CN101190280B - 梅树非果部分提取物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了梅树提取物在痛风中的应用，所述的用途可通过降低血尿酸、降低血脂和/或抑制炎症实现。本发明还公开了梅树提取物在治疗或预防高尿酸血症中的应用，通过这种应用可产生治疗或预防痛风的功效。

Description

梅树非果部分提取物的用途

技术领域

本发明涉及医药和保健食品领域。更具体地涉及梅花、梅枝、梅杆、梅根、梅叶的提取物在制备防治高尿酸血症和痛风的药物及保健食品中的应用。

背景技术

梅是蔷薇科(Rosaceae)植物，学名Prunus mume Sieb.Et Zucc，园艺栽培学上将梅分为花梅和果梅，果梅分为白梅、青梅和红梅。

WO00/39249(PCT/JP99/07285)公开了一种具有药效的梅提取物及含有该提取物的组合物，其中公开了如下内容：“使用5倍体积量的甲醇，由梅的茎叶部、梅的果仁和梅花制备提取物，该提取物具有抗氧化作用、胃粘膜损伤抑制作用、醛糖还原酶抑制作用、血糖值上升抑制作用、血小板凝集促进作用、酒精吸收抑制作用和抗炎作用等。”称所涉及的梅提取物用醇提法或干馏法获得，梅叶茎部的甲醇提取物中含有五环三萜化合物，梅花的甲醇提取物中含有槲皮素糖苷等黄酮类物质，但既缺乏对提取工艺的系统探索，又没有关于梅提取物可能有效成分的量化数据，更别提有效部位群的确定及制剂的标准化。这种甲醇粗提物未经分离纯化，杂质含量高，有效成分含量低，色泽深，产品吸湿性很强，不易保藏，加工适应性差。同时，所用的梅树品种不明确，当提取物应用于医药领域时，如不确定植物来源，则不能保证药品有效、安全、稳定的三个基本要求。此外，该文献并未涉及梅提取物在防治高尿酸血症和痛风方面的作用。

痛风是由于嘌呤代谢紊乱，导致高尿酸血症，和/或肾脏排泄尿酸减少，从而引起尿酸盐在组织沉积的疾病。其临床特点为高尿酸血症、特征性反复发作的关节炎、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸性肾结石形成，已成为当今世界中老年男性的常见病。

对于痛风的发病机制和治疗方法目前人类尚未完全了解，无论是原发性还是继发性，除少数由药物引起者，大多缺乏病因治疗，因此不能根治。目前医药市场上抗痛风药品种很少，如治疗痛风急性发作的药物主要有秋水仙碱、非甾体类镇痛药和糖皮质激素，痛风发作间隙期和慢性期的治疗药物主要有：促尿酸排泄药(如丙磺舒、苯磺唑酮)和抑制尿酸生成的药物(如别嘌呤醇)。这些药物虽然消炎止痛作用快，但在抗炎止痛的同时没有降尿酸作用，而且大多数药物毒副作用相当明显，如秋水仙碱的有效剂量与产生腹泻等胃肠道症状的剂量相近，还有全身不良反应，如骨髓抑制、肝肾损害、中枢神经系统损害。非甾体抗炎药在有活动性消化道溃疡、胃肠道出血的情况下绝对禁用，如保泰松用药短至3周即可导致严重的粒细胞减少症或再生障碍性贫血。在高尿酸血症的治疗方面，降尿酸药均无解热、镇痛、抗炎作用，对急性发作的关节炎不仅无益，反会加重症状或延长病程，而且单用降尿酸药治疗的早期，有诱发痛风急性发作的可能。

CN97116712.5公开了茶色素可抑制高尿酸血症，预防痛风发作，并具有治疗作用；CN98110667.6公开了由木通、益母草、车前子、米仁、苍术、黄柏、牛膝组成的物质，具有清热利湿、活血化浊的作用，可以降低血尿酸，治疗痛风性关节炎，预防关节畸形及肾脏病变；CN200410034933.9公开了主要为总黄酮、总生物、挥发油构成的组合物，具有降低高尿酸的效果，但没显示在抗炎、镇痛方面的药效。

痛风的治疗，首先是减轻由此造成的疼痛，然后将“超标”的尿酸减至正常范围，同时还需要积极预防痛风的诱发和加重因素，以达到有病治病、无病预防的目的，所以说痛风的防治战略应突出“防患于未然”。然而针对急性痛风病症特征，在抗炎、镇痛及降尿酸三方面均具有显著疗效的药物还没有。

