CN100400048C - 锦灯笼多糖在制备治疗糖尿病药物和保健品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于制药领域中的应用，具体涉及锦灯笼果实多糖在制备治疗糖尿病药物和降血糖保健品中的应用。本发明通过对新鲜的或干燥的锦灯笼果加去离子水加热、过滤、浓缩、搅拌沉淀、离心，真空干燥等步骤提取总多糖的粗制品。再进一步加工成粗多糖A及多糖B，具有显著降血糖作用。纯化的锦灯笼果实多糖可用于治疗糖尿病药物，而其粗制品可用于糖尿病患者或高血糖亚健康人群的保健品。本发明提取工艺简便，成本低廉，材料来源广泛。锦灯笼适应性很强，适于大规模人工栽种，易于推广应用。

Description

锦灯笼多糖在制备治疗糖尿病药物和保健品中的应用
技术领域
本发明属于制药领域中的应用，具体涉及锦灯笼果实多糖在制备治疗糖尿病药物和降血糖保健品中的应用。
背景技术
随着社会进步和经济快速发展，糖尿病的发病率日益增高，而且中青年人两倍于老年人的速度加入糖尿病的“大军”。因此，与预防和治疗糖尿病相关的药物成为国际、国内研究的热点和发展趋势。
目前，我国的降糖市场以西药为主，约占整个市场份额的73.68％；中成药为辅，约占24.7％。占降糖类产品绝对优势份额的主要是化学类处方药，虽然效果较明显，但长期服药引起的耐药性、抗药性、肝肾损伤等副作用使糖尿病患者倍感痛苦。而植物成分，特别是中医常用的中药成分如植物多糖和皂苷等，不仅毒副作用小，而且很多药物同时具有降血脂、提高免疫力、调节内分泌等多种作用，对糖尿病并发症有预防及治疗作用。因而从药用植物中发掘疗效更好的抗糖尿病的天然药物和保健品具有重要的意义和广阔的市场前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种从锦灯笼果实中提取的有显著降血糖效果且无毒副作用的多糖药物或保健品。
本发明的具体提取步骤：
步骤1：新鲜的或干燥的锦灯笼果加5-10倍(V/V)去离子水加热沸腾2-3小时，过滤残渣；再用5-10倍(V/V)去离子水提取两次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的1/15左右，加入4-5倍乙醇搅拌沉淀，沉淀物经过离心，真空干燥，得到总多糖的粗制品。
步骤2：将粗多糖溶解在去离子水中，反复冻溶后离心，弃沉淀；将上清液中多糖配制成2％的水溶液，加乙醇使其终浓度为30％并调整pH至2.5，静止过夜，离心后弃沉淀；向上清液中继续加入乙醇溶液使其终浓度为70％，静止过夜，沉淀物经过离心，真空干燥，得到的粗多糖A可作为糖尿病患者或高血糖亚健康人群缓解以及预防糖尿病的保健品。
步骤3：将步骤2得到的粗多糖A通过Sephadex G-200柱层析，洗脱液为0.15M NaCl，洗脱液经硫酸苯酚法检测，取阳性部分合并，冷冻干燥得样品B。该样品经过HPLC检测，结果为单一对称峰，证明该多糖为纯品，该纯品可作为糖尿病患者的治疗药品。
本发明的优点：
1.本发明具体地阐明了锦灯笼果实多糖为降血糖的有效药用成分，是具有显著降血糖作用的天然药物或保健品。纯化的锦灯笼果实多糖可用于治疗糖尿病药物，而其粗制品可用于糖尿病患者或高血糖亚健康人群缓解以及预防糖尿病的保健品。而其他相关研究和发明均为极其粗糙的提取物，药效成分不明确，利用价值低。
2.提取工艺简便，成本低廉。
3.材料来源广泛。锦灯笼适应性很强，极易大规模人工栽种，一旦种植可多年生存下去，规模化的种植锦灯笼可以使种植农户脱贫致富。
具体实施方式：
步骤1：新鲜的或干燥的锦灯笼果1Kg加5-10倍(V/V)去离子水加热沸腾2-3小时，过滤残渣；再用5-10倍(V/V)去离子水提取两次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的1/15左右，加入4-5倍乙醇搅拌沉淀，沉淀物经过离心，真空干燥，得到总多糖的粗制品32g。
步骤2：将粗多糖溶解在去离子水中，反复冻溶后离心，弃沉淀；将上清液中多糖配制成2％的水溶液，加乙醇使其终浓度为30％并调整pH至2.5，静止过夜，离心后弃沉淀；向上清液中继续加入乙醇溶液使其终浓度为70％，静止过夜，沉淀物经过离心，真空干燥，得到的粗多糖A 25.6g可作为糖尿病患者或高血糖亚健康人群缓解以及预防糖尿病的保健品。
步骤3：将步骤2得到的粗多糖通过Sephadex G-200柱层析，洗脱液为0.15M NaCl，洗脱液经硫酸苯酚法检测，取阳性部分合并，透析后浓缩，冷冻干燥得样品B 6.9g。该样品经过HPLC检测，结果为单一对称峰，证明该多糖为纯品，该纯品可作为糖尿病患者的治疗药品。
有关其降血糖活性的药效实验：
1.对正常小鼠的降血糖作用和体重的影响
昆明小鼠每组10只，剂量A为50mg/kg，B为25mg/kg；连续灌胃7天后测定其空腹血糖。对照组连续灌胃7天生理盐水。
降血糖作用：
粗品A和纯品B对正常小鼠空腹血糖的影响如表1.和对照组相比，粗品A和纯品B具有明显降血糖作用(分别为p＜0.05)，B和A相比降血糖作用差异显著p＜0.05.
表1粗品A和纯品B对正常小鼠空腹血糖和体重的影响
  血糖(mmol/L)   降糖效果
  空白对照组   4.94±0.21
  粗品A   4.17±0.12   15.6％
  纯品B   3.92±0.13   20.6％
体重的变化：
由表2可见，和对照组相比，粗品A和纯品B对小鼠体重的变化影响不大，说明无毒副作用。
表2粗品A和纯品B对正常小鼠体重的影响
Figure C20051011914500051
2.对四氧嘧啶引起的高血糖大鼠的降血糖作用
Wistar大鼠四氧嘧啶致高血糖后，筛选高血糖大鼠每组10只，，连续灌胃7天后测定其空腹血糖。灌胃剂量A为50mg/kg，B为25mg/kg。
空白对照组(10只)连续灌胃7天生理盐水；高血糖对照组为四氧嘧啶致高血糖后连续灌胃7天生理盐水；高血糖+粗品A组为四氧嘧啶致高血糖后连续灌胃7天粗品A；高血糖+粗品B组为四氧嘧啶致高血糖后连续灌胃7天纯品。
降血糖作用：
由表3可以看出，与高血糖对照组相比，粗品A和纯品B对四氧嘧啶致高血糖大鼠具有明显降血糖作用(分别为p＜0.05，p＜0.01)。
表3粗品A和纯品B对四氧嘧啶引起的高血糖大鼠空腹血糖的影响
Figure C20051011914500061
对体重的影响：
由表4可以看出，对照组体重增加，高血糖组体重明显降低，降低率为7.0％；而灌胃粗品A和纯品B的糖尿病大鼠体重略减轻，降低率分别为2.0％和1.5％，说明其对高血糖大鼠体重的减轻有一定的抑制作用。
表4粗品A和纯品B对四氧嘧啶引起的高血糖大鼠体重的影响
Figure C20051011914500062
3毒性实验
以正常剂量的十倍(A为500mg/kg，B为250mg/kg)连续灌胃昆明小鼠7天后，无一小鼠死亡并未见任何毒副作用和异常，说明粗品A和纯品B无毒副作用。
HPLC、气相色谱、红外光谱及核磁共振等结果表明该多糖分子量为270kD，其单糖组分为：鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸，其摩尔比为：2.2∶2.7∶0.9∶0.6∶4∶2∶2.5，白色粉末。

