CN100534474C

CN100534474C - 一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途

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Publication number: CN100534474C
Application number: CNB2006101713336A
Authority: CN
Inventors: 张荣利; 何黎清; 戴甲木
Original assignee: HUNAN BUTIAN PAHRMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Hunan Butian pharmaceutical Limited by Share Ltd
Priority date: 2006-12-19
Filing date: 2006-12-19
Publication date: 2009-09-02
Anticipated expiration: 2026-12-19
Also published as: CN101002858A

Abstract

本发明涉及一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途。组合物中有效成分的原料组成按重量份计为，茯苓30-3000份、人参10-1000份、枸杞20-2000份，三药均含有增加免疫的功效成分，且三药组方具有协同增效作用。本发明组合物具有抗疲劳、抗衰老、增强食欲等功效，能全面提高机体的免疫能力，适用于各种免疫力低下人群，尤其适合中老年人、慢性支气管炎患者、慢性肝炎患者、慢性肾炎患者、肿瘤患者或艾滋病患者等免疫力低下人群。

Description

一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途

技术领域

本发明涉及一种保健功效的组合物，特别涉及一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途。

背景技术

中药人参、茯苓配制成药早已见诸传统中药，如四君子汤、六君子汤、八珍汤、参苓白术散、十全大补丸或天王养心丹，或用于补益脾胃，或用于益气补血，或用于大补元气，滋肾养阳以培补先天之本。

人参的主要功效成分为人参皂苷和人参多糖。人参皂苷和人参多糖具有刺激细胞免疫与体液免疫的作用，能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率与吞噬指数，促进外周血白细胞增加，并在白细胞减少时作用尤为明显，还能促进抗体生成，增加血清免疫球蛋白IgG、IgA的含量。

茯苓的主要功效成分为水溶性茯苓多糖。水溶性茯苓多糖能调整T细胞亚群的比值，提升T₄/T₈比值，增强NK细胞活性，提高巨噬细胞的吞噬指数，促使癌症患者白细胞介素-2(IL-2)提高至正常水平，并通过增强肿瘤坏死因子(TNF)基因的转录，促进巨噬细胞释放TNF和增强TNF的活性。

枸杞是传统的滋补中药和名贵的补益类中药，具有补肝肾之阴、强身健体、补益精血、增强免疫等功效，其主要功效成分是枸杞多糖(Lyceum barbarum Polysaccharide，LBP)。LBP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖等6种单糖组成。枸杞还含有蛋白杂多糖、氨基酸与多种微量元素。《神农本草经》把枸杞列为上品，言其“久服，坚筋骨，轻身耐老”。《药性论》言其“补精气诸不足，易颜色、变白、明目安神，令人长寿”。LBP明显促进LACA小鼠脾细胞增殖和抗体生成，明显增加快速老化模型的小鼠(SAMP₈)脾抗体生成细胞的数目，增加脾细胞产生IgG抗体的水平，显著促进小鼠胸腺T细胞增殖和增强NK细胞的功能，增加巨噬细胞数量和显著增强巨噬细胞内DNA、RNA、糖原含量、主要代谢酶的活性，显著增强其吞噬功能。

免疫力低下人群，易患感冒、慢性支气管炎、慢性肝炎、慢性肾炎等病症，表现为外周血NK细胞活性降低、T淋巴细胞亚群T₄/T₈比值降低、巨噬细胞的功能降低、血清C₃补体水平降低等细胞免疫功能低下，甚至部分人群因免疫力低下为肿瘤所困扰，而肿瘤患者还常伴随血清白细胞介素-2(IL-2)与肿瘤坏死因子(TNF)的水平降低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有增强免疫功效的组合物，其有效成分由茯苓、人参和枸杞组成。

进一步，制备组合物有效成分的原料组成按重量份计为，茯苓30-3000份、人参10-1000份、枸杞20-2000份，优选为茯苓60-1500份、人参20-500份、枸杞40-1000份，更优选为茯苓120-750份、人参40-250份、枸杞80-500份，最优选为茯苓300份、人参100份、枸杞200份。

进一步，以人参皂苷计，组合物中总皂苷的百分含量不低于1％。

进一步，以葡聚计，组合物中粗多糖的百分含量不低于5％。

进一步，所述茯苓的有效成分为茯苓提取物，优选为提取物中的茯苓多糖；所述茯苓多糖可由本领域熟知的方法制得，如碱提取酸沉淀法制得的茯苓多糖提取物或羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran，CMP)或高取代度CMP。

所述碱提取酸沉淀法是指：茯苓粉用浓度为1.0-4.0mol/L或2.0-3.0mol/L的碱性溶液搅拌提取，离心分离，取上清液；上清液加酸(如醋酸、盐酸、硫酸或硝酸)，得酸沉淀物；沉淀物经离心、水洗，即得茯苓多糖粗品。

本发明的目的一是提供一种制备高取代度CMP，由如下方法制得：1)茯苓多糖加入到水或水醇混合液中，搅拌均匀后，加入茯苓多糖质量1-8％或2-6％或3-5％的碱性溶液，搅拌至完全溶解，得茯苓多糖碱化液；2)1.0-10mol/L氯乙酸与适当过量的2.0-10mol/L碱性溶液充分反应后，加入到1)步所得的茯苓多糖碱化液中，进行取代反应，分离纯化生成的CMP，即得。

进一步，所述茯苓多糖由本领域熟知的方法制得，如碱化提取法制得的茯苓多糖碱化提取液，相当于1)步制得的茯苓多糖碱化液；或碱提取酸沉淀法制得的茯苓多糖提取物。

所述碱化提取法是指：茯苓粉加入浓度为1.0-4.0mol/L或2.0-3.0mol/L的碱性溶液进行碱化提取，离心分离，取上清液，即得茯苓多糖碱化提取液。

进一步，所述水醇溶液为本领域熟知的醇溶剂加水制得的溶液，所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙二醇、乙酸乙酯、丙酮、二甲基亚砜、乙醚、异丙醇、二甲基甲酰胺的任一种或其组合。

本发明所述碱性溶液由本领域熟知的碱性物质加水溶解制得，所述碱性物质选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾的任一种或其组合，优选为氢氧化钠或氢氧化钾。

