CN105294875A - 从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物有效成分提取方法技术领域，公开了一种从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，包括以下步骤：灵芝粉碎，亚氯酸钠-冰醋酸体系氧化处理，残渣加水超声提取，上清液经醇沉离心得粗多糖。本发明利用亚氯酸钠-冰醋酸体系来消解灵芝子实体中的木质素和纤维素，使其中的多糖更多的释放出来；并与超声辅助萃取有机结合来提取多糖，操作方便，工艺简单，产率高，适合于规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物有效成分提取方法技术领域，尤其涉及从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法。
背景技术
灵芝是赤芝和紫芝的总称，又称“灵芝草”、“仙草”，始载于《神农本草经》，具有具滋补强壮、却病延年之功效。真菌若被直接食用一般达不到治疗的功效，其有效成分通常只有经过提取、分离纯化，才能提高功效，发挥一定的药理作用。在活性物质制备过程中，提取是第一步，也是最为关键的一步，如何将有效成分最大程度的释放出来具有非常重要的意义。热水浸提法是提取灵芝多糖常用的方法之一。但是，传统热水浸提法存在提取时间长、温度高、得率低的问题，为克服传统水提取法的不足，近年来，出现了超声或微博辅助萃取、超高压、酶法等新的提取技术与方法，但是这些方法的提取效果也很不理想。与其它食用菌不同，灵芝子实体木质化程度高，结构复杂，多糖一般与纤维素、木质素通过物理或化学键结合在一起，采用一般的方法很难将多糖提取出来。从目前的研究结果可以看出，单纯进行水溶性灵芝多糖的提取，其提取率只有3％左右，而其余大部分的多糖都滞留在残渣中，如果直接丢弃，即造成资源浪费，又对环境造成污染。为克服以上方法的缺陷，本发明利用亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系来消解灵芝子实体中的木质素和纤维素，使灵芝多糖更多的释放出来，从而大大提高灵芝多糖的提取效率。
发明内容
本发明针对现有技术的缺点，公开了从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:20～30；将灵芝子实体粉碎，以便于与亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系充分反应，更有效的将灵芝子实体中的纤维素和木质素消解或断裂，使更多的灵芝多糖释放出来，大大提高多糖的提取效率。本发明将灵芝子实体干燥，以便更加准确的称取亚氯酸钠、冰醋酸，更充分的与亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系反应，提高多糖的提取效率。
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于60～80℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重40～60％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；灵芝子实体与其它食用菌不同，灵芝子实体木质化程度高，结构复杂，多糖一般与纤维素、木质素通过物理或化学键结合在一起，采用一般的方法很难将多糖提取出来。本发明根据亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系来处理灵芝子实体，能够将其中的纤维素和木质素消解或断裂，使更多的灵芝多糖释放出来，大大提高了多糖的提取效率。
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:20～30比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；超声处理与亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系有机结合也有利于活性多糖的溶出。
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。
作为优选，步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。本发明对灵芝子实体进行超微粉碎，更有利于与亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系反应，进而更有效的将灵芝子实体中的纤维素和木质素消解或断裂，使更多的灵芝多糖释放出来，最大化提高多糖的提取效率。
作为优选，步骤A中，将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。采用蒸馏水，确保提取过程不受其他因素的影响，确保提取出灵芝多糖的纯度。
作为优选，步骤B中，放入25℃的摇床中振荡，振荡后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I。在25℃选用摇床进行振荡，使更多的灵芝多糖释放出来。
作为优选，步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，离心，得上清液I和沉淀物I。在25℃选用摇床进行振荡2小时，不但节约了时间，减少了灵芝多糖受其他条件影响的可能性，而且使更多的灵芝多糖释放出来。
作为优选，步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:20～30比例混合。
作为优选，步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:20～30比例混合，超声条件下处理20～30分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。超声条件下处理20～30分钟，更有利于活性多糖的溶出。
作为优选，超声处理的功率为100～250W。超声处理的功率为100～250W，更有利于活性多糖的溶出。
作为优选，步骤D中，合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，在4000转/分下离心10分钟，得上清液和灵芝多糖的沉淀物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明采用的灵芝子实体与其它食用菌不同，灵芝子实体木质化程度高，结构复杂，多糖一般与纤维素、木质素通过物理或化学键结合在一起，采用一般的方法很难将多糖提取出来。本发明根据亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系来处理灵芝子实体，能够将其中的纤维素和木质素消解或断裂，使更多的灵芝多糖释放出来，大大提高了多糖的提取效率。
(2)本发明采用超声处理与亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系有机结合也有利于活性多糖的溶出。
(3)本发明高效，操作简单，条件温和。
(4)因此本发明将氧化预处理和超声辅助萃取有机结合来提取灵芝多糖，具有产量高，操作简单等特点，对于挖掘灵芝的潜在价值有非常重要的意义。
附图说明
图1是本发明的流程图。
图2是未处理灵芝粉末的扫描电镜图(2000倍)。
图3是氧化处理和超声提取后沉淀物II的扫描电镜图(2000倍)。
具体实施方式
实施例1
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:20；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于60℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重40％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:20比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I；
步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:20～30比例混合，超声条件下处理20～30分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。超声处理的功率为100～250W。
步骤D中，合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，在4000转/分下离心10分钟，得上清液和灵芝多糖的沉淀物。灵芝多糖的收率为10.87％。
图3与图2相比，灵芝子实体经亚氯酸钠-冰醋酸氧化体系和超声处理处理后，灵芝子实体组织表面粗糙凹陷，结构呈现不规则状，多空洞，断层较多；能够将其中的纤维素和木质素消解或断裂，能够使更多的灵芝多糖释放出来。
实施例2
