CN106977574A

CN106977574A - 从罗汉果中提取罗汉果甙v的方法

Info

Publication number: CN106977574A
Application number: CN201710198656.2A
Authority: CN
Inventors: 何伟平
Original assignee: Guilin Strength Science And Technology Ltd
Current assignee: Guilin Strength Science And Technology Ltd
Priority date: 2017-03-29
Filing date: 2017-03-29
Publication date: 2017-07-25

Abstract

本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：1)取罗汉果粉碎，高压处理，得到浆液；2)将浆液超声波提取，得到提取粗液；3)将提取粗液离心分离，取沉淀；4)将沉淀用无水甲醇洗涤；5)将洗涤后的沉淀用进行超滤浓缩，得到浓缩液；6)将浓缩液结晶，重结晶，干燥，得到罗汉果甙V。本发明方法制备得到的罗汉果甙V具有高纯度，高生物活性，高提取率。

Description

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法

技术领域

本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法。

背景技术

罗汉果，为葫芦科植物罗汉果属多年生草质藤本植物罗汉果Momordicagrosvenori Swingle的干燥成熟果实，为一常用中药，具有清热解暑、润肺止渴作用，临床上可用于治疗高血压、肺结核、哮喘、胃炎、百日咳、急慢性支气管炎和急慢性扁桃体炎等多种疾病，同时罗汉果也是常用饮料干果，提取物是常用甜味剂，大量出口，远销日本、韩国、中国台湾、东南亚、加拿大、美国等地。

罗汉果及罗汉果提取物中的主要成分为葫芦烷型三萜皂苷，包括罗汉果苷IV(mogrosideIV)、罗汉果苷V(mogroside V)、赛门苷I(siamenoside I)、11-氧-罗汉果苷V(11-oxo-mogrosideV)、罗汉果苷IIE(mogroside IIE)、罗汉果苷IIIE(mogroside IIIE)等多种皂苷，其中罗汉果苷V为主要皂苷类成分。罗汉果苷V也是罗汉果的主要甜味成分，其甜度高，为蔗糖的四百多倍。由于制药工业及食品工业的发展，目前国内外对高纯度的罗汉果V的需求量非常大，但目前尚未见有高纯度的罗汉果苷V生产、销售。虽有多项专利申请涉及罗汉果甜苷的提取，方法简单，但所得产物为罗汉果总苷，提取物中罗汉果苷V的纯度均较低，不超过80％，限制了其应用范围和发展前景。

现有技术中提取罗汉果苷V纯度不够高，即使纯度高，但是提取率还是相对比较低。因此研究开发高纯度和高提取率的罗汉果苷V的方法很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，该方法制备得到的罗汉果甙V具有高纯度，高生物活性，高提取率。

为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：

本发明提供从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量8～12倍的乙醇溶液，在78～90MPa下高压处理3～6min，得到浆液；

2)将浆液在600～900W功率下超声波提取25～35min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在4000～6000r/min转速下离心分离3～7min，取沉淀；

4)将沉淀用其重量5～8倍重量的无水甲醇洗涤；

5)将洗涤后的沉淀用其6～9倍的去离子水溶解，用截留分子量为8～10万Da的超滤膜进行超滤分离，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为110～120万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，干燥，得到罗汉果甙V。

本发明所述步骤1)中，乙醇溶液的体积浓度为30～40％。合适乙醇溶液浓度，有助于提高罗汉果甙V的提取率。

本发明所述步骤1)中，在35～50℃下进行高压处理。通过高压处理，有利于后面罗汉果甙V的提取，提高罗汉果甙V的提取率。

本发明所述步骤2)中，在35～45℃下进行超声波提取。超声波提取条件温和，有利于提高罗汉果甙V的生物活性。

本发明所述步骤4)中，洗涤重复进行2～3次。多次洗涤有助于提高罗汉果甙V的纯度。

本发明所述步骤5)中，超滤分离时的操作温度为25～35℃，压力为0.35～0.4MPa。通过限定超滤条件，有利于提高超滤的效果。

本发明所述步骤6)中，真空冷冻干燥。真空冷冻干燥，效率高，且有利于保护罗汉果甙V的生物活性。

本发明所述步骤6)中，在干燥前还进行离心分离。干燥前进行离心分离有利于提高罗汉果甙V的纯度。

本发明所述步骤6)中，在7000～9000r/min转速下离心分离。转速控制得到，以确保罗汉果甙V的纯度和提取率。

本发明所述步骤6)中，离心分离1～4min。

通过本发明方法从罗汉果中提取罗汉果甙V先进行高压处理，有助于加快罗汉果甙V的溶出，提高提取效率，然后再进行超声波提取条件温和，最大限度保护有效成分不被破坏，且加快提取速度，后面使用不同截留分子量的超滤膜过滤得到的罗汉果甙V生物活性较好，且能够有效延长在体内中的作用，延长药效和提高效果，制备得到的罗汉果甙V纯度和提取率高。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量8倍体积浓度为40％的乙醇溶液，在78MPa和35℃温度下高压处理3min，得到浆液；