因此，本领域迫切需要提供一种新物质，它可以在抗炎、镇痛及降尿酸等方面发挥作用，有效治疗和预防痛风。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种治疗和预防痛风的新物质。

在本发明的第一方面，提供了一种梅树提取物在制备治疗或预防痛风的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还用于降低血尿酸、降低血脂和/或抑制炎症。

在本发明的第二方面，提供了一种梅树提取物在制备治疗或预防高尿酸血症的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还可用于(a)治疗痛风；和/或(b)治疗痛风性关节炎。

在本发明的第三方面，提供了一种梅树提取物在制备治疗痛风性关节炎的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还可用于(a)治疗痛风；和/或(b)降低血尿酸。

在本发明的第四方面，提供了一种梅树提取物在制备降低血脂的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还可用于治疗痛风；和/或(b)降低血尿酸。。

在本发明的第五方面，提供了一种梅树提取物在制备减少痛风发生频率的组合物中的用途。

在另一优选例中，所述的组合物还可用于(a)降低血尿酸；(b)降低血脂；和/或(c)抑制炎症。

在本发明的第六方面，提供了一种可用于治疗、预防痛风、降低高尿血酸、治疗痛风性关节炎和/或降低血脂的梅树提取物。

在另一优选例中，所述的梅树提取物包括梅树的花、枝、叶、根、和/或树干的水溶性的和/或脂溶性的提取物。

在另一优选例中，所述的梅树提取物是梅树非果部分提取物，尤其是梅树的花、枝、和/或叶提取物。

在另一优选例中，所述的梅树提取物是超临界CO₂萃取物、有机溶剂提取物、水提取物或其混合。

在另一优选例中，所述的梅树提取物中含有0.5-50wt％角鲨烯，按提取物的总重量计。

在另一优选例中，所述的梅树提取物含有下述十种化合物中的至少一种：

I角鲨烯(Squalene)

II木栓酮(Friedelin)

III叶绿醇(Phytol)

IV谷甾醇(Sitosterol)

V柠檬酸(Citric acid)

VI酒石酸(Tartaric acid)

VII苹果酸(Malic acid)

VIII绿原酸(Chlorogenic acid)

IX琥珀酸(Succinic acid)

X槲皮素(Quercetin)及其衍生物。

在另一优选例中，所述的梅树为蔷薇科的梅树；更佳地梅树为青梅。

在本发明的第七方面，提供了一种可用于治疗、预防痛风、降低高尿血酸、治疗痛风性关节炎和/或降低血脂的梅树组合物。

在另一优选例中，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。

在另一优选例中，所述的组合物包括选自下组的额外组分：梅果提取物、茶提取物、维生素或其组合。

在另一优选例中，还含有额外的降低血尿酸的组分。

在另一优选例中，还含有额外的降低血脂的组分。

在另一优选例中，还含有额外的抑制炎症的组分。

在另一优选例中，所述的组合物选自：

(i)粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液、片剂或含片；

(ii)饮料或酒类。

在本发明的第八方面，提供了一种治疗或预防痛风的方法，它包括步骤：给需要的对象施用梅树提取物。

在本发明的第九方面，提供了一种降低高尿血酸的方法，它包括步骤：给需要的对象施用梅树提取物。

在本发明的第十方面，提供了一种治疗痛风性关节炎的方法，它包括步骤：给需要的对象施用梅树提取物。

在本发明的第十一方面，提供了一种降低血脂的方法，它包括步骤：给需要的对象施用梅树提取物。

在本发明的第十二方面，提供了一种减少痛风发生频率的方法，它包括步骤：给需要的对象施用梅树提取物。

在另一优选例中，所述的施用量为平均每天500-1000毫克/60千克体重，服用时间为1周-1年或更长。

在另一优选例中，所述的对象是哺乳动物，更佳地为人。

在另一优选例中，所述的梅树提取物为梅非果提取物。

据此，本发明提供了一种新物质，它可以在抗炎、镇痛及降尿酸等方面发挥作用，有效治疗和预防痛风。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现梅树提取物，尤其是梅树非果部分的水溶性的和/或脂溶性的提取物(如超临界CO₂萃取物、有机溶剂提取物或/和水溶液提取物)，可以通过多种途径治疗痛风，如有效降低血尿酸、治疗痛风性关节炎、降低血脂、减少痛风发作次数或影响UA(血尿酸)、LPO(血浆过氧化脂质)、SOD(过氧化物岐化酶)、NO^2-/NO^3-的变化，因此可以用于防治痛风或抑制高尿血酸症等领域。