进一步，氯乙酸溶液的浓度为2.0-9.0mol/L，优选为3.0-8.0mol/L，更优选为4.0-7.0mol/L，最优选为4.5-6.0mol/L。

进一步，2)步碱性溶液的浓度为3.0-9.0mol/L，优选为4.0-8.0mol/L，更优选为5.0-7.0mol/L，最优选为5.5-6.5mol/L。

进一步，所述适当过量是指碱性溶液中碱性物质的实际用量比其与氯乙酸发生中和反应所需理论用量过量0.5-40％，优选过量5-30％，更优选过量10-25％，最优选过量15-20％。

进一步，2)步反应液在30-100℃条件下进行取代反应1-5h，优选反应温度为40-90℃，另优选为50-85℃，更优选为60-82℃，最优选为75-80℃；优选反应时间为2-4h，更优选为2.5-3.5h。

进一步，所述分离是指在2)步反应生成液中加入1.0-10mol/L的酸性溶液，调其pH值5.0-7.0后，加入3-5倍体积的醇溶剂，析出CMP粗品；所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、异丙醇、乙醚、丙酮的任一种或其组合。

本发明所述酸性溶液由本领域熟知的酸性物质加水溶解制得，优选所述酸性物质选自醋酸、盐酸、硫酸或硝酸的任一种或其组合，优选为盐酸或硝酸。

进一步，所述纯化是指CMP粗品加水配成1.0％-6.0％或2.0％-5.0％或3％-4％的水溶液，加入1.0mol/L-10mol/L的碱性溶液调pH值9.0-12.0，搅拌至CMP粗品完全溶解；加入30％H₂O₂溶液，其用量为溶解液总容积0.1‰-2.0‰或0.5‰-1.0‰，进行脱色反应；加入1.0-10mol/L的酸性溶液调pH值5.0-7.0，超滤去除分子量小于0.7×10⁴道尔顿的CMP及其他小分子杂质。

进一步，碱性溶液的浓度为2.0-9.0mol/L，优选为3.0-8.0mol/L，更优选为4.0-7.0mol/L，最优选为5.0-6.0mol/L。

进一步，脱色反应的温度为10℃-70℃，优选为15℃-60℃，更优选为20℃-50℃。脱色反应的时间根据脱色反应的完成程度而定，通常为2-48h，优选为5-40h，更优选为10-30h，最优选为15-25h。

进一步，酸性溶液的浓度为1.0-9.0mol/L，优选为2.0-8.0mol/L，更优选为3.0-7.0mol/L，最优选为4.0-6.0mol/L。

进一步，所述超滤是用DH-UF中空纤维超滤器进行超滤。

根据实际需要，可对反应生产的高取代度CMP进行多次分离纯化，以提高其纯度。

进一步，所述CMP的羧甲基取代度不低于1.0，优选不低于1.05，更优选不低于1.10，最优选不低于1.2。

进一步，高取代度CMP的分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿，优选为3.0×10⁴-8×10⁵道尔顿，更优选为6.0×10⁴-5.0×10⁵道尔顿，最优选为8.0×10⁴-3.0×10⁵道尔顿。

进一步，高取代度CMP的聚合度为32＜n＜4545，优选为136＜n＜3636，更优选为272＜n＜2272，最优选为363＜n＜1363。

进一步，所述人参的有效成分为人参粉，可由本领域熟知的制备方法制得，或由如下方法制得：人参干燥，杀菌消毒后粉碎，过筛，即得。

进一步，所述枸杞的有效成分为枸杞提取物，可由本领域熟知的制备方法制得，或由如下方法制得：1)枸杞粉加水浸泡，水浴提取多次，合并滤液得粗提液；2)减压浓缩粗提液后，进行醇析，干燥醇析沉淀物即得。所述醇析是用本领域熟知的醇溶剂沉淀浓缩粗提液中的有效成分；所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙二醇、乙酸乙酯、异丙醇、乙醚、丙酮的任一种或其组合。

除非另有说明，本发明所述百分含量均为重量百分含量；所述分子量均为相对分子量，其单位为道尔顿。

本发明的组合物具有抗疲劳、抗衰老、增强食欲等功效，能全面提高机体的免疫能力，适用于增强各种免疫力低下人群的免疫力，尤其适合中老年人免疫力降低者，以及慢性支气管炎、慢性肝炎、慢性肾炎与肿瘤等免疫力低下人群。组合物中茯苓提取物、人参粉和枸杞提取物均含有强效增强免疫成分，且三药组方具有协同增效作用。

1、茯苓为Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，味甘，性平，《神农本草经》把它列为上品，言其“久服安魂养神，不饥，延年”。茯苓具有健脾补中、养心安神、利水渗湿的功效。其化学成分较为复杂，含有β-茯苓聚糖、茯苓多糖、茯苓酸、乙酰茯苓酸、松苓酸和层孔酸等，其中茯苓多糖是增强免疫的主要活性成分。

茯苓多糖对小鼠体内S₁₈₀肉瘤细胞的抑制率可达48％，可促进细胞免疫偏低者的细胞免疫功能增强。对肺癌患者的临床研究表明，茯苓多糖对细胞免疫有很强的促进作用，特别能调整T细胞亚群的比值，增强机体免疫功能，改善机体状况，增强抗感染能力，茯苓多糖能增强巨噬细胞识别功能，提高巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，并能通过增强肿瘤坏死因子(TNF)基因的转录，促进巨噬细胞释放TNF，并增强TNF的活性。TNF是巨噬细胞分泌的一种多肽，是一种能直接造成肿瘤细胞死亡的细胞因子。TNF不仅直接参与单核细胞对肿瘤细胞的杀伤，而且能通过抑制基因转录活性，特异地降低myc基因mRNA的表达水平。

2、人参为五加科人参属植物人参Panax Ginseng C.A.Mey的干燥根，是传统名贵中药，《神农本草经》把它列为上品，言其“补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。久服轻身延年”。人参味甘，微苦，性微温，有大补元气、回阳救逆、安神益智、生津止渴之功能，临床上一直以能治疗慢性虚损而著称。人参中含有人参皂苷、多种氨基酸、多糖类、低分子肽类、有机酸、脂肪酸、V_B、V_C、菸酸、胆碱、果胶、微量元素等。单体有人参皂苷Ro、Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1等，人参皂苷是其增强免疫功能的主要成分。