2)将浆液在900W功率和35℃温度下超声波提取35min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在4000r/min转速下离心分离7min，取沉淀；

4)将沉淀用其重量5倍重量的无水甲醇洗涤，洗涤重复进行2次；

5)将洗涤后的沉淀用其6倍的去离子水溶解，用截留分子量为9万Da 的超滤膜进行超滤分离，操作温度为25℃，压力为0.4MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为110万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，在9000r/min转速下离心分离1min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为89.9％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为98.8％。

实施例2

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量9倍体积浓度为35％的乙醇溶液，在81MPa和50℃温度下高压处理4min，得到浆液；

2)将浆液在800W功率和40℃温度下超声波提取25min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在4500r/min转速下离心分离6min，取沉淀；

4)将沉淀用其重量6倍重量的无水甲醇洗涤，洗涤重复进行3次；

5)将洗涤后的沉淀用其7倍的去离子水溶解，用截留分子量为8万Da的超滤膜进行超滤分离，操作温度为30℃，压力为0.38MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为112万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，在8500r/min转速下离心分离2min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为91.2％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为98.8％。

实施例3

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量10倍体积浓度为40％的乙醇溶液，在84MPa和45℃温度下高压处理5min，得到浆液；

2)将浆液在700W功率和45℃温度下超声波提取35min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在5000r/min转速下离心分离5min，取沉淀；

4)将沉淀用其重量7倍重量的无水甲醇洗涤，洗涤重复进行2次；

5)将洗涤后的沉淀用其8倍的去离子水溶解，用截留分子量为10万Da的超滤膜进行超滤分离，操作温度为35℃，压力为0.37MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为115万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，在8000r/min转速下离心分离3min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为90.5％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为99.1％。

实施例4

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量11倍体积浓度为35％的乙醇溶液，在87MPa和40℃温度下高压处理6min，得到浆液；

2)将浆液在650W功率和40℃温度下超声波提取30min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在5500r/min转速下离心分离4min，取沉淀；

4)将沉淀用其重量8倍重量的无水甲醇洗涤，洗涤重复进行3次；

5)将洗涤后的沉淀用其9倍的去离子水溶解，用截留分子量为9万Da的超滤膜进行超滤分离，操作温度为25℃，压力为0.36MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为118万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，在7500r/min转速下离心分离4min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为90.6％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为99.2％。

实施例5

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量12倍体积浓度为30％的乙醇溶液，在90MPa和35℃温度下高压处理5min，得到浆液；

2)将浆液在600W功率和35℃温度下超声波提取25min，得到提取粗液；

3)将提取粗液在6000r/min转速下离心分离3min，取沉淀；

5)将洗涤后的沉淀用其6倍的去离子水溶解，用截留分子量为8万Da的超滤膜进行超滤分离，操作温度为35℃，压力为0.35MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为120万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

6)将浓缩液结晶，重结晶，在7000r/min转速下离心分离1min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为89.2％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为99.3％。

对比例1

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

1)取罗汉果粉碎，加入罗汉果重量10倍体积浓度为40％的乙醇溶液，在700W功率和45℃温度下超声波提取35min，得到提取粗液；

2)将提取粗液在5000r/min转速下离心分离5min，取沉淀；

3)将沉淀用其重量7倍重量的无水甲醇洗涤，洗涤重复进行2次；

4)将洗涤后的沉淀用其8倍的去离子水溶解，用截留分子量为10万Da的超滤膜进行超滤分离，操作温度为35℃，压力为0.37MPa，得到超滤液，然后将超滤液用截留分子量为115万Da的超滤膜进行超滤浓缩，得到浓缩液；

5)将浓缩液结晶，重结晶，在8000r/min转速下离心分离3min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为78.1％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为98.9％。

对比例2

从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括以下制备步骤：

3)将提取粗液在5000r/min转速下离心分离5min，取沉淀；

5)将洗涤后的沉淀用其8倍的乙醇溶液溶解，结晶，重结晶，在8000r/min转速下离心分离3min，真空冷冻干燥，得到罗汉果甙V。

经计算，罗汉果甙V提取率为78.9％，经HPLC检测罗汉果甙V纯度为90.2％。

Claims

1.从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

4)将沉淀用其重量5～8倍重量的无水甲醇洗涤；

6)将浓缩液结晶，重结晶，干燥，得到罗汉果甙V。

2.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤1)中，乙醇溶液的体积浓度为30～40％。

3.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤1)中，在35～50℃下进行高压处理。

4.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤2)中，在35～45℃下进行超声波提取。

5.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤4)中，洗涤重复进行2～3次。

6.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤5)中，超滤分离时的操作温度为25～35℃，压力为0.35～0.4MPa。

7.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤6)中，真空冷冻干燥。

8.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤6)中，在干燥前还进行离心分离。

9.根据权利要求8所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤6)中，在7000～9000r/min转速下离心分离。

10.根据权利要求9所述的从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：所述步骤6)中，离心分离1～4min。