CN114732784B - 一种补气温阳通便口服液及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药材开发技术领域,具体涉及一种补气温阳通便口服液及其制备工艺。所述补气温阳通便口服液以补气温阳通便组合物为原料,采用菌种发酵制得;重量份计,补气温阳通便组合物的组成为黄芪4份,山药4份,当归4份,玉竹4份,酒肉苁蓉4份,炒决明子5份,柏子仁5份,火麻仁5份。采用本发明获得的发酵口服液可以提高患者顺应性、感官性状较优,方便患者长期使用,达到提高养生保健防治未病的效果,对中药资源的开发及提高经济价值具有中药的实践意义。
Description
技术领域
本发明属于中药材开发技术领域,具体涉及一种补气温阳通便口服液及其制备工艺。
背景技术
功能性便秘(functional constipation,FC)是一种非器质性疾病或非药物因素导致的便秘,临床表现为排便次数减少、排便费力、排便不尽感、粪便干结等。我国成年人便秘的发病率为4%~6%,60岁以上人群慢性便秘患病率可高达22%,随着年龄增加患病率越来越高。长期便秘不仅影响人们生活质量,还会增加心脑血管疾病的发病率,严重影响身心健康,患者易焦躁不安、心烦易怒、失眠等。治疗功能性便秘的西药主要以刺激性泻药为主,若长期服用可能会出现不良反应,导致病情加重,停药后会复发,在药物安全性及长期疗效方面令人不满意。中医中药强调四诊合参、整体辨证,注重调整人体气血津液平衡、脏腑阴阳,治疗慢性便秘历史久远,在临床应用中取得了一定的效果。中医药治疗便秘的系统评价和Meta分析结果提示,单纯使用中药汤剂比单纯使用西药治疗便秘更有效。但是目前中药汤剂用量大、携带不方便、不能久贮、生物利用度低、顺应性、感官性状较差,无法商品化生产,且现代高压力、快节奏的生活方式使得人们更需要快捷、方便的食疗方式,对于高频发的便秘人群也急需这样的食药同源食品。因此,有必要开发一种顺应性、感官性状较优的能预防或治疗便秘的发酵饮品,并不会对人体造成过度刺激影响的绿色健康饮品显得意义十分重大,对中药资源的开发及提高经济价值具有中药的实践意义。
发明内容
针对上述问题,本发明提出了一种补气温阳通便口服液及其制备工艺,采用本发明获得的发酵饮品可以提高患者顺应性、感官性状较优,方便患者长期使用,达到提高养生保健防治未病的效果,对中药资源的开发及提高经济价值具有重要的实践意义。
本发明所述的一种补气温阳通便口服液,所述补气温阳通便口服液以补气温阳通便组合物为原料,采用菌种发酵制得;以重量份计,补气温阳通便组合物的原料组成为黄芪4份,山药4份,当归4份,玉竹4份,酒肉苁蓉4份,炒决明子5份,柏子仁5份,火麻仁5份。
所述的菌种为蛹虫草菌。
本发明中,方中黄芪、山药,补益脾肺之气;当归、玉竹,养血滋阴;酒肉苁蓉,可补肾阳益精血,润肠通便;炒决明子、柏子仁、火麻仁,能润肠通便,兼平肝降压,养心安神。如此心肝脾肾各安其好,对防治便秘有良好疗效。
所述一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其具体步骤为:
(1)按比例分别称取干燥、粉碎的补气温阳通便组合物原料粉末,加入蒸馏水,基础碳源,pH自然,灭菌,冷却,得发酵基质;向发酵基质中接种菌种,有氧发酵,得发酵液。
(2)将发酵液离心,将上清液倒出,得发酵上清液;
(3)将发酵上清液中加入澄清剂处理,得纯化液;
(4)将纯化液中加入矫味剂和防腐剂,搅拌均匀,静置,检查,过滤,灌装,灭菌,得成品。
步骤(1)中,以质量比计,补气温阳通便组合物原料粉末:蒸馏水=1:10。
步骤(1)中,菌种与发酵基质的体积质量比为1mL:10g。
步骤(1)中,有氧发酵时温度为25℃,转速为130r·min-1。
步骤(2)中,发酵液离心时速度为4000r·min-1,时间15min。
步骤(2)中,所述澄清剂加入量为1.6g·L-1,即每1升发酵上清液中加入1.6g澄清剂;搅拌速率为200r·min-1,絮凝温度为60℃,体系pH为5.0。
所述澄清剂为壳聚糖;所述矫味剂为甜菊糖苷,所述防腐剂为山梨酸钾。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明采用微生物有氧发酵,将原料经过特定的代谢途径转化为更易于被人体吸收、利用的产物,操作简单,发酵周期短,发酵效率高;