人参对物理、化学或生物等各种有害刺激因素有非特异性的抵抗能力，使紊乱的机能恢复正常，主要表现在血压、肾上腺、甲状腺机能和血糖方面的双向调节作用。已有动物试验证明，人参皂苷对小鼠的体液免疫和细胞免疫均有刺激作用，能促进周围血液中的白细胞增加，在白细胞减少时，作用尤为明显；还能增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高对血液中惰性胶体炭粒、金黄色葡萄球菌、鸡血细胞等吞噬廓清能力。剂量增大、给药次数增多，作用越强。业已证实人参皂苷具有刺激体液免疫和细胞免疫的作用，能增强机体免疫功能，防治多种原因引起的白细胞下降。人参能增强网状内皮系统和巨噬细胞的吞噬功能，停药后RES尚可保持激活状态约1周左右。人参还可促进抗体的生成，增加血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量。人参皂苷Rg1能选择性增强老年大鼠免疫功能，改善老年大鼠的行为活动和操作能力，提高海马神经细胞功能，促进大鼠海马神经细胞内c-fos基因的表达，对抗谷氨酸介导的神经毒作用，以及对原代培养的大鼠海马神经细胞表现出一定的保护作用。

3、枸杞是传统滋补中药和名贵的补益类中药，具有补肝肾之阴、强身健体、补益精血、增强免疫等功效，其主要功效成分是枸杞多糖(Lyceum barbarum Polysaccharide，LBP)。LBP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖等6种单糖组成。枸杞还含有蛋白杂多糖、氨基酸与多种微量元素。《神农本草经》把枸杞列为上品，言其“久服，坚筋骨，轻身耐老”。《药性论》言其“补精气诸不足，易颜色、变白、明目安神，令人长寿”。LBP明显促进LACA小鼠脾细胞增殖和抗体生成，明显增加快速老化模型的小鼠(SAMP₈)脾抗体生成细胞的数目，增加脾细胞产生IgG抗体的水平，显著促进小鼠胸腺T细胞增殖和增强NK细胞的功能，增加巨噬细胞数量和显著增强巨噬细胞内DNA、RNA、糖原含量、主要代谢酶的活性，显著增强其吞噬功能。

研究结果表明：枸杞多糖促进小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生，明显增强ConA激发的淋巴细胞增殖反应，显著增强T淋巴细胞功能和B细胞免疫功能，还促进IL-2产生和IR-2R表达，促进IL-2和IL-3等细胞因子的释放，增强机体免疫功能和延缓机体衰老。

临床研究表明，恶性肿瘤患者淋巴细胞T₃/T₄和T₄/T₈比值、淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬率明显低于正常人。肿瘤患者进行单纯放疗后，患者的T₃/T₄和T₄/T₈比值、淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬率较放疗前明显下降，外周血白细胞数及淋巴细胞绝对值也明显降低。而肿瘤患者服用LBP，可维持外周血白细胞数及淋巴细胞绝对值的原水平，并较放疗前明显增加，具有提高和增强放疗患者免疫功能的功效，可作为肿瘤患者的辅助治疗药物。

LBP增强免疫功能的机理：部分是通过调节中枢下丘脑与外周免疫器官脾脏交感神经，释放去甲肾上腺素等单胺递质，以及肾上腺皮质释放皮质酮等环节，以发挥下丘脑-垂体-肾上腺轴调动血浆皮质酮参与免疫反应。

本发明组合物可为本领域熟知的各种剂型，适合于本发明的剂型可以为口服制剂、外用制剂或注射剂，优选为口服制剂。口服制剂可选自口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂、糖浆剂、合剂、露剂、悬浮剂(干悬剂或悬浮液)、乳剂或茶剂等；外用制剂可选自凝胶剂、膏剂(贴膏剂、凝膏剂或软膏剂)、搽剂、洗剂、涂抹剂等；注射剂可选自针剂、输液或冻干粉针等。可采用本领域熟知的制剂技术手段制备得到本发明的组合物。

必要时，本发明组合物中还包含药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体的用量、种类根据组合物中有效成分的理化性质和含量、制剂类型等因素而定。

所述药学上可接受的载体为本领域熟知的用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料。口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂等。粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮，优选纤维素衍生物为微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐、山梨醇或甘氨酸，优选无机钙盐为硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙；润滑剂，例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇；崩解剂，例如淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素，优选的淀粉衍生物为羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇等；优选口服制剂的药学上可接受的载体为微晶纤维素、硬脂酸镁或乙醇等。

所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于：抗氧剂，例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠和焦亚硫酸钠；抑菌剂，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇；调节剂，例如盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂磷酸二氧钠和磷酸氢二钠；乳化剂，例如聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂；抗氧剂，例如亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；增溶剂，例如吐温-80、胆汁、甘油等。

另外，还可将活性成分与药学上可接受的缓控释载体按其制备要求加以混合，再按照本领域熟知的缓控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将活性成分微囊化后再制成微丸，如缓释微丸或控释微丸；所述的缓控释载体包括但不仅限于油脂性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂为单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷、二甲基硅氧烷；所述的亲水胶体为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等纤维素衍生物，或PVP、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普等；所述的包衣阻滞剂为乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HMPC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、丙稀酸类树脂等。

本发明组合物的日用剂量可根据服用人群的年龄、性别、体质、健康状况等因素而定，常用剂量为0.9-1.35g/次，3次/日，优选为1.35g/日，2次/日。

本发明组合物具有疗效独特，生物利用度高，稳定性好，外形美观，携带和服用方便等特点。

本发明的另一目的在于提供一种制备具有增强免疫功效组合物的方法，均匀混合茯苓、人参和枸杞的有效成分，即得。

进一步，以葡聚计，组合物中粗多糖的百分含量不低于5％。

本发明的目的一是提供一种制备高取代度CMP的方法，包括如下步骤：1)茯苓多糖加入到水或水醇混合液中，搅拌均匀后，加入茯苓多糖质量1-8％或2-6％或3-5％的碱性溶液，搅拌至完全溶解，得茯苓多糖碱化液；2)1.0-10mol/L氯乙酸与适当过量的2.0-10mol/L碱性溶液充分反应后，加入到1)步所得的茯苓多糖碱化液中，进行取代反应，分离纯化生成的CMP，即得。

