CN101219157B - 一种降低血糖产品的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种降低血糖产品的制备方法；该方法是以锁阳为原料，通过粉碎、回流、抽滤、离心、酶解、萃取、减压浓缩、调节pH值、透析袋透析和离心等步骤，制备出一种主要用于治疗链脲佐菌素(STZ)造成的化学性糖尿病，并对糖尿病引起的肝脏、肾脏损伤具有明显修复作用的治疗药物产品。本发明充分利用甘肃、青海、内蒙古自治区境内遍布的寄生于蒺藜科白刺属植物的锁阳，且蕴藏量十分充足这一良好的资源优势，开发本产品，市场前景十分看好，经济效益广阔。

Description

一种降低血糖产品的制备方法

技术领域

本发明涉及一种降低血糖产品的制备方法。

背景技术

糖尿病是一种与遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合症，它是一种全球范围内的严重危害人类健康的常见疾病。近年来，糖尿病发病率较高，我国一般人群发病率为1-2％，40岁以上者为3-4％，老年人发病率更较高。西方工业国家的发病率为2-4％。早期糖尿病没有明显的临床症状，不易觉察，在我国与西方工业国家都有大量的糖尿病人未能获得及时诊断和治疗，再加上糖尿病的并发症很多，目前对糖尿病缺乏有效的预防措施，如任其发展，将成为不可逆性的改变，可导致患者病残或死亡。因此，提高对糖尿病的认识，重视早期诊断，有效预防和治疗并发病，遏制全球糖尿病患病率及死亡率上升趋势，已成为当今世界医学界亟待解决和攻克的重点课题之一。

近十几年来，经过世人的不懈努力，研究开发了许多降低血糖的药物，对治疗糖尿病起到一定的作用。但是从目前国内常用降糖药来看，多是以合成药物为主的制剂，对肝肾有一定的损伤，不易为患者接受。近来研究发现不少中草药具有良好的降低血糖的作用，对治疗糖尿病很有帮助。中国专利CN86104075公开了一种降血糖药物--噻唑烷二酮类的制备方法，它们在治疗高血糖动物中的应用方法以及含有它们的药物配方；美国专利US 6855345公开了一种海巴戟天提取物治疗糖尿病的方法；美国专利(申请号：60/316,760)公开了一种具有治疗血糖病作用的龙蒿提取物成分；中国专利CN1137411(申请号为95105954.8)公开了一种由人参、蛤蚧等12种中药组成的康复胰岛降血糖的中药“康复胰岛降糖丹”及制作方法；中国专利CN1401318(申请号为02138749.4)公开了从中药鬼箭羽中提取、分离具有降血糖作用的有效部位及有效成分，包含萜类、酚酸类等，具有降糖尿病小鼠血糖作用，同时影响丙二醛及超氧化物歧化酶，能够减轻或抑制糖尿病并发症的发生和发展。在上述众多的专利文献中，对产品降糖作用机理的研究，往往只对模型动物的血糖水平和抗氧化系统进行了研究，很少涉及到产品的毒副作用，缺乏对肝脏、肾脏等脏器中反应器官受损程度的酶活性的研究。本发明首先对反映降糖作用的血糖、肝糖元和血清胰岛素水平进行了研究，还对反映肝脏和肾脏损伤的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血清尿素氮和血清肌酐水平进行了研究。

因此，发明制备一种主要用于治疗链脲佐菌素(STZ)造成的化学性糖尿病，并对糖尿病引起的肝脏、肾脏损伤具有明显的修复的治疗剂天然产品是本发明的目的所在。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种降低血糖产品的制备方法；该方法是以锁阳为原料，制备出一种主要用于治疗链脲佐菌素(STZ)造成的化学性糖尿病，并对糖尿病引起的肝脏、肾脏损伤具有明显修复作用的天然产品。

为解决上述技术问题，本发明一种降低血糖产品的制备方法，包括如下步骤：

1)称取锁阳干品100g，粉碎；加入450～550ml甲醇或石油醚，在70～80℃的条件下回流1.5～2.5小时；在0.07～0.09MPa的条件下抽滤，以水为溶剂，抽取60～120分钟，其中锁阳原料与水的重量比为1∶8～20；然后往滤液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75～80％，室温下静置20～30小时，然后在3500～4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的条件下干燥11～13小时，得物质A；

2)称取50g物质A，用80～100倍重量的水溶解，加热含有物质A的水溶液到60～70℃，然后加入5～7u/100ml木瓜蛋白酶进行酶解1.5～2.5小时，再用重量比为1∶2～4的氯仿和正丁醇混合液萃取3～6次，收集上层水溶液，在45～50℃、0.06-0.08Mpa下减压浓缩至原体积的1/9～1/11时，得物质B；

3)往物质B中滴加浓氨水，调节pH＝8～9之间，滴加浓度为20～30％的H₂O₂水溶液，直至溶液由褐色变为淡黄色；在40～50℃条件下振荡1.5～2.5小时，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析36～48小时，之后向透析袋内液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75～80％，静置10～14小时；在3500～4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的条件下干燥11～13小时，得降低血糖产品。

