CN115317569A - 一种石斛滋阴补气降糖丸及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种石斛滋阴补气降糖丸及其制备方法，其特征在于，包括以下重量份原料：霍山石斛3～8份、连翘5～12份、白术8～15份、金银花8～15份、花椒4～10份、葱白4～10份、甘草4～10份、天冬8～15份、百合8～15份、咖啡粉3～8份、盐3～8份、香豆素类柠檬酸‑苯丙二吡喃酮复合物2～5份。香豆素类柠檬酸‑苯丙二吡喃酮复合物结构上接枝的苯基等具备较大的空间结构及吸电子基赋予了其对于α‑葡糖糖苷酶更强的抑制活性，同时因其由柠檬提取物制备而得因此安全性高，所制备的石斛滋阴补气降糖丸具有滋阴降糖、阴阳平衡之效。

Description

一种石斛滋阴补气降糖丸及其制备方法
技术领域
本发明属于医药保健品技术领域，尤其涉及一种石斛滋阴补气降糖丸及其制备方法。
背景技术
糖尿病(diabetesmellitus，DM)是临床常见慢性代谢性疾病，主要以高血糖为特征，且通常会伴有血脂代谢紊乱和不同程度全身性炎症反应。由于人们生活方式的改变及生活水平的提高，糖尿病正呈现出患病率逐年增长及患病人群年轻化趋势。目前，临床针对本病的治疗主要以口服降糖药或注射胰岛素制剂以控制血糖，其目的旨在控制血糖水平、延缓病情进展、减少靶器官损伤及并发症进而改善患者生活质量。
糖尿病目前已经成为全世界继心脑血管疾病及肿瘤后威胁人类生命健康安全的第三大杀手，而所有糖尿病患者中，2型糖尿病(T2DM)占绝大部分，占比超90％。目前，T2DM治疗以西药为主，西药降糖药在控制血糖指标方面表现优异，某些新药在降低心血管疾病风险方面疗效显著，使广大糖尿病患者获益，但西药降糖药作用途径相对单一，部分西药可对人体消化系统及肾脏造成不同程度损伤，以及导致发生反应性低血糖等。有关荟萃分析表明，在T2DM的治疗过程中，用药剂量过大或使用非指南推荐联合用药，其风险往往大于受益。如长期使用噻唑烷二酮有可能会引起下呼吸道感染，还可能增加心衰住院率，另有研究发现，长期使用噻唑烷二酮与膀胱癌及女性骨折存在关联性。中药治疗T2DM历史悠久，现代药理学研究发现，某些中药成分或复方能保护β细胞，促进胰岛素分泌，提高胰岛素敏感性从而发挥降糖作用，与此同时，很多治疗糖尿病的中药还被证实能够调节肠道微环境，改善免疫功能，发挥纠正糖脂代谢紊乱作用。本病归属于中医学“消渴病”范畴，先天禀赋不足是其发病的重要因素，《灵枢·五变篇》中有云，“五脏皆柔弱者，善病消瘅”。与此同时，古代医家很早即认识到精神情志因素对本病的重要影响，叶天士认为，“心境愁郁，内热自燃，乃消证大病”。本病以阴虚津亏为本，燥热为标，为本虚标实之证，病位涉及肺胃肾三脏，三脏护卫影响，又以肾阴亏虚为根本。本病病程较长，病情往往迁延难愈，后期阴损及阳，可导致阴阳两虚。因此，糖尿病患者须得益气养阴、补血益气。
专利CN106039028 A涉及一种降糖丸，属于中药技术领域，由以下重量份的原料组成：霍山石斛48～75份、麻柳叶20～40份、生黄芪15～25份、生地黄12～20份、元参10～25份、丹参18～30份、苍术8～15份、葛根25～40份，经过粉碎、加水混合搅拌均匀，然后烘干至粘稠状制丸得产品。该发明采用纯中药进行合理配伍，具有良好的降血糖功效，因中药成分具有滋阴益气、扶正固本等功效，对糖尿病引起的口渴多饮、尿频、疲乏无力等症状具有较好的疗效；将中药制成药丸形式，方便携带，适合糖尿病患者长期服用；霍山石斛多糖，是一种免疫的增强剂和粘稠剂，因此在制备时无需加入淀粉类进行粘结，就可以成功生产出药效良好的降糖丸。
专利CN108558851 B公开了一种香豆素-噁唑-乙烯型α-葡萄糖苷酶抑制剂及制备方法，该方法包括：水杨醛、乙酰乙酸乙酯和哌啶反应后产物与N-溴代丁二酰亚胺和对甲苯磺酸混合反应，再加入六次甲基四胺反应得白色固体，将所得白色固体加入乙醇溶解并加入浓盐酸反应后产物与取代肉桂醛、碘、叔丁基过氧化氢和碳酸氢钠进行反应后得所述香豆素-噁唑-乙烯型α-葡萄糖苷酶抑制剂，可作为抗糖尿病药物的主要原料。该发明的香豆素-噁唑-乙烯型α-葡萄糖苷酶抑制剂作用机理明确，平稳降糖、安全无毒，抑制活性高且明显，制备方法成熟简单，在工业生产中比较容易严格地控制质量，制备条件温和无毒，无三废产生，对环境绿色友好。
