CN111743974A - 提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物及其制备方法，该组合物包括以下重量组分的原料：霍山石斛提取物20～40份、败酱草提取物1～3份、虎杖提取物0.5～0.6份、土茯苓提取物0.2～0.4份、白花蛇舌草提取物1～1.5份、马鞭草提取物2.4～2.8份、蒲公英提取物0.2～0.4份、丹参提取物0.05～0.08份、赤芍提取物4～6份、王不留行提取物0.5～1.5份、没药提取物0.05～0.15份、青皮提取物0.3～0.6份、黄芪提取物0.14～0.16份、菟丝子提取物0.08～0.12份、川牛膝提取物0.01～0.03份。本发明制备得到的霍山石斛中药组合物具有滋阴润肺、生津润燥、提高免疫力、祛风去湿、抗病毒的功能。

Description

提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及霍山石斛精深加工技术领域，尤其涉及一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物及其制备方法。
背景技术
霍山石斛(学名：Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)是兰科石斛属多年生草本植物，又称米斛，其茎入药，是我国传统医药中的一种名贵中药材，产于安徽大别山的霍山及临近地区。药用石斛种类繁多，但功效差别很大，传统医学认为霍山石斛是最道地、最为珍贵的石斛品种。清代赵学敏《本草纲目拾遗》中明确、详尽地阐释了霍山石斛：“……系出六安州及颖州府霍山县，名霍山石斛，最佳。形短只寸许，形如累米，嚼之微有浆、黏齿，有解暑醒脾，止渴利水，益人力气的功效……”。
据报道，霍山石斛的主要活性成分为多糖，与霍山石斛的药效密切相关。而多糖作为生物机体的基本组成成分，多糖同蛋白质、核酸一样，广泛参与了机体维持细胞的生命现象以及生理功能的过程，并发挥着重要作用。其中，霍山石斛为铁皮石斛中的一种，而铁皮石斛于2005年载入《中国药典》，相对于其他活性成分如生物碱、菲类，我国对于铁皮石斛多糖的研究起步较晚。目前报道的霍山石斛多糖具有的生物活性主要有：免疫调节作用、改善肺功能、缓解干燥综合征以及体外抗氧化活性。但是现有技术中并未一种以霍山石斛为基础原料制备而成的具有预防、治疗、保健三合一的功能性产品。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明所要解决的技术问题之一是提供一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下重量组分的原料：霍山石斛提取物20～40份、败酱草提取物1～3份、虎杖提取物0.5～0.6份、土茯苓提取物0.2～0.4份、白花蛇舌草提取物1～1.5份、马鞭草提取物2.4～2.8份、蒲公英提取物0.2～0.4份、丹参提取物0.05～0.08份、赤芍提取物4～6份、王不留行提取物0.5～1.5份、没药提取物0.05～0.15份、青皮提取物0.3～0.6份、黄芪提取物0.14～0.16份、菟丝子提取物0.08～0.12份、川牛膝提取物0.01～0.03份。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取5～20重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后进行冻干处理以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用100～200目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60～70℃，保持恒温2～4h，然后进行高速离心处理，静置20～30mi n后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为4～6g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为0.08～1.2％，盐酸的浓度为10～20g/L；
S4、向所述上清液加入预置的混合酶水溶液，在40～50℃条件下酶解4～6h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为6～7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：(20～30)；
S5、在所述酶解液中加入预置的活性炭进行吸附10～20min，然后过滤除去所述活性炭，得到使用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述活性炭与所述酶解液的质量体积比为(0.1～0.3)(g)：(100～200)(mL)；
S6、将所述使用活性炭吸附后的酶解液进行超滤，然后真空减压浓缩至固含量为15～25％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛提取物。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，步骤S1中冻干处理的温度为-20～-10℃，冻干时间为6～10h，真空度为20～40Pa。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述混合酶水溶液中的混合酶包括果胶酶、纤维素酶，混合酶水溶液。
更优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