如本文所用，术语“组合物”包括(a)治疗、预防痛风的组合物，(b)降低高血尿酸的组合物和/或(c)降低尿酸的组合物。

如本文所用，梅树(Prunus mume Sieb.Et Zucc)是蔷薇科(Rosaceae)植物。可用于本发明的梅树包括白梅、青梅和红梅，更佳地为青梅。

本发明提供的梅树提取物可来自于梅树的全部，优选其中的非果部分。所述的非果部分包括花、枝、杆、根、或叶。梅花主要是未坐果的花朵，人工采摘后晒干、炒干或烘干后备用；梅枝可以是春季删节的营养枝、秋季修剪的枝条，也可以是梅树砍伐后的枝干，晒干、切断、破碎后备用；梅杆和梅根来源于砍伐后的梅树；梅叶一般分夏、秋二次收集，晒干后备用。

如本文所用，属于“提取物”包括水溶性的和/或脂溶性的提取物。该术语还包括醇提物、或水提物。此外，还包括有效部位群，即含有脂溶性有效部位和水溶性有效部位的萃取物或其混合物。

可用于本发明的梅树提取物没有特别限制，可以是以梅树的果或非果部分为原料，用常规方法获得的水溶性的和/或脂溶性的提取物。

在优选例中，脂溶性有效部位是上述的非果部分用超临界CO₂或非极性有机溶剂萃取得到，含有长链烷烃、多烯烃、V_E、和甾醇类化合物的萃取物；水溶性有效部位是将超临界CO₂萃取或有机溶剂浸提后的物料挥去溶剂，用水性溶液提取，并辅以其他高效提取和分离手段得到，含有黄酮和三萜皂苷等。

优选地，梅树非果部分有效部位群的制备方法，是分别以梅花、梅枝、梅杆、梅根、梅叶等为原料分步萃取获得：

(1)分别以梅花、梅枝、梅杆、梅根、梅叶为原料，经干燥、破碎后，用超临界CO₂流体或非极性有机溶剂萃取，得到富含长链烷烃、多烯烃、V_E、三萜和甾醇类化合物的萃取物，即花、枝、杆、根、叶的脂溶性有效部位；

(2)将超临界CO₂萃取或有机溶剂浸提后的物料挥去溶剂，用体积百分比为0-50％的乙醇-水溶液浸提，并辅以微波辅助萃取或超声波辅助萃取和膜分离等手段，获得富含黄酮和三萜皂苷的提取物，即花、枝、杆、根、叶的水溶性有效部位；

(3)分别将上述花、枝、杆、根、叶的脂溶性有效部位与水溶性有效部位按实际生药提取量合并混匀，即为梅树非果部分有效部位群。

具体地，梅树非果部分醇提物的制备方法是以梅花、梅枝、梅杆、梅根、梅叶等为原料，经任选的干燥破碎后，添加一定体积的甲醇或乙醇溶液，经浸提、热回流提取、微波辅助萃取或超声波辅助萃取，提取液过滤、浓缩、干燥后得到梅树非果部分的醇提物。优选地，甲醇或乙醇溶液的体积浓度为70-95％。

具体地，梅树非果部分水提物的制备方法是以梅花、梅枝、梅杆、梅根、梅叶等为原料，加水浸泡溶胀后热回流提取，提取液浓缩至一定体积(通常是1∶1的生药量)后，加食用酒精醇沉(乙醇终浓度为50-70％)，取上清液减压回收乙醇，将料液浓缩至一定的固型物含量(通常在15-30％)后，喷雾干燥或真空干燥，可获得梅树非果部分的水提物。

梅树果实部分的提取物可使用本领域常用的方法获得。

用途

梅树提取物可用作治疗或预防痛风的组合物中的功效成分。所述的梅树提取物可包括梅树非果部分脂溶性有效部位、梅树非果部分水溶性有效部位、梅树非果部分醇提物、梅树非果部分水提物、梅树果实部分提取物，或其混合。优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位、水溶性有效部位和梅树果实提取物；更优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位和水溶性有效部位。

组合物中所述的梅树提取物含有下述十种化合物中的至少一种：

I角鲨烯(Squalene)

II木栓酮(Friedelin)

III叶绿醇(Phytol)

IV谷甾醇(Sitosterol)

V柠檬酸(Citric acid)

VI酒石酸(Tartaric acid)

VII苹果酸(Malic acid)

