CN104086615A - 一种从罗汉果中制备罗汉果甙v的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，包括下述步骤:原料处理、高压处理、超临界CO₂流体萃取，收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。具有含量高，工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

Description

一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法。

背景技术

罗汉果，被人们誉为“神仙果”，是我国特有的珍贵葫芦科植物，素有良药佳果之称。罗汉果属葫芦科植物，是一种多用途的药用和保健果品，是全世界特有的药用植物，1977年中国药典收载作为中药使用，1987年卫生部又将罗汉果列为既是药品又是食品的中药之一，据《中药大辞典》等书记载，罗汉果味极甜、性凉、无毒，入脾肺，具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、祛痰补血、益肝、健脾、镇静、止渴、促进肠胃机能、抑制哮喘以及降压等功效，常用于肺火燥咳、咽痛失音、肠燥便秘等症。

罗汉果提取物的主要成分为罗汉果甜甙，罗汉果甜甙具有很好的保健作用，对促进肠胃机能和清热止咳、滑肠排毒、嫩肤益颜、清热润肺的效果更为显著，可广泛应用于营养保健品、食品、药品等行业中。罗汉果甜甙中的有效成分主要是萜类化合物，包括甙III、甙IV、甙V等，其中罗汉果甜甙V(也称为罗汉果甙V，下同)是其甜味的主要成分，研究表明：罗汉果果实中分离并鉴定出了罗汉果甙Ⅲ、罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)、罗汉果甙V、罗汉果甙ⅡE、罗汉果甙ⅢE、罗汉果甙Ⅵ、罗汉果甙A、罗汉果新甙(neomogroside)、赛门甙Ⅰ(SiamensideⅠ)、11-oxo-mogroside、罗汉果二醇苯甲酸酯(mogroester)共11种葫芦烷三萜甙类(cucurbitaneglycosides)化合物，该类化合物是罗汉果果实中的主要活性物质，约占干果重4％，除少数为无甜[如罗汉果甙Ⅳ(mogrosideⅣ)]或苦味[如罗汉果新甙(neomogroside)]物质外,大多为甜味成分或微甜物质。其中罗汉果甙V为三萜系糖甙类S-5的强甜物质，是罗汉果果实中含量和甜度均较高的成分,是主要的甜味成分，其甜度相当于蔗糖的300倍，比甜菊甙(甜度相当蔗糖100-150倍)要甜得多，而且没有甜菊甙的苦异味，这种强甜物质味甜而纯正，无异味、回味感强、热稳定好，在100℃水溶液中稳定，在120℃连续加热12小时以上仍不被破坏，属非发酵物质，利于加工贮存。根据中国药学资料和日本学者竹本常松教授的研究证明：罗汉果对各种疾病起主要效果的就是罗汉果甜甙V。

目前，人们从罗汉果中获得提取物的方法主要有以下几种:1、水提加树脂分离法:其生产工艺是将罗汉果破碎后装入压力罐内，加水加温水提，将多次水提液合并过滤，上树脂进行吸附分离，用乙醇或甲醇洗脱，洗脱液去醇后，喷雾干燥而成；2、醇提(浸)膜分离法:其工艺是将罗汉果破碎，加入50％乙醇，装入储罐内常温或加温浸提，多次浸提液合并过滤，过滤液通过膜分离浓缩，浓缩液进行真空干燥而成；3、采用加热提取的方法。但采用上述方法得到的罗汉果提取物均存在一定的缺陷：所得到的提取物色泽深并具有浓烈的中药味和强烈的后苦味、有效成分含量低、提取液的颜色加深，而不利于后续的脱色提纯处理，能源消耗大、生产成本高的缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果，洗净，破碎；

2)高压处理：将破碎后的罗汉果，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10-15min，恢复常压，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50-60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50-60℃，萃取压力为15-20Mpa，萃取时间为1.5-2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。

本发明步骤4)所述的HP-20ss树脂柱，树脂用量为上清液重量的40-60倍。

本发明得到的罗汉果甙V，为白色粉末，经HPLC检测，含量在70％以上。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、现有技术在进行罗汉果甜甙等成分的提取时，前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂，通过加热提取来将有效成分溶出，而本发明采用高压来处理罗汉果原料，相比加热提取，不仅时间短，而且，避免了高温对罗汉果有效成分的破坏。

2、现有技术得到的罗汉果甙V含量一般在40-60％之间，本发明采用高压技术、超临界CO₂流体萃取和柱层析吸附技术的结合，随着高压技术的加入，使得本发明的技术结合出现质的提高，相比水提或醇提后柱层析，本发明时间短，罗汉果甙V含量高；相比超临界CO₂流体萃取加柱层析，本发明收率高。

3、本发明避免了无水乙醇、甲醇等大量有机溶剂的使用，更加环保。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压处理：将破碎后的罗汉果，放入高压罐中，加入100kg纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持15min，恢复常压，得到膏状浆液约200kg；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为60℃，萃取压力为15Mpa，萃取时间为1.5小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量71.2％。

实施例2：

一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压处理：将破碎后的罗汉果，放入高压罐中，加入100kg纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10min，恢复常压，得到膏状浆液约200kg；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50℃，萃取压力为20Mpa，萃取时间为2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量72.1％。

实施例3：

一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果100kg，洗净，破碎；

2)高压处理：将破碎后的罗汉果，放入高压罐中，加入100kg纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持12min，恢复常压，得到膏状浆液约200kg；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为55％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为55℃，萃取压力为20Mpa，萃取时间为2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用55％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V，含量70.8％。

Claims (1)

1.一种从罗汉果中制备罗汉果甙V的方法，其特征在于具体包括如下步骤：

1)原料处理：取新鲜的罗汉果，洗净，破碎；

2)高压处理：将破碎后的罗汉果，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10-15min，恢复常压，得到膏状浆液；

3)超临界CO₂流体萃取：将高压处理后的罗汉果膏状浆液置于萃取釜中，以超临界CO₂流体为萃取溶剂，以体积浓度为50-60％的乙醇溶液为夹带剂进行超临界萃取，膏状浆液的质量与萃取釜的体积比为1:4，乙醇溶液的体积与萃取釜的体积比为1:2；萃取温度为50-60℃，萃取压力为15-20Mpa，萃取时间为1.5-2.0小时；

4)收集萃取完后得到的提取液，离心，上清液进行HP-20ss树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到罗汉果甙V。