离心机10000转/分离心。留下上清液。

2、将1的上清液用3000分子量超滤膜的超滤器超滤，可得到两种组分，分别为3000分子量膜以下的水溶液物质(以下称为“混合物A1”)(29克)和3000分子量膜以上的水溶液物质(以下称为“混合物B1”)。

3、将2的混合物A真空冷冻干燥，得到威廉腔环蚓精制品的提取物，亦即本发明分子量在3000道尔顿以下的威廉腔环蚓抽提物。

4、将2的混合物B1真空冷冻干燥，备用。

实施例12：赤子爱胜蚓水抽提物的提取

1、新鲜的赤子爱胜蚓(1千克)经吐泥，水清洗后放入冷库冰冻，备用。

2、将冰冻的赤子爱胜蚓从冷库取出，经自然化冻后机械捣碎成浆状。加1.5倍体积的水混匀，浸泡6小时后(浸泡温度10℃)用3000转/分的离心机离心10分钟，留下上清液，弃掉沉淀。

3、将2的上清液经离心机20000转/分离心后留下上清液。

4、将3的上清液真空冷冻干燥，即可得到赤子爱胜蚓水抽提物。

实施例13：赤子爱胜蚓抽提物的提取

1、取实施例12制得的蚯蚓水抽提物制品加5倍的水溶解后用离心机20000转/分离心。留下上清液。

2、将1的上清液用3000分子量超滤膜的超滤器超滤，可得到两种组分，分别为3000分子量膜以下的水溶液物质(以下称为“混合物C1”)(28.6克)和3000分子量膜以上的水溶液物质(以下称为“混合物D1”)。

3、将2的混合物C1真空冷冻干燥，得到赤子爱胜蚓精制品的提取物，亦即本发明分子量在3000道尔顿以下的赤子爱胜蚓抽提物。

4、将2的混合物D1真空冷冻干燥，备用。

对比实施例1：混合物A与混合物B的降压实验

1制备样品

(1)将混合物A、B用重蒸水配制成三个不同的浓度。

混合物A：8mg/ml 4mg/ml 2mg/ml

混合物B：8mg/ml 4mg/ml 2mg/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃分别给予溶于重蒸水的混合物A、B，两种混合物剂量分别为40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在给予混合物A、B后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。混合物A与混合物B之间P＜0.05，有显著差异

4结果(见下表1和2)

表1  混合物A的降压试验

表2：混合物B的降压实验

结论：

(1)混合物B对血压无显著影响。

(2)混合物A的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物A具有降压功能。

对比实施例2：混合物C、D的降压实验

1制备样品

(1)将混合物C、D用重蒸水配制成三个不同的浓度。

混合物C：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

混合物D：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃给予溶于重蒸水的混合物C、D，两种混合物剂量分别为40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在给予混合物C、D后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。混合物C与混合物D之间P＜0.05，有显著差异

4结果(见下表3、表4)

表3  混合物C的降压试验

表4  混合物D的降压试验

结论：

(1)混合物D对血压无显著影响。

(2)混合物C的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物C具有降压作用。

对比实施例3：混合物E、F的降压实验

1制备样品

(1)将混合物E、F分别用重蒸水配制成三个不同的浓度。

混合物E：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

混合物F：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃分别给予溶于重蒸水的混合物E、F，两种混合物剂量分别为40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在分别给予混合物E、F后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。混合物E与混合物F之间P＜0.05，有显著差异

4结果(见下表5、表6)

(1)混合物F对血压无显著影响

(2)混合物E的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物E具有降压作用。

表5  混合物E的降压试验

表6  混合物F的降压实验

对比实施例4混合物A1和B1的降压实验

1制备样品

(1)将混合物A1、B1分别用重蒸水配制成三个不同的浓度。

混合物A1：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

混合物B1：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃分别给予溶于重蒸水的混合物A1、B1，两种混合物剂量分别为40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在分别给予混合物A1、B1后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。混合物A1与混合物Bl之间P＜0.05，有显著差异

4结果(见下表7、表8)