VIII绿原酸(Chlorogenic acid)

IX琥珀酸(Succinic acid)

X槲皮素(Quercetin)及其衍生物。

组合物中的活性成分除了上述的梅树的非果提取物，还可以含有有助于治疗或预防痛风的额外组分，例如梅树的果提取物、茶提取物、维生素或其组合。

在本发明的组合物中，还可以包括其它具有治疗或预防痛风、降低血尿酸、抑制尿酸生成、促进尿酸排泄、降低血脂或消炎、止痛的物质(提取物或化合物)，例如茶叶提取物、嘌呤类化合物(如别嘌呤醇)、丙磺舒、苯磺唑酮、他汀类化合物(如辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀)、激素(如糖皮质激素、甾质激素)。

本发明梅树提取物还可用作降低血尿酸组合物中的活性成分。所述的梅树提取物可包括梅树非果部分脂溶性有效部位、梅树非果部分水溶性有效部位、梅树非果部分醇提物、梅树非果部分水提物、梅树果实部分提取物，或其混合。优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位、水溶性有效部位和梅树果实提取物；更优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位和水溶性有效部位。

本发明的组合物中还可以包括其它具有降低血尿酸作用的物质。

本发明梅树提取物还可用作降低血脂组合物中的活性成分。所述的梅树提取物可包括梅树非果部分脂溶性有效部位、梅树非果部分水溶性有效部位、梅树非果部分醇提物、梅树非果部分水提物、梅树果实部分提取物，或其混合。优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位、水溶性有效部位和梅树果实提取物；更优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位和水溶性有效部位。

本发明的组合物中还可以包括其它具有降低血脂作用的物质。

本发明梅树提取物还可用作治疗痛风性关节炎组合物中的活性成分。所述的梅树提取物可包括梅树非果部分脂溶性有效部位、梅树非果部分水溶性有效部位、梅树非果部分醇提物、梅树非果部分水提物、梅树果实部分提取物，或其混合。优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位、水溶性有效部位和梅树果实提取物；更优选地，包括梅树非果部分脂溶性有效部位和水溶性有效部位。

本发明的组合物中还可以包括其它具有治疗痛风性关节炎作用的物质。

在本发明中，各种组合物可以按本领域熟知的方法配制，可以将活性成分与常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂或增溶剂等药物辅料混合，制成任何一种适合于临床使用的剂型，如粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、口服液体制剂等。

所述的组合物可以是保健食品或功能性食品，或是膳食补充剂；可以是保健饮料、酒类等。

本发明提供的用作治疗或预防痛风的组合物以其中所含的活性成分(梅树的非果提取物)计，其有效剂量为每日0.01-5克/60千克体重，更佳地为0.1-2.0克/60千克体重。

本发明的主要优点在于：

1、梅树提取物具有明显的治疗或预防痛风的功效；

2、梅树提取物具有明显的降低血尿酸的功能；

3、梅树提取物具有明显的降低血脂的功能；

4、梅树提取物具有明显的治疗痛风性关节炎的功能；

5、充分利用了以前被丢弃的梅树非果部分，减少了资源浪费，有利于环境。

6、提高了梅树资源的利用度，提高了梅林的经济效益，有利于农民的增收。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

青梅花提取物

萧山大青梅品种大叶青(Prunus mume‘Da Ye Qing’)的花，经采集、干燥后，粉碎成10目左右的粗粉，取15kg放入超临界萃取釜中萃取。

萃取条件：萃取压力35MPa，萃取温度60℃，分离温度40℃，分离压力4MPa，循环动态萃取2小时，在分离釜中得到梅花脂溶性提取物720g(Dietmate^TM(杭州尤美特科技有限公司的商标)-F01)。

经GC-MS分析其主要含长链烷烃、多烯烃、V_E、植物甾醇和三萜类化合物，其中特征性化合物角鲨烯(三十碳六烯)在脂溶性有效部位中的含量为质量分数1.04％。

从萃取釜中取出萃余物，萃余物经30％乙醇-水溶液热回流提取。

提取条件：温度80℃，料液比1∶10(W/V)，热回流提取2小时，得到梅花水溶性提取物1140g(Dietmate^TM-F02)。

经分析其总黄酮含量为18.84％、总三萜皂苷7.08％、总酸5.64％；红外光谱分析表明，该提取物在3404、2929、1606、1516、1403、1270、1078、868、818、780、612cm^-1附近有特征性吸收峰；紫外光谱分析表明，其在327nm处有强吸收，在290nm处有次强吸收。

