CN101704849A - 一种竹叶黄酮提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种制备竹叶黄酮提取物的方法，以竹叶为原料，经粉碎、浸泡、回流提取、冷却、离心、减压脱溶、真空冷冻干燥后得竹叶黄酮提取物，得到的竹叶黄酮提取物含有黄酮化合物、可溶性总糖、蛋白质、粗脂肪、水分、矿物质等，具有显著的抗氧化、清除自由基、降压降血脂的作用，可广泛应用于食品、保健品、化妆品及清洁用品中。该工艺使用乙醇-水体系，实现了无污染操作，同时，黄酮提取率较高，纯度及抗氧化活性亦较高。
Description
技术领域
本发明涉及一种竹叶黄酮提取物的制备方法。竹叶黄酮是从禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)的竹叶中提取分离得到，有多种生物学功效，在保健品、化妆品及食品添加剂方面应用广泛。
背景技术
竹叶中含有丰富的黄酮类物质，经动物实验证明，竹叶提取物中的黄酮及其甙类化合物具有明显的降血脂和降血清胆固醇的作用；药理研究表明，竹叶黄酮具有抗整体动物缺氧的作用，能有效扩张冠脉血管，增加冠脉流量，增加心肌收缩力，明显改善心肌缺血及缩小心梗范围，降低血小板聚集程度，有效抑制凝血和血栓形成，对脑缺血有一定的保护作用；研究又发现富含黄酮的竹叶提取物有多种生物学功效，如清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒等功能，在保健品、化妆品及食品添加剂方面应用广泛。
发明内容
本发明的目的旨在以我国资源十分丰富、且尚未得到有效开发利用的竹叶为植物材料，提供一种高效的竹叶黄酮提取物的制备方法，并应用于食品、保健品、化妆品中。
一种竹叶黄酮提取物的制备方法，其步骤为：
(1)称取粉碎至20目的竹叶粉于圆底烧瓶中，在所述的圆底烧瓶中加入60％的乙醇溶液形成竹叶粉乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶10至1∶8，所述竹叶粉质量单位为克，所述60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述60％的乙醇溶液事先用6M盐酸调pH值至3-4；
(2)将所述竹叶粉乙醇溶液室温放置2小时，使竹叶粉得到充分的浸泡，得到浸泡后的竹叶粉乙醇溶液；
(3)将所述浸泡后的竹叶粉乙醇溶液在电热套中加热至沸腾，加热回流3小时后，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第一次提取液；
(4)将倾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹叶粉残渣再加入60％的乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶5至1∶6，其中60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述竹叶粉质量单位为克，所述的60％乙醇溶液用6M盐酸调pH至3-4，加热回流2小时，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第二次提取液；
(5)将所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，将乙醇提取液采用高速冷冻离心机离心除沉淀，所述高速冷冻离心机的转速为每分钟8000转，在20℃的情况下离心30分钟，得到上清液；
(6)将所述上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，其中所述旋转蒸发仪真空度为0.09Mpa，水浴温度控制在50-55℃之间，脱除溶剂至脱溶瓶中剩余少量料液且能倾倒出来，停止脱溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷动干燥机中冷冻至干，得竹叶黄酮提取物.
附图说明
图1.调酸至pH3-4与不调酸得到的竹叶黄酮乙醇提取液色谱图
图2.绿竹叶黄酮提取物液相色谱图
具体实施方式
以下，关于本发明的竹叶黄酮提取物的制备方法，基于实施方式进行说明。
一种竹叶黄酮提取物的制备方法，其步骤为：
(1)称取粉碎至20目的竹叶粉于圆底烧瓶中，在所述的圆底烧瓶中加入60％的乙醇溶液形成竹叶粉乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶10至1∶8，所述竹叶粉质量单位为克，所述60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述60％的乙醇溶液事先用6M盐酸调pH值至3-4；
(2)将所述竹叶粉乙醇溶液室温放置2小时，使竹叶粉得到充分的浸泡，得到浸泡后的竹叶粉乙醇溶液；
(3)将所述浸泡后的竹叶粉乙醇溶液在电热套中加热至沸腾，加热回流3小时后，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第一次提取液；
(4)将倾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹叶粉残渣再加入60％的乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶5至1∶6，其中60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述竹叶粉质量单位为克，所述的60％乙醇溶液用6M盐酸调pH至3-4，加热回流2小时，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第二次提取液；
(5)将所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，将乙醇提取液采用高速冷冻离心机离心除沉淀，所述高速冷冻离心机的转速为每分钟8000转，在20℃的情况下离心30分钟，得到上清液；
(6)将所述上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，其中所述旋转蒸发仪真空度为0.09Mpa，水浴温度控制在50-55℃之间，脱除溶剂至脱溶瓶中剩余少量料液且能倾倒出来，停止脱溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷动干燥机中冷冻至干，得竹叶黄酮提取物。
得到的竹叶黄酮提取物的特征是：竹叶黄酮产品得率12-14％，其中总黄酮3.74-5.88％，可溶性总糖17.9-33.9％，蛋白质5.99-15.79％，粗脂肪8.9-19.9％，水分6.84-9.97％，灰分11.67-15.46％。
本发明在提取过程中所述的60％乙醇溶液需事先用盐酸调pH至3-4，用此酸性溶液提取竹叶黄酮的提取率远远高于不调酸的溶液提取率，原因是弱酸性条件下，竹叶黄酮化合物结构不仅不被破坏，而且乙醇溶液更容易穿透竹叶表面的蜡质层，加之在提取之前竹叶粉在60％乙醇溶液中浸泡2小时，这些都使得叶片组织中的黄酮化合物得到充分的提取.为了验证60％乙醇溶液调酸的效果，本发明在其他提取条件都相同的情况下，分别用盐酸调pH至3-4的60％乙醇溶液与不调酸度的60％乙醇溶液按照步骤(1)、(2)、(3)、(4)提取竹叶黄酮，得到步骤(5)所述的乙醇提取液，分别将调酸与不调酸得到的乙醇提取液做液相色谱测试，所得图谱见附图1，从附图1可以看出，调节pH至3-4得到的乙醇提取液总黄酮的峰面积与不调酸的峰面积比值接近3.
