CN108991529B - 一种健脾养元的食品组合物及其制备方法 - Google Patents

一种健脾养元的食品组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种健脾养元的食品组合物及其制备方法，该食品组合物由以下原料制成：人参1‑7份、茯苓2‑6份、山药2‑7份、枸杞2‑6份、桑葚2‑6份、玫瑰花1‑3份、灰树花4‑16份和香菇3‑15份。通过药食同源健脾益肾方增进肿瘤患者食欲，健脾益胃，固护胃气，补益肾气，调补先天与后天之本，提高机体免疫力，为疾病向好的方向转归奠定基础。

Description

一种健脾养元的食品组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种健脾养元的食品组合物及其制备方法。
背景技术
美国国家癌症综合网定义的CRF概念:CRF是患者在经历肿瘤及在治疗肿瘤过程中所出现的主观感受，临床症状表现为精力疲乏，情绪低落，认知能力下降，兴趣丧失，无法从事原先可以胜任的工作，且疲乏程度与活动情况不相关，与肿瘤及治疗手段密切相关，而患者经充足睡眠及休息后疲劳仍无法缓解。癌因性疲乏所表现的疲劳、失眠、肌肉酸痛、情志抑郁等均符合古之虚劳表现。
“正气内存，邪不可干”，“邪之所腠，其气必虚”，中医认为肿瘤发生的主要原因在于人体的正气不足，而在肿瘤疾病的发病过程中，又很容易耗伤人体的气血津液，导致人体正气进一步损伤。“正气内虚，毒瘀并存”是恶性肿瘤的核心病机，“正虚为本，邪实(包括癌毒、痰湿、瘀血等)为标，正邪交争”。朴炳奎教授结合《黄帝内经》和李仲梓内外相因导致肿瘤的发病学说及肿瘤发生的化学毒、环境毒及癌基因突变学说认为“正气内虚”“毒邪致癌”是恶性肿瘤的发病学基础。所以正气不足贯穿于疾病发展演变的每一个阶段，因而在对肿瘤治疗中，应以补益正气为主，驱邪外出为辅。而健脾益肾方贯穿于疾病发展的整个阶段，健脾补肾法是健脾益气法与补肾填精法的有机结合，因此以四君子为基本方加减组成一个具有健脾益肾的复方应用于防治肿瘤中，可以有效的固护胃气，提高人体正气，增强机体防病、抗病及自身修复的能力。
随着姬松茸破壁粉、灰树花破壁粉、灵芝破壁孢子粉、香菇多糖、灰树花多糖等真菌类产品在抗癌或提高免疫力方面的临床及市场推广和应用，药食两用真菌的开发受到极大的推动和鼓舞，目前市场上主要的产品主要是口服液、破壁粉、胶囊、片剂、固体饮料等，虽然剂型方便，但是都偏于药的形式，而且大多都添加了许多辅料、添加剂，没有一款真正的符合药膳色、香、味、形、效理念的产品，更何谈针对肿瘤患者癌因性品疲乏的药膳产品。
加减四君子方与药用真菌的结合符合扶正祛邪的思想，健脾养元菌汤粉是从脾胃论治，又能顾及肾气，兼能顾及肿瘤患者的营养需求又能增强化疗药物抑瘤作用、降低化疗不良反应的一款的药膳产品，对改善癌因性疲乏症状具有十分良好的临床意义。
发明内容
本发明解决的技术问题是，本产品作为一款针对肿瘤患者开发的功能性药膳食品，既要具备一定的功效，同时作为食品也要具备色香味形，因此在设计配方和工艺的过程中要兼顾功效与口感，二者要做到有机协调与统一，因此经过严谨的配方设计后配伍组成健脾益肾方，且全为药食同源原料，原料口感较好，作为食品考虑安全问题，提取工艺全部以水为溶媒，对提取工艺进行优化，提取分中药复方提取和菌类提取两部分，中药复方提取以功能性成分多糖含量为指标，菌类提取是以功能性成分多糖和鲜味成分呈味核苷酸为指标评价提取工艺，所选指标兼顾功能与口味，充分体现药膳的特色。
本发明的技术方案是，提供一种健脾养元的食品组合物，该食品组合物由以下原料制成：人参1-7份、茯苓2-6份、山药2-7份、枸杞2-6份、桑葚2-6份、玫瑰花1-3份、灰树花4-16份和香菇3-15份。
优选地，该食品组合物由以下原料制成：人参2份、茯苓5份、山药5份、枸杞5份、桑葚5份、玫瑰花2份，灰树花7份，香菇3.5份。
优选地，所述食品组合物为粉末状。本发明将其称为健脾养元菌汤粉。
优选地，所述食品组合物由粉末A和粉末B按1:1-2的比例混合；
粉末A的制备方法包括以下步骤：
(1)取人参、茯苓、山药、枸杞、桑葚，加8-12倍水、浸泡1-3小时，按提取温度70-100℃，提取时间1-2h，进行第一次提取，150-300目过滤，药渣中加入玫瑰花，加8～12倍水进行第二次提取，提取温度90-100℃，提取1小时，150～300目过滤；
(2)两次提取的提取液合并，50-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.15，浓缩完毕加入占浓缩液5％～10％的可溶性大豆多糖和5％～10％的麦芽糊精，搅拌溶解，60-100目过滤；
(3)过滤后的保持浓缩液温度40～80℃进行喷雾干燥，得粉末A；
粉末B的制备方法包括以下步骤：
(a)取灰树花、香菇，粉碎，加8-20倍水，浸泡1-2小时，按提取温度70-100℃提取30-90分钟，提取结束200目过滤；该步骤可重复1-3次，合并过滤后的提取液；
(b)滤液50-70℃减压浓缩至相对密度1.03-1.12，浓缩完毕加入占浓缩液质量1-10％的可溶性大豆多糖和1-10％的麦芽糊精，搅拌溶解60-100目过滤，滤液进行喷雾干燥，得粉末B。
优选地，喷雾干燥的具体条件为：保持浓缩液的温度40～80℃，进行喷雾干燥，进风温度80～150℃，蠕动泵速度10～30RPM，出风温度60～120℃，风机20～40m3/min，压力0.2～0.4MPa。
其中，可溶性大豆多糖和麦芽糊精作为辅料添加。
本方中包含两味药食两用真菌灰树花、香菇与人参、茯苓、山药、枸杞子、桑葚、玫瑰花这六味药食同源的中药，方中以灰树花健脾益气、扶正固本，人参大补元气，补脾养胃为君；山药益气养阴、补脾肺肾，香菇健脾胃、补肝肾、益智安神为臣药；茯苓利水渗湿，健脾安神，枸杞子、桑葚补益肝肾，滋阴生津为佐药，三味药共奏健脾利湿、补肾养阴之效；再佐以玫瑰花疏肝解郁，活血行气，全方共奏健脾益肾、调补气血之效。
本产品因通过工艺方法已将有效成分提取，以水略加冲泡就可以喝到营养又美味的便捷菌汤，还可以和不同偏性和功效的食材搭配，以适应不同患者或不同病证阶段的治疗。
喝汤的形式既符合中国传统饮食中的健康饮食方式，又是中医传统有效服药剂型，特别是对于补益类来说热汤服的形式更有利于发挥补益作用，健脾养元菌汤粉是将加减四君子和药食两用真菌有机结合，既能以巧妙的配比充分发挥中药复方与菌汤独特鲜美风味，又能通过中药提取工艺优化和菌汤熬煮工艺的优化充分发挥中药复方与药食用真菌的功效，本方在选方配伍上以健脾益肾法为据，以减轻肿瘤患者癌因性疲乏症状为目标，选药均为药食同源药材，可作为普通食品原料，安全性高，可融合于日常膳食中，营养健康、安全有效。