更优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述混合酶由果胶酶、纤维素酶、食用菌水解酶以质量比3：4：1混合而成。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述混合酶水溶液中的混合酶的浓度为0.2～0.4g/L。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，步骤S6中超滤过程为使用相对分子质量为4000～5000Da的中空纤维素膜在0.4～0.6MPa的压力下对所述使用活性炭吸附后的酶解液进行超滤。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，步骤S6中真空减压浓缩的真空度为0.095～0.094MPa，浓缩温度为40～50℃。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，步骤S7中冷冻干燥的工艺为：先在-30～-20℃之间下预冻7～9h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15～16h；最后在低温升华干燥后升温至25～30℃，再继续干燥4～6h。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用20～40目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取20～40g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在20～30℃温度下搅拌40～60min后，加入3～6g的碳酸氢钠，继续20～30℃温度下搅拌4～5h，搅拌完成后使用60～90目的过滤网进行过滤，然后置于温度为50～60℃的干燥箱中进行干4～6h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30～45min，然后以20℃/min的速率升温至1100～1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至850～900℃并保持25～30min，得到所述活性炭。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述活性炭为药用活性炭，所述药用活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用20～40目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取20～40g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在20～30℃温度下搅拌40～60min后，加入3～6g的碳酸氢钠，继续20～30℃温度下搅拌4～5h，搅拌完成后使用60～90目的过滤网进行过滤，然后置于温度为50～60℃的干燥箱中进行干4～6h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30～45min，然后以20℃/min的速率升温至1100～1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至850～900℃并保持25～30min，得到活性炭。
S3、将所述活性炭和浓度为5mol/L、体积为400～500mL的醋酸在锥形瓶中混合后置于恒温振荡器中，在20～30℃条件下振荡4～5h，振荡结束后，过滤，然后使用去离子水洗涤4～6次，洗涤完成后在120～150℃条件下干燥12～16h，得到所述药用活性炭。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述白花蛇舌草提取物的制备方法为：用白花蛇舌草的全草质量4～10倍的水对白花蛇舌草的全草进行浸泡，浸泡2～6h，在70～85℃下提取2～6h，再加入白花蛇舌草的全草质量4～10倍的水，继续70～85℃下提取2～6h，经过滤分离得到提取液和药渣，所得提取液经浓缩后得到所述白花蛇舌草提取物。
优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英的全草自然晒干后粉碎，按料液比1：(3～8)加入溶剂，超声处理，经过滤、浓缩后得到蒲公英提取物。
更优选的，在所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物中，所述溶剂为乙醇、丙酮中的一种或多种。
本发明还提供一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后，加适量辅料后按常规方法制备成口服固体制剂，即得所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物。
与现有技术相比，本发明所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物将霍山石斛提取物、败酱草提取物、虎杖提取物、土茯苓提取物、白花蛇舌草提取物、马鞭草提取物、蒲公英提取物、丹参提取物、赤芍提取物、王不留行提取物、没药提取物、青皮提取物、黄芪提取物、菟丝子提取物、川牛膝提取物进行特定的比例混合后，制备得到的霍山石斛中药组合物不仅能有效抑制自由基的氧化反应，能增强人力免疫力，进而防治一些罕见和多发性疾病，而且具有滋阴润肺、生津润燥、祛风去湿、抗病毒的功能。
具体实施方式
本发明提供一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物及其制备方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例中所使用到的新鲜的霍山石斛购于安徽省霍山县六茗堂林农科技开发有限公司，斛龄4年。
本发明实施例中所使用到的败酱草提取物购于西安全奥生物科技有限公司，棕黄色粉末，80目，产品规格为10:1(即毎10g败酱草得到1g败酱草提取物)。
本发明实施例中所使用到的虎杖提取物购于西安全奥生物科技有限公司，棕黄色粉末，80目，主要成分是虎杖苷，产品规格为10:1(即毎10g虎杖得到1g虎杖提取物)。
本发明实施例中所使用到的土茯苓提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为土茯苓的根茎，棕黄色粉末，80目，产品规格为20:1(即毎20g土茯苓得到1g土茯苓提取物)。
本发明实施例中所使用到的白花蛇舌草的拉丁学名：Hedyotis diffusa Willd，又叫蛇舌草、二叶葎、竹叶菜、蛇利草。其成药味微苦，甘，寒，入胃、大肠、小肠经，苦寒清热解毒，甘寒清利湿热，对痈肿、咽痛、蛇伤等有较强的解毒消痈作用，购于亳州市源信药业有限公司。
本发明实施例中所使用到的马鞭草提取物购于西安全奥生物科技有限公司，棕黄色粉末，80目，产品规格为10:1(即毎10g马鞭草得到1g马鞭草提取物)。