竹叶黄酮提取物的制备方法中，得到的乙醇提取液中有大量的沉淀物，该沉淀物颗粒粒径极小，使用常规的布氏漏斗过滤的方法，滤纸需频繁更换，滤液会有很大的损失，而且耗用时间较长，本发明采用高速离心机进行离心，使沉淀物分离，此种方法不仅保证了乙醇提取液损失少、操作所需时间短，而且也满足了除去大量沉淀物的要求。
本发明所述的竹叶黄酮提取物制备方法，采用的是乙醇-水体系，实现了整个过程的无污染操作。
对本发明中制备得到的竹叶黄酮提取物进行大鼠体内抗氧化活性研究，采用的研究方案是：体重80-100g的3周雄性大鼠购置于军事医学科学院动物实验中心，圈养在不锈钢网笼内，室内温度21-23℃，相对湿度55-60％，将大鼠随机分为5组，每组7只，分别为空白、负对照、正对照、低剂量提取物和高剂量提取物组。空白组大鼠喂养未加胆固醇饲料和每天灌生理盐水；负对照组大鼠喂养加胆固醇饲料和每天灌生理盐水；正对照组大鼠喂养加胆固醇饲料和每天灌VE，VE的用量按0.0025g/kg体重计算；低、高剂量组大鼠是喂养加胆固醇饲料和每天灌高、低剂量的竹叶黄酮提取物，其中高、低剂量组所用的竹叶黄酮提取物用量是按400mg/kg体重和100mg/kg体重计算。每组小鼠在喂养6周并禁食12小时之后，随机取7只大鼠测试肝脏和肾脏的SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA数据，表1为数据结果。
表1.胆固醇喂养、灌胃VE及竹叶黄酮提取物大鼠肝脏和肾脏的SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA数据结果(n＝7)
注：不同的上标字母表示差异显著(p＜0.05)
从表1可以看出，肝脏组织中，SOD活力高剂量组(喂胆固醇饲料及高剂量竹叶黄酮提取物)最小，与其他组的差异显著(p＜0.05)；肾脏中SOD活力同样是高剂量组最小，与其他组的差异显著(p＜0.05)，其次是低剂量组(喂胆固醇饲料及低剂量竹叶黄酮提取物)，高低剂量组差异显著(p＜0.05)，空白(喂无胆固醇基础饲料)、负对照(喂胆固醇饲料)及正对照组(喂胆固醇饲料及VE)的SOD活力偏大，与高剂量组差异显著(p＜0.05)；肝肾组织中高剂量组的SOD活力值都是最低的.
