CN109485744A - 一种泥鳅多糖提取方法及其应用 - Google Patents

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赵海英
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FUJIAN YOUXI XIANJIN PHARMACEUTICAL Co Ltd
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    • A23F3/34—Tea substitutes, e.g. matè; Extracts or infusions thereof

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体提供一种泥鳅多糖的提取方法，通过利用酶解的方式结合传统的水提醇沉，提高了泥鳅多糖的提取效率，同时酶的添加能够更有效地去除蛋白等杂质，保证泥鳅多糖纯度的同时还能避免其多糖活性结构遭到破坏，有利于其在制备食品、化妆品中抗氧化剂中的应用。

Description

一种泥鳅多糖提取方法及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种泥鳅多糖的提取方法及其应用。
背景技术
泥鳅的可食部含水分83％、蛋白质9.6％、脂肪3.7％、碳水化合物2.5％、灰1.2％；又含钙280mg/kg、磷720mg/kg、铁9mg/kg。肉的脂肪中，含不饱和的二十二碳六烯脂肪酸1.3-2.5％，显著量的十八碳三烯脂肪酸和二十二碳五烯脂肪酸等。全体100克中含维生素A70IU、维生素A原90IU、维生素B 30ug、维生素B2 440μg、尼克酸4.0mg。泥鳅全体或皮肤分泌的滑液入药，甘、平、无毒。其主要功效为补中益气、醒酒止渴、健脾和胃、清热解毒、祛湿邪，治消渴、水肿黄疽、痔疾、阳痰等症。泥鳅具有上述丰富的营养以及保健功能，究其原因是由于其含有泥鳅多糖、超氧化物歧化酶、多肽、凝集素等多种活性物质。其中泥鳅多糖主要是由岩藻糖、甘露糖、半乳糖等构成，可从泥鳅中提取分离得到，具有良好的抗氧化、免疫调节、保护肝损伤和抗疲劳的作用，尤其是抗氧化功能极为突出，目前已广泛应用于食品、化妆品中抗氧化剂的制备中。
众所周知，传统的多糖提取方法是水提醇沉，党晓研等(《超声波辅助提取泥鳅多糖的工艺优化》，渔业研究，2016,38(5)：375-376)在提取泥鳅多糖的时引入超声波辅助提取，通过超声波的空化效应增加原料的破碎，提高多糖的溶出，进而显著提高泥鳅多糖的提取效率。但是超声波辅助提取过程中可能会引起多糖结构遭到破坏，使提取得到的多糖活性降低。
随着生活节奏的加快，人们面临的生活和精神压力越来越大，亚健康问题越来越受到人们的重视。传统治疗亚健康的药品副作用大，甚至会对器官造成损害，成为困扰亚健康患者的一大难题。绿色、健康的治疗产品越来越受到人们的青睐。茶与酒是生活中常见的两种不同的饮品，经常喝茶不仅可提神醒脑、而且有助消化；适量饮酒可促进血液循环、有利于身体健康。
CN102125130A公开了一种原味枸杞养生茶，利用枸杞、藏茶、红枣、金银花、决明子、甘草等配制而成，制备方法在于将青海高原资源枸杞、藏茶、红枣、金银花、决明子、甘草等原料按配方经烘烤、调配、杀菌、包装成袋泡熬茶，冲服饮用。该原味枸杞养生茶携带方便，成本低，保健功效多，冲饮方便，适合外出旅游人群使用。然而上述养生茶对人体的抗衰老作用效果较差。
发明内容
基于上述现有技术的缺陷，本发明采用酶解的方式提高泥鳅多糖的提取效率，提取条件更加温和，在提高提取效率的同时，还能去除蛋白等杂质，并保证多糖的活性，有利于其在后续食品、化妆品等产品开发过程中的应用。
本发明提供一种泥鳅多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)将泥鳅冷冻干燥，粉碎，用丙酮浸泡脱水，过滤后烘干粉碎过筛，得泥鳅粉备用；
(2)在步骤(1)泥鳅粉中加入NaOH溶液浸泡，离心，上清液即为泥鳅粗多糖溶液；
(3)步骤(2)泥鳅粗多糖溶液加入复合酶水解，离心后，上清液浓缩，再加无水乙醇静置过夜，沉淀物用无水乙醇洗涤；
(4)加入savge溶液，离心去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，取水相；
(5)水相装入透析袋中，透析、干燥，即得泥鳅多糖提取物。
进一步地，所述泥鳅多糖的提取方法，包括以下步骤：
(1)将泥鳅冷冻干燥，粉碎，用丙酮浸泡15-20h脱水，过滤后于30-40℃烘干、粉碎、过80-100目筛，得泥鳅粉备用；
(2)在步骤(1)泥鳅粉中加入0.05-0.15mol/L的NaOH溶液浸泡12-20h，于2-4℃,4000-8000rpm离心10-20min，上清液即为泥鳅粗多糖溶液；
(3)步骤(2)泥鳅粗多糖溶液加入复合酶，30-35℃温浴2-3h，然后在沸水中灭活，于2-4℃,4000-8000rpm离心10-20min，上清液于40-50℃浓缩后，加3-5倍体积无水乙醇静置过夜，沉淀物用无水乙醇洗涤2-3次；