健脾养元菌汤粉是将药食两用真菌灰树花、香菇在兼顾功效与美味的条件下提取，并与健脾益肾中药复方提取物科学配伍，从中国传统饮食中选择喝汤的健康饮食方式，通过优化的工艺制作的固体菌汤粉，相比口服液、胶囊、片剂，其热服的方式更能发挥健脾益肾的补益调理作用，寓医于食，口感鲜美。
灰树花是一种大型的药食用真菌，具有“扶正固本”的功效，其抗肿瘤方面的作用在国内外的研究中受到重视，而且灰树花的抗肿瘤作用并非是直接杀死肿瘤细胞，而是依靠机体自身的免疫力来发挥作用，表现在抑制肿瘤细胞生长，防止肿瘤转移，防止正常细胞癌变，以及与化学疗法和放射疗法协同作用，提高癌症的治疗效果而降低放疗、化疗的副作用等方面，加之其降血糖、降血压、抗抑郁等作用对提高患者的生活质量也有良好的辅助作用，且灰树花等药食用真菌其安全性也十分令人满意，对肿瘤的预防和治疗方面都是一个很好的原料。
香菇具有数千年的栽培和食用历史，素有“山珍之王”之称。作为一种食品，其味道鲜美、营养丰富，具有开胃、滋补的功效。香菇主要含有碳水化合物、多糖、蛋白质、纤维素、脂类等多种成分，具有抗菌、抗病毒、免疫调节和抗肿瘤活性。其中香菇多糖是其主要活性成分，香菇多糖具有抑制肿瘤生成、免疫调节等多种生物活性，是一种理想的抗癌辅助药物，与放化疗合用可起到“减毒增效”的作用。我国是食用菌生产大国，香菇资源非常丰富，产量居世界首位，因此对香菇多糖的综合开发利用具有重要的社会意义和经济意义。
人参具有“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智、久服轻身延年”的功效，人参的主要有效成分人参皂苷具有清热解毒，促进肿瘤细胞的凋亡和分化，延缓衰老，调节中枢神经系统，提高机体免疫力，改善心脑血管供血不足等作用；人参多糖可明显增强免疫系统的功能并有抗肿瘤活性。
茯苓是最早纳入《中国药典》的药用食用菌之一，味甘、淡，性平，具有利水祛湿、健脾、安神的功效，茯苓中主要的活性成分为茯苓多糖、茯苓三萜，具有利尿、抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等重要药用价值。
山药为薯蓣科植物薯蓣(Dioscotea opposita Thunb.)的根茎，性平、味甘，有健脾除湿、补气益肾等功效。研究发现山药活性成分包括多糖、糖蛋白、尿囊素、皂苷等，具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老等功效。山药多糖是从山药中分离提取获得的最重要的活性成分，具有健脾胃、益肺肾、抗突变、促免疫、降血糖、抗衰老等多种功能。尿囊素是尿酸衍生物，属咪唑类杂环化合物，其化学成分为1-脲基间二氮杂戊烷-2，4-二酮，是山药的重要活性成分之一，具有镇静、局部麻醉、修复上皮组织、促进皮肤溃疡和伤口愈合及抗病毒等作用，对鱼鳞病、银屑病等各种角化性皮肤病有良好疗效。山药皂甙属于薯蓣皂甙中的一类，是异螺旋甾烷的衍生物，由糖元和异戊二烯多聚体连接而成，具有抑瘤、降血糖、双向免疫调节、改善心脑血液循环、防止心律失常、抑制神经递质释放等功效。山药具有多种药用功能的特性，以其替代部分人工合成物质用于部分药品辅料、包衣等，既提高药品安全性，又充分发挥山药的药用功效。
枸杞子是名贵的中药材，可药食两用，在中国其保健功效的历史悠久，早在《神农本草经》中称其为“久服轻身不老、耐寒暑”可有抗衰老的功效。现代医学发现，枸杞子中枸杞多糖是一种淡黄色纤维状固体的生物活性物质，可提高巨噬细胞和免疫细胞T、B、NK、CTL等免疫功能，同时促进细胞因子IL一2、IL_3及TNFB等的产生，具有调节免疫、延缓衰老多种功效。相关研究发现，枸杞多糖具有增强荷瘤、化疗及调节神经内分泌免疫调节网络的功效。
桑椹味甘酸、性寒，归心、肝、肾经，具有补肝益肾、养血生津、滋液熄风、润肠通便的作用。桑葚中的主要活性成分为白藜芦醇和多糖，白藜芦醇具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗炎、抗氧化、保肝、神经系统保护等多种药理学作用。现代医学表明，桑葚中所含的白藜芦醇能够刺激人体内的某些基因抑制癌细胞的增长，并且能够阻止血液细胞中栓塞的形成，被誉为继紫杉醇之后又一新的抗癌物质。现代医学已明确了桑葚的六种医疗保健功能，包括防癌抗诱变、增强免疫力、保肾护肝、驻颜抗衰老、促进造血细胞生长、降低血糖血脂。
中药玫瑰花有活血行气、疏肝解郁、芳香开窍的功效，玫瑰花中含有多种生理活性成分，其中所含挥发油被认为是其主要活性成分。挥发油类化合物具有芳香开窍、活血行气、扩张心血管、改善内脏及外周血液循环的作用。玫瑰花还含有黄酮、有机酸、鞣质等类化学成分，具有降血糖、抗肿瘤、抗菌、抗氧化等作用。
本发明的有益效果是，通过药食同源健脾益肾方增进肿瘤患者食欲，健脾益胃，固护胃气，补益肾气，调补先天与后天之本，提高机体免疫力，为疾病向好的方向转归奠定基础。而且肿瘤患者因对肿瘤的恐惧和治疗对身体的不良作用及经济的压力，精神疲惫、情绪低落，易出现情志方面的问题，本方中考虑身心和畅的重要性，组方中以辅以疏肝行气的玫瑰花、健脾安神的茯苓，同时文献记载灰树花对抑郁症也有良好的效果，而且能正常、有食欲的摄入每日摄入食物对患者的精神也有很大的鼓舞作用，患者家属也能精神放松，传达给患者良好的情绪氛围，本产品对癌因性疲乏所表现的疲劳、失眠、肌肉酸痛、情志抑郁等也有良好的改善作用，可以提高肿瘤患者的生活质量，为患者鼓舞正气抵抗疾病提供帮助；而且本方采用健脾益肾法在肿瘤治疗过程中一直适用，始终贯穿疾病治疗过程中，因此可以作为临床用药的辅助。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例一：
1、取人参2份、茯苓5份、山药5份、枸杞5份、桑葚5份，加12倍水、浸泡1小时，按提取温度100℃，提取1.5h进行第一次提取，200目过滤，药渣中加入玫瑰花2份，加10倍水进行第二次提取，提取温度100℃，提取1小时，200目过滤；
2、两次提取完毕，合并两次提取液，60℃减压浓缩至相对密度1.07，浓缩完毕加入10％的可溶性大豆多糖和10％的麦芽糊精，搅拌溶解，80目过滤；