食物中的糖类是血糖的主要来源，而食物中的碳水化合物经过α-葡萄糖苷酶水解生成单糖后才能被吸收。因此，α-葡萄糖苷酶是调节餐后血糖的关键酶，是治疗糖尿病的又一个有效靶点。而α-葡萄糖苷酶抑制剂能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性，减少血糖的生成，具有降血糖的临床应用价值。自然界中，大量植物中含有的黄酮、生物碱、萜类及多糖均具备良好的滋阴降糖功效，因此经植物提取或者将植物加工制得的滋阴降糖产品层出不穷，然而，天然活性成分在植物中往往含量较少，直接对其加工处理往往很难发挥出其真正的作用。伏格列波糖、阿卡波糖、米格列醇是临床上应用最广泛的α-葡萄糖苷酶抑制剂，都来源于微生物的代谢产物，尽管这三种药物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较强，但是这三种药物都存在着对部分糖类物质不能分解的缺点，使得糖类物质到达大肠后，容易出现腹胀气等不良反应。因此，寻找出新型、高效、低毒的α-葡萄糖苷酶抑制剂并开发出新的滋阴降糖产品将具有十分重大的市场推广价值。
发明内容
有鉴于现有技术中的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种新型、高效、低毒的石斛滋阴补气降糖丸及其制备方法。
α-葡萄糖苷酶是一种淀粉水解酶，广泛分布于生物体内，主要在细胞外起作用。它从多糖的非还原末端水解底物的α-葡萄糖苷键，产生α-D-葡萄糖，主要水解二糖、低聚糖、芳香糖苷，能以蔗糖和多聚的糖为底物。此外，其具备转糖苷作用，可将低聚糖中的α-1,4-糖苷键转化成α-1,6-糖苷键或其他形式的链接，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖或糖酯、糖肽等。而人体餐后血糖升高的主要原因是摄入的碳水化合物在α-葡萄糖苷酶作用下，释放的葡萄糖经小肠吸收进入血液。α-葡萄糖苷酶抑制剂能够可逆性竞争小肠绒毛粘膜细胞刷状缘的α-葡萄糖苷酶，抑制糖类化合物的分解，减少葡萄糖的生成和吸收，减缓餐后血糖升高，从而减少了血糖对胰腺的刺激，保护了胰腺功能，并能够有效的改善因高血糖引发并发症的发生和发展。
本发明中通过将述名贵诸药与咖啡合用，能有机地配合，共奏清热泻火、凉血解毒之效，以达到滋阴降糖、补血益气、兼治阴阳失调之功能。本处方的配伍严谨，没有十八反、十九畏的配伍禁忌，实验证明本处方为安全、毒副作用很小的制剂。咖啡，味甘甜，微苦涩，十分适合消费者的口味。处方中用咖啡粉做药引的原因，主要是利用咖啡含有的咖啡因兴奋人体中枢神经的功效，迅速将各种中药的有效成分引入到人体的各器官，达到迅速治病的效果。另外，本发明中所制备的香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物能够通过嵌入酶的空腔中，与周边的氨基酸残基发生相互作用，由氨基酸残基组成的疏水口袋紧紧地围绕和抓住配体香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物，与之形成疏水作用力，由于香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物插入到了α-葡糖糖苷酶的口袋中，在某种程度上改变了酶的构象，从而降低了对底物的亲和力，因此抑制了酶的活性。香豆素类-苯丙二吡喃酮复合物相比于香豆素类衍生物而言，其结构上接枝的苯基等具备较大的空间结构，结合较强的吸电子基如氯取代基、酯基等赋予了复合物更强的抑制活性，降糖效果更佳。由于是由柠檬提取物制备而得因此安全性高，天然环保，将其与石斛等诸多中药材合用所制备的降糖丸具备良好的滋阴补血、降糖保健之功效。
本发明的技术方案：
一种石斛滋阴补气降糖丸，包括以下原料组成：
霍山石斛、连翘、白术、金银花、花椒、葱白、甘草、天冬、百合、咖啡粉、盐、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
优选的，一种石斛滋阴补气降糖丸，包括以下重量份原料组成：
霍山石斛3～8份、连翘5～12份、白术8～15份、金银花8～15份、花椒4～10份、葱白4～10份、甘草4～10份、天冬8～15份、百合8～15份、咖啡粉3～8份、盐3～8份、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物2～5份。
一种石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，包括以下步骤：
S1将霍山石斛、连翘、白术、金银花、花椒、葱白、甘草、天冬、百合、盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料加热翻炒5～10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次1～4h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与咖啡粉、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
所述稠膏相对密度为1.05～1.20。
优选的，所述淀粉的用量为稠膏质量的20～30％。
所述香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物的制备方法包括如下步骤：