Claims (1)

1.锦灯笼多糖制备治疗糖尿病药物及预防糖尿病的保健品的方法，其特征是具体提取步骤如下：
(1)新鲜的或干燥的锦灯笼果按体积比加5-10倍去离子水加热沸腾2-3小时，过滤残渣；按体积比再用5-10倍去离子水提取两次，合并滤液；将滤液浓缩至原体积的1/15左右，按体积比加入4-5倍乙醇搅拌沉淀，沉淀物经过离心，真空干燥，得到总多糖的粗制品；
(2)将粗多糖溶解在去离子水中，反复冻溶后离心，弃沉淀；将上清液中多糖配制成2％的水溶液，加乙醇使其终浓度为30％并调整pH至2.5，静止过夜，离心后弃沉淀；向上清液中继续加入乙醇溶液使其终浓度为70％，静止过夜，沉淀物经过离心，真空干燥，得到的粗多糖A；
(3)将步骤(2)得到的粗多糖A通过Sephadex G-200柱层析，洗脱液为0.15M NaCl，洗脱液经硫酸苯酚法检测，取阳性部分合并，冷冻干燥得样品B，该样品经过HPLC检测，结果为单一对称峰，证明该多糖为纯品。
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锦灯笼降血糖作用的实验研究. 王和平，徐美术，孙亮，宋旭波.中医药信息，第21卷第1期. 2004
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