肝脏中，低剂量组的CAT活力最大，与负对照组和高剂量组差异不显著(p＞0.05)，与空白组及正对照组差异显著(p＜0.05)；肾脏中，空白组的CAT活力最大，与其他组差异显著(p＜0.05)。
关于GSH-Px活力，肝脏中，高剂量组的值最低，与其它四组差异显著(p＜0.05)；肾脏中，高剂量组的也偏低，但差异不显著(p＞0.05)。
关于MDA值，肝脏中，高剂量组的值最低，与正负对照组差异显著(p＜0.05)，与空白和低剂量组差异不显著(p＞0.05)，其中最高的是负对照组，它与其它各组差异显著(p＜0.05)；肾脏中，高、低剂量组的偏低，两组间差异不显著(p＞0.05)，与其它三组差异显著，负对照组的MDA值最大，其次是空白组，这两组间差异不显著(p＞0.05)，正对照组的MDA值居于中间，与其它四组差异显著(p＜0.05)。
从表1的大鼠肝肾的四个指标可以看出，酶活力指标高剂量组普遍偏低，MDA值也出现高剂量组偏低的现象。竹叶黄酮提取物对大鼠灌胃给药后有明显的抗氧化损伤作用，使肝肾组织中的过氧化脂质降解代谢产物中的MDA含量明显减少，尤其是高剂量给药组效果最明显，好于其它各组。
所获得的竹叶黄酮提取物可以应用于食品、保健品及化妆品中。作为天然食品添加剂和抗氧化剂，可应用到焙烤食品中，制备具有竹叶清香的蛋糕、蛋挞、月饼或蜜汁糕团，起到抗氧化、防腐保鲜作用；竹叶黄酮提取物可制备成糕点、糖果营养羹、饮品(即营养保健露)、茶、竹叶酒等各种食品、营养保健品；竹叶黄酮提取物也可以通过螯合Cu2+，以抑制酪氨酸酶的活性，从而减少黑色素的生成，在化妆品中添加竹叶黄酮提取物即可起到美白功效，竹叶黄酮提取物可用于护肤膏霜、护肤乳液、洁肤膏霜、洁肤乳液等化妆品中。
实施例1.制备绿竹叶黄酮提取物
称取200g粉碎至20目的绿竹(Dendrocalamopsis oldhami(Munro)Keng f.)叶粉于圆底烧瓶中，加入2000mL60％乙醇溶液，60％乙醇溶液事先用6M盐酸调至pH3-4，加热之前竹叶粉乙醇溶液室温浸泡2hr，然后在电热套中加热至沸腾，加热回流3hr，冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，料液为乙醇第一次提取液，竹叶粉残渣再用1200mL60％乙醇溶液(pH3-4)进行二次提取，加热回流2hr，冷却35-40℃后出料，料液为乙醇第二次提取液。合并乙醇第一次提取液及乙醇第二次提取液，将得到的乙醇提取液用高速冷冻离心机离心除沉淀，离心机转速为每分钟8000转，在20℃的情况下离心30分钟，得到上清液，将上清液在旋转蒸发仪上脱除溶剂，旋转蒸发仪真空度为0.09Mpa，水浴温度控制在50-55℃之间，脱除溶剂至脱溶瓶中剩余少量料液且能倾倒出来，停止脱溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷动干燥机中冷冻至干，得绿竹叶黄酮提取物。HPLC法计算提取物中总黄酮的含量为3.74％。附图2为绿竹叶黄酮提取物液相色谱图。
实施例2.竹叶黄酮食品添加剂
竹叶黄酮提取物4g，氧化锌0.4g，，维生素C 0.4g，分别用8g，2g，2g水溶解，在40℃以下搅拌均匀即可。
实施例3.竹叶黄酮护肤乳液的制备
配方 Wt％
1.竹叶黄酮提取物 0.1
2.凡士林 2.0
3.蜂蜡 0.5
4.脱水山梨醇倍半油酸酯 0.8
5.角鲨烷 5.0
6.聚氧乙烯油醚 1.2
7.1，3-丁二醇 5.0
8.乙醇 5.0
9.2％汉生胶 20.0
10.精制水 剩余量
具体制法：在70℃加热成分1、7、8和10，得到混合物A；在70℃加热成分2、3、4、5、6，得到混合物B。在A中加入B，再加入9，均质乳化，冷却到30℃，得到竹叶黄酮护肤乳液。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上的实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (2)
1.一种竹叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于：
(1)称取粉碎至20目的竹叶粉于圆底烧瓶中，在所述的圆底烧瓶中加入60％的乙醇溶液形成竹叶粉乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶10至1∶8，所述竹叶粉质量单位为克，所述60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述60％的乙醇溶液事先用6M盐酸调pH值至3-4；
(2)将所述竹叶粉乙醇溶液室温放置2小时，使竹叶粉得到充分的浸泡，得到浸泡后的竹叶粉乙醇溶液；
(3)将所述浸泡后的竹叶粉乙醇溶液在电热套中加热至沸腾，加热回流3小时后，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第一次提取液；
(4)将倾倒出所述乙醇第一次提取液后剩余的竹叶粉残渣再加入60％的乙醇溶液，所述竹叶粉质量与所述60％的乙醇溶液体积的比值范围为1∶5至1∶6，其中60％的乙醇溶液体积单位为毫升，所述竹叶粉质量单位为克，所述的60％乙醇溶液用6M盐酸调pH至3-4，加热回流2小时，将竹叶粉乙醇溶液冷却至35-40℃，倾倒出乙醇溶液，倾倒过程尽量不要将竹叶粉倒出，此乙醇溶液为乙醇第二次提取液；
(5)将所述乙醇第一次提取液和所述乙醇第二次提取液混合，得到乙醇提取液，将乙醇提取液采用高速冷冻离心机离心除沉淀，所述高速冷冻离心机的转速为每分钟8000转，在20℃的情况下离心30分钟，得到上清液；
(6)将所述上清液在旋转蒸发仪上进行浓缩，脱除溶剂，其中所述旋转蒸发仪真空度为0.09Mpa，水浴温度控制在50-55℃之间，脱除溶剂至脱溶瓶中剩余少量料液且能倾倒出来，停止脱溶，将脱除溶剂后的料液倒入表面皿中，置于真空冷动干燥机中冷冻至干，得竹叶黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的竹叶黄酮提取物的制备方法，所述的制备方法采用乙醇-水体系。
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Granted publication date: 20121121 Termination date: 20141120 |
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