(4)加入savge溶液，于2-4℃,4000-8000rpm离心10-20min去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，取水相；
(5)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2-3天，干燥即得泥鳅多糖提取物。
更进一步地，所述步骤(3)中复合酶为木瓜蛋白酶：中性蛋白酶＝1：1配制而成。
更进一步地，所述步骤(4)中萃取剂为氯仿-正丁醇＝1：4配制而成。
本发明进一步提供通过上述制备方法制备得到的泥鳅提取物。
本发明还提供上述方法制备得到的泥鳅提取物在制备食品、化妆品抗氧化剂中的应用。
进一步地，上述方法制备得到的泥鳅提取物在制备养生茶中抗氧化剂中的应用。
本发明的目的在于克服背景技术中存在的问题，提供一种养生茶组合物及其制备方法，该养生茶组合物可以补血养颜，长期服用具有降血脂、抗老化的效果。
本发明的一个目的是提供一种养生茶组合物，包括藤霜茶、红枣、枸杞、黄秋葵和抗氧化添加剂；所述抗氧化添加剂为野刺梨和泥鳅多糖提取物。
进一步地，以重量份数计包括红枣50-70份、藤霜茶30-45份、枸杞30-45份、黄秋葵18-25份、抗氧化添加剂3-8份。
进一步地，所述泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:2-7。
进一步地，以重量份数计包括红枣55-65份、藤霜茶35-40份、枸杞35-40份、黄秋葵20-25份、抗氧化添加剂4-6份。
进一步地，所述泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:3-5。
藤霜茶富含钙、铁、锌、硒等多种对人体有益的微量元素及有效成份，以及茶多酚、黄酮等多种人体必须的营养成分。黄酮物质，主要有消炎镇痛，抗氧化作用。对口腔溃疡、牙龈炎，咽喉肿痛，有消炎止痛，化痰的作用，能够消除牙菌，预防口臭，适合讲话工作者饮用，如：教师，主持人，业务谈判人员，长期饮用可有效的保护嗓子，缓解咽喉疲劳。藤霜茶里的有效成份为蛇葡萄素及双氢杨梅素等黄酮类化合物，可减轻机体内氧化损伤，具有抗衰老的作用。还能减轻肝组织的变性和坏死程度，有保肝护肝之作用。长期饮用有延缓衰老的功效。藤霜茶里的植物黄酮能排出人体内的有害酸，酮体，铅，汞等重金属，清除血液里的血垢，是人体的清洁剂，具有活化体内细胞，抗氧化，预防慢性病的作用。藤霜茶全面的养生功效是任何茶叶无法比拟的，且比普通茶耐泡，入口先微苦后甘甜，生津止渴，回味无穷，口感极佳。长期饮用，无任何毒副作用，老少皆宜，安全可靠。
红枣含有大量的糖类物质，主要为葡萄糖，也含有果糖、蔗糖，以及由葡萄糖和果糖组成的低聚糖、阿拉伯聚糖及半乳醛聚糖等，并含有大量的维生素C、核黄素、硫胺素、胡萝卜素、尼克酸等多种维生素，具有较强的补养作用，能提高人体免疫功能，增强抗病能力。
中医认为，枸杞可以降低血糖、降低血压、抗脂肪肝、降低血液中的胆固醇、甘油三酯水平，对脂肪肝和糖尿病患者具有一定的疗效。现代研究也表明，它具有增强免疫力、延缓衰老、抗癌等作用，常被当作滋补调养的食物。
黄秋葵含有一种黏性液体，以及阿拉伯聚糖、半乳聚糖、鼠李聚糖、蛋白质、还有草酸钙等成分，经常食用，可消除疲劳、迅速恢复体力，同时黄秋葵还具有增强机体抵抗力，维护人体关节腔里关节膜和浆膜的光滑效果，削减脂类物质在动脉管壁上的堆积，避免肝脏和肾脏中结缔组织萎缩等功效。
泥鳅多糖提取物中含有泥鳅高聚糖和泥鳅寡糖，其单糖组分主要为半乳糖、岩藻糖和甘露糖，泥鳅多糖具有消除活性氧的作用，对DNA具有良好的保护作用，是一种较好的抗氧化剂，同时泥鳅多糖还具有护肝和抗炎作用。本发明泥鳅多糖提取物利用本领域常规提取方法，经水提、醇提、萃取、透析后，冷冻干燥即得。
野刺梨是目前世界上维生素C含量最高的水果，每100克果肉中含维生素C 2054～2725毫克，是我们熟知的柑橘与奇异果维生素C含量的100倍和9倍。而维生素C具有促进抗体形成的作用的，对于感冒等病毒感染疾病有很强的免疫力，同时对于一些传染性的疾病也有预防作用。除了维C之外，野刺梨还含有维生素B族、维生素E、单宁酸及硒和锌等微量元素。同时野刺梨中含有一种叫做超氧化物岐化酶的物质，而且含量还比较丰富，它可以减少体内自由基的破坏，起到抗衰老的作用；超氧化物岐化酶还能进入血管将沉积的自由基清除，保持血管的畅通，可以降脂降压，对心血管疾病有很好的预防作用，还能预防老年痴呆。
本发明人经过大量的研究发现，将野刺梨和泥鳅多糖提取物配合使用可大大提高养生茶组合物的抗老化功效。泥鳅多糖提取物可显著提高野刺梨中超氧化歧化酶的活性，并可以通过促进超氧化歧化酶从细胞表面释放而发挥消除自由基的作用，进而阻止自由基链反应，达到抗老化的效果。同时野刺梨和泥鳅多糖提取物的质量比对本发明的抗老化效果具有重要影响，泥鳅多糖提取物加入量过多，本发明的抗老化效果反而出现降低。