(2)发酵中药的药效是普通水提法中药的1.5~10倍,有时少量的药物就能起到显著的疗效,同时克服了中药汤剂用量大、携带不方便、不能久贮、无法商品化生产等缺点;
(3)发酵能明显提高补气温阳通便组合物中活性成分的含量及抗氧化活性的能力,具有更易吸收,生物利用度高,奏效快等优点,可以使该补气温阳通便方更好的发挥作用。
附图说明
图1为本发明所述整体工艺流程图;
图2为蛹虫草菌发酵补气温阳通便方主要活性成分色谱图,其中A松果菊苷;B阿魏酸;C毛蕊花糖苷。
具体实施方式
实施例1
一种补气温阳通便口服液,以补气温阳通便组合物为原料,采用菌种发酵制得;重量份计,补气温阳通便组合物的组成为黄芪4份,山药4份,当归4份,玉竹4份,酒肉苁蓉4份,炒决明子5份,柏子仁5份,火麻仁5份。
所述的菌种为蛹虫草菌。
所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其具体步骤为:
(1)按比例分别称取经干燥、粉碎的补气温阳通便组合物原料粉末共105g(过60目筛),置于2000mL锥形瓶中,按1:10(M·M-1)的比例加入蒸馏水,pH自然,不进行调糖处理,于121℃高压蒸汽灭菌30min,待其冷却至室温后,得发酵基质;向发酵基质中接种菌种,菌种与发酵基质的体积质量比为1mL:10g,于25℃、130r·min-1摇床恒温振荡培养,得发酵液;
(2)发酵液以4000r·min-1的速度离心15min,将上清液倒出,得发酵上清液;
(3)将发酵上清液中加入壳聚糖纯化处理,得纯化液;所述壳聚糖添加量1.6g·L-1、处理温度60℃、调节pH值5.0、处理时间为0.5h;
(4)将纯化液中加入矫味剂和防腐剂,搅拌均匀,静置,检查,过滤,灌装,灭菌,得成品。
实施例2
1发酵液的制备
按比例分别称取经干燥、粉碎的补气温阳通便组合物原料粉末共105g(过60目筛),置于2000mL锥形瓶中,按1:10(M·M-1)的比例加入蒸馏水,pH自然,不调糖处理,于121℃高压蒸汽灭菌30min,待其冷却至室温后,得发酵基质;向发酵基质中接种菌种,菌种与发酵基质的体积质量比为1mL:10g,于25℃、130r·min-1摇床恒温振荡培养。发酵流程图见图1。
发酵液以4000r·min-1的速度离心15min,将上清液倒出,得发酵上清液。
2未发酵样品的制备
取补气温阳通便方粉末35g置于1000mL圆底烧瓶中,加水280mL,加热回流提取两次,每次1h,合并两次提取液,水浴锅60℃蒸发至干,然后加蒸馏水至100mL,于4℃冰箱内储存。
3松果菊苷、阿魏酸和毛蕊花糖苷含量测定
3.1色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);检测器:紫外检测器;流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液;流速为1mL·min-1;柱温:30℃;进样量5μL;检测波长:307nm。
表1二元线性洗脱程序
3.2对照品溶液的配制
分别精密称取松果菊苷、阿魏酸和毛蕊花糖苷对照品适量制成浓度分别为0.1040mg·mL-1、0.0378mg·mL-1、0.0270mg·mL-1混合对照品溶液,于4℃保存备用。
3.3含量测定
取“1”和“2”项中的供试品溶液,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,进样。分析蛹虫草发酵前后补气温阳通便方中主要活性成分含量。
3.4线性关系考察
分别精密吸取“3.2”项下的混合对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4mL,置于5mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得系列对照品溶液;在“3.1”项色谱条件下进行测定。以峰面积(A)为纵坐标,浓度(μg·mL-1)为横坐标,计算回归方程,结果见表2。
表2线性关系
4总酚含量测定
配制不同浓度的没食子酸对照品溶液,各加入1mL福林酚试剂,1.5mL15%Na2CO3溶液,室温下避光反应30min,在760nm波长处测定其吸光度,根据没食子酸的不同浓度与吸光度值的关系,绘制标准曲线。建立回归方程Y=0.0768X+0.0066,R2=0.9994。相同方法检测供试品溶液吸光度,利用回归方程计算总酚含量。
5总黄酮含量测定