进一步，所述分离是指在2)步反应生成液中加入1.0-10mol/L的酸性溶液，调其pH值5.0-7.0后，加入3-5倍体积的醇溶剂，析出CMP粗品；所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙二醇、乙酸乙酯、异丙醇、乙醚、丙酮的任一种或其组合。

进一步，所述超滤是用DH-UF中空纤维超滤器进行超滤。

本发明的另一目的在于提供本发明组合物用于制备具有增强免疫功效的食品或药物中的应用，优选为具有保健功能的食品或药物。

进一步，所述增强免疫应用是指用于增强免疫力低下人群的免疫力，所述免疫力低下人群选自中老年人、慢性支气管炎患者、慢性肝炎患者、慢性肾炎患者、肿瘤患者或艾滋病患者，优选用于防治或辅助治疗免疫力低下引起的慢性支气管炎、慢性肝炎、慢性肾炎、恶性肿瘤或艾滋病等病症。

附图说明

图1已知分子量的标准多糖Dexfran按Ka.v对数Log Mw作图的分子量标准曲线；

图2本发明制得的羧甲基茯苓多糖在SephadexG-200层析柱上的洗脱曲线，根据测得的Ka.v值，求得其分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

具体实施方式

以下将结合实施例具体说明本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。

实施例1高取代度CMP的制备

1)干茯苓75kg，粉碎成细粉，投入到浸泡罐中，泵入400L水，搅拌均匀，浸泡12h；

2)将400L浓度为2.25mol/L的氢氧化钠溶液缓慢泵入浸泡罐中，搅拌反应1h，过滤，取滤液；

3)在中和罐中投入向300L浓度为5.3mol/L的氯乙酸溶液后，再缓慢加入300L浓度为6.25mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌至反应充分，冷却至室温；

4)将3)步反应液泵入2)步所得滤液中，充分混匀后，缓缓升温至75℃，恒温反应2.5h；

5)用6mol/L的盐酸溶液调4)步所得反应液的pH值5.0-7.0，加入相当于反应液3倍体积的95％乙醇，搅拌均匀，过滤、洗涤，取CMP醇析物；

9)CMP醇析物在60℃干燥4h后，105℃干燥2h，得CMP粗制品37.5kg。

10)将7.5kgCMP粗制品分散于250L双蒸水，加入6mol/L的氢氧化钠溶液调pH至10.0-13.0；加入1.25L浓度为30％的H₂O₂溶液，15℃脱色反应36h，去除有色杂质；加入6mol/L的盐酸溶液调pH值6.0，3000转/分离心分离30min，取滤液，滤液用DH-UF中空纤维超滤器滤除分子量0.7×10⁴以下的CMP，以及微量的氯化钠、氯乙酸钠与羟乙酸钠等杂质后，滤液中加入3倍滤液体积的95％乙醇，进行醇析，过滤或离心，取CMP醇析物在60℃干燥4h后，105℃干燥2h，粉碎，得6.0kg羧甲基取代度1.0的CMP纯品，其理化性质如下：

性状：白色粉末，无臭，略有引湿性。

分子式：(C₈H₁₂O₇)n 聚合度(n)：32＜n＜4545

分子量：0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿

IR[KBr](cm¹)：3700-3000，2900，1600.7，1425.2，1324.9，1078.0，891.0。

UV(0.1mol/L HCl溶液、H₂O、0.1mol/LNaOH溶液)：无吸收峰。

¹³C-NMP[H₂D](ppm)：180.078，104.870，87.697，86.667，84.935，83.145，77.851，76.490，75.669，73.273，72.296，70.345，62.975。

[a]²⁰D：-1.70-1.90(C＝5，H₂O)

1％水溶液的pH值5.0-7.0

水份百分含量＜8.0％

以氯化钠计，氯化物％＜0.01％；以P_b计，重金属％＜0.001％，以As计，砷％＜0.0001％。

实施例2羧甲基茯苓多糖分子量的测定

测定条件：仪器为LKB柱层析系统，SephadexG-200柱。移动相为0.2mol/L的NaCl溶液(pH值7.0)缓冲溶液，流速0.5ml/min，进样量(W/V)1mg/ml，恒温10^℃。示差折射自动检测，记录仪记录峰位。

标准曲线：用已知分子量的标准多糖Dexfran T2000(Mw2000000)、T500(Mw500000)、T40(Mw40000)、T20(Mw20000)、T10(Mw10000)、T5(Mw5000)制作标准曲线，按Ka.v对数Log Mw作图，标准曲线见图1。

本发明制得的羧甲基茯苓多糖在SephadexG-200层析柱上的洗脱曲线参见图2，根据测得的Ka.v值，求得其分子量(Mw)为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

根据羧甲基茯苓多糖的分子式为(C₈H₁₂O₇)n，其分子量测定值为0.7×10⁴-1.0×10⁶，聚合度(n)0.7×10⁴/Mw_C8H12O7＜n＜1.0×10⁶/Mw_C8H12O7，即本发明羧甲基茯苓多糖的聚合度(n)为32＜n＜4545。

实施例3酸化法测定羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度(D·S)

精密称取羧甲基茯苓多糖样品0.4041g，置于150ml的烧杯中，80℃水浴加热，搅拌使溶解，冷却后，用2mol/L的盐酸溶液调pH至4.0，加入无水乙醇100ml，搅拌均匀，静置过夜，离心分离醇析物，醇析物用95％的乙醇反复洗涤，至洗涤液中不含氯离子。洗净醇析物用0.1000mol/L的NaoH标准溶液40.00ml溶解，待溶液呈透明状后，立即用0.1000mol/L的标准盐酸溶液反滴定，至酚酞指示剂的红色刚退去，记录反滴定所消耗0.1000mol/L的盐酸标准溶液的体积为21.60ml。