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:30；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于80℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重60％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:30比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为10.19％。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I；
步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:20～30比例混合，超声条件下处理30分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。超声处理的功率为250W。
步骤D中，合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，在4000转/分下离心10分钟，得上清液和灵芝多糖的沉淀物。
实施例3
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:25；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于65℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重45％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:25比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为10.79％。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I；
步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:20～30比例混合，超声条件下处理25分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。超声处理的功率为150W。
步骤D中，合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，在4000转/分下离心10分钟，得上清液和灵芝多糖的沉淀物。
实施例4
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:21；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于61℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重41％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:21比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为8.68％。
实施例5
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:28；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于78℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重58％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:28比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为12.90％。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
实施例6
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:24；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于70℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重50％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:26比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为12.47％。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I。
实施例7
从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，如图1所示，包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:22；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于68℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重51％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:21比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。灵芝多糖的收率为13.51％。
步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I；
步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:26比例混合，超声条件下处理27分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。超声处理的功率为180W。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。
Claims (9)
1.从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤，
A.原材料预处理：对灵芝子实体进行干燥、粉碎后，将粉碎后的灵芝子实体与水混合成混合液，灵芝子实体与水的重量比为1:20～30；
B.亚氯酸钠-冰醋酸处理：将混合液置于60～80℃的水浴中，加入占灵芝干重40％的亚氯酸钠，搅拌后，每隔1小时滴入占灵芝干重40～60％的冰醋酸，滴入冰醋酸后进行搅拌，按照以上方法滴入三次冰醋酸，每次滴入冰醋酸后均进行搅拌；
放入摇床中振荡，振荡后离心得上清液I和沉淀物I；
C.水提取：将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:20～30比例混合，经过超声处理后，离心得上清液II和沉淀物II；
D.醇沉多糖：合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，离心得上清液和灵芝多糖的沉淀物；灵芝多糖的沉淀物经干燥、粉碎后得灵芝粗多糖。
2.根据权利要求1所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤A中，对灵芝子实体进行超微粉碎。
3.根据权利要求1或2所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤A中，将粉碎后的灵芝子实体与蒸馏水混合成混合液。
4.根据权利要求1所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤B中，放入25℃的摇床中振荡，振荡后，在6000转/分下离心15分钟，得上清液I和沉淀物I。
5.根据权利要求1或4所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤B中，放入25℃的摇床中，振荡2小时后，离心，得上清液I和沉淀物I。
6.根据权利要求1所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与蒸馏水按重量比1:20～30比例混合。
7.根据权利要求1所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤C中，将步骤B所得沉淀物I与水按重量比1:20～30比例混合，超声条件下处理20～30分钟，在6000转/分下离心15分钟，得上清液II和沉淀物II。
8.根据权利要求7所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：超声处理的功率为100～250W。
9.根据权利要求1所述的从灵芝子实体中提取灵芝多糖的方法，其特征在于：步骤D中，合并上清液I和上清液II，加入3倍体积的95％的乙醇进行醇沉后，在4000转/分下离心10分钟，得上清液和灵芝多糖的沉淀物。
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Legal Events
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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