本发明实施例中所使用到的蒲公英拉丁学名：Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz.菊科，根圆锥状，表面棕褐色，皱缩，叶边缘有时具波状齿或羽状深裂，基部渐狭成叶柄，叶柄及主脉常带红紫色，花葶上部紫红色，密被蛛丝状白色长柔毛；头状花序，总苞钟状，瘦果暗褐色，长冠毛白色，花果期4～10月，富含维生素A、维生素C及钾，铁、钙、维生素B2、维生素B1、镁、维生素B6、叶酸及铜，性味甘，微苦，寒。归肝、胃经。有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效，购于都安博珍堂农业发展有限公司。
本发明实施例中所使用到的丹参提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为唇形科植物丹参Salvia Miltiorrhizae的干燥根及根茎，棕黄色粉末，主要成分是丹酚酸B，80目，产品规格为25:2(即毎25g丹参得到2g丹参提取物)。
本发明实施例中所使用到的赤芍提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为毛莨科植物芍或川赤芍的干燥根，棕黄色粉末，主要成分是赤芍苷，80目，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)。
本发明实施例中所使用到的王不留行提取物购于西安全奥生物科技有限公司，棕黄色粉末，100目，产品规格为20:1(即毎20g王不留行得到1g王不留行提取物)。
本发明实施例中所使用到的没药提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为橄榄科植物没药树或爱伦堡没药树的胶树脂，棕黄色粉末，80目，产品规格为10:1(即毎10g没药得到1g没药提取物)。
本发明实施例中所使用到的青皮提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮，棕黄色粉末，80目，产品规格为10:1(即毎10g青皮得到1g青皮提取物)。
本发明实施例中所使用到的黄芪提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为黄芪的干燥根，棕黄色粉末，主要成分是黄芪多糖，100目，产品规格为10:1(即毎10g黄芪得到1g黄芪提取物)。
本发明实施例中所使用到的菟丝子提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为旋花科菟丝子属菟丝子的成熟种子，棕黄色粉末，120目，产品规格为30:1(即毎30g菟丝子得到1g菟丝子提取物)。
本发明实施例中所使用到的川牛膝提取物购于西安全奥生物科技有限公司，提取来源为觅科植物牛膝的根，棕黄色粉末，60目，产品规格为10:1(即毎10g川牛膝得到1g川牛膝提取物)。
本发明实施例中所使用到的油茶果壳购于江西清水瑶生态农业开发有限公司。
本发明实施例中所使用到的果胶酶购于安徽中南生物科技有限公司，酶活力为40万u/g。
本发明实施例中所使用到的纤维素酶购于安徽中南生物科技有限公司，酶活力为40万u/g。
本发明实施例中所使用到的食用菌水解酶购于郑州奇华顿化工产品有限公司，酶活力为20万u/g。
实施例1
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物购于九仙尊霍山石斛股份有限公司，棕黄色粉末80目，产品规格为20:1(即毎20g丹参得到1g丹参提取物)。
所述白花蛇舌草提取物、所述蒲公英提取物均购于西安全奥生物科技有限公司，所述白花蛇舌草提取物为棕黄色粉末，产品规格为20:1(即毎20g丹参得到1g丹参提取物)，从为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草中进行提取而得。
所述蒲公英提取物为棕黄色粉末，主要成分是蒲公英多糖，蒲公英多糖的含量为蒲公英提取物的50％，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)，从菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz的干燥全草中进行提取而得。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例2
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30min后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述活性炭，得到使用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用活性炭(食品级，购于平泉市兰天活性炭厂，30目)吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。
所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
所述白花蛇舌草提取物、所述蒲公英提取物均购于西安全奥生物科技有限公司，所述白花蛇舌草提取物为棕黄色粉末，产品规格为20:1(即毎20g丹参得到1g丹参提取物)，从为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草中进行提取而得。
所述蒲公英提取物为棕黄色粉末，主要成分是蒲公英多糖，蒲公英多糖的含量为蒲公英提取物的50％，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)，从菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz的干燥全草中进行提取而得。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例3
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30mi n后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述活性炭，得到使用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用活性炭吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。