本发明的另一个目的是提供前述养生茶组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按配比称取原料，备用；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量3-6倍的水，加热煮沸，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量50-70％的乙醇水溶液进行醇沉，取上层清液进行浓缩，得到稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物溶解于其总重量20-40％的纯化水中，溶解的同时进行加热，得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
进一步地，步骤(4)中乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30-40％。
进一步地，步骤(4)中所得稠膏的相对密度为1.6-1.8。
进一步地，步骤(5)中所述细粉的粒度为80-100目。
进一步地，步骤(6)中所述泥鳅多糖提取物使用前先在氯化钠水溶液中超声处理，过滤，取滤液，滤液浓缩，真空干燥后使用。发明人发现泥鳅多糖提取物经过在氯化钠水溶液中超声处理后，使泥鳅多糖提取物粒径更加均匀，且去除了部分杂质，有效提高了本发明的抗老化效果。
本发明有益效果：
与现有技术相比，本发明涉及的养生茶组合物通过添加一定比例的抗氧化添加剂野刺梨和泥鳅多糖提取物，二者配合作用，可显著提高本发明的抗老化效果。同时野刺梨和泥鳅多糖提取物与藤霜茶、红枣、枸杞、黄秋葵，组分之间具有协同作用，相互补充，相互促进，大大提高了养生茶组合物的抗老化效果。另外本发明养生茶组合物还可以补血养颜，长期饮用具有降血脂、增强免疫力的效果。
具体实施方式
实施例1
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣50份、藤霜茶30份、枸杞45份、黄秋葵18份、抗氧化添加剂3份(其中抗氧化添加剂为泥鳅多糖提取物和野刺梨，泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:2)；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量3倍的水，加热煮沸80分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量50％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前先在质量分数为2％的氯化钠水溶液中超声处理20分钟，过滤，取滤液，并将滤液浓缩，浓缩液真空干燥后使用)溶解于其总重量20％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
实施例2
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣70份、藤霜茶45份、枸杞30份、黄秋葵25份、抗氧化添加剂8份(其中抗氧化添加剂为泥鳅多糖提取物和野刺梨，泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:7)；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量6倍的水，加热煮沸90分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量70％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为40％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前先在质量分数为2％的氯化钠水溶液中超声处理20分钟，过滤，取滤液，并将滤液浓缩，浓缩液真空干燥后使用)溶解于其总重量40％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
实施例3
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣60份、藤霜茶35份、枸杞35份、黄秋葵22份、抗氧化添加剂5份(其中抗氧化添加剂为泥鳅多糖提取物和野刺梨，泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:4)；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量5倍的水，加热煮沸70分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量60％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前先在质量分数为2％的氯化钠水溶液中超声处理20分钟，过滤，取滤液，并将滤液浓缩，浓缩液真空干燥后使用)溶解于其总重量30％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
对比例1