通过本发明的方法制得的降低血糖产品的物化特性如下：

颜色：白色粉末状固体

粘度：13.7mPas(浓度1％)

pH值：6.8

紫外线吸收光谱，纯降糖天然产物经过紫外扫描，在200nm处有强吸收峰，在260nm、280nm均无核酸和蛋白质的特征吸收峰，说明不含有核酸和蛋白质等杂质；茚三酮反应、碘—碘化钾反应和双缩脲反应均为阴性，说明无蛋白质和淀粉；红外光谱显示在3425cm^-1处有一特征峰，O-H的伸缩振动在3200-3600cm^-1处出现一宽峰；在2931cm^-1处有一特征峰，是分子中C-H键的变角振动引起的，这些均为多糖的吸收峰；斐林试剂反应和硫酸—苯酚反应成阳性，说明降糖天然产物为还原性多糖。利用GC峰面积和内标校正因子计算单糖组成为：半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和核糖。

本发明的特点和产生的有益效果是：

本发明以锁阳为原料，锁阳又名不老草，属锁阳科锁阳属多年生肉质寄生草本植物，无叶绿素，生于干燥多沙地带，主产于我国西北地区。锁阳的作用早在明代《本草纲目》就有记述：补肾、益精血、润燥养筋治萎弱。临床主治尿频、便秘、阳痿早泄、腰膝酸软、失眠脱发，对于中老年尿频和早泄有着独特的效果，经现代科学研究表明：锁阳的化学成份主要含有多糖、锁阳萜、花色苷、谷甾醇熊果酸，胡萝卜素及锌、锰、铜等多种微量元素，能增加血清糖皮质激素的浓度，有兴奋神经，增强体液免疫功能的作用。

原料锁阳经过提取、纯化、分离、脱蛋白、脱色等步骤，制备出的天然的降低血糖制剂，能使肝糖原水平显著升高，改善血液高凝状态，疏通微循环、增强机体免疫，并能减少糖尿病造成的对肝脏、肾脏的损伤即降低血液中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮和血清肌酐的含量，以及抑制糖尿病导致体重减轻。

本发明是以天然生物多糖制成，与其它降糖药相比具有生产工艺简单，使用方便，无毒副作用，降糖效果好等优点，对STZ诱导的糖尿病等都有较好的疗效。经对大鼠药理实验表明：30天服用该制剂使高血糖动物的血糖降低26.7％，谷丙转氨酶(GPT)降低25.2％、谷草转氨酶(GOT)降低28.1％、尿素氮含量降低54.9％。

本发明充分利用甘肃、青海、内蒙古自治区境内遍布的寄生于蒺藜科白刺属植物的锁阳，且蕴藏量十分充足这一良好的资源优势，开发本产品，市场前景十分看好，经济效益广阔。

本发明制备的产品使用效果动物试验如下：

降糖作用：实验用昆明种小鼠56只，雌雄各半，共分7组，每组8只，分别如下：正常对照组(Group 1)、模型组(Group 2)、多糖对照组(Group 3，250mg/(kgb.w.))、多糖低剂量组(Group 4，100mg/(kgb.w.))、多糖中剂量组(Group5，150mg/(kgb.w.))、多糖高剂量组(Group 6，200mg/(kgb.w.))、消渴丸阳性对照组(Group 7，0.84g/(kgb.w.))，正常对照组灌胃生理盐水。试验时间为3周，每天测饮水量和摄食量，2天称一次体重，第2、4周取空腹尾静脉血，测血糖浓度。链脲佐菌素(STZ)引起的化学型糖尿病大鼠服用本品后血液中血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮均降低，结果如下表1：

表1

体重变化：每组体重平均值见(表2)，对照组体重增加，高血糖组体重明显降低，降低率为8.80％，而喂纯降糖天然产物组的糖尿病大鼠个体体重减轻，降低率为0.77％，说明其对高血糖个体体重的减轻有抑制作用。

表2实验各组大鼠体重(g/只)

天数	1	30天	生长趋势
				高血糖组	250.1	228.1	-8.80％

高血糖+锁阳多糖	273.3	252.5	-0.77％
				对照组	261.2	291	+11.5％

服用本品后使链脲佐菌素引起的化学型糖尿病动物的血糖降低，胰岛素水平和肝糖元升高，肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶降低，血清尿素氮和肌酐含量降低到正常水平，均表明降糖效果较好。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明

图1为本发明的方法制备出的降血糖产品对糖尿病小鼠血糖的影响，图中，

^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001与模型组对比

^◆P＜0.05，^◆◆P＜0.01，^◆◆◆P＜0.001与阳性对照组对比；

图2为本发明的方法制备出的降血糖产品对肝糖元的影响；

图3为本发明的方法制备出的降血糖产品对血清的胰岛素影响；

图4为本发明的方法制备出的降血糖产品对肝脏谷丙转氨酶(GOT)和谷草转氨酶(GPT)的影响；

图5为本发明的方法制备出的降血糖产品对尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的影响；

图6为本发明的方法制备出的降血糖产品的紫外扫描图；

图7为本发明的方法制备出的降血糖产品的红外扫描图。

具体实施方式

实施例1

本发明一种降低血糖产品的制备方法，包括如下步骤：

1)称取锁阳干品100g，粉碎；加入450ml甲醇或石油醚，在70℃的条件下回流1.5小时；在0.07MPa的条件下抽滤，以水为溶剂，抽取60分钟，其中锁阳原料与水的重量比为1∶8；然后往滤液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75％，室温下静置20小时，然后在3500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40℃，0.06MPa下的条件下干燥11小时，得物质A；

