CN104004110B - 一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖及其应用，可有效解决瓜子金多糖的提取及制备增强人体免疫功能的药物及保健品的问题，技术方案是，取瓜子金药材粉碎，加水；水浴提取2～3次，过滤，合并滤液，浓缩，得多糖浓缩液；加入乙醇直至含醇量为80％～90％，静置12～24h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；加水使粗多糖浓度为3～12mg/mL，上AB-8树脂柱，用8～10BV水洗脱，浓缩至相对密度为15～30mg/mL，加入乙醇至含醇量为80％～90％，静置12-24h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，即得，本发明提取工艺简单、方便，提取的瓜子金多糖可用于制备增强机体免疫功能药物及保健食品的开发，具有巨大的经济及社会效益。

Description

一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖及其应用

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖及其应用。

背景技术

多糖是存在于生物体内的一种大分子物质，近年来随着多糖研究的深入，证实多糖具有多方面的生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、降血糖、降血脂、提高免疫力等。并且从天然产物中提取的多糖生物活性显著，为天然产物中的有效成分。

瓜子金，最早出现在《植物名实图考》中，为远志科植物瓜子金PolygalajaponicaHoutt.的全草，性味辛、苦、平，归肺经，具有祛痰止咳，活血消肿，解毒止痛的功能。用于咳嗽痰多，咽喉肿痛；外治跌打损伤，疔疮疖肿，蛇虫咬伤[1]。瓜子金中含有皂苷、有机酸、黄酮类、寡糖酯等多种成分[2]，现代对瓜子金的研究主要集中在皂苷类[3-4]成分，而对瓜子金多糖的提取精制以及增强免疫功能的活性未见报道。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖及其应用，可有效解决瓜子金多糖的提取及制备增强人体免疫功能的药物及保健品的问题。

本发明解决的技术方案是，取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:10～30加水，搅拌均匀；70～100℃水浴提取2～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:1～3，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为80％～90％，4℃静置12～24h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为3～12mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:4～12，上样量为2～4BV，洗脱流速为1ml/min，用8～10BV水洗脱，浓缩至浓度为15～30mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为80％～90％，4℃静置12-24h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得灰白色、疏松粉末状的瓜子金多糖，有效用于制备增强机体免疫功能药物和保健品，实现从瓜子金中提取瓜子金多糖以及制备增强机体免疫功能药物和保健品中的应用，所述的水为自来水、或纯净水、或蒸馏水、或去离子水。

本发明提取工艺简单、方便，提取的瓜子金多糖可用于制备增强机体免疫功能药物及保健食品的开发，开辟了瓜子金药材的新的应用前景，具有巨大的经济及社会效益。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:10加水，搅拌均匀；70℃水浴提取2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:1，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为80％，4℃静置12h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为3mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:4，上样量为2BV，洗脱流速为1ml/min，用8BV水洗脱，浓缩至浓度为15mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为80％，4℃静置12h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得灰白色、疏松粉末状的瓜子金多糖，瓜子金多糖经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术)测定糖含量77.71％。

实施例2

取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:20加水，搅拌均匀；85℃水浴提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:2，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为85％，4℃静置18h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为8mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:8，上样量为3BV，洗脱流速为1ml/min，用9BV水洗脱，浓缩至浓度为23mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为85％，4℃静置18h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得灰白色、疏松粉末状的瓜子金多糖，瓜子金多糖经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术)测定糖含量78.88％。

实施例3

取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:30加水，搅拌均匀；100℃水浴提取2次，每次3h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:3，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为90％，4℃静置24h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为12mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:12，上样量为4BV，洗脱流速为1ml/min，用10BV水洗脱，浓缩至浓度为30mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为90％，4℃静置24h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得灰白色、疏松粉末状的瓜子金多糖，瓜子金多糖经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术)测定糖含量79.10％。

上述仅是给出的几个实施例，在研制中，发明人经反复多次实验，每次至少重复3次，均取得了相同或相近似的结果，提取物稳定，方法可靠，并对提取物进行反复的试验均取得了满意的技术效果，充分表明瓜子金多糖具有增强免疫的作用，已经为动物实验充分证明，

具体实验情况如下：

一、实验材料

1.试验动物：18～22g昆明种清洁级小鼠，雌雄各半。由河南医科大学实验动物中心提供。

2.实验试药：本发明的瓜子金多糖，血细胞染色液试剂(四川省新成生物科技有限公司)，豚鼠血清(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)，注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)，柠檬酸钠，磷酸氢二钠，氯化钾，磷酸二氢钾，酚红，葡萄糖，氯化钙。

二、试验方法

2.1瓜子金多糖对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

取昆明种小鼠60只，体重20g左右，雌雄各半，随机分6组，每组10只，分为：空白对照组、模型组、瓜子金多糖低、中、高剂量组(5mg/mL，7.5mg/mL,10mg/mL；0.2ml/10g)、阳性对照香菇多糖组(5mg/ml；0.2ml/10g)。除了空白对照组作为对照外，其余各组均腹腔注射浓度为8mg/mL的环磷酰胺溶液连续3天，建立环磷酰胺免疫低下小鼠模型。7～10天后除空白组小鼠外，其余组小鼠免疫功能全部降低。造模结束后第1天，香菇多糖组，瓜子金多糖低、中、高剂量组分别灌服相应的剂量溶液；对空白对照组、模型组小鼠灌服等体积生理盐水溶液，持续给药7天，每天给药1次。