合并F01和F02即得梅花的有效部位群(Dietmate^TM-F0)。

实施例2

青梅枝提取物

萧山大青梅品种细叶青(Prunus mume‘Xi Ye Qing’)的枝，经采集、干燥后，粉碎成10目左右的粗粉，取15kg放入超临界萃取釜中萃取。

萃取条件：萃取压力30MPa，萃取温度55℃，分离温度45℃，分离压力4MPa，循环动态萃取2小时，得到梅枝脂溶性提取物645g(Dietmate^TM-B01)。

经GC-MS分析其主要含长链烷烃、多烯烃、V_E、植物甾醇和三萜类化合物，其中特征性化合物角鲨烯(三十碳六烯)在脂溶性有效部位中的含量为质量分数4.87％。

从萃取釜中取出萃余物，萃余物经30％乙醇-水溶液热回流提取。

提取条件：温度80℃，料液比1∶15(W/V)，回流提取2小时]，得到梅枝水溶性提取物2400g(Dietmate^TM-B02)。

经分析其含有总黄酮40.59％、总三萜皂苷19.07％、总酸3.70％；红外光谱分析表明该提取物在3406、2926、1609、1519、1447、1394、1284、1070和611cm^-1附近有特征性吸收峰；紫外光谱分析表明其在190-700nm的波长范围内进行扫描，结果显示：在280nm处有强吸收，在320nm处有次强吸收。

合并B01和B02即得梅枝的有效部位群(Dietmate^TM-B0)。

实施例3

青梅叶提取物

萧山大青梅品种红顶(Prunus mume‘Hong Ding’)的叶，经采集、干燥后，粉碎成10目左右的粗粉，取15kg放入超临界萃取釜中萃取。

萃取条件：萃取压力35MPa，萃取温度55℃，分离温度40℃，分离压力6MPa，循环动态萃取2小时，得到梅叶脂溶性提取物975g(Dietmate^TM-L01)。

经GC-MS分析其主要含长链烷烃、多烯烃、V_E、植物甾醇和三萜类化合物，其中特征性化合物角鲨烯(三十碳六烯)在脂溶性有效部位中的含量为质量分数44.15％。

从萃取釜中取出萃余物，萃余物经30％乙醇-水溶液热回流提取。

提取条件：温度70℃，料液比为1∶12(W/V)，提取3小时]，得到梅叶水溶性提取物1680g(Dietmate^TM-L02)；经分析其含有总黄酮30.46％、总三萜皂苷4.93％、总酸5.96％；红外光谱分析表明该提取物在3386、2932、1596、1516、1404、1314、1074、776、721、611、527cm-1附近有特征性吸收峰；紫外光谱分析结果显示：在322nm处有强吸收，在285nm处有次强吸收。

合并L01和L02即得梅叶的有效部位群(Dietmate^TM-L0)。

实施例4

青梅杆提取物

以萧山大青梅品种红丰(Prunus mume‘Hong Feng’)的梅杆为原料，经采集、干燥后，粉碎成10目左右的粗粉，取15kg，加30％的乙醇溶液150L，热回流提取。

提取条件：温度为70℃，料液比为1∶10(W/V)，提取3小时]，提取液经过滤、减压浓缩、喷雾干燥后即得梅杆醇提取(Dietmate^TM-H1)584g。

实施例5

青梅根提取物

以萧山大青梅品种大叶青(Prunus mume‘Da Ye Qing’)的根为原料，经采集、干燥后，粉碎成10目左右的粗粉，取15kg，加纯水250L浸泡3小时后，微波辅助提取。

提取条件：功率为1000W，料液比为1∶10(W/V)，1小时，提取液经过滤后，浓缩至1∶1左右的生药体积，就入3倍体积的食用酒精，搅拌均匀后在4℃左右的冷库中放置过夜，取上清液，减压回收乙醇，并将提取液浓缩至固型物含量20％左右，喷雾干燥，即得梅根的水提物(Dietmate^TM-R2)467g。

实施例6

将实施例1、2、3制备的Dietmate^TM-F02、B02、L02与维生素A、B等材料根据表1配方混合，制成口服液，每瓶100mL。

表1Dietmate^TM抗痛风口服液配方

组分	含量(kg)
		DietmateTM-L02	2kg
DietmateTM-F02	2kg
		DietmateTM-B02	2kg
纯水	100L
		异麦芽低聚糖	5kg