X1称取柠檬100～150重量份，洗净后破碎，加500～1000重量份的水，升温至70～80℃下搅拌4～6h，过滤，残渣继续加入200～400重量份的水，升温至70～80℃下搅拌2～3h，过滤，将两次过滤的滤液进行合并，浓缩至干得柠檬提取物；
X2向步骤X1中得到的柠檬提取物中加入30～50重量份的浓硫酸，在20～30℃下搅拌1～2h，逐渐升温至60～70℃，搅拌至无气泡生成，将反应液缓慢倒入200～400重量份的冰水中，加入500～1000重量份的乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相浓缩至干得到黄色固体；
X3取步骤X2中的黄色固体5～8重量份，加入2～3重量份的5-氯间苯二酚，0.05～0.1重量份的1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，升温至30～40℃，在无溶剂的条件下搅拌30～40min，再加入50～60重量份的乙酸乙酯进行稀释，室温下搅拌4～6h，反应结束后，加入100～120重量份的水洗，分液，有机相浓缩至干得到白色粉末；
X4取步骤X3中的白色粉末3～5重量份，加入到20～30重量份的氯化亚砜中，反应在冰盐浴下搅拌30～60min，升温至回流后继续搅拌，搅拌直至回流产生的蒸汽不使蓝色石蕊试纸变色为止，反应结束后将反应液直接过滤，得白色固体；
X5称取对甲基苯酚1～2重量份，吡啶1～2重量份加入到5～10重量份的二乙醚中，搅拌均匀后分批加入到步骤X4中的白色固体中，加热至回流，搅拌30～60min，反应结束后加入5～10重量份的水，分液，有机相浓缩至干得到香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
(1)本发明将霍山石斛等中药材与咖啡合用，能有机地配合，以达到滋阴降糖、补血益气、兼治阴阳失调之功能。本处方的配伍严谨，没有十八反、十九畏的配伍禁忌，实验证明本处方为安全、毒副作用很小的制剂；
(2)利用咖啡含有的咖啡因兴奋人体中枢神经的功效，迅速将各种中药的有效成分引入到人体的各器官，达到迅速治病的效果；
(3)本发明中所制备的香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物通过插入到α-葡糖糖苷酶的口袋中，改变了酶的构象，从而降低了对底物的亲和力，进而抑制了酶的活性。其结构上接枝的苯基等具备较大的空间结构，结合较强的吸电子基如氯取代基、酯基等赋予了复合物更强的抑制活性。通过对柠檬提取物进行接枝改性从而制备得到了香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物，其对于α-葡糖糖苷酶的活性比普通的药物更强，降糖效果更佳，由于是由柠檬提取物制备而得因此安全性高，将其与石斛等诸多中药材合用所制备的降糖丸具备良好的滋阴补血、降糖保健之功效。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明，但是应该明确提出这些实施例用于举例说明，但是不解释为限制本发明的范围。
本发明实施例中部分原料的参数如下：
霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)，又称“米斛”，是石斛中的极品，性微寒，味甘、淡，清热生津、滋养肝肺、开胃健脾，益精强阴、生津止渴、补虚赢、除胃中虚火；大补阴虚，对于虚劳失血、咯血、肠风血痔、盗汗夏季热、热性病和结核病后期及恢复期具有很好的滋阴清热、强肝、滋肺、补肾作用，对高热病症、脏腑劳损及病后虚弱有显著的疗效和修复作用。
连翘(Forsythia suspensa)，性苦、凉，归心、肝、胆经。清热，解毒，散结，消肿。治温热，丹毒，斑疹，痈疡肿毒，瘰疬，小便淋闭。
白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)，性味苦温辛烈，归脾胃经，健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎。用于脾虚食少，消化不良，泄泻，水肿，自汗，胎动不安。
金银花(Lonicera japonica Thunb.)，正名忍冬花，性甘寒，归肺、胃经，主温病发热，热毒血痢，痈肿疔疮，喉痹及多种感染性疾病，功能清热解毒、消炎退肿，对细菌性痢疾和各种化脓性疾病都有效。
花椒(Zanthoxylum bungeanum Maxim.)，味辛，性温，归脾、胃、肾经。温中散寒，除湿，止痛，杀虫止痒，解鱼腥毒，治积食停饮，心腹冷痛，呕吐，噫呃，咳嗽气逆，风寒湿痹，泄泻，痢疾，疝痛，齿痛，蛔虫病，蛲虫病，阴痒，疮疥。