3、保持浓缩液温度60℃左右，进行喷雾干燥，进风温度125℃，蠕动泵速度15RPM，出风温度90℃，风机35m3/min，压力0.2MPa，得粉末A；
4、取灰树花7份淋洗干净后沥去水分，香菇3.5份，略粉碎，加20倍水，浸泡1小时，按提取温度100℃提取30分钟，提取结束200目过滤；
5、滤液60℃减压浓缩至相对密度1.04，浓缩完毕加入浓缩液体积3％的可溶性大豆多糖和1％的麦芽糊精，搅拌溶解80目过滤，滤液进行低温喷雾干燥，物料温度70～80℃，调节蠕动泵速度15RPM、进风温度100℃、出风温度70℃左右、风机30m3/min、压力0.25MPa左右，得粉末B。
6、粉末A和粉末B按1:1比例混合，用铝箔袋包装，杀菌。
实施例二：
1、取人参3份、茯苓5份、山药6份、枸杞5份、桑葚4份，加12倍水、浸泡1小时，按提取温度100℃，提取1.5h进行第一次提取，200目过滤，药渣中加入玫瑰花2份，加10倍水进行第二次提取，提取温度85℃，提取1小时，200目过滤；
2、两次提取完毕，合并两次提取液，60℃减压浓缩至相对密度1.09，浓缩完毕加入10％的可溶性大豆多糖和10％的麦芽糊精，搅拌溶解，80目过滤；
3、保持浓缩液温度60℃左右，进行喷雾干燥，进风温度145℃，蠕动泵速度15RPM，出风温度90℃，风机35m3/min，压力0.2MPa，得粉末A；
4、取灰树花8份淋洗干净后沥去水分，香菇7份，略粉碎，加20倍水，浸泡1小时，按提取温度85℃提取1小时，提取结束200目过滤，同法共提取2次，合并滤液；
5、滤液60℃减压浓缩至相对密度1.07，浓缩完毕加入浓缩液体积3％的可溶性大豆多糖和1％的麦芽糊精，搅拌溶解80目过滤，滤液进行低温喷雾干燥，物料温度70～80℃，调节蠕动泵速度15RPM、进风温度120℃、出风温度70℃左右、风机30m3/min、压力0.25MPa左右，得粉末B。
6、粉末A和粉末B按1:1.5比例混合，用铝箔袋包装，杀菌。
实施例三：
1、取人参6份、茯苓5份、山药5份、枸杞5份、桑葚4份，加12倍水、浸泡1小时，按提取温度100℃，提取1.5h进行第一次提取，200目过滤，药渣中加入玫瑰花1份，加10倍水进行第二次提取，提取温度85℃，提取1小时，200目过滤；
2、两次提取完毕，合并两次提取液，60℃减压浓缩至相对密度1.12，浓缩完毕加入10％的可溶性大豆多糖和10％的麦芽糊精，搅拌溶解，80目过滤；
3、保持浓缩液温度60℃左右，进行喷雾干燥，进风温度145℃，蠕动泵速度15RPM，出风温度90℃，风机35m3/min，压力0.2MPa,得粉末A；
4、取灰树花8份淋洗干净后沥去水分，香菇7份，略粉碎，加20倍水，浸泡1小时，按提取温度100℃提取40分钟，提取结束200目过滤，同法共提取3次，合并滤液；
5、滤液60℃减压浓缩至相对密度1.04，浓缩完毕加入浓缩液体积3％的可溶性大豆多糖和1％的麦芽糊精，搅拌溶解80目过滤，滤液进行低温喷雾干燥，物料温度70～80℃，调节蠕动泵速度15RPM、进风温度120℃、出风温度70℃左右、风机30m3/min、压力0.25MPa左右，得粉末B。
6、粉末A和粉末B按1:2比例混合，用铝箔袋包装，杀菌。
下面根据实施例一的配方对健脾养元菌汤粉进行具体的研究，根据实施例一的产品进行药效实验。
健脾养元菌汤固体饮料中药复方提取工艺研究
为了优化中药复方提取工艺，使复方中的抗肿瘤有效成分多糖含量最大化，本实验通过正交设计考察提取温度、加水倍数、提取时间、浸泡时间以得到最佳提取工艺参数。实验方案如下：
1.材料与仪器
人参(吉林)、茯苓、山药、枸杞、玫瑰花等药材皆购自老百姓大药房，经湖南中医药大学药学院周日宝教授鉴定符合2015版《中国药典》一部有关规定；灰树花购于湖南大后方商贸有限公司，香菇购于上海裕国电子商务有限公司。5％苯酚、浓硫酸、乙醚、无水乙醇等比色用试剂皆为国产分析纯试剂。
UV9100B紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；YP-B5001型电子天平(上海光正医源仪器有限公司)；RHP-400型高速多功能粉碎机(浙江永康市荣浩工业有限公司)；YC-1800实验室低温喷雾干燥机(上海雅程仪器设备有限公司)；SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；YJD20老药师常温煎药机(长沙市卓成医疗器械有限公司)；RE-200013旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)。
2方法与结果
2.1健脾养元菌汤中药复方提取基本方法
将人参、茯苓、山药、桑椹、玫瑰花、枸杞粉碎成10目左右，加一定倍数自来水浸泡一定时间，然后按一定温度回流提取一定时间，抽滤器过滤，同法提取两次或三次，过滤后合并滤液，取样备用。
2.2健脾养元菌汤中药复方提取次数的考察
将人参、茯苓、山药、桑椹等6味中药按比例称取三份，每份100克，每份适当粉碎成10目，按表1设计方案中的参数分别制备三份水煎煮液，50℃减压浓缩并定容至100mL，按2.4.2分别处理成供试液，每份按2.4.2项下测定多糖含量，结果见表1，由表1结果可知，水煎煮2次多糖提取量占水煎煮三次的93％以上，故水煎煮2次为佳。
表1健脾养元菌汤中药复方提取次数的考察
Figure BDA0001773504560000081
2.3正交实验设计
因复方中有效成分大多为水溶性成分，且主要功效指标多糖为水溶性，本方提取物亦作为制备固体饮料原料，考虑食品安全，所以采用传统水煎煮法提取，采用L9(34)正交实验(表2)，以总多糖含量为考察指标，对提取温度、加水倍数、提取时间、浸泡时间进行参数优化。
表2水提因素水平表
Figure BDA0001773504560000082
2.4多糖含量测定
2.4.1对照品溶液制备精密称定无水葡萄糖对照品0.025g，置250mL量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，制得含0.1004mg/mL的葡萄糖标准溶液。
2.4.2健脾养元菌汤中药提取物供试品溶液的制备
精密移取各工艺条件下制得的水提样品液1ml，加蒸馏水定容至100ml容量瓶中，摇匀，制得供试品1；依次精密移取供试品1各1ml,分别加入1ml蒸馏水，1ml 5％的苯酚溶液，5ml浓硫酸，摇匀，室温置10min，40℃水浴加热15min，冷却至室温，在最大吸收波长处测定吸光度A。