按照下式计算羧甲基茯苓多糖的取代度(D·S)：

D \cdot S = \frac{0.162 A}{1 - 0.058 A}

A = \frac{C_{NaOH} V_{NaOH} - C_{HCl} V_{HCl}}{m}

式中：A为中和1g酸式羧甲基茯苓多糖样品所消耗的NaOH的mmol数；

C_NaOH为NaOH标准溶液的浓度(0.1000mol/L)；

V_NaOH为加入0.1000mol/L的NaOH标准溶液的体积数(40.00ml)；

C_HCl为反滴定用的盐酸标准溶液的浓度(0.1000mol/L)；

V_HCl为反滴定所消耗0.1000mol/L的盐酸标准溶液的体积数(21.60ml)；

m为样品的质量(g)；

0.162为茯苓多糖的失水葡萄糖单元的mmol质量；

0.058为失水葡萄糖单元中一个羟基被羧甲基取代后，失水葡萄糖单元mmol质量的净增值。

本发明所得羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度(D.S)为1.0，计算过程如下：

A = \frac{0.1000 \times 40.00 - 0.1000 \times 21.60}{0.4041} = 4.5533 (m mol)

D \cdot S = \frac{0.162 \times 4.5533}{1 - 0.058 \times 4.5533} = 1.0

实施例4 高取代度CMP的制备

1)75kg干茯苓细粉，泵入400L水，搅拌均匀，浸泡14h；

2)将400L浓度为3mol/L的氢氧化钠溶液缓慢泵入浸泡罐中，搅拌反应1h，过滤，取滤液；

3)在中和罐中投入向300L浓度为5.5mol/L的氯乙酸溶液后，再缓慢加入300L浓度为6.5mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌至反应充分，冷却至室温；

4)将3)步反应液泵入2)步所得滤液中，充分混匀后，缓缓升温至78^℃，恒温反应2h；

5)用6mol/L的盐酸溶液调4)步所得反应液的pH值6.0，加入相当于反应液3倍体积的95％乙醇，搅拌均匀，过滤、洗涤，取CMP醇析物；

9)CMP醇析物在60^℃干燥4h后，105^℃干燥2h，得CMP粗制品37.8kg。

10)将7.5kgCMP粗制品分散于250L双蒸水，加入6.5mol/L的氢氧化钠溶液调pH至10.0-13.0；加入1.5L浓度为30％的H₂O₂溶液，25^℃脱色反应20h，去除有色杂质；加入6.5mol/L的盐酸溶液调pH值6.0，3000转/分离心分离30min，取滤液，滤液用DH-UF中空纤维超滤器滤除分子量0.7×10⁴以下的CMP及其他小分子杂质，滤液中加入3.2倍滤液体积的95％乙醇，进行醇析，过滤或离心，取CMP醇析物先后在60^℃干燥4h和105^℃干燥2h，粉碎，得6.1kg羧甲基取代度1.05的CMP纯品，其相对分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

实施例5 高取代度CMP的制备

1)75kg干茯苓细粉，泵入400L水，搅拌均匀，浸泡16h；

2)将400L浓度为4mol/L的氢氧化钠溶液缓慢泵入浸泡罐中，搅拌反应1h，过滤，取滤液；

3)在中和罐中投入向300L浓度为6.0mol/L的氯乙酸溶液后，再缓慢加入300L浓度为6.8mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌至反应充分，冷却至室温；

4)将3)步反应液泵入2)步所得滤液中，充分混匀后，缓缓升温至82℃，恒温反应1.5h；

9)CMP醇析物先后在60^℃干燥4h和105^℃干燥2h，得CMP粗制品37.9kg。

10)将7.5kgCMP粗制品分散于250L双蒸水，加入6.5mol/L的氢氧化钠溶液调pH至10.0-13.0；加入1.6L浓度为30％的H₂O₂溶液，30^℃脱色反应18h，去除有色杂质；加入6.5mol/L的盐酸溶液调pH值6.0，3000转/分离心分离30min，取滤液，滤液用DH-UF中空纤维超滤器滤除分子量0.7×10⁴以下的CMP及其他小分子杂质，滤液中加入3.2倍滤液体积的95％乙醇，进行醇析，过滤或离心，取CMP醇析物先后在60℃干燥4h和105℃干燥2h，粉碎，得6.15kg羧甲基取代度1.10的CMP纯品，其相对分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

实施例6 高取代度CMP的制备

1)75kg干茯苓细粉，泵入400L水，搅拌均匀，浸泡16h；

3)在中和罐中投入向300L浓度为5.8mol/L的氯乙酸溶液后，再缓慢加入300L浓度为7.0mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌至反应充分，冷却至室温；

4)将3)步反应液泵入2)步所得滤液中，充分混匀后，缓缓升温至82^℃，恒温反应1h；

9)CMP醇析物先后在60℃干燥4h和105℃干燥2h，得CMP粗制品38.1kg。

10)将7.5kgCMP粗制品分散于250L双蒸水，加入6.5mol/L的氢氧化钠溶液调pH至10.0-13.0；加入1.6L浓度为30％的H₂O₂溶液，30^℃脱色反应18h，去除有色杂质；加入6.5mol/L的盐酸溶液调pH值6.0，3000转/分离心分离30min，取滤液，滤液用DH-UF中空纤维超滤器滤除分子量0.7×10⁴以下的CMP及其他小分子杂质，滤液中加入3.2倍滤液体积的95％乙醇，进行醇析，过滤或离心，取CMP醇析物先后在60℃干燥4h和105℃干燥2h，粉碎，得6.18kg羧甲基取代度1.15的CMP纯品，其相对分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

实施例7 高取代度CMP的制备

1)75kg干茯苓细粉，泵入400L水，搅拌均匀，浸泡16h；

2)将400L浓度为5mol/L的氢氧化钠溶液缓慢泵入浸泡罐中，搅拌反应1h，过滤，取滤液；

3)在中和罐中投入向300L浓度为6.0mol/L的氯乙酸溶液后，再缓慢加入300L浓度为7.2mol/L的氢氧化钠溶液，搅拌至反应充分，冷却至室温；

4)将3)步反应液泵入2)步所得滤液中，充分混匀后，缓缓升温至85℃，恒温反应1h；

9)CMP醇析物先后在60℃干燥4h和105℃干燥2h，得CMP粗制品40.0kg。

10)将7.5kgCMP粗制品分散于250L双蒸水，加入6.5mol/L的氢氧化钠溶液调pH至10.0-13.0；加入1.6L浓度为30％的H₂O₂溶液，30^℃脱色反应15h，去除有色杂质；加入6.5mol/L的盐酸溶液调pH值6.0，3000转/分离心分离30min，取滤液，滤液用DH-UF中空纤维超滤器滤除分子量0.7×10⁴以下的CMP及其他小分子杂质，滤液中加入3.2倍滤液体积的95％乙醇，进行醇析，过滤或离心，取CMP醇析物先后在60℃干燥4h和105℃干燥2h，粉碎，得6.2kg羧甲基取代度1.20的CMP纯品，其相对分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

实施例8 胶囊剂的制备

胶囊剂的组成：

茯苓 300g

枸杞 200g

人参 100g

制备方法：

1、茯苓提取物粉按照实施例1方法制备.