葱白(Allium fislulosum L.)，味辛，性温，归肺、胃经。发汗解表，散寒通阳，主要用于外感风寒，阴寒内盛，格阳于外，脉微，厥逆，腹泻，外敷治疗疮痈疔毒。
甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)，味甘、性平，归心、肺、脾、胃经，补脾益气，清热解毒、祛痰止咳，甘草三萜及葡萄糖醛苷都很好地抑制病毒再生。天冬，味甘、苦，性寒，归肺、肾经，养阴润燥，清肺生津，用于肺燥干咳，顿咳痰黏，腰膝酸痛，骨蒸潮热，内热消渴，热病津伤，咽干口渴，肠燥便秘。
百合(Lilium brownii var.viridulum Baker)，性味甘，微苦，微寒，归心、肺经。养阴润肺；清心安神。主阴虚久嗽；痰中带血；热病后期；余热未清，或情志不遂所致的虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚；痈肿；湿疮。
以上药材均从中国药材集团公司购买得到，符合中华人民共和国药典2005版标准。
咖啡粉：选自雀巢(Nestle)纯黑咖啡醇品咖啡粉。
浓硫酸，wt＝95～98％，阿拉丁。
1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，wt＝98％，阿拉丁。
对照例1
一种石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，包括以下步骤：
S1将50g霍山石斛、80g连翘、100g白术、100g金银花、80g花椒、60g葱白、60g甘草、100g天冬、100g百合、5g精粉碘盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料倒入铁锅中，加热翻炒10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次加水5L，每次2h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与50g咖啡粉、20g香豆素混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
所述稠膏相对密度为1.05。
所述淀粉的用量为稠膏质量的20％。
实施例1
一种石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，包括以下步骤：
S1将50g霍山石斛、80g连翘、100g白术、100g金银花、80g花椒、60g葱白、60g甘草、100g天冬、100g百合、5g精粉碘盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料倒入铁锅中，加热翻炒10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次加水5L，每次2h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与50g咖啡粉、20g香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
所述稠膏相对密度为1.05。
所述香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物的制备方法包括如下步骤：
X1称取柠檬1kg，洗净后破碎，加5kg水，升温至70℃下搅拌4h，过滤，残渣继续加入2kg水，升温至80℃下搅拌2h，过滤，将两次过滤的滤液进行合并，在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得柠檬提取物；
X2向步骤X1中得到的柠檬提取物中加入300g浓硫酸，在25℃下搅拌1h，逐渐升温至60℃，搅拌至无气泡生成，将反应液缓慢倒入2kg冰水中，加入5kg乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到黄色固体；
X3取步骤X2中的黄色固体50g，加入20g 5-氯间苯二酚，0.5g1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，升温至40℃，在无溶剂的条件下搅拌30min，再加入500g乙酸乙酯进行稀释，室温下搅拌4h，反应结束后，加入1kg的水洗，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到白色粉末；
X4取步骤X3中的白色粉末30g，加入到200g氯化亚砜中，反应在冰盐浴下搅拌30min，升温至回流后继续搅拌，搅拌直至回流产生的蒸汽不使蓝色石蕊试纸变色为止，反应结束后将反应液直接过滤，得白色固体；
