CN104086615B - 一种从罗汉果中制备罗汉果甙v的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,包括下述步骤:原料处理、高压处理、超临界CO2流体萃取,收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用50-60%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V。具有含量高,工艺简单,适合生产,生产成本低等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域的提取方法,具体说是一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法。
背景技术
罗汉果,被人们誉为“神仙果”,是我国特有的珍贵葫芦科植物,素有良药佳果之称。罗汉果属葫芦科植物,是一种多用途的药用和保健果品,是全世界特有的药用植物,1977年中国药典收载作为中药使用,1987年卫生部又将罗汉果列为既是药品又是食品的中药之一,据《中药大辞典》等书记载,罗汉果味极甜、性凉、无毒,入脾肺,具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、祛痰补血、益肝、健脾、镇静、止渴、促进肠胃机能、抑制哮喘以及降压等功效,常用于肺火燥咳、咽痛失音、肠燥便秘等症。
罗汉果提取物的主要成分为罗汉果甜甙,罗汉果甜甙具有很好的保健作用,对促进肠胃机能和清热止咳、滑肠排毒、嫩肤益颜、清热润肺的效果更为显著,可广泛应用于营养保健品、食品、药品等行业中。罗汉果甜甙中的有效成分主要是萜类化合物,包括甙III、甙IV、甙V等,其中罗汉果甜甙V(也称为罗汉果甙V,下同)是其甜味的主要成分,研究表明:罗汉果果实中分离并鉴定出了罗汉果甙Ⅲ、罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)、罗汉果甙V、罗汉果甙ⅡE、罗汉果甙ⅢE、罗汉果甙Ⅵ、罗汉果甙A、罗汉果新甙(neomogroside)、赛门甙Ⅰ(SiamensideⅠ)、11-oxo-mogroside、罗汉果二醇苯甲酸酯(mogroester)共11种葫芦烷三萜甙类(cucurbitaneglycosides)化合物,该类化合物是罗汉果果实中的主要活性物质,约占干果重4%,除少数为无甜[如罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)]或苦味[如罗汉果新甙(neomogroside)]物质外,大多为甜味成分或微甜物质。其中罗汉果甙V为三萜系糖甙类S-5的强甜物质,是罗汉果果实中含量和甜度均较高的成分,是主要的甜味成分,其甜度相当于蔗糖的300倍,比甜菊甙(甜度相当蔗糖100-150倍)要甜得多,而且没有甜菊甙的苦异味,这种强甜物质味甜而纯正,无异味、回味感强、热稳定好,在100℃水溶液中稳定,在120℃连续加热12小时以上仍不被破坏,属非发酵物质,利于加工贮存。根据中国药学资料和日本学者竹本常松教授的研究证明:罗汉果对各种疾病起主要效果的就是罗汉果甜甙V。
目前,人们从罗汉果中获得提取物的方法主要有以下几种:1、水提加树脂分离法:其生产工艺是将罗汉果破碎后装入压力罐内,加水加温水提,将多次水提液合并过滤,上树脂进行吸附分离,用乙醇或甲醇洗脱,洗脱液去醇后,喷雾干燥而成;2、醇提(浸)膜分离法:其工艺是将罗汉果破碎,加入50%乙醇,装入储罐内常温或加温浸提,多次浸提液合并过滤,过滤液通过膜分离浓缩,浓缩液进行真空干燥而成;3、采用加热提取的方法。但采用上述方法得到的罗汉果提取物均存在一定的缺陷:所得到的提取物色泽深并具有浓烈的中药味和强烈的后苦味、有效成分含量低、提取液的颜色加深,而不利于后续的脱色提纯处理,能源消耗大、生产成本高的缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,具有工艺简单,适合生产,生产成本低等优点。
本发明通过以下技术方案实现,具体包括如下步骤:
1)原料处理:取新鲜的罗汉果,洗净,破碎;
2)高压处理:将破碎后的罗汉果,放入高压罐中,加入相同重量的纯净水,加压至4kg/cm2,使其压力均匀,并保持10-15min,恢复常压,得到膏状浆液;
3)超临界CO2流体萃取:将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中,以超临界CO2流体为萃取溶剂,以体积浓度为50-60%的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取,膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4,乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2;萃取温度为50-60℃,萃取压力为15-20Mpa,萃取时间为1.5-2.0小时;
4)收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用50-60%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V。
本发明步骤4)所述的HP-20ss树脂柱,树脂用量为上清液重量的40-60倍。
本发明得到的罗汉果甙V,为白色粉末,经HPLC检测,含量在70%以上。
与现有技术相比,本发明的优点:
1、现有技术在进行罗汉果甜甙等成分的提取时,前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂,通过加热提取来将有效成分溶出,而本发明采用高压来处理罗汉果原料,相比加热提取,不仅时间短,而且,避免了高温对罗汉果有效成分的破坏。