2)称取50g物质A，用80倍重量的水溶解，加热含有物质A的水溶液到60℃，然后加入5u/100ml木瓜蛋白酶进行酶解1.5小时，再用重量比为1∶2的氯仿和正丁醇混合液萃取3次，收集上层水溶液，在45℃、0.06Mpa下减压浓缩至原体积的1/9，得物质B；

3)往物质B中滴加浓氨水，调节pH＝8，滴加浓度为20％的H₂O₂水溶液，直至溶液由褐色变为淡黄色；在40℃条件下振荡1.5小时，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析36小时，之后向透析袋内液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75％，静置10小时；在3500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40℃，0.06MPa下的条件下干燥11小时，得降低血糖产品。

实施例2

本发明一种降低血糖产品的制备方法，包括如下步骤：

1)称取锁阳干品100g，粉碎；加入550ml甲醇或石油醚，在80℃的条件下回流2.5小时；在0.09MPa的条件下抽滤，以水为溶剂，抽取120分钟，其中锁阳原料与水的重量比为1∶20；然后往滤液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的80％，室温下静置30小时，然后在4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在50℃，0.08MPa下的条件下干燥13小时，得物质A；

2)称取50g物质A，用100倍重量的水溶解，加热含有物质A的水溶液到70℃，然后加入7u/100ml木瓜蛋白酶进行酶解2.5小时，再用重量比为1∶4的氯仿和正丁醇混合液萃取6次，收集上层水溶液，在50℃、0.08Mpa下减压浓缩至原体积的1/11，得物质B；

3)往物质B中滴加浓氨水，调节pH＝9，滴加浓度为30％的H₂O₂水溶液，直至溶液由褐色变为淡黄色；在50℃条件下振荡2.5小时，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析48小时，之后向透析袋内液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75～80％，静置14小时；在4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在50℃，0.08MPa下的条件下干燥13小时，得降低血糖产品。

实施例3

本发明一种降低血糖产品的制备方法，包括如下步骤：

1)称取锁阳干品100g，粉碎；加入500ml甲醇或石油醚，在75℃的条件下回流2小时；在0.08MPa的条件下抽滤，以水为溶剂，抽取90分钟，其中锁阳原料与水的重量比为1∶15；然后往滤液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的78％，室温下静置25小时，然后在4000转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在45℃，0.07MPa下的条件下干燥12小时，得物质A；

2)称取50g物质A，用90倍重量的水溶解，加热含有物质A的水溶液到65℃，然后加入6u/100ml木瓜蛋白酶进行酶解2小时，再用重量比为1∶3的氯仿和正丁醇混合液萃取4次，收集上层水溶液，在48℃、0.07Mpa下减压浓缩至原体积的1/10时，得物质B；

3)往物质B中滴加浓氨水，调节pH＝9，滴加浓度为25％的H₂O₂水溶液，直至溶液由褐色变为淡黄色；在45℃条件下振荡2小时，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析42小时，之后向透析袋内液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的78％，静置12小时；在4000转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在45℃，0.07MPa下的条件下干燥12小时，得降低血糖产品。

Claims (1)

1.一种降低血糖产品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)称取锁阳干品100g，粉碎；加入450～550ml甲醇或石油醚，在70～80℃的条件下回流1.5～2.5小时；在0.07～0.09MPa的条件下抽滤，以水为溶剂，抽取60～120分钟，其中锁阳原料与水的重量比为1∶8～20；然后往滤液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75～80％，室温下静置20～30小时，然后在3500～4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的条件下干燥11～13小时，得物质A；

2)称取50g物质A，用80～100倍重量的水溶解，加热含有物质A的水溶液到60～70℃，然后加入5～7u/100ml木瓜蛋白酶进行酶解1.5～2.5小时，再用重量比为1∶2～4的氯仿和正丁醇混合液萃取3～6次，收集上层水溶液，在45～50℃、0.06-0.08Mpa下减压浓缩至原体积的1/9～1/11时，得物质B；

3)往物质B中滴加浓氨水，调节pH＝8～9之间，滴加浓度为20～30％的H₂O₂水溶液，直至溶液由褐色变为淡黄色；在40～50℃条件下振荡1.5～2.5小时，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析36～48小时，之后向透析袋内液中加入乙醇，使乙醇含量占总体积的75～80％，静置10～14小时；在3500～4500转/分钟的转速下离心分离，收集沉淀；将沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的条件下干燥11～13小时，得降低血糖产品。

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