CN105061625A - 一种泥鳅表皮多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
一种泥鳅表皮多糖的提取方法，包括以下步骤：丙酮萃取；泥鳅表皮多糖粗品制备；醇沉；酶解；萃取；透析；冻干。本发明方法提取的泥鳅多糖，在抗肿瘤、防衰老、抗炎症、降血脂等方面发挥作用，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域，市场前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是一种泥鳅表皮多糖的提取方法。
背景技术
泥鳅具有很高的营养价值。泥鳅的可食部含水分83%，蛋白质9.6%，脂肪3.7%，碳水化合物2.5%，灰分1.2%;又含钙280mg/kg，磷720mg/kg，铁9mg/kg。肉的脂肪中，含不饱和的二十二碳六烯脂肪酸1.3－2.5%，显著量的十八碳三烯脂肪酸和二十二碳五烯脂肪酸等。全体100克中含维生素A70IU，维生素A原90IU，维生素B30ug，维生素B2440μg，尼克酸4.0mg。
泥鳅的药用价值也很高。泥鳅全体或皮肤分泌的滑液入药，甘、平、无毒。其主要功效为补中益气、醒酒止渴、健脾和胃、清热解毒、祛湿邪，治消渴、水肿黄疽、痔疾、阳痰等症。民间常用其粘液治痈肿、中耳炎，用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌、骨髓炎等，疗效显著，近代用于治疗传染性肝炎和消渴病。泥鳅的营养价值很高，对许多疾病确有疗效，但目前关于泥鳅药用的有效成分(或部位)以及用现代方法对泥鳅进行炮制加工和药理观察的探讨较少。
泥鳅多糖具有很好的抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗病毒，降血糖、降血脂等功效，其提取方法报道较少。
发明内容
本发明的目的是，从传统中医药角度出发，采用现代提取工艺技术，提取泥鳅的表皮多糖。
本发明所采用的技术方案是：
本发明所提供的一种泥鳅表皮多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜活泥鳅扒皮，所得泥鳅皮冷冻干燥，再用高速捣碎机粉碎，用丙酮浸泡12h脱水，滤除丙酮液后置烘箱中50℃烘干，粉碎后过70目筛，得淡黄色粉末，即为含泥鳅表皮多糖的丙酮萃取粉；
(2)在泥鳅表皮丙酮萃取粉中加入0.2mol/LNaOH溶液，室温浸泡10h，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，上清液即为泥鳅表皮多糖粗品；
3)加入无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜。在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除上清液。将沉淀用无水乙醇洗涤2~3次，每次再离心分出上清液；
(4)用蒸馏水溶解沉淀的粗多糖，至沉淀浓度为4％，加入6％复合酶（木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1:1）水解蛋白等杂质成分，40℃温浴1h，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(5)加入savge溶液，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂氯仿-正丁醇(1∶4)萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(6)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天；
(7)将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末，即为提取得到的泥鳅表皮多糖。
上述的一种泥鳅表皮多糖的提取方法步骤(2)中NaOH溶液是0.2mol/LNaOH；步骤(4)中复合酶由木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1:1配制而成；步骤(5)中萃取剂由氯仿-正丁醇=1∶4配制而成。
本发明方法提取的泥鳅多糖，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域。
具体实施方式：
实施例l：
(1)称取新鲜活泥鳅500克，扒皮，所得泥鳅皮冷冻干燥，再用高速捣碎机粉碎，用丙酮浸泡12h脱水，滤除丙酮液后置烘箱中50℃烘干，粉碎后过70目筛，得淡黄色粉末，即为含泥鳅表皮多糖的丙酮萃取粉；
(2)在泥鳅表皮丙酮萃取粉中加入0.2mol/LNaOH溶液，室温浸泡10h，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，上清液即为泥鳅表皮多糖粗品；
3)加入无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜。在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除上清液。将沉淀用无水乙醇洗涤2~3次，每次再离心分出上清液；(4)用蒸馏水溶解沉淀的粗多糖，至沉淀浓度为4％，加入6％复合酶（木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1:1），40℃温浴1h，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(5)加入savge溶液，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂氯仿-正丁醇(1∶4)萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(6)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天；
(7)将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末1388mg，即为提取得到的泥鳅表皮多糖。