所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
所述活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用30目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取30g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在25℃温度下搅拌50min后，加入4g的碳酸氢钠，继续25℃温度下搅拌4h，搅拌完成后使用70目的过滤网进行过滤，然后置于温度为55℃的干燥箱中进行干5h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30min，然后以20℃/min的速率升温至1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至900℃并保持30min，得到所述活性炭。
所述白花蛇舌草提取物、所述蒲公英提取物均购于西安全奥生物科技有限公司，所述白花蛇舌草提取物为棕黄色粉末，产品规格为20:1(即毎20g丹参得到1g丹参提取物)，从为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草中进行提取而得。
所述蒲公英提取物为棕黄色粉末，主要成分是蒲公英多糖，蒲公英多糖的含量为蒲公英提取物的50％，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)，从菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz的干燥全草中进行提取而得。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例4
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30min后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的药用活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述药用活性炭，得到使用药用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述药用活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用药用活性炭吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。
所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
所述药用活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用30目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取30g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在25℃温度下搅拌50min后，加入4g的碳酸氢钠，继续25℃温度下搅拌4h，搅拌完成后使用70目的过滤网进行过滤，然后置于温度为55℃的干燥箱中进行干5h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30min，然后以20℃/min的速率升温至1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至900℃并保持30min，得到活性炭。
S3、将所述活性炭和浓度为5mol/L、体积为400mL的醋酸在锥形瓶中混合后置于恒温振荡器中，在25℃条件下振荡4h，振荡结束后，过滤，然后使用去离子水洗涤5次，洗涤完成后在120℃条件下干燥14h，得到所述药用活性炭。
所述白花蛇舌草提取物、所述蒲公英提取物均购于西安全奥生物科技有限公司，所述白花蛇舌草提取物为棕黄色粉末，产品规格为20:1(即毎20g丹参得到1g丹参提取物)，从为茜草科植物白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的全草中进行提取而得。
所述蒲公英提取物为棕黄色粉末，主要成分是蒲公英多糖，蒲公英多糖的含量为蒲公英提取物的50％，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)，从菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz的干燥全草中进行提取而得。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例5
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30mi n后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的药用活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述药用活性炭，得到使用药用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述药用活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用药用活性炭吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。
所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
