CN104098641A - 一种从罗汉果中提取罗汉果甙v的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，包括下述步骤:原料处理、高压微射流超微粉碎处理、超临界CO₂流体萃取，收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。具有含量高，工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

Description

一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法。

背景技术

罗汉果，被人们誉为“神仙果”，是我国特有的珍贵葫芦科植物，素有良药佳果之称。罗汉果属葫芦科植物，是一种多用途的药用和保健果品，是全世界特有的药用植物，1977年中国药典收载作为中药使用，1987年卫生部又将罗汉果列为既是药品又是食品的中药之一，据《中药大辞典》等书记载，罗汉果味极甜、性凉、无毒，入脾肺，具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、祛痰补血、益肝、健脾、镇静、止渴、促进肠胃机能、抑制哮喘以及降压等功效，常用于肺火燥咳、咽痛失音、肠燥便秘等症。

罗汉果提取物的主要成分为罗汉果甜甙，罗汉果甜甙具有很好的保健作用，对促进肠胃机能和清热止咳、滑肠排毒、嫩肤益颜、清热润肺的效果更为显著，可广泛应用于营养保健品、食品、药品等行业中。罗汉果甜甙中的有效成分主要是萜类化合物，包括甙III、甙IV、甙V等，其中罗汉果甜甙V(也称为罗汉果甙V，下同)是其甜味的主要成分，研究表明：罗汉果果实中分离并鉴定出了罗汉果甙Ⅲ、罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)、罗汉果甙V、罗汉果甙ⅡE、罗汉果甙ⅢE、罗汉果甙Ⅵ、罗汉果甙A、罗汉果新甙(neomogroside)、赛门甙Ⅰ(SiamensideⅠ)、11-oxo-mogroside、罗汉果二醇苯甲酸酯(mogroester)共11种葫芦烷三萜甙类(cucurbitaneglycosides)化合物，该类化合物是罗汉果果实中的主要活性物质，约占干果重4％，除少数为无甜[如罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)]或苦味[如罗汉果新甙(neomogroside)]物质外,大多为甜味成分或微甜物质。其中罗汉果甙V为三萜系糖甙类S-5的强甜物质，是罗汉果果实中含量和甜度均较高的成分,是主要的甜味成分，其甜度相当于蔗糖的300倍，比甜菊甙(甜度相当蔗糖100-150倍)要甜得多，而且没有甜菊甙的苦异味，这种强甜物质味甜而纯正，无异味、回味感强、热稳定好，在100℃水溶液中稳定，在120℃连续加热12小时以上仍不被破坏，属非发酵物质，利于加工贮存。根据中国药学资料和日本学者竹本常松教授的研究证明：罗汉果对各种疾病起主要效果的就是罗汉果甜甙V。

目前，人们从罗汉果中获得提取物的方法主要有以下几种:1、水提加树脂分离法:其生产工艺是将罗汉果破碎后装入压力罐内，加水加温水提，将多次水提液合并过滤，上树脂进行吸附分离，用乙醇或甲醇洗脱，洗脱液去醇后，喷雾干燥而成；2、醇提(浸)膜分离法:其工艺是将罗汉果破碎，加入50％乙醇，装入储罐内常温或加温浸提，多次浸提液合并过滤，过滤液通过膜分离浓缩，浓缩液进行真空干燥而成；3、采用加热提取的方法。现有技术采用上述方法得到的罗汉果提取物均存在一定的缺陷：所得到的提取物色泽深并具有浓烈的中药味和强烈的后苦味、有效成分含量低、提取液的颜色加深，而不利于后续的脱色提纯处理，能源消耗大、生产成本高的缺点。

高压微射流超微粉碎技术是国外近些年发展起来的性能优异的湿法超微粉碎技术，高压微射流超微粉碎设备可产生挤压力、剪切力、冲击力，经过液-液、液-固之间的高速撞击、高剪切、空穴作用等，使物料的分子结构发生变化。高压微射流超微粉碎设备可以做到纳米分散，细化效果可达0.lum甚至以下，压力高达100-200MPa，因此也称为纳米均质机或超高压均质机，具有颗粒粒径分布均匀、操作简单、无污染、可在线清洁消毒、可高效率进行细胞破壁等诸多优点。如中国专利CN101019627A，公开了一种用微射流瞬时高压技术制备高性能百合全粉的方法，使用该设备改善百合超微全粉的物理特性和产品性能；又如中国专利CN101940320B，公开了一种薄膜分散-动态高压微射流制备中链脂肪酸纳米脂质体的方法，也使用该设备制备性质优良的中链脂肪酸纳米脂质体。

目前，没有高压微射流超微粉碎技术在植物活性成分提取中应用的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果，洗净，破碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将破碎后的罗汉果浆液按照1:8-10的重量比加入纯净水，用高速剪切乳化机处理10-20min，转速为8000-12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80-120MPa，处理次数为2-4次，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压微射流超微粉碎处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50-60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50-60℃，萃取压力为15-20Mpa，萃取时间为1.5-2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。

本发明步骤4)所述的HP-20ss树脂柱，树脂用量为上清液重量的40-60倍。

本发明得到的罗汉果甙V，为白色粉末，经HPLC检测，含量在75％以上。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、现有技术在进行罗汉果甜甙等成分的提取时，前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂，通过加热提取来将有效成分溶出，而本发明采用高压微射流超微粉碎来处理罗汉果原料，相比加热提取，经过高压超微粉碎作用，提高了水溶性活性成分(罗汉果甙V等)的溶出，同时改变了罗汉果中多糖、膳食纤维的组成和结构，暴露更多的结合位点，提高其吸附性、分散性，不溶性膳食纤维的持水力、持油力和溶胀性增加，水溶性膳食纤维的吸附能力增强，利于后续工艺的处理，利于提高活性成分的收率，而且，避免了高温对罗汉果有效成分的破坏。

2、现有技术得到的罗汉果甙V含量一般在40-60％之间，本发明采用高压微射流超微粉碎技术、超临界CO₂流体萃取和柱层析吸附技术的结合，随着高压微射流超微粉碎技术的加入，使得本发明的技术结合出现质的提高，相比水提或醇提后柱层析，本发明时间短，罗汉果甙V含量高；相比超临界CO₂流体萃取加柱层析，本发明收率高。

3、本发明避免了无水乙醇、甲醇等大量有机溶剂的使用，更加环保。具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将破碎后的罗汉果浆液加入纯净水800kg，用高速剪切乳化机处理10min，转速为12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为100MPa，处理次数为4次，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压微射流超微粉碎处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为60℃，萃取压力为15Mpa，萃取时间为1.5小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量75.2％。

实施例2：

一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将破碎后的罗汉果浆液加入纯净水1000kg，用高速剪切乳化机处理20min，转速为10000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为120MPa，处理次数为3次，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压微射流超微粉碎处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50℃，萃取压力为20Mpa，萃取时间为2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量76.1％。

实施例3：

一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将破碎后的罗汉果浆液加入纯净水900kg，用高速剪切乳化机处理15min，转速为8000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80MPa，处理次数为2次，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压微射流超微粉碎处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为55％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为55℃，萃取压力为20Mpa，萃取时间为2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用55％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量75.8％。

Claims (1)

1.一种从罗汉果中提取罗汉果甙V的方法，其特征在于：

具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果，洗净，破碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将破碎后的罗汉果浆液按照1:8-10的重量比加入纯净水，用高速剪切乳化机处理10-20min，转速为8000-12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80-120MPa，处理次数为2-4次，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压微射流超微粉碎处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50-60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50-60℃，萃取压力为15-20Mpa，萃取时间为1.5-2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。