2.2.3标准曲线的绘制
精密吸取无水葡萄糖对照品溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置于10mL具塞试管中，分别加蒸馏水补至2.0mL,各再精密加入5％苯酚溶液1mL，摇匀,迅速加入5mL浓硫酸，摇匀，室温放置10min，置40℃水浴加热15min，取出，迅速冷却至室温，以相应试剂为空白，在490nm的最大吸收波长处测定吸光度。以吸光度对无水葡萄糖溶液浓度进行线性回归，得线性方程：Y＝0.017176+0.043539X，R＝0.9929。
表3中药复方水提正交设计安排及结果表
Figure BDA0001773504560000091
由直观分析得知，各因素对提取效果影响大小顺序为：加水倍数>浸泡时间>提取时间>提取温度，每个因素三个水平之间的趋势为:A2>A1>A3，B3>B2>B1,C2>C1>C3,D1>D3>D2。该提取工艺稳定可行。直观分析的最佳工艺为A2B3C2D1。
表4中药复方水提方差分析表
Figure BDA0001773504560000092
由表3结果进一步进行方差分析，结果见表4。方差分析结果表明，各因素对实验结果均无显著性影响。考虑到提取时间对本品提取温度影响较小，为方便工艺化生产选用100℃提取温度，通过两两比较，B因素1水平和3水平之间有P＝0.03<0.05，有显著统计意义，而2水平和3水平之间无统计意义，且B水平趋势为B3>B2>B1，为降低能源消耗，结合生产实际，最终确定最佳提取工艺为：浸泡1小时，提取2次，每次加水10倍，每次提取1小时。
2.3验证实验
考虑实际生产以及实验误差等因素，对优选的提取工艺进行重复性实验验证。称取处方量的药材3份进行回流加热提取，依法制备样品，并测定含量。结果见表5。表明该提取工艺稳定可行。
表5水提验证结果
Figure BDA0001773504560000101
3结果与讨论
本方是复方，成分复杂，但考虑抗肿瘤的功效选用多糖为指标，因本方中有些单药本身含糖比较好，且多糖类物质也较为粘稠，加水量少、煎煮时间长会导致药液粘稠，易导致过滤的损失，加水量过多会增加溶剂成本和浓缩的能耗，结合实际生产需求确定最佳提取工艺为浸泡1小时，提取2次，每次加水10倍，每次提取1小时。本次选用的评价指标总多糖，只作为考察工艺优劣的指标，可以简化供试品溶液的处理过程，简化实验流程。
灰树花香菇菌汤提取工艺研究
1材料与仪器
美国Agilent 1290 Infinity型超高效液相色谱仪。色谱柱(4.6mm×250mill，5μm)，VWD紫外检测器。UV9100B紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科仪器股份有限公司)；YP-B5001型电子天平(上海光正医源仪器有限公司)；RHP-400型高速多功能粉碎机(浙江永康市荣浩工业有限公司)；SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；忠臣LC-E096P电陶炉(广东长盈电器集团公司)；RE-200013旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)。
乙腈(色谱纯)，水(怡宝纯净水)，磷酸二氢钾(分析纯，批号20170609)，四丁基溴化铵(分析纯，批号20171101)，5’-肌苷酸二钠和5’-鸟苷酸二钠标准品(Sigma公司),灰树花购于湖南大后方商贸有限公司，香菇购于上海裕国电子商务有限公司。
2方法与结果
2.1菌汤制备
按比例称取灰树花、香菇各9份，淋洗30秒，粉碎约10目，加水浸泡，浸泡结束后置电陶炉上，600℃炉温煮沸后转300℃炉温开始计算煎煮时间，煎煮结束后用200目筛网过滤并挤压滤渣，得滤液，计算体积并取样；液相色谱测定呈味核苷酸含量，氨基酸分析仪测定氨基酸；测定多糖含量。
2.2菌汤提取次数的考察
将灰树花、香菇按比例称取三份，每份100克，每份适当粉碎成10目，按表5设计方案中的参数分别制备三份水煎煮液，50℃减压浓缩并定容至100mL，按2.4.2分别处理成供试液，每份按2.4.2项下测定多糖含量，结果见表6，由表6结果可知，水煎煮2次多糖提取量占水煎煮三次的92％以上，故水煎煮2次为佳。
表6菌汤提取次数的考察
Figure BDA0001773504560000111
2.3菌汤熬煮工艺试验设计
多糖具有抗肿瘤和提高免疫力的作用，对灰树花、香菇的熬制工艺主要以总多糖含量和鲜味成分呈味核苷酸含量为考察指标，本方提取物亦作为制备固体饮料原料，考虑食品安全，所以采用传统水煎煮法提取，采用正交实验L9(34)(表7)，对加水倍数、提取时间、浸泡时间进行参数优化。
表7菌汤熬煮工艺因素水平表
Figure BDA0001773504560000112
2.4多糖含量测定
2.4.1对照品溶液制备精密称定无水葡萄糖对照品0.025g，置250mL量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，制得含0.1004mg/mL的葡萄糖标准溶液。
2.4.2健脾养元菌汤中药提取物供试品溶液的制备精密移取各工艺条件下制得的菌汤样品液1ml，加蒸馏水定容至100ml容量瓶中，摇匀，制得供试品1；依次精密移取供试品1各1ml,分别加入1ml蒸馏水，1ml 5％的苯酚溶液，5ml浓硫酸，摇匀，室温置10min，40℃水浴加热15min，冷却至室温，在最大吸收波长处测定吸光度A。
2.4.3标准曲线的绘制精密吸取无水葡萄糖对照品溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置于10mL具塞试管中，分别加蒸馏水补至2.0mL,各再精密加入5％苯酚溶液1mL，摇匀,迅速加入5mL浓硫酸，摇匀，室温放置10min，置40℃水浴加热15min，取出，迅速冷却至室温，以相应试剂为空白，在490nm的最大吸收波长处测定吸光度。以吸光度对无水葡萄糖溶液浓度进行线性回归，得线性方程：Y＝0.017176+0.043539X，R＝0.9929。
2.5呈味核苷酸含量测定：
2.5.1标准溶液的配制精密称取5’-肌苷酸二钠(IMP)和5’-鸟苷酸二钠(GMP)对照品各50.0mg置于100mL量瓶中，加水超声15min溶解，定容至刻度，于4℃冰箱中保存。