2、人参粉的制备：人参干燥后，进行紫外线杀菌消毒，粉碎，过80目筛，即得。

3、枸杞提取物粉的制备：1)枸杞粉加10倍蒸馏水浸泡2h，在90℃水浴中提取1小时，趁热过滤，提取3次，合并3次滤液得粗提液；2)将粗提液减压浓缩至原体积的1/6，冷却后，在搅拌下加入95％乙醇，直到乙醇浓度达80％，静置过滤沉淀；3)沉淀加蒸馏水溶解，再加入95％乙醇重复沉淀操作1次，离心分离，所得沉淀物60℃干燥10h，105℃干燥2h，粉碎，过80目筛，即得。

4、充分混匀茯苓提取物粉、枸杞提取物粉和人参粉后，用胶囊填充机装胶囊，每粒装入0.45g。

实施例9 颗粒剂的制备

茯苓 600g

枸杞 400g

人参 200g

1、茯苓提取物粉按照实施例2方法制备；枸杞提取物粉和人参粉的制备方法同实施例8；

2、充分混匀茯苓提取物粉、枸杞提取物粉和人参粉后，加入适量淀粉浆和乙醇，制粒、整粒、烘干，即得。

以下通过药效试验例验证本发明药物组合物的免疫增强效果。

试验例1 本发明组合物提高小鼠的迟发型变态反应(DTH)能力(足跖增厚法)

体重为18-22g的清洁级昆明种雄性小鼠40只，由中南大学实验动物学部提供，批准号为湖南省医动字第20-011号，随机分为蒸馏水对照组和试验组，每组10只。试验组包括本发明组合物的低、中、高剂量组，所用剂量分别为0.185g/kg.bw、0.370g/kg.bw和1.110g/kg.bw，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。

取本发明组合物样品加蒸馏水配至所需浓度，对照组予以等容积的蒸馏水，灌胃给予受试小鼠，每日灌胃1次，灌胃容积为0.2ml/10g.bw，连续30日。试验后，各组小鼠均腹腔注射2％(v/v)SRBC(0.2μl/每鼠)致敏后4日，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20μl/每鼠)，于注射后24小时测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

试验结果为：本发明组合物的低剂量组、中剂量组、高剂量组与蒸馏水对照组的小鼠注射后24小时足跖肿胀度(mm)分别为0.358±0.101、0.445±0.119、0.452±0.136与0.308±0.121，各剂量组与蒸馏水对照组相比，足跖肿胀度均有增高趋势，中、高剂量组与对照组比，P值均＜0.05，具有显著性差异。

试验例2 本发明组合物提高小鼠半数溶血值(HC₅₀)的试验

体重为18-22g的清洁级昆明种雄性小鼠40只，由中南大学试验动物学部提供，批准号为湖南省医动学第20-011号。随机分为蒸馏水对照组和试验组，每组10只。试验组包括本发明组合物的低、中、高剂量组，所用剂量分别为0.185g/kg.bw、0.370g/kg.bw和1.110g/kg.bw，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。

取本发明组合物样品加蒸馏水配至所需浓度，对照组予以等容积的蒸馏水，灌胃给予受试小鼠，每日灌胃1次，灌胃容积为0.2ml/10g.bw，连续30日。试验后，按照下述方法测定各受试组小鼠的半数溶血值(HC₅₀)的测定。

HC₅₀的测定方法如下：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只小鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)压积RBC0.2ml进行免疫。5日后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剖离，使血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释成200倍，取1ml置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.5ml，补体1ml(用SA缓冲液按1∶10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心10min，取上清液1ml，加都氏试剂3ml。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBC0.25ml，加都氏试剂至4ml于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，计算公式为：

半数溶血值(HC₅₀)＝样品光度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数。

试验结果如下：本发明组合物的低剂量组、中剂量组、高剂量组与蒸馏水组的小鼠半数溶血值(HC₅₀)分别为177.8±27.9、179.9±23.7、192.5±24.1、158.4±23.7。本发明组合物的各剂量组小鼠溶血值(HC₅₀)与蒸馏水对照组比，均有增高趋势，高剂量组与对照组比，P＜0.05，具有显著性差异。

试验例3 本发明组合物提高小鼠抗体生成细胞[溶血空斑数(×10³个/全脾)]

体重为18-22g的清洁级昆明种雄性小鼠40只，由中南大学实验动物学部提供，批准号为湖南省医动学第20-011号。随机分为蒸馏水对照组和试验组，每组10只。试验组包括本发明组合物的低、中、高剂量组，所用剂量分别为0.185g/kg.bw、0.370g/kg.bw和1.110g/kg.bw，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。

取本发明组合物样品加蒸馏水配至所需浓度，对照组予以等容积的蒸馏水，灌胃给予受试小鼠，每日灌胃1次，灌胃容积为0.2ml/10g.bw，连续30日。试验后，用Jerne改良玻片法测定各受试组小鼠的抗体生成细胞。

Jerne改良玻片法的测定过程如下：取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，将压积SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每只小鼠腹腔注射液0.2ml。将免疫后4日的小鼠处死，取脾，轻轻撕碎，用Hanks液制成细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，离心2次，最后将细胞悬浮在5ml Hanks液中。将表层培养基加热溶解后与等量的pH7.4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入用SA液配制的10％SRBC50μL(V/V)、20μL的脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，置二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA液稀释的补体(1∶10)加入到玻片凹槽内，继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

试验结果如下：本发明组合物的低剂量组、中剂量组、高剂量组与蒸馏水对照组的小鼠溶血空斑数(x10³个/全脾)的计数结果分别为21.78±9.96、29.03±10.48、31.35±10.51、19.03±8.19，本发明组合物各剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比，均有增高趋势，高剂量组与对照组，P＜0.05，具有显著性差异。

