CN102766221A - 灵芝多糖提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灵芝多糖的提取方法。该方法步骤包括复合酶酶解灵芝子实体、超声波处理和灵芝多糖提取。本发明具有溶剂安全，避免了传统方法中采用氯仿、甲醇等有机溶剂对环境的污染。与超临界二氧化碳萃取法相比，具有提取设备简单、操作方便、成本低、速度快、收效高等特点。采用生物酶酶解原料后再提取相对于传统的热水浸提法，可使灵芝多糖的提取率和含量得到较大提高的效果。

Description

灵芝多糖提取方法
技术领域
本发明涉及一种以灵芝为原料提取成分方法，特别涉及灵芝多糖提取方法。
背景技术
灵芝多糖是由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形(三级结构)的葡聚糖，其立体构形与脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，是一种大分子化合物，其分子量从数千到数十万，它是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。不溶于高浓度的乙醇，微溶于低浓度的乙醇及冷水，在热水中能全部溶解。灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。灵芝多糖中除含有葡萄糖外，大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖，但含量较少。
传统的灵芝多糖提取方法主要是采用热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法提取。酸或碱浸提法虽能提高提取率，但对设备要求高且极易破坏多糖的结构，还存在环境污染问题。另外由于灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，活性多糖有效成分附着在细胞壁内侧，传统的热水浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。中国专利CN1181271介绍了使用低压水煮工艺，多糖的药理活性比常规水煮要高，但多糖提取率偏低，且所得提取物中灵芝三萜酸含量也偏低。中国专利CN1560072通过采用超临界CO2萃取灵芝三萜酸提取液，提余物再经热水浸提得灵芝多糖提取液。但该方法所需设备投入较大、操作难度和生产成本也较高，且灵芝多糖提取率偏低。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全环保高效的提取灵芝多糖的方法。
发明的一种实施方式，提供一种灵芝三萜的提取方法，包括：
1)获取灵芝干粉，向灵芝干粉中加入复合酶溶液，在35～60℃下复合酶作用酶解1～4h，酶解结束后加热灭活复合酶；
2)加热灭活后的灵芝干粉加入乙醇，使乙醇浓度达40％～80％，调pH值为9～10，在40℃～90℃下进行频率为20～100KHz的超声处理，超声处理2～4h后分离出不溶物；
3)将步骤2)分离得到的不溶物中加入乙醇调节乙醇浓度为40％～80％，在40℃～90℃下进行频率为20～100KHz的超声处理，超声处理2～4h后分离出最终不溶物；
4)将步骤3)得到的终不溶物调节pH为中性，除醇，加入8倍于终不溶物重量的水，在50℃～90℃下进行水提，将所得水提提取液进行浓缩，喷干，得到灵芝多糖。
复合酶溶液中复合酶为木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中任意两种或三种混合物。木瓜蛋白酶用量为每克灵芝干粉4800～800000U、纤维素酶用量为每克灵芝干粉90～1500U，果胶酶用量为每克灵芝干粉32～200U。
步骤1)中复合酶溶液用量为每克灵芝干粉加入3mL。
步骤2)中使用的氢氧化钠为饱和溶液。
步骤3)中使用1mol/L的HCl调节pH。
步骤3)中水提共进行两次。
步骤4)中加水量为8倍于终不溶物质量。
本发明方法所用溶剂安全，避免了传统方法中采用氯仿、甲醇等有机溶剂对环境的污染。与超临界二氧化碳萃取法相比，具有提取设备简单、操作方便、成本低、速度快、收效高等特点。采用生物酶酶解原料后再提取相对于传统的热水浸提法，可使灵芝多糖的提取率和含量得到较大提高。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法，除醇和浓缩方法皆为减压旋蒸法，所用的酶与试剂为市售商业产品。下面对发明作进一步详细的说明。
实施例1：
(1)取50.0g粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(0.6g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；和1.2g纤维素酶，酶活15000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在35℃下对原料进行酶解4h，酶解结束后，升温至100℃灭酶0.5h。
(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到40％，再加入氢氧化钠饱和溶液调pH为9后，加热至40℃，保温提取2h，期间使用50KHz的超声波超声10min，一釜原料提取2次。
(3)分离得提取液和灵芝渣子，提取液可用于提取灵芝三萜，渣子用1mol/L的HCl调pH为中性后并除醇，加入灵芝重量8倍量的水，在50℃条件下进行水提4h，共提取2次，将水提所得提取液进行浓缩后喷干得灵芝多糖，得率为2.74％，多糖含量为32.3％。
实施例2：
(1)取50.0g粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(1.2g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；和0.6g纤维素酶，酶活15000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在50℃下对原料进行酶解3h，酶解结束后，升温至100℃灭酶0.5h。
(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到50％，再加入氢氧化钠饱和溶液调pH为10后，加热至50℃，保温提取2h，期间使用20KHz的超声波超声50min，一釜原料提取2次。
(3)分离得提取液和灵芝渣子，提取液可用于提取灵芝三萜，渣子调pH为中性后并除醇，加入灵芝重量8倍量的水，在60℃条件下进行水提3h，共提取2次，将水提所得提取液进行浓缩后喷干得灵芝多糖，得率为3.12％，多糖含量为36.8％。
实施例3：
(1)取50.0g粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(0.3g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.3g纤维素酶，酶活15000U/g；和5.0g果胶酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在50℃下对原料进行酶解2h，酶解结束后，升温至100℃灭酶0.5h。
(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到70％，再加入烧碱调pH为10后，加热至60℃，保温提取2h，期间使用100KHz的超声波超声90min，一釜原料提取2次。
(3)分离得提取液和灵芝渣子，提取液可用于提取灵芝三萜，渣子调pH为中性后并除醇，加入灵芝重量8倍量的水，在70℃条件下进行水提2h，共提取2次，将水提所得提取液进行浓缩后喷干得灵芝多糖，得率为3.33％，多糖含量为35.8％。
实施例4：
(1)取50.0g粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(0.8g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；0.8g纤维素酶，酶活15000U/g；和0.8g果胶酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在60℃下对原料进行酶解1h，酶解结束后，升温至100℃灭酶0.5h。
(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到80％，再加入烧碱调pH为9后，加热至70℃，保温提取2h，期间使用80KHz的超声波超声30min，一釜原料提取2次。
(3)分离得提取液和灵芝渣子，提取液可用于提取灵芝三萜，渣子调pH为中性后并除醇，加入灵芝重量8倍量的水，在80℃条件下进行水提2h，共提取2次，将水提所得提取液进行浓缩后喷干得灵芝多糖，得率为3.34％，多糖含量为38.6％。
实施例5：
(1)取50.0g粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(2.0g木瓜蛋白酶，酶活800000U/g；2.0g纤维素酶，酶活15000U/g；和0.8g果胶酶，酶活20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在60℃下对原料进行酶解1h，酶解结束后，升温至100℃灭酶0.5h。
(2)向釜中加入95％的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到75％，再加入烧碱调pH为9后，加热至90℃，保温提取2h，期间使用70KHz的超声波超声40min，一釜原料提取2次。
(3)分离得提取液和灵芝渣子，提取液可以用提取灵芝三萜，渣子调pH为中性后并除醇，加入灵芝重量8倍量的水，在90℃条件下进行水提2h，共提取2次，将水提所得提取液进行浓缩后喷干得灵芝多糖，得率为3.63％，多糖含量为38.4％。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于发明的保护范围。