2.5.2供试品溶液的制备
将上文2.2中按正交设计制备的菌汤15ml,离心后精密吸取1ml于100ml容量瓶中，然后加入0.01mol/L的盐酸定容至100mL，在250nm波长处，测定吸光值。色谱条件：流动相乙腈-水(0.005mol/L四丁基溴化铵+0.05mol/L磷酸二氢钾)(1:99,v/v)，流速0.6mL/min，ThermoC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)，检测波长250nm，柱温25℃，进样量10μL。
2.5.3线性关系试验
精密吸取2.4.1制备对照溶液储备液1.0、2.0、4.0、8.0、16mL，用流动相稀释至10mL，依次进样10μL，以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。5’-肌苷酸二钠的线性方程为Y＝2272.9X+4.5833，r为0.9999.线性范围0.25—4.00μg。5’-鸟苷酸二钠的线性方程为Y＝0.0005X-0.0099。r为0.9999，线性范围0.25—4.00μg。
表8菌汤提取工艺正交设计安排表
Figure BDA0001773504560000121
综合评分＝多糖含量/最高含量*50％+呈味核苷酸含量/最高含量*50％；多糖含量和呈味核苷酸含量均为每克原药材中的所含的量。
由表8直观分析得知，各因素对提取效果影响大小顺序为：浸泡时间>煎煮时间>加水倍数，每个因素三个水平之间的趋势为:A2>A3>A1，B1>B3>B2,C2>C3>C1。该提取工艺稳定可行。直观分析的最佳工艺为A2B1C2，而此工艺下的总多糖含量在所有试验组中排第二，呈味核苷酸含量排第一，说明所选工艺科学、可行。
表9菌汤熬煮工艺方差分析表
Figure BDA0001773504560000131
由表8结果进一步进行方差分析，结果见表9。方差分析结果表明，各因素对实验结果均无显著性影响。通过两两比较，C因素1水平和3水平之间有P＝0.03<0.05,有显著统计意义，而2水平和3水平之间无统计意义，且C水平趋势为C2>C3>C1，为降低能源消耗，结合生产实际，最终确定最佳提取工艺为：浸泡1小时，提取1次，每次加水20倍，每次提取30分钟。
2.6验证实验
考虑实际生产以及实验误差等因素，对优选的提取工艺进行重复性实验验证。称取处方量的药材3份进行回流加热提取，依法制备样品，并测定含量。结果见表10。表明该提取工艺稳定可行。
表10菌汤熬制最优工艺验证结果
Figure BDA0001773504560000132
3结果与讨论
本试验对菌汤的熬煮工艺优化是为了使菌汤中提取尽可能多的多糖并保留菌类良好的风味，这里主要用的风味指标为呈味核苷酸，呈味核苷酸是菌汤里的呈鲜的挥发性成分，高温和久煮易挥发损失，因此在筛选工艺的时候以总多糖和呈味核苷酸为效应指标，从结果可知，在先粉碎后浸泡1小时的前提下，菌汤熬煮30分钟就可以获得最佳的提取效果，这样对放大生产来说也节约了煎煮过程中的能源损耗，因此该工艺科学、可行、适合放大生产。
健脾养元菌汤中药复方提取液低温喷雾干燥工艺研究
为最大程度的保证喷雾干燥后所得成品的较高生物活性和得率，本试验主要探索适合的较低温度的喷雾干燥条件，采用正交设计试验对蠕动泵速、进风温度、风机速度进行了不同参数调节，以期得到优化的喷雾干燥工艺。
1.材料与仪器
YC-1800实验室低温喷雾干燥机(上海雅程仪器设备有限公司)；ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司)；旋转蒸发器RE-2000B(巩义市予华仪器有限责任公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；MC密度计(国营河北省武强县精创仪器仪表厂)；中药单煎机普及型-新款(长沙市卓成医疗器械有限公司)忠臣LC-E096P电陶炉(广东长盈电器集团公司)；PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；2X2-2型旋片真空泵(浙江台州求精真空泵有限公司)；人参(吉林)、茯苓、山药、枸杞、玫瑰花等药材皆购自老百姓大药房，经湖南中医药大学药学院周日宝教授鉴定符合2015版《中国药典》一部有关规定；可溶性大豆多糖购于河南千志商贸有限公司。
2.水提液制备
以中药复方优化后的最佳工艺中试放大，取人参、茯苓、山药、枸杞、桑葚适量，加12倍水、浸泡1小时，按提取温度100℃，提取1.5h进行第一次提取，200目过滤，药渣中加入玫瑰花，加10倍水进行第二次提取，提取温度100℃，提取1小时，200目过滤；两次提取完毕，合并两次提取液，60℃减压浓缩至相对密度1.07，浓缩完毕加入10％的可溶性大豆多糖，搅拌溶解，80目过滤；
3.喷雾干燥正交试验
经过预试，设备压力不可调，自然压力维持在0.2Mpa左右，影响喷雾干燥效果的因素主要是进风温度、风机速度、蠕动泵速度，因此以此为考察因素，进行三因素三水平正交试验，选用正交实验L9(34)表进行试验安排，因素安排表如表11，以100ml溶液所得干粉重量为主要考察指标，按表12的安排表进行喷雾干燥进行实验，方差分析表见表13。
表11中药复方喷雾干燥工艺因素水平表
Figure BDA0001773504560000151
表12中药复方喷雾干燥工艺正交设计安排表
Figure BDA0001773504560000152
表13中药复方水提方差分析表
Figure BDA0001773504560000153
Figure BDA0001773504560000161
由极差和方差分析可知，对得粉量影响效果大小依次为:A风机速度>C进风温度>B蠕动泵速度，优选优组合为A3B1C1,由于B对结果的影响不大,且直观可知A3B2C1组合的得粉量最高,因此以A3B2C1为最优组合。
3.1验证试验
考虑实验误差对优选的喷雾干燥条件进行重复性验证,取三份100ml浓缩液按照风机速度25m3/min,蠕动泵速度15ml/min,进风温度125℃进行喷雾干燥,结果见表14。
表14喷雾干燥最优工艺验证结果
Figure BDA0001773504560000162
4.结果与讨论