所述药用活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用30目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取30g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在25℃温度下搅拌50min后，加入4g的碳酸氢钠，继续25℃温度下搅拌4h，搅拌完成后使用70目的过滤网进行过滤，然后置于温度为55℃的干燥箱中进行干5h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30min，然后以20℃/min的速率升温至1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至900℃并保持30min，得到活性炭。
S3、将所述活性炭和浓度为5mol/L、体积为400mL的醋酸在锥形瓶中混合后置于恒温振荡器中，在25℃条件下振荡4h，振荡结束后，过滤，然后使用去离子水洗涤5次，洗涤完成后在120℃条件下干燥14h，得到所述药用活性炭。
所述白花蛇舌草提取物的制备方法为：用白花蛇舌草的全草质量8倍的水对白花蛇舌草的全草进行浸泡，浸泡4h，在80℃下提取4h，再加入白花蛇舌草的全草质量10倍的水，继续80℃下提取4h，经过滤分离得到提取液和药渣，所得提取液经浓缩后得到所述白花蛇舌草提取物。
所述蒲公英提取物为棕黄色粉末，主要成分是蒲公英多糖，蒲公英多糖的含量为蒲公英提取物的50％，产品规格为10:1(即毎10g丹参得到1g丹参提取物)，从菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.～Mazz的干燥全草中进行提取而得。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例6
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，该组合物包括以下原料：霍山石斛提取物30份、败酱草提取物2.1份、虎杖提取物0.52份、土茯苓提取物0.3份、白花蛇舌草提取物1.2份、马鞭草提取物2.5份、蒲公英提取物0.28份、丹参提取物0.07份、赤芍提取物5份、王不留行提取物1.1份、没药提取物0.08份、青皮提取物0.5份、黄芪提取物0.15份、菟丝子提取物0.1份、川牛膝提取物0.02份。
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30mi n后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的药用活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述药用活性炭，得到使用药用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述药用活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用药用活性炭吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。
所述混合酶水溶液中的混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
所述药用活性炭的制备方法为：
S1、将油茶果壳晒干后粉碎处理后使用30目的筛网过筛得到油茶果壳粉末，然后称取30g油茶果壳粉末加入到300mL的水中，在25℃温度下搅拌50min后，加入4g的碳酸氢钠，继续25℃温度下搅拌4h，搅拌完成后使用70目的过滤网进行过滤，然后置于温度为55℃的干燥箱中进行干5h，得到预处理油茶果壳；
S2、将S1中预处理后的油茶果壳置于管式炉反应器中，并向管式炉内通入氮气30min，然后以20℃/min的速率升温至1200℃，此时向管式炉中通入水蒸气，水蒸气流量控制在1.5g/min，继续对管式炉以20℃/min的速率升温至900℃并保持30min，得到活性炭。
S3、将所述活性炭和浓度为5mol/L、体积为400mL的醋酸在锥形瓶中混合后置于恒温振荡器中，在25℃条件下振荡4h，振荡结束后，过滤，然后使用去离子水洗涤5次，洗涤完成后在120℃条件下干燥14h，得到所述药用活性炭。
所述白花蛇舌草全草提取物的制备方法为：用白花蛇舌草的全草质量8倍的水对白花蛇舌草的全草进行浸泡，浸泡4h，在80℃下提取4h，再加入白花蛇舌草的全草质量10倍的水，继续80℃下提取4h，经过滤分离得到提取液和药渣，所得提取液经浓缩后得到所述白花蛇舌草提取物。
所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英的全草自然晒干后粉碎，按料液比1：5加入乙醇，超声处理，经过滤、浓缩后得到蒲公英提取物。
一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将上述所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后得到霍山石斛中药组合物的粉料，然后与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入体积百分浓度85％的乙醇制粒并过20目筛，60℃干燥后经压片机压制成片剂，0.6g/片，其中，该粉料、乳糖、淀粉、硬脂酸镁的质量比分别为64：12：20：4，该片剂的服用方法为一次两片，一日两次。
实施例7
与实施例6基本相同，区别仅在于：
所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英的全草自然晒干后粉碎，按料液比1：5加入丙酮，超声处理，经过滤、浓缩后得到蒲公英提取物。
实施例8
与实施例6基本相同，区别仅在于：
所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英的全草自然晒干后粉碎，按料液比1：5加入由乙醇和丙酮以3：1混合而成的溶剂，超声处理，经过滤、浓缩后得到蒲公英提取物。
实施例9
与实施例8基本相同，区别仅在于：
其中所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取15重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后在-15℃、真空度30Pa的条件下冻干处理8h以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用120目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60℃，保持恒温3h，然后进行高速离心处理，静置30mi n后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为5g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为1％，盐酸的浓度为15g/L；