实施例7

梅树非果部分提取物抗痛风动物试验

1、实验材料

大鼠足趾容积测定仪(购自浙江中医药大学)、4℃冰箱、1mL注射器、6^#注射针、滤纸；尿酸、NaOH、HCl、生理盐水、蒸馏水等。

SD雄性大鼠(购自浙江省医学科学院实验动物中心)

梅树非果部分提取物试样：实施例1、2、3中分别制备得到的Dietmate^{T M}-F0、B0、L0。

2、实验方法

(1)尿酸钠结晶及尿酸钠溶液的制备

取194mL蒸馏水加6mL NaOH(1mol/L)，煮沸后加1g尿酸，用HCl(1mol/L)调pH至7.2，室温搅拌冷却，贮存于4℃冰箱中24小时，去上清液，用滤纸将沉淀物的水份吸干，放入干燥箱(70℃)烘2小时，取出刮下粉末，放入研钵内研成细末，用孔径250μm的金属网筛过滤，装瓶备用。

取500mg尿酸钠结晶(MSU)，加入9mL生理盐水，同时加入1mL吐温-80，加热搅拌，配成10mL尿酸钠溶液备用。

(2)动物模型制作

用6号注射针在受试大鼠右后肢胫跗骨关节背侧45°角方向插入胫骨前面肌腱内侧，将0.1mL(50mg/mL)MSU混悬液注入踝关节腔。

(3)动物试验

取30只SD雄性大鼠随机分为5组(Dietmate^TM-F0、B0、L0组，模型对照组、正常对照组)，每组5只大鼠，造模前2天开始灌胃给药(500mg/kg)，每日1次。模型对照组、正常对照组以同体积生理盐水灌胃。

实验当日灌胃给药1小时后用6号注射针在受试大鼠右后肢胫跗骨关节背侧45°角方向插入胫骨前面肌腱内侧，将0.1mL(50mg/mL)MSU混悬液注入踝关节腔，致炎。

各组大鼠在造模前、造模后1小时、2小时、4小时、6小时、24小时、48小时、72小时，分别测试受试足趾容积。以致炎前后足趾容积之差为肿胀率，进行组间差异性比较。

肿胀率 $E(\%)=\frac{V_t-V_n}{V_n}\×100\%$

Vn、Vt分别代表用致炎剂前后足趾容积值。

3、试验结果与分析

如表2所示，模型对照组、Dietmate^TM-B0、L0、F0组在6小时肿胀度最高，24小时或48小时消退明显；而Dietmate^TM-B0组在4小时达到最高，6小时逐渐消退，24小时消退明显。

表2Dietmate^TM-B0、F0、L0对痛风性关节炎大鼠足趾肿胀度的影响

0.187

0.237

0.250

0.272

0.258

0.243

0.199

Dietmate-F0

1.910±0.233

2.056±0.259

2.137±0.260

2.241±0.319

2.001±0.345

1.926±0.237

1.891±0.225

Dietmate-L0

2.016±0.200

2.082±0.202

2.230±0.284

2.213±0.242

2.099±0.255

1.987±0.181

1.978±0.174

如表3所示，在对足趾肿胀率的影响方面，致炎后1小时，Dietmate^TM-F0组与模型对照组差异极显著；致炎后2小时，Dietmate^TM-F0、L0组与模型对照组差异极显著；致炎后4小时、48小时，Dietmate^TM-F0组与模型对照组有极显著差异；致炎后6小时，Dietmate^TM-B0、F0、L0组与模型对照组相比均有显著差异。

表3Dietmate^TM-B0、F0、L0对痛风性关节炎大鼠足趾肿胀率的影响

^***与模型组比较，P＜0.01；^**与模型组比较，P＜0.05；^*与模型组比较，P＜0.1。

结果表明，梅花有效部位群Dietmate^TM-F0可显著降低痛风性关节炎大鼠的足趾肿胀度，且足趾肿胀在6小时明显减退，48小时起即达到致炎前水平，而且足趾肿胀是从致炎后2小时开始的，大大缩短了肿胀期；