试验例4 本发明组合物提高小鼠单核一巨噬细胞碳廓清的能力

体重18～22g的清洁级昆明种雄性小鼠40只，由中南大学实验动物学部提供，批准号为湖南省医动字第20-011号。随机分为蒸馏水对照组和试验组，每组10只。试验组包括本发明组合物的低、中、高剂量组，所用剂量分别为0.185g/kg.bw、0.370g/kg.bw和1.110g/kg.bw，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。

取本发明组合物样品加蒸馏水配至所需浓度，对照组予以等容积的蒸馏水，灌胃给予受试小鼠，每日灌胃1次，灌胃容积为0.2ml/10g.bw，连续30日。试验后，各受试组小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1ml，墨汁注入后立即计时，于注入黑汁后第2min、10min，分别从内目比静脉丛取血20μL，加入到2mlNa₂CO₃溶液中，摇匀。以Na₂CO₃溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测定光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾，称重，计算吞噬指数a。

试验结果如下：本发明组合物的低剂量组、中剂量组、高剂量组与蒸馏水对照组比，具有增高单核-巨噬细胞吞噬指数的趋势，高剂量组与对照组比，P＜0.05，具有显著性差异。

综上所述，本发明组合物按0.185～1.110g/kg.bw剂量灌胃小鼠，连续服用30日，能显著提高小鼠的迟发型变态反应、半数溶血值、抗体生成细胞数和单核-巨噬细胞碳廓清的能力，表明本发明组合物具有显著的增强免疫功效。

Claims

1、一种具有增强免疫力功效的中药组合物，制备该组合物所用药效成分的原料组成按重量份计为，茯苓300份、人参100份、枸杞200份。

2、根据权利要求1所述的组合物，以人参皂甙计，组合物中总皂甙的百分含量不低于1％。

3、根据权利要求1所述的组合物，以葡聚计，组合物中粗多糖的百分含量不低于5％。

4、根据权利要求1-3任一项所述的组合物，制备该组合物所用茯苓的药效成分为高取代度羧甲基茯苓多糖，由如下方法制备：1)茯苓多糖加入到水或水醇混合液中，搅拌均匀后，加入茯苓多糖质量的1-8％的碱性溶液，搅拌至完全溶解，得茯苓多糖碱化液；2)1.0-10mol/L氯乙酸与适当过量的2.0-10mol/L碱性溶液充分反应后，加入到1)步所得的茯苓多糖碱化液中，进行取代反应，分离纯化生成的羧甲基茯苓多糖，即得，所述适当过量是指碱性溶液中碱性物质的实际用量比其与氯乙酸发生中和反应所需理论用量过量0.5-40％。

5、根据权利要求4所述的组合物，1)步所加入的碱性溶液为茯苓多糖质量的2-6％。

6、根据权利要求5所述的组合物，1)步所加入的碱性溶液为茯苓多糖质量的3-5％。

7、根据权利要求4所述的药物组合物，1)步所述茯苓多糖选自碱化提取法制得的茯苓多糖碱化提取液或碱提取酸沉淀法制得的茯苓多糖粗品。

8、根据权利要求7所述的药物组合物，所述的茯苓多糖碱化提取液为：茯苓粉中加入浓度为1.0-4.0mol/L的碱性溶液进行碱化提取，离心分离所得上清液。

9、根据权利要求8所述的药物组合物，茯苓粉中所加入碱性溶液的浓度为2.0-3.0mol/L。

10、根据权利要求4所述的药物组合物，所述水醇混合液为本领域熟知的醇溶剂加水制得的溶液，所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙二醇、乙酸乙酯、丙酮、二甲基亚砜、乙醚、异丙醇、二甲基甲酰胺的任一种或其组合。

11、根据权利要求4所述的药物组合物，所述碱性溶液由本领域熟知的碱性物质加水溶解制得，所述碱性物质选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾的任一种或其组合。

12、根据权利要求11所述的药物组合物，所述碱性物质选自氢氧化钠或氢氧化钾的任一种或其组合。

13、根据权利要求4所述的药物组合物，所述氯乙酸溶液的浓度为2.0-9.0mol/L。

14、根据权利要求13所述的药物组合物，所述氯乙酸溶液的浓度为3.0-8.0mol/L。

15、根据权利要求14所述的药物组合物，所述氯乙酸溶液的浓度为4.0-7.0mol/L。

16、根据权利要求15所述的药物组合物，所述氯乙酸溶液的浓度为4.5-6.0mol/L。

17、根据权利要求4所述的药物组合物，所述2)步碱性溶液的浓度为3.0-9.0mol/L。

18、根据权利要求17所述的药物组合物，所述2)步碱性溶液的浓度为4.0-8.0mol/L。

19、根据权利要求18所述的药物组合物，所述2)步碱性溶液的浓度为5.0-7.0mol/L。

20、根据权利要求19所述的药物组合物，所述2)步碱性溶液的浓度为5.5-6.5mol/L。

21、根据权利要求4所述的药物组合物，所述适当过量是指碱性溶液中碱性物质的实际用量比其与氯乙酸发生中和反应所需理论用量过量5-30％。

22、根据权利要求21所述的药物组合物，所述适当过量是指碱性溶液中碱性物质的实际用量比其与氯乙酸发生中和反应所需理论用量过量10-25％。

23、根据权利要求22所述的药物组合物，所述适当过量是指碱性溶液中碱性物质的实际用量比其与氯乙酸发生中和反应所需理论用量过量15-20％。

24、根据权利要求4所述的药物组合物，所述2)步反应液在30-100℃条件下进行取代反应1-5h。

25、根据权利要求24所述的药物组合物，所述2)步反应温度为40-90℃。

26、根据权利要求25所述的药物组合物，所述2)步反应温度为50-85℃。

27、根据权利要求26所述的药物组合物，所述2)步反应温度为60-82℃

28、根据权利要求27所述的药物组合物，所述2)步反应温度为75-80℃。

29、根据权利要求24所述的药物组合物，所述2)步反应时间为2-4h。

30、根据权利要求29所述的药物组合物，所述2)步反应时间为2.5-3.5h。

31、根据权利要求4所述的药物组合物，所述分离是指在2)步反应生成液中加入1.0-10mol/L的酸性溶液，调其pH值5.0-7.0后，加入3-5倍体积的醇溶剂，析出羧甲基茯苓多糖粗品，所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、丙二醇、乙酸乙酯、异丙醇、乙醚、丙酮的任一种或其组合。