对各组小鼠在给药第7天上午腹腔注射5％的鸡红细胞生理盐水混悬溶液0.5mL/只，注射后两小时给药，灌胃给药2h后(即给鸡红细胞混悬液4h后)，将小鼠脱颈椎，然后腹腔注射Hank’s应用液2.5mL，轻轻按揉小鼠腹部，在小鼠腹部皮肤剪开一小孔，用移液枪吸取腹腔液2mL置于塑料试管中，混匀，吸取20μL，推片，将载玻片置于铺有湿纱布的瓷盘中，37℃条件下保温30min，用生理盐水冲去附着粘着细胞，滴加血细胞染色液染色，水冲洗，晾干，在显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬情况，并计算吞噬百分率和吞噬指数，计算公式如下，结果见表1。

吞噬百分率(％)＝(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数)×100％

吞噬指数＝巨噬细胞吞噬鸡红细胞的总数/巨噬细胞总数，并计算得吞噬百分率和吞噬指数

表1瓜子金多糖对免疫低下小鼠吞噬功能的影响(n＝10)

从上表可以看出，空白组与模型组相比具有极显著的意义(P<0.01)，吞噬百分率和吞噬指数均显著下降，说明造模成功。与模型组相比，香菇多糖组和瓜子金多糖组均可显著提高吞噬指数和吞噬百分率，具有极显著意义(P<0.01)。

2.2多糖对环磷酰胺诱导免疫低下小鼠溶血素及溶血空斑形成的影响

小鼠规格、分组、给药剂量均同2.1，于给药第1天各组小鼠均腹腔注射5％鸡红细胞生理盐水混悬液0.2mL/只，进行免疫。于第7天给药后2h，小鼠眼球取血，离心，得到上层血清，血清稀释100倍。吸取1mL的血清稀释液、0.5mL5％鸡红细胞混悬液与0.5mL10％补体溶液，混匀，置于37℃水浴锅30min后，置于冰水中终止反应，另设不加血清空白管作对照，吸取上清液于540nm比色，得各组小鼠的溶血素细胞形成情况。

小鼠眼球取血后脱颈椎处死，取脾脏，两只小鼠的脾脏合并起来，匀浆，调脾细胞个数，使混悬液中脾细胞数为5×106个/mL。取调整后的脾细胞混悬液1mL，然后加入0.5mL0.2％鸡红细胞混悬液与1:10豚鼠血清0.5mL，混匀，置37℃水浴1h，另设不加脾细胞混悬液空白管作对照，2000r/min离心10min，取上清液于413nm处比色，得各组小鼠的溶血空斑细胞形成情况，结果见表2

表2.瓜子金多糖对免疫低下小鼠溶血素及溶血空斑形成的影响(x±s)

由表中可以看出，香菇多糖组和瓜子金多糖各剂量组均可明显提高免疫低下小鼠溶血素及溶血空斑的的形成，具有极显著性意义(P<0.01)

经动物实验验证，本发明中提取精制的瓜子金多糖类成分能显著提高机体免疫功能，完全具备开发为提高免疫力的保健类食品和免疫增强药的潜力及推广应用价值，该类成分可用于由过度疲劳、营养不全、生活无序、肿瘤病人放化疗等多种原因导致的免疫力低下的症状。开发研究瓜子金多糖不仅可以拓宽中药瓜子金应用范围，而且提高瓜子金的医用价值，开拓了制备增强免疫力药物和保健品的新途径，具有极大的社会价值和经济价值。

Claims (6)

1.一种从瓜子金中提取的瓜子金多糖，其特征在于，取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:10～30加水，搅拌均匀；70～100℃水浴提取2～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:1～3，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为80％～90％，4℃静置12～24h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为3～12mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:4～12，上样量为2～4BV，洗脱流速为1ml/min，用8～10BV水洗脱，浓缩至浓度为15～30mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为80％～90％，4℃静置12-24h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得。

2.根据权利要求1所述的从瓜子金中提取的瓜子金多糖，其特征在于，取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:10加水，搅拌均匀；70℃水浴提取2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:1，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为80％，4℃静置12h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为3mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:4，上样量为2BV，洗脱流速为1ml/min，用8BV水洗脱，浓缩至浓度为15mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为80％，4℃静置12h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得。

3.根据权利要求1所述的从瓜子金中提取的瓜子金多糖，其特征在于，取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:20加水，搅拌均匀；85℃水浴提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:2，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为85％，4℃静置18h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为8mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:8，上样量为3BV，洗脱流速为1ml/min，用9BV水洗脱，浓缩至浓度为23mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为85％，4℃静置18h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得。

4.根据权利要求1所述的从瓜子金中提取的瓜子金多糖，其特征在于，取瓜子金药材粉碎过2号筛，按固液重量比1:30加水，搅拌均匀；100℃水浴提取2次，每次3h，过滤，合并滤液，浓缩至固液体积比1:3，得多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入质量浓度为95％以上的乙醇并充分搅拌，直至含醇量为90％，4℃静置24h后，离心，用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗脱，得粗多糖；将得到的粗多糖加水使粗多糖浓度为12mg/mL，上AB-8树脂柱，柱径高比为1:12，上样量为4BV，洗脱流速为1ml/min，用10BV水洗脱，浓缩至浓度为30mg/mL，加入质量浓度为95％以上乙醇至含醇量为90％，4℃静置24h后，离心得多糖沉淀，将多糖沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤2-3次，真空干燥即得。

5.权利要求1或2-4中任意一项所述的从瓜子金中提取的瓜子金多糖在制备增强机体免疫功能药物中的应用。

6.权利要求1或2-4中任意一项所述的从瓜子金中提取的瓜子金多糖在制备增强机体免疫功能保健品中的应用。