梅叶有效部位群Dietmate^TM-L0可在致炎后2小时极显著降低痛风性关节炎大鼠足趾肿胀度，但在致炎6小时后抑制作用逐渐有所减弱；

梅枝有效部位群Dietmate^TM-B0可在致炎后6小时显著降低痛风性关节炎大鼠足趾肿胀度，但在致炎48小时后抑制作用逐渐有所减弱。

实施例8

梅花提取物治疗高尿酸血症的临床观察

1.病例选择

所有病例入选前均经两次以上采血证实存在高血脂，并且血尿酸含量高于

正常值。共选取60例，其中男45例，女15例，年龄在38-75岁，平均58.6岁。所选病例中，含高血糖10例，高血压25例，冠心病9例。

2.诊断标准

血尿酸(HUA)浓度：男≥417μmol/L，女≥339μmol/L(血尿酸用酶法测定)。

3.服药方法

治疗前四周停服一切降脂及影响嘌呤代谢的药物。服用实施例1中制备的含梅花有效部位群(Dietmate^TM-F0)的胶囊，每日2粒，折合Dietmate^TM-F0剂量为400mg/日/人，连续服用30天。

4.观察方法

所有病例服药前后检测血尿酸、血脂、血液流变学及血糖，肝肾功能和血尿常规，心电图，眼底，同时查左手无名指甲微循环。

5.结果

服用Dietmate^TM-F0后，58例血尿酸明显下降(p＜0.01)，2例无明显变化，疗效见表4。全部病例在服用Dietmate^TM-F0期间在症状和化验方面均未发现不良反应。

表4Dietmate^TM-F0对血尿酸的影响

例数	n	治疗前	治疗后
				男	45	532.74±78.37	412.06±98.32*
女	15	435.19±86.27	324.08±88.95*

^*与治疗前相比，p＜0.01

尿酸为三氧嘌呤，嘌呤合成代谢增多及尿酸排泄减少是血尿酸增多的重要机制。高尿酸血症是内科常见病症，可分为原发性和继发性两种。常用碱性药物和别嘌呤醇治疗。

本发明应用梅花提取物Dietmate^TM-F0治疗高尿酸血症，结果表明，Dietmate^TM-F0治疗前后血尿酸水平具有极显著的差异(p＜0.0)1，且无任何副作用。说明Dietmate^TM-F0具有治疗或预防痛风的功效。

实验例9

梅树非果部分提取物抑制高尿酸血症和预防痛风发作的临床观察

1.实验方法

按照美国风湿病协会关于痛风的诊断标准诊断为原发性痛风的患者作为观察对象，共60例，均为男性，年龄42-65岁，平均50.2±7.6岁。伴有高血脂症者42例，伴高血压病者10例，伴冠心病6例；糖尿病患者3例，肝肾功能正常。

2.治疗方法

痛风急性发作期控制以后将观察对象按就诊序号随机分为2组：

甲组为实验组，30例，口服以实施例6制备的口服液，每天服用两次，每次10mL(相当于每日提取物剂量1.2克/60千克体重)，连续60天；

乙组为对照组，30例，口服丙磺舒(500mg，每日3次，连续60天)、别嘌呤醇(0.1g，每日2次，60天)。

两组病人均戒酒、避免高嘌呤饮食。3个月后，随访患者痛风急性发作情况，以比较2组病人疗效。

3.实验室检查

治疗前后均取观察对象外周静脉血样做如下实验检查。

血脂用酶联试剂比色法(试剂盒购自上海十八制药厂)测血清总胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，按Friedewald公式计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)；血尿酸(UA)用磷钨酸还原法；血肌酐(CRE)用苦味酸法；血清总蛋白(SP)用双缩尿法；血清白蛋白(A)用溴甲酚绿法；球蛋白(G)为血清总蛋白减去白蛋白后所得；谷丙转氨酶(GPT)用赖氏法；胆红色用酶法；血清葡萄糖用氧化酶法；血浆过氧化脂质(LPO)用硫代巴比妥酸荧光法；红细胞内超氧化物歧化酶(SOD)用邻苯三酚自氧化法；血浆一氧化氮(NO)用镀铜镉还原法检测血浆样本的NO^2-/NO^3-浓度。

4.结果与分析(治疗前后痛风发作频率比较)

(1)治疗前后痛风发作频率的比较，结果见表5。

表5实施例6制备的口服液对痛风发作次数的影响

与治疗前相比，^*p＜0.05

结果表明，甲组经实施例6制备的口服液治疗后，痛风发作次数少于治疗前，差异有显著性(p＜0.05)，并与阳性对照组有可比性。

(2)治疗前后血脂的变化，结果见表6。

表6患者治疗前后血脂的变化比较(mmol/L)

组别	例数	TG	CHO	HDL-C	LDL-C
						甲组乙组甲组乙组	治疗前3030治疗后3030	1.8±0.231.9±0.311.3±0.43*#1.6±0.47	7.2±1.367.8±1.243.5±0.67*#4.7±1.32*	1.05±0.421.10±0.371.35±0.17*#1.56±0.35*	3.6±0.643.8±0.543.1±0.58*#3.6±0.51