32、根据权利要求31所述的药物组合物，所述酸性溶液由本领域熟知的酸性物质加水溶解制得，所述酸性物质选自醋酸、盐酸、硫酸或硝酸的任一种或其组合。

33、根据权利要求32所述的药物组合物，所述酸性物质选自盐酸或硝酸的任一种或其组合。

34、根据权利要求4所述的药物组合物，所述纯化是指羧甲基茯苓多糖粗品加水配成1.0-6.0％的水溶液，加入1.0-10mol/L的碱性溶液调pH值9.0-12.0，搅拌至羧甲基茯苓多糖粗品完全溶解；加入30％H₂O₂溶液，其用量为溶解液总容积0.1‰-2.0‰，进行脱色反应；加入1.0-10mol/L的酸性溶液调pH值5.0-7.0，超滤去除分子量小于0.7×10⁴道尔顿的羧甲基茯苓多糖及其他小分子杂质。

35、根据权利要求34所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖粗品水溶液的浓度为2.0-5.0％。

36、根据权利要求35所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖粗品水溶液的浓度3-4％。

37、根据权利要求34所述的药物组合物，H₂O₂溶液的用量为溶解液总容积的0.5‰-1.0‰。

38、根据权利要求34所述的药物组合物，纯化步骤所加入的碱性溶液的浓度为2.0-9.0mol/L。

39、根据权利要求38所述的药物组合物，纯化步骤所加入的碱性溶液的浓度为3.0-8.0mol/L。

40、根据权利要求39所述的药物组合物，纯化步骤所加入的碱性溶液的浓度为4.0-7.0mol/L。

41、根据权利要求40所述的药物组合物，纯化步骤所加入的碱性溶液的浓度为5.0-6.0mol/L。

42、根据权利要求34所述的药物组合物，所述脱色反应的温度为10℃-70℃。

43、根据权利要求42所述的药物组合物，所述脱色反应的温度为15℃-60℃。

44、根据权利要求43所述的药物组合物，所述脱色反应的温度为20℃-50℃。

45、根据权利要求34所述的药物组合物，所述脱色反应的时间为2-48h。

46、根据权利要求45所述的药物组合物，所述脱色反应的时间为5-40h。

47、根据权利要求46所述的药物组合物，所述脱色反应的时间为10-30h。

48、根据权利要求47所述的药物组合物，所述脱色反应的时间为15-25h。

49、根据权利要求34所述的药物组合物，所述酸性溶液的浓度为1.0-9.0mol/L。

50、根据权利要求49所述的药物组合物，所述酸性溶液的浓度为2.0-8.0mol/L。

51、根据权利要求50所述的药物组合物，所述酸性溶液的浓度为3.0-7.0mol/L。

52、根据权利要求51所述的药物组合物，所述酸性溶液的浓度为4.0-6.0mol/L。

53、根据权利要求34所述的药物组合物，所述超滤为DH-UF中空纤维超滤器所进行的超滤。

54、根据权利要求1-3任一项所述的组合物，组合物中人参的有效成分为人参粉，由如下方法制得：人参干燥，杀菌消毒后粉碎，过筛，即得。

55、根据权利要求1-3任一项所述的组合物，所述枸杞为本领域熟知的制备方法或由如下方法制得的枸杞提取物：1)枸杞粉加水浸泡，水浴提取多次，合并滤液得粗提液；2)减压浓缩粗提液后，进行醇析，干燥醇析沉淀物即得。

56、根据权利要求1-3任一项所述的组合物，所述组合物的剂型选自口服制剂、外用制剂或注射剂。

57、根据权利要求56所述的组合物，所述口服制剂选自口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、散剂、糖浆剂、合剂、露剂、悬浮剂、乳剂或茶剂。

58、根据权利要求57所述的组合物，所述悬浮剂选自干悬剂或悬浮液。

59、根据权利要求56所述的组合物，所述外用制剂选自凝胶剂、膏剂、搽剂或洗剂。

60、根据权利要求59所述的组合物，所述膏剂选自贴膏剂、凝膏剂或软膏剂。

61、根据权利要求56所述的组合物，所述注射剂选自针剂、输液或冻干粉针。

62、根据权利要求4所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度不低于1.0。

63、根据权利要求62所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度不低于1.05。

64、根据权利要求63所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度不低于1.10。

65、根据权利要求64所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的羧甲基取代度不低于1.2。

66、根据权利要求4所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的分子量为0.7×10⁴-1.0×10⁶道尔顿。

67、根据权利要求66所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的分子量为3.0×10⁴-8×10⁵道尔顿。

68、根据权利要求67所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的分子量为6.0×10⁴-5.0×10⁵道尔顿。

69、根据权利要求68所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的分子量为8.0×10⁴-3.0×10⁵道尔顿。

70、根据权利要求4所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的聚合度为32＜n＜4545。

71、根据权利要求70所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的聚合度为136＜n＜3636。

72、根据权利要求71所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的聚合度为272＜n＜2272。

73、根据权利要求72所述的药物组合物，所述羧甲基茯苓多糖的聚合度为363＜n＜1363。

74、权利要求1-73任一项所述组合物用于制备具有增强免疫功效的药物中的应用。

75、根据权利要求74所述的应用，所述增强免疫是指用于增强免疫力低下人群的免疫力或防治免疫力低下引起的病症。

76、根据权利要求75所述的应用，所述免疫力低下人群选自中老年人、慢性支气管炎患者、慢性肝炎患者、慢性肾炎患者或肿瘤患者。

77、根据权利要求74-76任一项所述的应用，所述应用为用于恶性肿瘤患者的辅助治疗。

78、一种制备权利要求1-73任一项所述药物组合物的方法，其特征在于，将茯苓提取物、人参粉、枸杞提取物均匀混合。

79、根据权利要求78所述的方法，其特征在于，将茯苓提取物、人参粉、枸杞提取物与药学上可接受载体均匀混合。