2、现有技术得到的罗汉果甙V含量一般在40-60%之间,本发明采用高压技术、超临界CO2流体萃取和柱层析吸附技术的结合,随着高压技术的加入,使得本发明的技术结合出现质的提高,相比水提或醇提后柱层析,本发明时间短,罗汉果甙V含量高;相比超临界CO2流体萃取加柱层析,本发明收率高。
3、本发明避免了无水乙醇、甲醇等大量有机溶剂的使用,更加环保。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1:
一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,具体包括如下步骤:
1)原料处理:取新鲜的罗汉果100kg,洗净,破碎;
2)高压处理:将破碎后的罗汉果,放入高压罐中,加入100kg纯净水,加压至4kg/cm2,使其压力均匀,并保持15min,恢复常压,得到膏状浆液约200kg;
3)超临界CO2流体萃取:将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中,以超临界CO2流体为萃取溶剂,以体积浓度为60%的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取,膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4,乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2;萃取温度为60℃,萃取压力为15Mpa,萃取时间为1.5小时;
4)收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用50%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V,含量71.2%。
实施例2:
一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,具体包括如下步骤:
1)原料处理:取新鲜的罗汉果100kg,洗净,破碎;
2)高压处理:将破碎后的罗汉果,放入高压罐中,加入100kg纯净水,加压至4kg/cm2,使其压力均匀,并保持10min,恢复常压,得到膏状浆液约200kg;
3)超临界CO2流体萃取:将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中,以超临界CO2流体为萃取溶剂,以体积浓度为50%的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取,膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4,乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2;萃取温度为50℃,萃取压力为20Mpa,萃取时间为2.0小时;
4)收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用60%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V,含量72.1%。
实施例3:
一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,具体包括如下步骤:
1)原料处理:取新鲜的罗汉果100kg,洗净,破碎;
2)高压处理:将破碎后的罗汉果,放入高压罐中,加入100kg纯净水,加压至4kg/cm2,使其压力均匀,并保持12min,恢复常压,得到膏状浆液约200kg;
3)超临界CO2流体萃取:将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中,以超临界CO2流体为萃取溶剂,以体积浓度为55%的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取,膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4,乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2;萃取温度为55℃,萃取压力为20Mpa,萃取时间为2.0小时;
4)收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用55%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V,含量70.8%。
Claims (1)
1.一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法,其特征在于具体包括如下步骤:
1)原料处理:取新鲜的罗汉果,洗净,破碎;
2)高压处理:将破碎后的罗汉果,放入高压罐中,加入相同重量的纯净水,加压至4kg/cm2,使其压力均匀,并保持10-15min,恢复常压,得到膏状浆液;
3)超临界CO2流体萃取:将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中,以超临界CO2流体为萃取溶剂,以体积浓度为50-60%的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取,膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4,乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2;萃取温度为50-60℃,萃取压力为15-20Mpa,萃取时间为1.5-2.0小时;
4)收集萃取完后得到的提取液,离心,上清液进行HP-20ss树脂柱层析,再用50-60%的乙醇溶液洗脱,经浓缩、喷雾干燥,得到罗汉果甙V。
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