CN108685964B - 毛大丁草提取物的应用及其有效组分制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了毛大丁草提取物的应用及其有效组分制备方法，本发明发现乙酸乙酯部位、石油醚部位对α‑葡萄糖苷酶活性均有一定的抑制作用，其中乙酸乙酯部位抑制活性最强，其次为石油醚部位，从而提出毛大丁草提取物在治疗糖尿病药物中的应用。这为天然植物药毛大丁草在抑制α‑葡萄糖苷酶中的研究奠定了一定的基础。

Description

毛大丁草提取物的应用及其有效组分制备方法
技术领域
本发明涉及本发明属于中药提取物应用技术领域，特别是一种毛大丁草提取物抑制α-葡萄糖苷酶的应用及其有效组分制备方法。
技术背景
糖尿病是一种以高血糖为特征，人体血液中胰岛素含量绝对或相对不足，并引发脂肪和蛋白质等一系列代谢紊乱的疾病。目前中国糖尿病人数已是全球患者绝对数量最多的国家。目前临床上治疗糖尿病的药物主要有：(1)促进胰岛素分泌，如格列本脲、瑞格列奈等；(2)降低肝脏糖类生成，如二甲双胍等；(3)增强胰岛素的作用，如罗格列酮、化格列酮等；(4)延缓碳水化合物的消化和吸收，如α-葡萄糖苷酶抑制剂—阿卡波糖等。
α-葡萄糖苷酶抑制剂是一类竞争性或非竞争性抑制位于小肠的各种α-葡萄糖苷酶活性的口服降糖药物，其使得小肠内葡萄糖的生成速度减慢，从而有效延缓葡萄糖的吸收、降低餐后高血糖，达到治疗糖尿病的目的。长期使用α-葡萄糖苷酶抑制剂还具有增加胰岛素敏感性的作用。
临床上广泛使用α-葡萄糖苷酶抑制剂来降低餐后高血糖，使用效果最好的有阿卡波糖(Acarbose，又称拜糖平)和米格列醇(Miglitol，又称奥恬苹)。该类药物是Ⅱ型糖尿病的首选药和Ⅰ型糖尿病胰岛素治疗的辅助药物。但是，两种药物均会引起患者胃肠不适。因此，在天然植物中发现更高效和安全的α-葡萄糖苷酶抑制剂是Ⅱ型糖尿病干预研究的热点。
毛大丁草为菊科植物毛大丁草Piloselloides hirsuta(Forsk.)G.Jeffrey的干燥全草。春季采挖，除去杂质，干燥。产于西藏、云南、四川、贵州、广西、广东、湖南、湖北、江西、江苏、浙江、福建等省区。本品亦为贵州省少数民族用药，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)，具有宣肺止咳，发汗利水，行气活血。用于伤风咳嗽，哮喘，水肿胀满，小便不利，小儿食积，经闭，跌扑损伤，痈疖，疔疮。化学研究表明，毛大丁草中含有黄酮、挥发油、萜类、香豆素类、多糖、醌类等化学成分。药理活性研究表明，其具有抑制植物病原真菌、镇咳、祛痰、平喘、抑制子宫收缩、升白作用、抗肿瘤等药理作用。目前未见文献对毛大丁草提取物及化合物有α-葡萄糖苷酶的抑制作用的报道。
发明内容
本发明的目的是提供毛大丁草提取物在抑制α-葡萄糖苷酶药物上的应用及其有效组分制备方法。
本发明的技术方案如下：
首先，本发明提出了毛大丁草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用。进一步的，本发明提出毛大丁草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用是指毛大丁草提取物在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用。
其次，为实现上述应用，本发明提出毛大丁草提取物用于抑制α-葡萄糖苷酶的活性组分的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)取除去杂质的毛大丁草全草，粗粉碎成毛大丁草粉末；
(2)取粉碎后的毛大丁草粉末，加入甲醇溶液提取，取滤液用旋转蒸发仪浓缩，得毛大丁草浓缩液；
(3)将所述毛大丁草浓缩液加水溶解，先用石油醚萃取，再加酸调pH值到5-6，然后用乙酸乙酯萃取、最后再用正丁醇萃取，萃取层蒸干浓缩，分别得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；
(4)将得到的石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位进行α-葡萄糖苷酶抑制活性研究，筛选出活性组分。
其中，步骤(2)中所述甲醇溶液加入量为1g毛大丁草药材粉末加入3～8ml的甲醇，提取方法为超声处理，提取时间为1～2小时，提取次数为2～4次。
步骤(2)中所述旋转蒸发仪浓缩在45～60℃，-0.1MPa的条件下。
步骤(3)中所述加水溶解时，每1g毛大丁草提取液浸膏加水的体积2～4ml。
步骤(3)中所述石油醚、乙酸乙酯或正丁醇萃取的萃取次数为3～5次。
步骤(2)中甲醇浓度为纯甲醇。
研究表明，按照本发明方法制备的毛大丁草抑制α-葡萄糖苷酶的活性组分中，毛大丁草提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位均对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用，其中乙酸乙酯部位活性最强。本发明有助于从天然植物药中研究具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分，从而实现其在药物中的应用。
附图说明
图1为本发明专利中毛大丁草提取物的制备流程图；
图2为实施例1的毛大丁草提取物的制备流程图；
图3为本发明专利中阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用图；
图4为本发明专利中石油醚部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用图；
图5为本发明专利中乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶抑制作用图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：
(一)组分的制备
取毛大丁草药材(过100目筛)180g，用5倍量甲醇溶液(900ml)超声提取1小时，滤过，滤渣再用3倍量甲醇溶液(540ml)超声提取2次，每次1小时，滤过，合并3次滤液后浓缩至浸膏(毛大丁草药材总提物)8.9g，加入3倍量水(27ml)混匀溶解，先用2倍体积的石油醚萃取、水层再加酸调pH值到5，然后用2倍体积的乙酸乙酯萃取、水层继续用2倍量的正丁醇萃取，分别将各萃取液浓缩，得石油醚部位2.6g，乙酸乙酯部位3.2g，正丁醇部位1.7g。具体指标流程如图2所述。
(二)活性组分的筛选
以4-硝基酚-α-葡萄糖苷(PNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型筛选活性组分。首先，向磷酸钾缓冲液的酶活力测定系统中加入-α-葡萄糖苷酶25μL(0.2U/ml)，37℃保温15min，加入PNPG 25μL(5.0mM)后，37℃反应30min，最后加入碳酸钠100μL(1.0M)终止反应，在405nm处测定对硝基酚的吸光度，然后再分别取不同浓度的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位100μL加入酶活力测定系统中，先将酶于37℃保温15min，加底物PNPG，37℃反应30min，再加入碳酸钠终止反应，在405nm测对硝基酚的吸光度。本实验的每个样品都需要平行测定三次，抑制率(％)用以下公式计算：
抑制率(％)＝1-(OD样品-OD背景)/OD空白×100％
其中，OD样品为加入待测样品反应后的吸光度；OD背景为只加样品时的吸光度；OD空白为不加样品反应后的吸光度。
毛大丁草不同组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性结果见表1，结果表明，在相同的样品浓度下，对α-葡萄糖苷酶抑制活性最高为乙酸乙酯部位，其次是石油醚部位，正丁醇部位对α-葡萄糖苷酶无抑制作用。
表1醇提物各萃取组分对酶的活性抑制的影响
Table 1 The inhibitory radio of enzymatic activity of extracts
Figure BDA0001728777880000041
毛大丁草的不同浓度萃取物对酶活性的影响分别如图4和5所示，从图4和5的对比可以看到，石油醚、乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶均有较好的抑制作用，明显优于阳性对照药阿卡波糖的活性。其中乙酸乙酯萃取物在0.125mg/ml时抑制率达到56.95％。不同组分IC50值见表2。
表2醇提物各萃取组分的IC50值
Table 2 The IC50 of enzymatic activity of extracts
Figure BDA0001728777880000042
以上只是本发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。