含糖高的物料喷雾干燥温度超过糖软化点易出现结块，因此需要添加辅料提高物料的软化点，而且含糖高的物料干燥后的干粉也容易受潮，虽然预试的时候喷雾干燥的进风温度低至80℃也能得到干粉，但含水量会较高，鉴于物料易受潮的特性所以不易温度过低，因此本实验选用125℃的进风温度，既可以尽量避免中药活性少受高温的影响，也可得到状态较好的干粉。
菌汤低温喷雾干燥工艺研究
菌汤的风味成分为挥发性成分，受热易挥发，影响对菌汤风味的保留，所以菌汤的喷雾干燥工艺宜用较低的喷雾干燥温度，菌汤中的功能性成分主要水溶性多糖，但相比中药复方的浓缩液并无太多的糖分，质地也不粘稠，为避免对热敏性活性的影响，可适当选用较低的喷雾干燥温度，本实验只要探索菌汤喷雾干燥较低温度的工艺条件。
1.仪器与材料
YC-1800实验室低温喷雾干燥机(上海雅程仪器设备有限公司)；ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司)；旋转蒸发器RE-2000B(巩义市予华仪器有限责任公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；MC密度计(国营河北省武强县精创仪器仪表厂)；中药单煎机普及型-新款(长沙市卓成医疗器械有限公司)忠臣LC-E096P电陶炉(广东长盈电器集团公司)；PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；2X2-2型旋片真空泵(浙江台州求精真空泵有限公司)；灰树花购于湖南大后方商贸有限公司，香菇购于上海裕国电子商务有限公司；可溶性大豆多糖购于河南千志商贸有限公司。
2.菌汤的制备
按比例称取灰树花、香菇适量，淋洗30秒，粉碎约10目，加水浸泡1小时，浸泡结束后置电陶炉上，600℃炉温煮沸后转300℃炉温煎煮30分钟，煎煮结束后用200目筛网过滤并挤压滤渣，得滤液，60℃减压浓缩至相对密度1.04(60℃)，称取菌汤浓缩液体积3％的可溶性大豆多糖，搅拌均匀，过80目筛备用。
3.单因素试验
3.1进风温度单因素试验：取实施例1中制备好的浓缩液，料液温度60℃，固定蠕动泵、风机、压力自然，平行三次，试验不同进风温度下喷雾干燥的效果。结果见表15。
表15进风温度单因素试验安排及结果
Figure BDA0001773504560000171
注：95％置信区间公式为
Figure BDA0001773504560000172
三个温度的置信区间重合，没有统计意义，为探索较低进风温度的喷雾干燥条件，对100℃下的条件进行再试验。
3.2风机速度单因素试验：取1中制备好的浓缩液，料液温度60℃，固定蠕动泵15ml/min、进风温度100℃、压力自然，对不同风机速度进行考察，平行三次，结果见表16。
表16风机速度单因素试验安排及结果
Figure BDA0001773504560000181
由表16结果可知，95％置信区间均不重合，差别具有统计意义，其中风机速度为30m3/min时得粉量最高。
4.结果与讨论
由直观结果可知，蠕动泵15ml/min、进风温度100℃、风机速度30m3/min得粉量最高，没有对蠕动泵速度继续进行单因素试验是因为100℃喷雾干燥温度已较低，蠕动泵速度再调快会使干粉含水量增加，调低则进料太慢效率太低，根据预试验的经验，直接固定蠕动泵速度，探索此条件下尽可能低的进风温度，以及适合的风机速度。本试验得到的进风温度条件在以往的文献报道中很少见，据设备生产商反应也较为罕见，这个可能跟添加的辅料关系比较大，可能是可溶性大豆多糖的添加能明显的提高物料的糖软化点，大大改善喷雾干燥黏壁的情况，用较低的温度可尽量减少高温对物料敏性活性的影响。
健脾养元菌汤急性经口毒性试验
本研究采用ICR小鼠经口灌胃给予受试样品，连续观察14天，从小鼠的急性毒性试验结果了解受试样品是否具有毒性，以及毒性反应程度和涉及的器官，为进一步毒性试验的剂量设计、毒性反应指标的选择和临床试验的开展提供实验依据。
1.实验材料
1.1受试样品
健脾养元菌汤(干粉)，批号：20180123，棕褐色固体粉末，易溶于水，每克样品相当于原药材2.16g。成人推荐食用量11.5g/次，2次/天，热水冲服，由湖南中医药大学提供，保存于低温干燥环境。
1.2实验动物
SPF级ICR小鼠20只，雌雄各半，平均体重：19.4g，体重范围16.1～22.3g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2016-0002，实验动物质量合格证号：No.43004700041968，在湖南省药物安全评价研究中心屏障环境C区饲养(温度范围：20.0～26.0℃；相对湿度范围：40.0％～70.0％)，实验动物使用许可证号：SYXK(湘)2015-0016。鼠饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2014-0010，饲料合格证编号：No.11002900035009。
1.3主要仪器
PL2002型电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；MS105DU型分析天平，梅特勒-托利多中国有限公司。
2.实验方法
2.1动物伦理与保护
本实验经中心实验动物管理(伦理)委员会审查、批准后实施，完全按国家相关实验动物福利法规和本中心相关标准操作规程的规定执行。
2.2实验设计的依据
预实验结果：健脾养元菌汤粉药液含糖量高，配制液较粘稠，可配置的最大给样浓度≥0.66g/mL，由于人体推荐食用量较大，故采用24h内多次给样法进行实验，ICR小鼠按20mL/kg经口灌胃给予健脾养元菌汤，共给样三次，给样剂量共计为39.6g/kg(相当于人体推荐食用量的103倍)，给样后未观察到动物出现死亡等异常情况。
2.3试验分组及剂量设计
根据预实验结果，本实验采用最大给样量法进行正式试验，选取检疫合格ICR小鼠20只，雌雄各半，动物禁食不禁水6h后，按20mL/kg经口灌胃给予受试样品，24h内给样三次，每次给样间隔4h，健脾养元菌汤给样剂量共计39.6g/kg。
2.4检测指标
2.4.1一般临床观察：给样后0～4h内仔细观察并记录各组动物是否出现毒性反应以及毒性反应症状、出现时间以及死亡情况等，如动物死亡，则进行大体解剖观察，存活动物此后连续观察14天；
2.4.2体重：给样当天及给样后第7天、第14天进行动物称重；
2.4.3大体解剖观察：观察结束时，处死所有存活动物，进行大体解剖观察，如脏器发现明显病变，则进行组织病理学检查。
3.实验结果
3.1一般临床观察