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣60份、藤霜茶35份、枸杞35份、黄秋葵22份、野刺梨5份；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量5倍的水，加热煮沸70分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量60％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物溶解于其总重量30％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
对比例2
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣60份、藤霜茶35份、枸杞35份、黄秋葵22份、泥鳅多糖提取物5份；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量5倍的水，加热煮沸70分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量60％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前先在质量分数为2％的氯化钠水溶液中超声处理20分钟，过滤，取滤液，并将滤液浓缩，浓缩液真空干燥后使用)溶解于其总重量30％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
对比例3
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣60份、藤霜茶35份、枸杞35份、黄秋葵22份、抗氧化添加剂5份(其中抗氧化添加剂为泥鳅多糖提取物和野刺梨，泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为2:1)；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量5倍的水，加热煮沸70分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量60％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前先在质量分数为2％的氯化钠水溶液中超声处理20分钟，过滤，取滤液，并将滤液浓缩，浓缩液真空干燥后使用)溶解于其总重量30％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
对比例4
采用以下配方和步骤制得本发明产品：
(1)按配比称取原料，备用：以重量份数计，红枣60份、藤霜茶35份、枸杞35份、黄秋葵22份、抗氧化添加剂5份(其中抗氧化添加剂为泥鳅多糖提取物和野刺梨，泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:4)；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量5倍的水，加热煮沸70分钟，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量60％的乙醇水溶液(乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30％)进行醇沉，24小时后取上层清液进行浓缩，得到相对密度为1.6-1.8的稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成80-100目的细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物(其中泥鳅多糖提取物使用前不在质量分数为2％的氯化钠水溶液中进行超声处理)溶解于其总重量30％的纯化水中，溶解的同时进行加热，加热温度75℃，充分溶解后得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
应用实施例
为了验证本发明所述的养生茶组合物的效果，下面将对养生茶组合物进行抗氧化实验研究。
1、抗氧化活性成分分析
多酚类物质具有很活泼的酚羟基，能提供大量的氢质子与自由基反应，清除多余的自由基，是非常理想的天然抗氧化剂。用Folin-ciocalteu试剂法测定实施例1所得产品的多酚类物质的含量，实验结果显示实施例1产品中多酚含量高达20.6％。
2、邻二氮菲-铁氧化法测定羟自由基
取0.75mmol/L邻二氮菲溶液1mL于试管中，依次加入0.2mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液2mL和水1mL，充分混匀后，加0.75mmol/L的FeSO4溶液1mL，混匀，加0.01％的H2O2 1mL于37℃下温育60min，于536nm处测吸光值，其值为A1；将其中的H2O2用1mL蒸馏水代替，测得吸光值A2；分别用1mL实施例和对比例样品溶液代替1mL水，分别测定不同浓度的吸光值A3。按照公式计算清除率d，d(％)＝(A3-A1)/(A2-A1)×100％。结果见表1。