X5称取对甲基苯酚10g，吡啶10g加入到100g二乙醚中，搅拌均匀后分批加入到步骤X4中的白色固体中，加热至回流，搅拌30min，反应结束后加入100g水，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
所述淀粉的用量为稠膏质量的20％。
实施例2
一种石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，包括以下步骤：
S1将50g霍山石斛、80g连翘、100g白术、100g金银花、80g花椒、60g葱白、60g甘草、100g天冬、100g百合、5g精粉碘盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料倒入铁锅中，加热翻炒10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次加水5L，每次2h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与20g香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
所述稠膏相对密度为1.05。
所述香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物的制备方法包括如下步骤：
X1称取柠檬1kg，洗净后破碎，加5kg水，升温至70℃下搅拌4h，过滤，残渣继续加入2kg水，升温至80℃下搅拌2h，过滤，将两次过滤的滤液进行合并，在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得柠檬提取物；
X2向步骤X1中得到的柠檬提取物中加入300g浓硫酸，在25℃下搅拌1h，逐渐升温至60℃，搅拌至无气泡生成，将反应液缓慢倒入2kg冰水中，加入5kg乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到黄色固体；
X3取步骤X2中的黄色固体50g，加入20g 5-氯间苯二酚，0.5g1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，升温至40℃，在无溶剂的条件下搅拌30min，再加入500g乙酸乙酯进行稀释，室温下搅拌4h，反应结束后，加入1kg的水洗，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到白色粉末；
X4取步骤X3中的白色粉末30g，加入到200g氯化亚砜中，反应在冰盐浴下搅拌30min，升温至回流后继续搅拌，搅拌直至回流产生的蒸汽不使蓝色石蕊试纸变色为止，反应结束后将反应液直接过滤，得白色固体；
X5称取对甲基苯酚10g，吡啶10g加入到100g二乙醚中，搅拌均匀后分批加入到步骤X4中的白色固体中，加热至回流，搅拌30min，反应结束后加入100g水，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
所述淀粉的用量为稠膏质量的20％。
实施例3
一种滋阴降糖丸的制备方法，包括以下步骤：
S1将80g连翘、100g白术、100g金银花、80g花椒、60g葱白、60g甘草、100g天冬、100g百合、5g精粉碘盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料倒入铁锅中，加热翻炒10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次加水5L，每次2h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与50g咖啡粉、20g香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
所述稠膏相对密度为1.05。
所述香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物的制备方法包括如下步骤：
X1称取柠檬1kg，洗净后破碎，加5kg水，升温至70℃下搅拌4h，过滤，残渣继续加入2kg水，升温至80℃下搅拌2h，过滤，将两次过滤的滤液进行合并，在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得柠檬提取物；
X2向步骤X1中得到的柠檬提取物中加入300g浓硫酸，在25℃下搅拌1h，逐渐升温至60℃，搅拌至无气泡生成，将反应液缓慢倒入2kg冰水中，加入5kg乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到黄色固体；