配置不同浓度的芦丁对照品溶液,分别加入0.15mL 5%NaNO2溶液,反应6min,分别加入0.15mL 10%Al(NO3)3溶液,反应6min,再分别加入2mL 4%NaOH溶液,反应15min,用70%乙醇定容至5mL,以蒸馏水为空白,在510nm波长处测定其吸光度,根据芦丁的不同浓度-吸光度值的关系,绘制标准曲线。建立回归方程Y=2.6237X+0.0012,R2=0.9994。相同方法测定供试品溶液吸光度,利用回归方程计算总黄酮含量。
6抗氧化活性测定
6.1DPPH自由基清除活性
取0.2mL样品和2mL 0.2mmol·L-1的DPPH无水乙醇溶液,混合均匀,室温下暗处理30min,于517nm波长处测定其吸光度Ai,用无水乙醇代替DPPH无水乙醇溶液,测吸光度Aj,用蒸馏水代替样品测吸光度Ac,使用VC做对照,根据VC的不同浓度-清除率的关系,绘制标准曲线,并按照下列公式计算DPPH自由基清除率:
建立回归方程为Y=7.776X+0.0029,R2=0.9991。相同方法测定供试品溶液吸光度,利用回归方程计算供试品溶液DPPH自由基清除率。
6.2羟自由基清除活性
取6mmol·L-1FeSO4溶液和6mmol·L-1H2O2各0.3mL于试管中充分混合10min,加入样品1mL反应10min,加入0.3mL 6mmol·L-1的水杨酸避光温育30min,于510nm波长处测定其吸光度A1,用蒸馏水代替水杨酸溶液测吸光度A2,用蒸馏水代替样品测吸光度A0,使用VC做对照,根据VC的不同浓度-清除率的关系,绘制标准曲线,并根据下列公式计算羟自由基清除率:
建立回归方程Y=0.0297X+0.5589,R2=0.9992。相同方法测定供试品溶液吸光度,利用回归方程计算供试品溶液羟自由基清除率。
6.3总抗氧化能力(FRAP)
取0.3mL不同浓度的FeSO4·7H2O对照品溶液,加入3mL FRAP溶液,充分混合,反应10min,于593nm波长处测定其吸光度,根据FeSO4的不同浓度-吸光度值的关系,绘制标准曲线。根据FeSO4的不同浓度-吸光度值的关系,建立回归方程Y=1.8008X+0.014,R2=0.9992。相同方法下测定供试品溶液吸光度,利用回归方程计算供试品溶液FRAP值。样品的FRAP值与提取的每克干样品中的FeSO4·7H2O mmol数相等。
7数据统计分析
试验结果以平均值±标准偏差(n=3)表示。使用SPSS 22.0统计软件独立样本T检验分析量子样本数据之间的显著性,单因素方差分析(ANOVA,one-way analysis ofvariance)多组样本数据之间的显著性,p<0.05表示存在显著性差异。
8结果与分析
由表3可以看出蛹虫草发酵补气温阳通便方后与未发酵相比主要活性成分含量发生了较大变化(p<0.05),除阿魏酸含量有少量降低以外,其余有效成分含量及抗氧化活性均有不同程度提高。
表3发酵液有效成分含量测定结果
实施例3补气温阳通便口服液澄清工艺研究
在单因素及正交实验的基础上,以补气温阳通便口服液透光率及干膏率综合得分为响应值,以壳聚糖添加量(A)、搅拌速度(B)、温度(C)和pH(D)作为考察因素,以1、2、3分别代表低、中、高三个水平,利用正交实验对其澄清条件进行优化,因素水平见表4。
表4正交实验因素水平表
正交实验设计方案及综合得分见表5,回归方程的方差分析见表6。
表5正交实验方案及结果
表6方差分析结果
注:“*”表示显著(P<0.05)
由表5直观分析可知,因素A(澄清剂加入量)的极差R最大,因此为澄清工艺的主要影响因素。各因素对发酵液澄清效果的影响次序依次为A(澄清剂加入量)、D(pH)、B(搅拌速率)、C(絮凝温度),各因素不同水平程度依次为A1>A2>A3、B3>B1>B2、C3>C1>C2、D1>D3>D2,结果表明发酵液最优澄清工艺为A1B3C3D1,即澄清剂加入量为1.6g·L-1,搅拌速率为200r·min-1,絮凝温度为60℃,体系pH为5.0。表6方差分析表明,A因素(澄清剂加入量)对发酵液的澄清效果有显著影响。因此最终确定澄清工艺为壳聚糖加入量为1.6g·L-1,搅拌速率为200r·min-1,絮凝温度为60℃,体系pH为5.0。
实施例4补气温阳通便口服液矫味剂和防腐剂的筛选