(1)混合物B1对血压无显著影响

(2)混合物A1的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物A1具有降压作用。

表7  混合物A1的降压试验

表8  混合物B1的降压实验

对比实施例5混合物C1和D1的降压实验

1制备样品

(1)将混合物C1、D1用重蒸水配制成三个不同的浓度。

混合物C1：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

混合物D1：8mg/ml 4mg/ml  2mg/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃分别给予溶于重蒸水的混合物C1、D1，两种混合物剂量分别为40mg/kg，20mg/kg，10mg/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在给予混合物A、B后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。混合物C1与混合物D1之间P＜0.05，有显著差异

4结果(见下表9和10)

表9  混合物C1的降压试验

表10 混合物D1的降压实验

结论：

(1)混合物D1对血压无显著影响。

(2)混合物C1的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物A具有降压功能。

对比实施例6蚯蚓粉的降压活性实验

一：蚯蚓粉的制备

1、取新鲜的威廉腔环蚓经吐泥备用。

2、水清洗。用烘箱，在40～60℃的温度条件下，烘干10至20小时，备用。

3、将烘干好的蚯蚓直接机械捣碎成粉状，备用。

二：上述蚯蚓粉(以下称为蚯蚓粉)的降压活性实验

1制备样品

(1)将蚯蚓粉用重蒸水配制成三个不同的浓度。

蚯蚓粉：1.2g/ml 0.6g/ml  0.3g/ml

(2)设重蒸水作阴性对照

2实验方法

取大鼠，称重后用20％乌拉坦麻醉。仰位固定，分离颈总动脉，插管记录血压(仪器：RM6000四导生理记录仪，AP-601，AP-611记录血压)，动物的舒张压和收缩压由仪器直接读出。

手术后稳定30min，记录血压。灌胃给予溶于重蒸水蚯蚓粉，剂量为6g/kg，3g/kg，1.5g/kg，另外设灌胃给予重蒸水作阴性对照。在给予蚯蚓粉后30min，60min，90min，120min，150min，180min分别记录血压。

3数据处理

与分子量小于3000道尔顿的威廉腔环蚓提取物结果比较(前述实施例2中的“混合物A”)。分别计算收缩压和舒张压的均值和标准差，组间差别采用t检验分析。两组间P＜0.01，有极显著差异

4结果(见表11、表12)

表11  混合物A的降压试验

表12  蚯蚓粉降压试验

结论：

(1)蚯蚓粉的1.5g/kg的剂量和3g/kg的剂量对血压无明显影响，6g/kg的剂量能使血压下降，但无统计学意义。

(2)混合物A的小剂量对血压无显著影响，剂量20mg/kg在给药后的90min收缩压和舒张压显著小于对照组，此后血压轻度回升，而剂量40mg/kg在给药后血压持续下降，从90min后血压降低幅度超过20mmHg。

综合降压数值考虑，可以认定混合物A具有降压功能，其活性大大优于蚯蚓粉。

Claims (6)

1.蚯蚓抽提物在制备降血压的药物或者在制备治疗或预防高血压的保健食品中的应用，其中所述蚯蚓抽提物为分子量为3000道尔顿以下的蚯蚓的水抽提物，所述的蚯蚓为威廉腔环蚓和锯齿远蚓中的一种或多种。

2.权利要求1所述的应用，其中所述蚯蚓抽提物是由包含下列步骤的制备方法制备的：将蚯蚓的水抽提物经过3000分子量滤膜超滤，收集滤液，即可。

3.权利要求2所述的应用，其中所述的蚯蚓的水抽提物是由下列方法制得的：将经吐泥、水洗处理后的蚯蚓捣碎成浆状，加水混匀后浸泡，然后用1000-3000转/分的离心机离心，得上清液1，将上清液1用10000-20000转/分的离心机离心，得上清液2，在得到上清液2之后还包含干燥步骤。

4.权利要求3所述的应用，其中，所述的加水的量为浆状蚯蚓体积的0.8-1.5倍；所述的浸泡的时间为3-10小时；而且，浸泡的温度为4-10℃。

5.权利要求2所述的应用，其中，在用3000分子量滤膜超滤之前还包括下列步骤：将蚯蚓的水抽提物加水溶解后，再用离心机以10000-20000转/分离心，得上清液；其中所述的蚯蚓的水抽提物为干燥物。

6.权利要求5所述的应用，其中所述的加水的量为蚯蚓的水抽提物体积的1-5倍。