Claims (8)

1.灵芝多糖提取方法，包括如下步骤：
1)获取灵芝干粉，向灵芝干粉中加入复合酶溶液，在35～60℃下复合酶作用酶解1～4h，酶解结束后加热灭活复合酶；
2)向加热灭活后的灵芝干粉中加入乙醇，使乙醇浓度达40％～80％，调pH值为9～10，在40℃～90℃下进行频率为20～100KHz的超声处理，超声处理2～4h后分离出不溶物；
3)将步骤2)分离得到的不溶物中加入乙醇，使酒精浓度达40％～80％，在40℃～90℃下进行频率为20～100KHz的超声处理，超声处理2～4h后分离出最终不溶物；
4)将步骤3)得到的终不溶物调节pH为中性，除醇，加水在50℃～90℃下进行水提，将所得水提提取液进行浓缩，喷干，得到灵芝多糖。
2.根据权利要求1所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述复合酶溶液中复合酶为木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中任意两种或三种混合物。
3.根据权利要求2所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶用量为每克灵芝干粉4800～800000U、纤维素酶用量为每克灵芝干粉90～1500U，果胶酶用量为每克灵芝干粉32～200U。
4.根据权利要求1所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述步骤1)中复合酶溶液用量为每克灵芝干粉加入3mL。
5.根据权利要求1-4任一项所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述步骤2)中使用的氢氧化钠为饱和溶液。
6.根据权利要求1-5任一项所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述步骤3)中使用1mol/L的HCl调节pH。
7.根据权利要求1-6任一项所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述步骤3)中水提共进行两次。
8.根据权利要求1-7任一项所述的灵芝多糖提取方法，其特征在于所述步骤4)中加水量为8倍于终不溶物质量。
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