给样当天0～4h内及给药后连续观察14天：给样组小鼠未见明显异常反应，试验期内未出现动物死亡情况。
3.2体重
如表17所示：给样前及给样后第7天、第14天称重，小鼠体重呈正常增长且体重增重在正常范围内。
表17小鼠体重结果
Figure BDA0001773504560000201
Figure BDA0001773504560000202
3.3大体解剖观察
最后一次观察结束后处死所有存活小鼠并进行大体解剖检查，肉眼观察脏器的位置、大小、色泽、粘连、表面和切面的质地等，均未见积液及肿瘤等异常改变。
4.实验结论
本实验条件下，小鼠经口灌胃给予健脾养元菌汤，未见明显毒性反应的剂量(NOAEL)≥39.6g/kg(相当于人体推荐食用量的103倍)。
健脾养元菌汤粉中药总组分对体外培养人结直肠癌细胞HT-29的抑制作用
随着肿瘤发病率和死亡率的上升，恶性肿瘤是中国居民的主要死亡原因之一，也是一个主要的公共卫生问题。结直肠癌(colorectal cancer,CRC)，包括结肠癌和直肠癌，是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一。据全国肿瘤登记中心发布的关于2015年中国癌症统计结果显示，我国结直肠癌发病例数约为37.63万，死亡例数19.1万，其发病率和死亡率均居我国恶性肿瘤的第五位，均呈现上升趋势；是我国男性罹患的第四大恶性肿瘤，女性所患恶性肿瘤中结直肠癌居于第三位。结直肠癌的治疗方法主要有外科治疗、化疗、放疗、和辅助治疗，由于结直肠癌早期诊断率相对较低，多数患者发现时已处于中晚期，失去了施行根治性切除手术的机会，而临床主要治疗方案为直接采用化疗手段诱导细胞凋亡。对于晚期结直肠癌，多伴有远处转移，患者预后极差。5-氟尿嘧啶和卡培他滨、亚叶酸钙、奥沙利铂和伊立替康等氟尿嘧啶类化合物是结直肠癌化疗最常用的药物种类；自从Heidelberger于1957年首次报告5-Fu的抗肿瘤作用以来，它作为抗代谢类药物已广泛用于临床治疗各种癌症近50年，至今仍是治疗结直肠癌的主要药物。但化疗后患者往往会出现许多不良毒副反应，对于其远期生存率并无明显提高。而中医中药治疗的重要性越来越得到专家的认可，其在改善化疗后不良毒副反应、提高生存质量等方面具有独特的优势。
1.材料和方法
1.1材料
1.1.1细胞人结肠癌HT-29细胞，购自上海中乔新舟
1.1.2药物与试剂健脾养元菌汤粉中药总组分溶液配制：称取一定量的健脾养元菌汤粉中药总组分(实施例一制备)，用完全培养液溶解配制成实验需要的浓度，用0.22um的一次性过滤器过滤除菌，4℃保存备用。使用时，用预温的完全培养液将上述健脾养元菌汤粉中药总组分母液稀释至实验所需浓度。
1.2细胞培养
1.2.1细胞培养前的准备
(1)细胞培养所需物品需在超净工作台内紫外线照射30min以上。
(2)调整细胞培养箱的各项参数至所需要求。
(3)在进行实验之前，超净工作台、工作服和肿瘤细胞培养实验室内均需紫外线照射30min以上。
1.2.2细胞的复苏
将-80℃冰箱中保存的人结直肠癌细胞冻存管快速取出，用镊子夹住冻存管口，迅速放入37℃恒温水浴箱中，并不停的来回晃动使其快速解冻。融化后，擦拭干净，在超净工作台内用吸管轻轻吸入到装有8-10ml完全培养基的25cm细胞培养瓶中，移入37℃、5％CO2、相对饱和湿度为95％的孵育箱中静置培养，第二天换液，每天观察细胞的形态变化并及时记录细胞的生长状况。根据细胞状态及时进行实验处理。
1.2.3细胞的传代
每天观察癌细胞的生长状态，待细胞密度达到70-80％时进行消化传代。从二氧化碳培养箱中取出培养瓶，镜检观察后，置于超净工作台内，用酒精棉球擦拭瓶口及瓶身，打开瓶盖，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加500～800ul含0.25％EDTA的胰酶进行消化，拧紧瓶盖。倾斜晃动培养瓶，尽可能使胰酶覆盖整个瓶底，于培养箱内静置1-2min，随时观察消化情况。在倒置光学显微镜内见到大部分细胞脱落变圆时，加2～3ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散，制备成单细胞悬液后接种于2个培养瓶内，添加7～8ml完全培养基，消毒瓶口及瓶身，移入培养箱内继续培养，观察记录细胞的生长情况。
1.2.4细胞的冻存
选取生长状态良好，且处于对数生长期的细胞于冻存前一天更换培养液，按细胞传代的方法消化、收集细胞并离心去上清，加入配制好的含DMEM培养基70％、胎牛血清20％、DMSO 10％的细胞冻存液1ml吹匀吹散细胞，分装保存于2ml冻存管内，每管1ml细胞悬液，拧紧管盖，封口膜封口。做好冻存记录，清楚标记冻存细胞名称、冻存批次、冻存时间、冻存者的名字。最后放入-80℃冰箱内长期冻存。
1.3 CCK-8法检测细胞增殖、凋亡及IC50
制备单细胞悬液，并使用细胞计数板行细胞计数，适当稀释最终调整细胞悬液的浓度为6×104/ml；在96孔板中接种细胞悬液，每孔100μl，每组设6个平行孔，将培养板放置在培养箱中培养过夜(37℃、5％CO2)；24小时后向培养板中每孔分别加入不同浓度健脾养元菌汤粉中药总组分溶液，继续培养48h后进行CCK-8检测,向每孔加入10μl CCK-8溶液，注意不要将CCK-8溶液加入到孔壁上，同时要避免在孔中生成气泡；加入CCK-8溶液后置于培养箱中1h后用酶标仪测定在450nm处的吸光度，实验重复3次，取平均值。细胞的增殖抑制率＝(对照孔OD值—实验孔OD值)/(对照孔OD值—空白孔OD值)×100％。对照孔中有肿瘤细胞和CCK-8溶液不给药，空白孔中只有培养基和CCK-8溶液，实验孔中有细肿瘤细胞哦、CCK-8溶液、药物溶液。
2.结果与讨论
2.1对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响经健脾养元菌汤粉中药总组分处理48h后，HT-29细胞的生长明显受到抑制，见表18。
表18不同浓度健脾养元菌汤粉中药总组分对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响
Figure BDA0001773504560000231
注：中药给药组为中药复方提取物给药组，空白对照组为培养液中有肿瘤细胞不给药组，阳性对照组为给化疗药5-fu组。