Claims (6)

1.毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于该提取物活性成分制备方法包括如下步骤：
（1）取除去杂质的毛大丁草全草，粗粉碎成毛大丁草粉末；
（2）取粉碎后的毛大丁草粉末，加入甲醇溶液提取，取滤液用旋转蒸发仪浓缩，得毛大丁草浓缩液；
（3）将所述毛大丁草浓缩液加水溶解，先用石油醚萃取，再加酸调pH值到5-6，然后用乙酸乙酯萃取、最后再用正丁醇萃取，萃取层蒸干浓缩，分别得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；
（4）将得到的石油醚部位、乙酸乙酯部位及正丁醇部位进行α-葡萄糖苷酶的抑制活性研究，筛选出活性组分：毛大丁草提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位。
2.根据权利要求1所述的毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于：步骤（2）中所述甲醇溶液加入量为1g毛大丁草药材粉末加入3~8ml 的甲醇，提取方法为超声处理，提取时间为1~2小时，提取次数为2~4次。
3.根据权利要求1所述的毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于：步骤（2）中所述旋转蒸发仪浓缩在45~60℃，-0.1MPa的条件下。
4.根据权利要求1所述的毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于：步骤（3）中所述加水溶解时，每1g毛大丁草提取液浸膏加水的体积2~4ml。
5.根据权利要求1所述的毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于：步骤（3）中所述石油醚、乙酸乙酯或正丁醇萃取的萃取次数为3~5次。
6.根据权利要求2所述的毛大丁草提取物活性成分作为唯一原料药在制备抑制α-葡萄糖苷酶药物中的应用，其特征在于：甲醇浓度为纯甲醇。
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