CN110357985A - 一种灵芝多糖提取技术 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：S1)：原料预处理：将灵芝在50‑80度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45‑55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在50‑80度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理80‑100min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至7.8‑8.5，加入胰蛋白酶；本发明提供一种灵芝多糖提取技术，对灵芝多糖进行精提纯，能够减少多糖内部的杂质蛋白的含量，提高灵芝多糖的纯度。

Description

一种灵芝多糖提取技术

技术领域

本发明涉及灵芝多糖提取技术领域，具体为一种灵芝多糖提取技术。

背景技术

灵芝，是我国中医药宝库中的珍品，素有仙草之誉，《神农本草经》和《本草纲目》都对灵芝的功能有详细的记载，服用灵芝能够健脾、养胃、增元气、排毒养颜、抗癌止瘤、强身健体、调理血压，适用于多种人群，灵芝作为药材被历版《中华人民共和国药典》所收载，多糖是其主要活性成分之一多糖是一类由10个以上单糖通过糖苷键聚合而成天然高分子化合物，通常是由醛糖或酮糖组成，具有广泛的生物活性，是维持生命活动的基本物质之一，多糖与脂类、蛋白质形成的脂多糖、糖蛋白在细胞与细胞信息交流、以及蛋白质的加工和转移以及免疫系统分子识别方面起着重要的作用，根据来源不同，多糖分为三种，分别是植物多糖，动物多糖，微生物多糖，而微生物多糖是近年来研究的重心，灵芝多糖是一种由三股单糖链组成且呈螺旋状的立体构型物，其构型与RNA、DNA相似，其分子量从数百到数十万，灵芝多糖作为灵芝的主要生物活性组分，现代药理学和临床试验证实灵芝多糖在预防和治疗多种疾病中扮演重要角色，具有抗肿瘤、免疫调节、抗辐射、抗菌、抗氧化等多种药理作用，近来越来越多如灵芝胶囊、灵芝口服液等灵芝多糖相关产品的出现，推动着灵芝产业的飞速发展，对灵芝多糖的质量要求也越来越高，灵芝多糖可从灵芝子实体、灵芝孢子和灵芝发酵菌丝体等原料中分离提取获得，灵芝多糖的传统提取工艺是利用多糖能溶于水、不溶于有机溶剂的原理，用水提醇沉的方法从原料中提取，传统提取工艺简单，目前广泛应用于灵芝多糖的制备，随着多糖提取技术的不断发展，酶提取法、超临界流体辅助提取法、超滤提取法、微波辅助提取法、超声波提取法等新型提取方法也逐渐被应用到灵芝多糖提取中，现有技术中的提取方法，在制备灵芝多糖都不同程度的含有蛋白质杂质，传统方法难以将杂志蛋白进行脱除，影响灵芝多糖的质量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供一种灵芝多糖提取技术，对灵芝多糖进行精提纯，能够减少多糖内部的杂质蛋白的含量，提高灵芝多糖的纯度，可以有效解决背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在50-80度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45-55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在50-80度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理80-100min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至7.8-8.5，加入胰蛋白酶，在35-40度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入4-6倍体积且93％-97％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖。

作为本发明的一种优选技术方案：超声处理的功率为100-250w，离心的速度为6000r/min，选择合适的超声处理功率及离心速度，能够节省时间，高效率的进行提取。

作为本发明的一种优选技术方案：灵芝多糖脱蛋白步骤中胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的0.05％-0.5％，酶解时间为15-20h，胰蛋白酶的量应控制在合适的范围内，保证反应正常进行，不破坏内部的成分。

作为本发明的一种优选技术方案：灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为5-30g/L，脱酶处理时间为0.5-1h，搅拌速度50-100r/min，大孔结构树脂对有机物的浓缩分离作用好，具有强大的吸附作用，起到脱酶作用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明灵芝多糖的提取方法简单，多糖的提取效率高，内部的杂质蛋白含量少，多糖的纯度高，易于工业化生产，该技术采用酶解法脱蛋白，能够缩短工艺流程降低能耗，减少有机溶剂的使用，提取出的多糖浓度高，且无污染，食用多糖能够增强机体的免疫力，影响细胞的代谢，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供以下技术方案：