X3取步骤X2中的黄色固体50g，加入20g 5-氯间苯二酚，0.5g1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，升温至40℃，在无溶剂的条件下搅拌30min，再加入500g乙酸乙酯进行稀释，室温下搅拌4h，反应结束后，加入1kg的水洗，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到白色粉末；
X4取步骤X3中的白色粉末30g，加入到200g氯化亚砜中，反应在冰盐浴下搅拌30min，升温至回流后继续搅拌，搅拌直至回流产生的蒸汽不使蓝色石蕊试纸变色为止，反应结束后将反应液直接过滤，得白色固体；
X5称取对甲基苯酚10g，吡啶10g加入到100g二乙醚中，搅拌均匀后分批加入到步骤X4中的白色固体中，加热至回流，搅拌30min，反应结束后加入100g水，分液，有机相在﹣0.9MPa，45℃下浓缩至干得到香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
所述淀粉的用量为稠膏质量的20％。
测试例1
对对照例及实施例所制备的滋阴降糖丸进行滋阴补气试验。试验设6个组，每组10只健康雄鼠，体重为18-22g，分别为阴性对照组、试验组各1组及模型组。以氢化可的松进行肾阳虚证造模，除阴性对照组外，其余小鼠每日肌注氢化可的松25mg/kg，连续注射12天，以畏寒喜暖、四肢发凉、小便清稀、消瘦为造模是否成功指标。造模成功后开始连续口服给药30天，每天以标准体重小鼠剂量＝205.5mg/kg口服给药，模型组和阴性对照组每次给予同等质量的蒸馏水口服。
表1滋阴降糖丸对小鼠睾丸重量、睾丸酮及促黄体生产激素的影响
Figure BDA0003856553910000131
由表1可知，模型组小鼠睾丸重量、睾丸酮及促黄体生产激素与阴性对照组相比明显下降，而睾丸酮和促黄体生产激素与小鼠的生殖机能密切相关。石斛滋阴补气降糖丸能使氢化可的松产生的影响得到显著的缓解。统计学分析表明，阴性对照组、试验组与模型组相比有显著性差异(P<0.01)，实施例3中没有添加石斛，其对小鼠睾丸重量、睾丸酮及促黄体激素的影响则差于其他实验方案，这可能是由于石斛的滋阴固气、平衡阴阳之效最佳，缺少石斛作为主药使得其调节阴阳失衡之效明显下降。
测试例2
对硝基苯-α-D-葡萄糖苷(PNPG)在α-葡萄糖苷酶作用下可以水解产生葡萄糖和对硝基苯酚(PNP)，因此测定PNP在405nm波长下的吸光度，即为最大吸收，从而可以计算出各样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率，并求解IC50值。在96孔板上顺序加入pH为6.8的磷酸盐缓冲液、PNPG底物及样品溶液，每个组3个孔作为重复.加入上述溶液后混合均匀，置于37℃保温10min，然后加入37℃水浴预热后的酶溶液(浓度为0.1U/mL)，轻晃使充分混匀，置于37℃下反应20min，最后加入70μL 0.2mol/L的Na2CO3溶液进行反应终止.酶标仪405nm下测定吸光度，根据公式算出各样品抑制率.抑制率＝[(AC－AB)－(AS－ASB)]/(AC－AB)×100％。式中，AC为对照组吸光值；AB为空白组吸光值；AS为样品组吸光值；ASB为样品空白组吸光值。对滋阴降糖丸进行降糖实验，为了让小鼠适应环境，需喂养一周。一周后所有小鼠24h内禁食不禁水，随机选取12只作为正常对照组，在腹腔的位置注射100mg/kg生理盐水，按100mg/kg的剂量在96只小鼠的腹腔部位注射四氧嘧啶溶液，每隔1d注射一次，共注射三次。之后的3d正常饲喂，使用血糖仪进行尾部采血时提前禁食12h。统计血糖值，选取血糖值在10～25mmol/L范围内的小鼠，将其随机分成8组，每组12只，苦味酸进行标记。实验小鼠每天以220mg/kg的剂量口服给药石斛滋阴补气降糖丸，阴性对照组和正常组的实验小鼠灌胃给药等量的生理盐水，阳性对照组的实验小鼠每天按200mg/kg灌胃给药盐酸二甲双胍。每隔一周检测一次血糖，记录整个实验周期4周的血糖值，记录数值。血糖下降百分率＝[(灌胃前血糖值-灌胃后血糖值)/灌胃前血糖值]×100％。
表2滋阴降糖丸体外降糖活性及降糖效果测试
Figure BDA0003856553910000141
Figure BDA0003856553910000151
天然香豆素及其衍生物已被实验证明具有抗糖尿病活性，对α-葡萄糖苷酶具有一定抑制能力。α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是香豆素衍生物的主要靶向酶，其抑制作用可治疗高血糖。高剂量的香豆素可能会产生毒性，如致癌性和肝毒性。在现有的香豆素衍生物分子中引入一个或多个药效团，通过协同作用改善生物活性降低毒副作用，从而获得具有潜在药用价值的化合物目前的主要研究方向。实施例1中所制备的香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物相比对照例1中的香豆素对于α-葡萄糖苷酶的抑制活性更强，这可能是由于其结构上接枝的苯基等具备较大的空间结构，结合较强的吸电子基如氯取代基、酯基等赋予了复合物更强的抑制活性，因此降糖效果会更佳。实施例1中α-葡萄糖苷酶的抑制机理主要为通过所制备的香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物插入到α-葡糖糖苷酶的口袋中，改变了酶的构象，从而降低了对底物的亲和力，进而抑制了酶的活性。复合物由柠檬提取物制备而得因此安全性高，将其与石斛等诸多中药材合用所制备的降糖丸具备良好的滋阴补血、降糖保健之功效。