S4、向所述上清液加入浓度为0.3g/L的混合酶水溶液，在50℃条件下酶解5h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：20；
S5、在所述酶解液中加入预置的活性炭进行吸附15min，然后过滤除去所述活性炭，得到使用药用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述药用活性炭与所述酶解液的质量体积比为0.2(g)：100(mL)；
S6、将所述使用药用活性炭吸附后的酶解液在相对分子质量为4000Da的中空纤维素膜在0.5MPa的压力条件下进行超滤，然后在真空度为0.095MPa，45℃条件下真空减压浓缩至固含量为20％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛对应的提取物。所述混合酶由果胶酶、纤维素酶、食用菌水解酶以质量比3：4：1混合而成。
步骤S7中冷冻干燥的工艺为：在-25℃条件下预冻8h；然后在-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15h；最后低温升华干燥后升温至25℃，再继续干燥5h。
测试例1
300只清洁级小鼠(购自上海应为信生物科技有限公司)，放在洁净动物实验室适应性饲养一周，每10只一笼，分笼饲养，保持垫料干燥卫生，每三天换洗一次。每天按时打扫，做好消毒灭菌等工作，保证洁净动物实验室干净整洁。室温25±2℃，相对湿度50±5％，光照明暗间隔为12h，以鼠标准饲料常规饲养，自由进食和饮水，每周记录一次小鼠体重。
经过一周的适应期后，300只小鼠随机分为10组，即空白组、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、实施例9。实施例1-9中制备得到的粉料均设为296mg/kg/d，每天上午9：00-10：30期间灌胃，空白组小鼠灌胃等量的生理盐水。灌胃30天后，参照《保健食品检验与评价技术规范实施手册-2003版》检测受试样品的抗疲劳功效，其中测试过程中血尿素氮(BUN)检测试剂盒、肝糖原检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)WST-1法测试盒、丙二醛(MDA)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒均购自南京金益柏生物科技有限公司。
负重游泳实验：末次给样30min后，从各组中随机取10只小鼠，将其尾根部缠绕5％体重的铅皮后，放置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温25±1℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。
血清尿素测定：末次给样30min后，从各组中随机取10只小鼠，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后拔眼球采全血。不加抗凝剂于4℃冰箱放置约3h，血凝固后3000转/分的离心机中离心10min，取血清备用。用血尿素氮(BUN)检测试剂盒测定。
肝糖原、MDA、CAT、SOD及GSH-Px测定：末次给样30min后，从各组中随机取10只小鼠拔眼球采全血，将收集到的血液于3000转/分的离心机中离心10min，取血清备用，按照MDA、CAT、SOD及GSH-Px测试盒进行测定。采血完成后，立即解剖小鼠，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg，按照肝糖原检测试剂盒说明进行测定。
其中，抗氧化酶为生物体防御氧化损伤发挥了主要的作用，而体内抗氧化酶主要有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)，SOD可催化过氧化物形成H2O2和O2，对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，是细胞防御氧自由基的第一道防线。GSH-Px是以GSH为底物，特异性催化GSH氧化成GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2O2的分解，从而起到保护细胞膜结构及功能完整的作用。CAT酶是机体内清除H2O2的重要酶，在细胞内主要与线粒体及过氧化物酶结合，它能将细胞代谢所产生的毒性物质H2O2迅速加以清除，从而起到和GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白和解毒的作用，提高抗氧化酶的活力，就能加快自由基的清除。
负重游泳实验、血清尿素、肝糖原、MDA、CAT、SOD及GSH-Px测定结果取平均值，测定结果件表1：
表1小鼠抗疲劳结果测试表
Figure BDA0002592201060000211
从表1中可以看出，实施例9中制备得到的粉料能持续提高小鼠的运动能力，同时小鼠体内血清尿素以及MDA均低于空白组以及实施例1-8，另外实施例9中小鼠体内的肝糖原、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶均高于实施例1-8以及空白组中的小鼠。
测试例2
DPPH清除率测定：1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)是一种稳定的有机自由基，其溶液具有特征性的紫红色团吸收峰，当存在自由基清除剂时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受的电子数成定量关系，因而可用光度法检测自由基的清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。将实施例1-9中制备得到的粉料与去离子水混合后得到浓度为10mg/mL的组合物溶液，准确吸取1mL该组合物溶液加入至容量为10mL比色管中，然后加入0.8mg/mL的DPPH溶液2.5mL，用蒸馏水将比色管定容至5mL，并将其在室温环境下静置20min后，在波长为517nm处测定吸光度，并通过下面公式来计算清除率。