样品均在199nm处出现多糖特征吸收峰，在260nm处无蛋白吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白质和核酸等杂质成分。
实施例2：
(1)称取新鲜活泥鳅1000克，扒皮，所得泥鳅皮冷冻干燥，再用高速捣碎机粉碎，用丙酮浸泡12h脱水，滤除丙酮液后置烘箱中50℃烘干，粉碎后过70目筛，得淡黄色粉末，即为含泥鳅表皮多糖的丙酮萃取粉；
(2)在泥鳅表皮丙酮萃取粉中加入0.2mol/LNaOH溶液，室温浸泡10h，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，上清液即为泥鳅表皮多糖粗品；
3)加入无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜。在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除上清液。将沉淀用无水乙醇洗涤2~3次，每次再离心分出上清液；(4)用蒸馏水溶解沉淀的粗多糖，至沉淀浓度为4％，加入6％复合酶（木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1:1），40℃温浴1h，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(5)加入savge溶液，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂氯仿-正丁醇(1∶4)萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(6)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天；
(7)将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末2739mg，即为提取得到的泥鳅表皮多糖。
样品均在199nm处出现多糖特征吸收峰，在260nm处无蛋白吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白质和核酸等杂质成分。
Claims (6)
1.一种泥鳅表皮多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜活泥鳅扒皮，所得泥鳅皮冷冻干燥，再用高速捣碎机粉碎，用丙酮浸泡12h脱水，滤除丙酮液后置烘箱中50℃烘干，粉碎后过70目筛，得淡黄色粉末，即为含泥鳅表皮多糖的丙酮萃取粉；
(2)在泥鳅表皮丙酮萃取粉中加入NaOH溶液，室温浸泡10h，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，上清液即为泥鳅表皮多糖粗品；
(3)加入无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜；在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除上清液；将沉淀用无水乙醇洗涤2~3次，每次再离心分出上清液；(4)用蒸馏水溶解沉淀的粗多糖，至沉淀浓度为4％，加入6％复合酶水解蛋白等杂质成分，40℃温浴1h，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(5)加入savge溶液，在温度为5℃，转速为10000r/min的条件下，离心5min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(6)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天；
(7)将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末，即为提取得到的泥鳅表皮多糖。
2.如权利要求1所述的一种泥鳅表皮多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中NaOH溶液是：0.2mol/LNaOH。
3.如权利要求1所述的一种泥鳅表皮多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中复合酶是：由木瓜蛋白酶：中性蛋白酶=1:1配制而成。
4.如权利要求1所述的一种泥鳅表皮多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中萃取剂是：由氯仿-正丁醇=1∶4配制而成。
5.如权利要求1～4任一项所述的一种泥鳅表皮多糖的提取方法得到的泥鳅多糖。
6.一种如权利要求5所述的泥鳅多糖的用途，其特征在于，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域。
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|---|---|---|---|---|
| CN107198069A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-09-26 | 福建省水产研究所 | 一种泥鳅多糖饮品及其制备方法 |
| CN109265577A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-01-25 | 深圳市生命谷生命科技研究院 | 一种泥鳅多糖的制备方法 |
| CN109485744A (zh) * | 2018-05-21 | 2019-03-19 | 福建省尤溪仙锦药业有限公司 | 一种泥鳅多糖提取方法及其应用 |
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| CN109485744A (zh) * | 2018-05-21 | 2019-03-19 | 福建省尤溪仙锦药业有限公司 | 一种泥鳅多糖提取方法及其应用 |
| CN109265577A (zh) * | 2018-10-18 | 2019-01-25 | 深圳市生命谷生命科技研究院 | 一种泥鳅多糖的制备方法 |
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