Claims (8)

1.一种石斛滋阴补气降糖丸，其特征在于，包括以下原料：
霍山石斛、连翘、白术、金银花、花椒、葱白、甘草、天冬、百合、咖啡粉、盐、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
2.一种石斛滋阴补气降糖丸，其特征在于，包括以下重量份的原料：
霍山石斛3～8份、连翘5～12份、白术8～15份、金银花8～15份、花椒4～10份、葱白4～10份、甘草4～10份、天冬8～15份、百合8～15份、咖啡粉3～8份、盐3～8份、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物2～5份。
3.如权利要求1或2所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1将霍山石斛、连翘、白术、金银花、花椒、葱白、甘草、天冬、百合、盐混合均匀，备用；
S2将步骤S1混合均匀的原料加热翻炒5～10min至焦黄色，加水煎煮两次，每次1～4h，合并煎液，过滤，浓缩为稠膏；
S3将稠膏与咖啡粉、香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物混匀，干燥后粉碎成颗粒，加入淀粉混匀制成素丸，然后包衣，即得所述石斛滋阴补气降糖丸。
4.如权利要求3所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于：所述稠膏相对密度为1.05～1.20。
5.如权利要求3所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于，所述香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物的制备方法包括如下步骤：
X1称取柠檬100～150重量份，洗净后破碎，加500～1000重量份的水，升温至70～80℃下搅拌4～6h，过滤，残渣继续加入200～400重量份的水，升温至70～80℃下搅拌2～3h，过滤，将两次过滤的滤液进行合并，浓缩至干得柠檬提取物；
X2向步骤X1中得到的柠檬提取物中加入30～50重量份的浓硫酸，在20～30℃下搅拌1～2h，逐渐升温至60～70℃，搅拌至无气泡生成，将反应液缓慢倒入200～400重量份的冰水中，加入500～1000重量份的乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相浓缩至干得到黄色固体；
X3取步骤X2中的黄色固体，加入5-氯间苯二酚以及1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐，升温至30～40℃，在无溶剂的条件下搅拌30～40min，再加入50～60重量份的乙酸乙酯进行稀释，室温下搅拌4～6h，反应结束后，加入100～120重量份的水洗，分液，有机相浓缩至干得到白色粉末；
X4取步骤X3中的白色粉末，加入到氯化亚砜中，反应在冰盐浴下搅拌30～60min，升温至回流后继续搅拌，搅拌直至回流产生的蒸汽不使蓝色石蕊试纸变色为止，反应结束后将反应液直接过滤，得白色固体；
X5称取对甲基苯酚1～2重量份，吡啶1～2重量份加入到5～10重量份的二乙醚中，搅拌均匀后分批加入到步骤S4中的白色固体中，加热至回流，搅拌30～60min，反应结束后加入5～10重量份的水，分液，有机相浓缩至干得到香豆素类柠檬酸-苯丙二吡喃酮复合物。
6.如权利要求5所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于：所述步骤X3中黄色固体为5～8重量份，5-氯间苯二酚为2～3重量份，1-丁基磺酸-3-甲基咪唑硫酸氢盐为0.05～0.1重量份。
7.如权利要求5所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于：所述步骤X4中白色粉末为3～5重量份，氯化亚砜为20～30重量份。
8.如权利要求3所述的石斛滋阴补气降糖丸的制备方法，其特征在于：所述淀粉的用量为稠膏质量的20～30％。
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