实施例一：

一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在50度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在50度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉，该步骤可以除去脂类、低聚糖等小分子，为提取灵芝多糖做准备；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理80min，超声处理的功率为100w，离心的速度为6000r/min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液，超声波作用会出室内恒空化效应，在组织细胞内形成高压，高压在溶液中形成冲击波，能有效的减小消除水与灵芝之间的阻力，提高传质效率，同时能够使细胞组织发生破裂，提高提取效率；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至7.8，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的0.05％，酶解时间为15h，在35度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二，利用胰蛋白酶的酶解作用，能够有效的将多糖内的杂质蛋白出去，且不损坏内部的结构，保持灵芝多糖的高浓度，提高其营养价值；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为5g/L，脱酶处理时间为0.5h，搅拌速度50r/min，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液，阳离子交换树脂能够避免色素解吸，提高脱色率，降低色素之间的作用力；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入4倍体积且93％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖，灵芝多糖为极性，不溶于乙醇溶液内，因此在多糖的提取液内加入一定浓度的乙醇溶液，能够使多糖形成沉淀，将多糖分离出来。

实施例二：

一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在80度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在80度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理100min，超声处理的功率为250w，离心的速度为6000r/min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至8.5，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的0.5％，酶解时间为20h，在40度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为30g/L，脱酶处理时间为1h，搅拌速度100r/min，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入4-6倍体积且93％-97％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖。

实施例三：

一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在60度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45-55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在60度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理90min，超声处理的功率为100-250w，离心的速度为6000r/min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至8，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的2％，酶解时间为17.5h，在37度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为15g/L，脱酶处理时间为0.7h，搅拌速度70r/min，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入5倍体积且94.5％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖。

实施例四：

一种灵芝多糖提取技术，包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在70度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45-55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在70度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理90min，超声处理的功率为200w，离心的速度为6000r/min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至8.2，加入胰蛋白酶，胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的0.4％，酶解时间为18h，在38度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为25g/L，脱酶处理时间为0.8h，搅拌速度85r/min，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入5倍体积且96％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖。

本发明好处：本发明采用胰蛋白酶对灵芝堆糖提取液中的杂质蛋白进行去除，在酶解结束后，用阳离子交换树脂进行脱酶处理，即无需再次使用中和剂调节PH值，工艺简单，能够获得高浓度的多糖，经过提纯后的灵芝多糖中杂质蛋白含量少，营养程度高，有助于工业化提取灵芝多糖。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种灵芝多糖提取技术，其特征在于：包括以下步骤：

S1)：原料预处理：将灵芝在50-80度的温度下干燥，然后放入粉碎机中粉碎成末，然后用石油醚按1：5的比例，温度45-55度的环境下进行脱脂处理，然后用离心机离心，沉淀物质在50-80度的温度下干燥，获得脱脂灵芝粉；

S2)：灵芝粗多糖提取：按照1：20料比向脱脂灵芝粉内加水，然后经过超声处理，处理80-100min，放入离心机中离心得到上清液一与沉淀物一，上清液一即为灵芝粗多糖粗提液；

S3)：灵芝多糖脱蛋白：调节上清液一的PH至7.8-8.5，加入胰蛋白酶，在35-40度条件下酶解提取液中的蛋白杂质，然后将提取液放入离心机中离心获得上清液二；

S4)：灵芝提取液提纯：在上清液二中加入阳离子交换树脂，然后搅拌混合液，去除残留的胰蛋白酶，过滤获取溶液，即为灵芝多糖精提液；

S5)：醇沉提取液：将灵芝多糖精提液加入4-6倍体积且93％-97％浓度的乙醇溶液内，混合均匀，然后离心得到沉淀物二，将灵芝多糖精提液中的沉淀物二进行干燥，然后进行粉碎，获得灵芝多糖。

2.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖提取技术，其特征在于：超声处理的功率为100-250w，离心的速度为6000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖提取技术，其特征在于：灵芝多糖脱蛋白步骤中胰蛋白酶的添加量为上清液一质量的0.05％-0.5％，酶解时间为15-20h。

4.根据权利要求1所述的一种灵芝多糖提取技术，其特征在于：灵芝提取液提纯步骤中的阳离子交换树脂为带有磺酸基的大孔结构树脂，阳离子交换树脂添加量为5-30g/L，脱酶处理时间为0.5-1h，搅拌速度50-100r/min。