通过CCK-8法观察到健脾养元菌汤粉中药总组分对人结直肠癌细胞生长増殖有一定的抑制作用，实验结果显示健脾养元菌汤粉中药总组分抑制人结直肠癌细胞生长增殖的作用随着药物浓度的増高，其抑制作用越显著，其作用效应呈一定的量-效关系。
健脾养元菌汤粉中药总组分由人参、茯苓、山药、枸杞子、桑椹、砂仁、玫瑰花这7味药食同源类药物组成。方中人参大补元气、补脾养胃，茯苓利水渗湿、健脾安神，山药益气养阴、补脾肺肾，枸杞子和桑椹补益肝肾、滋阴生津，再佐以砂仁化湿行气、温中止呕，玫瑰花疏肝解郁、活血行气，全方共奏健脾益肾、调补气血之效。符合防治结直肠癌的中医药理论。
综上所述，本研究证实健脾养元菌汤粉中药总组分可以抑制人结肠癌细胞HT-29的生长，这将有助于我们更深入认识健脾养元菌汤粉的功效，为健脾养元菌汤粉的抗肿瘤机制研究打下了基础，也为临床进一步的研究提供了实验依据。

Claims (3)

1.一种组合物在制备抑制人结肠癌药物中的应用，其特征在于，该组合物由以下原料制成：人参1-7份、茯苓2-6份、山药2-7份、枸杞2-6份、桑葚2-6份、玫瑰花1-3份、灰树花4-16份和香菇3-15份；
所述组合物由粉末A和粉末B按1 : 1-2的比例混合；
粉末A的制备方法包括以下步骤：
（1）取人参、茯苓、山药、枸杞、桑葚，加8-12倍水、浸泡1-3小时，按提取温度70-100℃，提取时间1-2h，进行第一次提取，150-300目过滤，药渣中加入玫瑰花，加8~12倍水进行第二次提取，提取温度90-100℃，提取1小时，150~300目过滤；
（2）两次提取的提取液合并，50-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.15，浓缩完毕加入占浓缩液5%~10%的可溶性大豆多糖和5%~10%的麦芽糊精，搅拌溶解，60-100目过滤；
（3）过滤后的浓缩液在温度40~80℃下进行喷雾干燥，得粉末A；
粉末B的制备方法包括以下步骤：
（a）取灰树花、香菇，粉碎，加8-20倍水，浸泡1-2小时，按提取温度70-100℃提取30-90分钟，提取结束200目过滤；
（b）滤液50-70℃减压浓缩至相对密度1.03-1.12，浓缩完毕加入占浓缩液质量1-10%的可溶性大豆多糖和1-10%的麦芽糊精，搅拌溶解60-100目过滤，滤液进行喷雾干燥，得粉末B；
喷雾干燥的条件为：保持浓缩液的温度40~80℃，进行喷雾干燥，进风温度80~150℃，蠕动泵速度10~30RPM，出风温度60~120℃，风机20~40m3/min，压力0.2~0.4MPa；
重复步骤（a）的提取条件1-3次，将提取液合并。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该组合物由以下原料制成：人参2份、茯苓5份、山药5份、枸杞5份、桑葚5份、玫瑰花2份，灰树花7份，香菇3.5份。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述组合物为粉末状。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110679921A (zh) * 2019-09-10 2020-01-14 江苏康缘药业股份有限公司 一种增强免疫力的组合物、饮品及其制备方法
CN110917291A (zh) * 2019-12-12 2020-03-27 江苏康缘药业股份有限公司 一种具有提高免疫力功能的组合物及其制备方法和应用
CN113514294B (zh) * 2021-04-22 2024-06-07 济南海关技术中心 一种鸡蛋中苏丹红标准样品及其制备方法
CN114058656B (zh) * 2021-11-13 2024-02-27 吉林省农业科学院 一种利用玉米粉直接生产饲用低聚异麦芽糖的生产方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101002858A (zh) * 2006-12-19 2007-07-25 戴甲木 一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途
CN103860580A (zh) * 2014-03-27 2014-06-18 华夏先葆(北京)中药研究院有限公司 一种具有扶正固本、健脾和胃、增强免疫力功能的复合真菌多糖制剂
CN104288495A (zh) * 2014-09-23 2015-01-21 孟州世博生物科技有限公司 一种山药黄精胶囊及其制备方法
CN104872679A (zh) * 2015-06-19 2015-09-02 福和寿（武汉）健康管理有限公司 改善肠胃和增强免疫力功能的保健食品及其制备方法
CN107897913A (zh) * 2017-12-20 2018-04-13 大连深蓝肽科技研发有限公司 一种健脾益气美食

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102512615B (zh) * 2011-12-15 2014-08-06 天长市中医院 一种用于癌症恢复期的中药组合物
CN104474429B (zh) * 2014-12-30 2017-12-01 兰州古驰生物科技有限公司 一种具有改善记忆力减退功能的中药制剂

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101002858A (zh) * 2006-12-19 2007-07-25 戴甲木 一种具有增强免疫功效的组合物及其制备方法和其用途
CN103860580A (zh) * 2014-03-27 2014-06-18 华夏先葆(北京)中药研究院有限公司 一种具有扶正固本、健脾和胃、增强免疫力功能的复合真菌多糖制剂
CN104288495A (zh) * 2014-09-23 2015-01-21 孟州世博生物科技有限公司 一种山药黄精胶囊及其制备方法
CN104872679A (zh) * 2015-06-19 2015-09-02 福和寿（武汉）健康管理有限公司 改善肠胃和增强免疫力功能的保健食品及其制备方法
CN107897913A (zh) * 2017-12-20 2018-04-13 大连深蓝肽科技研发有限公司 一种健脾益气美食

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