按照蛹虫草发酵工艺流程(料液比为1:10、接种量10%,25℃、130r·min-1有氧发酵5d)对补气温阳通便方进行发酵,发酵液4000r·min-1离心10min,取上清液,按最优澄清工艺(即壳聚糖加入量为1.6g·L-1,搅拌速率为200r·min-1,絮凝温度为60℃,体系pH为5.0)进行纯化、浓缩。
取发酵补气温阳通便口服液,添加矫味剂和防腐剂进行调配。由10人组成感官评价小组,确保评价人员2小时内未食用有明显味道的食品,随机给予品尝不同调配方法的补气温阳通便口服液(样品采用一次性透明杯盛装,杯体无任何标记),并通过感官评分细则(表7)对样品口感进行评价并赋分,记录并统计,确定产品调配方法。
表7感官评分细则
最终确定甜菊糖苷和山梨酸钾添加量分别为0.2g·kg-1和0.3g·kg-1。
实施例5补气温阳通便口服液质量标准研究及稳定性研究
按最佳发酵工艺及最佳制剂工艺制备发酵补气温阳通便口服液,并对其进行感官评价、性状检查、pH值检查、相对密度检查、装量差异检查、微生物限度检查、薄层鉴别(黄芪、当归)、主要活性成分含量测定(松果菊苷、阿魏酸、毛蕊花糖苷、总酚、总黄酮)、营养成分含量测定(脂肪、蛋白质、水分、灰分、膳食纤维、碳水化合物、能量、钠离子含量)、光照影响试验、温度影响试验和加速试验。
最终确定发酵补气温阳通便口服液为红褐色液体,有光泽,味微酸甜,有发酵香气,口感柔和;该液体制剂为澄清液体,贮存期间不得有发霉、酸败或其他变质现象,允许有少量摇之即散的沉淀;pH值在4.0~4.5之间;相对密度应介于1.045~1.077之间(20℃);薄层鉴别时应出现对应斑点;每1mL含总黄酮以芦丁计,介于2.40mg~2.46mg之间;本品每1mL含总酚以没食子酸计0.87mg;本品每1mL含松果菊苷及毛蕊花糖苷总量介于0.235mg~0.303mg之间;本品每1mL含阿魏酸含量为0.004mg。
营养成分均在合理范围内;可日光常温保存,保质期初步定为2年。
Claims (8)
1.一种补气温阳通便口服液,其特征在于,所述补气温阳通便口服液以补气温阳通便组合物为原料,采用菌种发酵制得;以重量份计,补气温阳通便的原料组成为黄芪4份,山药4份,当归4份,玉竹4份,酒肉苁蓉4份,炒决明子5份,柏子仁5份,火麻仁5份;
所述的菌种为蛹虫草菌。
2.权利要求1所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,其具体步骤为:
(1)按比例分别称取干燥、粉碎的补气温阳通便组合物原料粉末,加入蒸馏水,pH自然,灭菌,冷却,得发酵基质;向发酵基质中接种菌种,有氧发酵,得发酵液;
(2)将发酵液离心,上清液倒出,得发酵上清液;
(3)将发酵上清液中加入澄清剂处理,得纯化液;
(4)将纯化液中加入矫味剂和防腐剂,搅拌均匀,静置,检查,过滤,灌装,灭菌,得成品。
3.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,步骤(1)中,以质量比计,补气温阳通便组合物原料粉末:蒸馏水=1:10。
4.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,步骤(1)中,菌种与发酵基质的体积质量比为1 mL:10 g。
5.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,步骤(2)中,发酵液离心时速度为4000 r·min-1,时间15 min。
6.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,步骤(3)中,所述澄清剂加入量为1.6 g·L-1,搅拌速率为200 r·min-1,絮凝温度为60 ℃,体系pH=5.0。
7.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,所述澄清剂为壳聚糖;所述矫味剂为甜菊糖苷,所述防腐剂为山梨酸钾。
8.根据权利要求2所述的一种补气温阳通便口服液的制备工艺,其特征在于,还包括发酵液中有效成分的检测,所述有效成分为松果菊苷、阿魏酸和毛蕊花糖苷;具体色谱条件为:色谱柱:Diamonsil C18色谱柱,4.6 mm×250 mm,5 μm;检测器:紫外检测器;流动相为甲醇- 0.2 %磷酸水溶液;流速为1 mL·min-1;柱温:30 ℃;进样量5 μL;检测波长:307 nm。
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