组别 相对浓度(/L) 清除率(％)
实施例1 5g 81.2
实施例2 5g 85.4
实施例3 5g 86.0
对比例1 5g 68.7
对比例2 5g 63.9
对比例3 5g 72.1
对比例4 5g 75.0
3、邻苯三酚法测定超氧阴离子自由基
取4.5mLpH8.2的0.05mol/L的Tris-HCl缓冲溶液置于37℃水浴中温育30min，分别加入1mL实施例和对比例样品溶液和0.5mL 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后于37℃水浴中反应5min，加入1mL 0.2mol/L的HCl终止反应，以蒸馏水调零，分别在波长420nm下测定其吸光度A1，空白对照组以相同体积的上述Tris-HCl缓冲溶液代替样品溶液，其余处理条件相同，其吸光度为A2。按照公式计算清除率。清除率d(％)＝(A2-A1)/A2×100％。结果见表2。
组别 相对浓度(/L) 清除率(％)
实施例1 5g 92.1
实施例2 5g 94.6
实施例3 5g 94.9
对比例1 5g 73.0
对比例2 5g 68.9
对比例3 5g 79.8
对比例4 5g 84.6
由表1和表2可知，当只采用一种抗老化添加剂、或者加入过量的泥鳅多糖提取物时，其产品的清除率大大降低，同时将泥鳅多糖提取物使用前在氯化钠水溶液中进行超声处理，显著提高了产品的清除率。本发明通过添加一定比例的抗氧化添加剂野刺梨和泥鳅多糖提取物，二者协同作用，可显著提高本发明的抗老化效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种泥鳅多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将泥鳅冷冻干燥，粉碎，用丙酮浸泡脱水，过滤后烘干粉碎过筛，得泥鳅粉备用；
(2)在步骤(1)泥鳅粉中加入NaOH溶液浸泡，离心，上清液即为泥鳅粗多糖溶液；
(3)步骤(2)泥鳅粗多糖溶液加入复合酶水解，离心后，上清液浓缩，再加无水乙醇静置过夜，沉淀物用无水乙醇洗涤；
(4)加入savge溶液，离心去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，取水相；
(5)水相装入透析袋中，透析、干燥，即得泥鳅多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的泥鳅多糖提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中复合酶为木瓜蛋白酶：中性蛋白酶＝1：1配制而成。
3.根据权利要求1所述的泥鳅多糖提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中萃取剂为氯仿-正丁醇＝1：4配制而成。
4.一种组合物，其特征在于，包括藤霜茶、红枣、枸杞、黄秋葵和抗氧化添加剂；所述抗氧化添加剂为野刺梨和泥鳅多糖提取物。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，以重量份数计包括红枣50-70份、藤霜茶30-45份、枸杞30-45份、黄秋葵18-25份、抗氧化添加剂3-8份。
6.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述泥鳅多糖提取物和野刺梨的质量比为1:2-7。
7.一种如权利要求4所述的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)按配比称取原料，备用；
(2)将藤霜茶以传统制茶工艺进行切段、杀青、分筛、烘干、灭菌等步骤制成半成品藤霜茶茶叶，备用；
(3)将红枣、枸杞、黄秋葵、野刺梨加入到提取罐中，然后加入所述组分总重量3-6倍的水，加热煮沸，分离出残渣，得到提取液；
(4)向步骤(3)所得提取液中加入该提取液重量50-70％的乙醇水溶液进行醇沉，取上层清液进行浓缩，得到稠膏；
(5)将上述稠膏放入烘箱烘干，烘干后粉碎成细粉，得到有效成分提取物；
(6)将步骤(5)所得有效成分提取物和泥鳅多糖提取物溶解于其总重量20-40％的纯化水中，溶解的同时进行加热，得到有效成分溶解液；
(7)将步骤(6)所得有效成分溶解液以高压喷洒在半成品藤霜茶茶叶上，使两者充分混合，即得产品。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中乙醇水溶液中乙醇的质量分数为30-40％。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所得稠膏的相对密度为1.6-1.8。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)中所述泥鳅多糖提取物使用前先在氯化钠水溶液中超声处理，过滤，取滤液，滤液浓缩，真空干燥后使用。
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