清除率(％)＝(A0-A)/A0*100％
式中：A0为未加组合物溶液时测定的DPPH的吸光度；A为加组合物溶液后测定的DPPH的吸光度。
羟自由基清除率的测定：向试管中依次加入1mL的0.75mmol/邻二氮菲溶液，2mL、pH＝7.4的磷酸盐缓冲液和1mL蒸馏水，充分混匀，然后加入1mL的0.01％双氧水，37℃水浴60min，于536nm测定吸光值为A1；A2为1mL蒸馏水代替双氧水测定的吸光值；A0为1mL样品代替蒸馏水测定的吸光值。羟自由基清除率的计算公式如下：
羟自由基清除率(％)＝(A0-A1)/(A2-A1)×100％
表2自由基清除率的测定结果
Figure BDA0002592201060000221
Figure BDA0002592201060000231
从表2中可以看出，实施例9中制备得到的粉料的自由基的清除率高于实施例1-8中制备得到的粉料，该粉料与乳糖、淀粉、硬脂酸镁混合均匀后，加入乙醇制粒并干燥后经压片机压制成片剂能有效的清除人体内的自由基，能延缓运动性疲劳发生和加快体能恢复，强化人体的免疫能力。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，包括以下重量组分的原料：霍山石斛提取物20～40份、败酱草提取物1～3份、虎杖提取物0.5～0.6份、土茯苓提取物0.2～0.4份、白花蛇舌草提取物1～1.5份、马鞭草提取物2.4～2.8份、蒲公英提取物0.2～0.4份、丹参提取物0.05～0.08份、赤芍提取物4～6份、王不留行提取物0.5～1.5份、没药提取物0.05～0.15份、青皮提取物0.3～0.6份、黄芪提取物0.14～0.16份、菟丝子提取物0.08～0.12份、川牛膝提取物0.01～0.03份。
2.根据权利要求1所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，所述霍山石斛提取物由以下步骤制备而成：
S1、取5～20重量份的新鲜的霍山石斛去除杂质后使用水清洗干净，然后进行冻干处理以得到冻干后的霍山石斛；
S2、将所述冻干后的霍山石斛进行粉碎处理，并使用100～200目的筛子过筛以得到过筛后的霍山石斛粉末；
S3、在常温下将所述霍山石斛粉末置于预置的含有氯化钠和盐酸水溶液中，搅拌并升温至60～70℃，保持恒温2～4h，然后进行高速离心处理，静置20～30min后分层提取上清液，其中，所述含有氯化钠和盐酸水溶液与所述霍山石斛粉末的体积质量比为200(mL)：1(g)，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中氯化钠的浓度为4～6g/L，所述含有氯化钠和盐酸水溶液中盐酸的体积百分比为0.08～1.2％，盐酸的浓度为10～20g/L；
S4、向所述上清液加入预置的混合酶水溶液，在40～50℃条件下酶解4～6h，得到酶解液，其中，酶解过程中使用质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液进行pH调节，使得酶解过程中的pH为6～7，所述混合酶水溶液与所述上清液的体积比3：(20～30)；
S5、在所述酶解液中加入预置的活性炭进行吸附10～20min，然后过滤除去所述活性炭，得到使用活性炭吸附后的酶解液，其中，所述活性炭与所述酶解液的质量体积比为(0.1～0.3)(g)：(100～200)(mL)；
S6、将所述使用活性炭吸附后的酶解液进行超滤，然后真空减压浓缩至固含量为15～25％的浓缩液；
S7、将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得到所述霍山石斛提取物。
3.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，步骤S1中冻干处理的温度为-20～-10℃，冻干时间为6～10h，真空度为20～40Pa。
4.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，所述混合酶水溶液中的混合酶包括果胶酶、纤维素酶，混合酶水溶液，。
5.根据权利要求4所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，所述混合酶由果胶酶、纤维素酶以质量比3：4混合而成。
6.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，所述混合酶水溶液中的混合酶的浓度为0.2～0.4g/L。
7.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，步骤S6中超滤过程为使用相对分子质量为4000～5000Da的中空纤维素膜在0.4～0.6MPa的压力下对所述使用活性炭吸附后的酶解液进行超滤。
8.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，步骤S6中真空减压浓缩的真空度为0.095～0.094MPa，浓缩温度为40～50℃。
9.根据权利要求2所述的提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物，其特征在于，步骤S7中冷冻干燥的工艺包括下述步骤：
S1、在-30～-20℃条件下预冻7～9h；
S2、-25℃到-5℃过程中低温升华干燥15～16h；
S3、低温升华干燥后升温至25～30℃，再继续干燥4～6h。
10.一种提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物的制备方法，将权利要求1～9中任意一项所述霍山石斛提取物、所述败酱草提取物、所述虎杖提取物、所述土茯苓提取物、所述白花蛇舌草提取物、所述马鞭草提取物、所述蒲公英提取物、所述丹参提取物、所述赤芍提取物、所述王不留行提取物、所述没药提取物、所述青皮提取物、所述黄芪提取物、所述菟丝子提取物、所述川牛膝提取物按比例在常温下均匀混合后，加适量辅料后按常规方法制备成口服固体制剂，即得所述提高人体免疫力的霍山石斛中药组合物。
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