*与治疗前相比，p＜0.05；

#与乙组患者相比，p＜0.05。

结果表明，甲组患者治疗前后血脂比较，具有显著差异性(p＜0.05)；治疗后甲组患者与乙组患者血脂比较，差异有显著性(p＜0.05)。

(3)治疗前后血UA、LPO、SOD、NO的变化，结果见表7。

表7患者治疗前后血UA、LPO、SOD、NO的变化比较

*与治疗前相比，p＜0.05；

#与乙组患者相比，p＜0.05。

结果表明，甲组患者治疗前后UA、LPO、SOD、NO^2-/NO^3-比较，差异有显著性，治疗后，甲组患者与乙组患者UA、LPO、SOD、NO^2-/NO^3-比较，差异有显著性。

(4)痛风发作与血脂、UA、LPO、NO的相关性分析

相关性分析表明，痛风发作与血脂、UA、LPO、NO的含量呈正相关。

痛风是嘌呤代谢紊乱及尿酸钠盐形成痛风石沉积造成的，以痛风石性慢性关节炎、痛风肾病为临床特点，并且常伴有高脂血症、高血压病、糖尿病、动脉硬化、冠心病等，本发明提供的梅树提取物，尤其是梅树非果部分提取物的主要成分为黄酮糖苷、三萜皂苷、有机酸等活性物质，具有抗脂质过氧化、降血脂、增强免疫等药理作用。

发明人将其用于预防原发性痛风的反复发作，经30例伴有高脂血症、肝肾功能正常的原发性痛风患者服用实施例6制得的口服液3个月后随访，服用该口服液的患者痛风复发次数显著低于治疗前。服用该口服液患者的血脂、UA、LPO、NO等指标也得到全面改善。

结果表明，本发明提供的梅树提取物，尤其是梅树非果部分的有效部位群(脂溶性有效部位和水溶性有效部位)具有显著的抗痛风作用，并可能与其降脂效果相关。

实施例10

以实施例1制备的Dietmate^TM-F0 500g与药用淀粉500g为原料，不添加任何其他成分，灌制成0号胶囊，净重每粒300mg。

给9位痛风患者服用该胶囊，每天服用两次，每次两粒；一个月后，在不改变其饮食、活动习惯的情况下，10位痛风患者的平均痛风发作次数显著下降，表明梅花有效部位群(Dietmate^TM-F0)500g具有显著降低痛风发作次数的功效。

实施例11

以实施例1、2、3制备的Dietmate^TM-F0、B0、L0与魔芋精粉、竹笋膳食纤维微粉、药用淀粉等材料，根据表8配方复配，制成片剂。

表8Dietmate^TM抗痛风片剂配方

组分	含量(kg)
		DietmateTM-L0	5kg
DietmateTM-B0	5kg
		DietmateTM-F0	5kg
魔芋精粉	15kg
		竹笋膳食纤维微粉	15kg
药用淀粉	15kg

给5位痛风患者服用该片剂，每天服用两次，每次1片(每片2克)；一个月后，在不改变其它饮食、活动习惯的情况下，6位痛风患者的痛风症状明显改善，表明上述片剂具有显著抗痛风的功效。

实施例12

以实施例4制备的Dietmate^TM-H1(100g)为原料，直接加入1000L酒精度为18％的黄酒中，充分溶解、混匀，罐装，即制得梅保健酒，少量常喝此酒，具有显著抗痛风的功效。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (8)

1.一种梅树提取物在制备治疗或预防痛风的组合物中的用途；所述的梅树提取物包括梅树的花、枝、和/或叶的水溶性的和/或脂溶性的提取物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的梅树为蔷薇科的梅树。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的梅树为青梅。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物包括选自下组的额外组分：梅果提取物、茶提取物、维生素或其组合。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的梅树提取物含有下述十种化合物中的至少一种：

I角鲨烯(Squalene)

II木栓酮(Friedelin)

III叶绿醇(Phytol)

IV谷甾醇(Sitosterol)

V柠檬酸(Citric acid)

VI酒石酸(Tartaric acid)

VII苹果酸(Malic acid)

VIII绿原酸(Chlorogenic acid)

IX琥珀酸(Succinic acid)

X槲皮素(Quercetin)及其衍生物。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物选自：

(i)粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液、或片剂；

(ii)饮料或酒类。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的组合物为含片。