CN112656820A - 一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法 - Google Patents
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，将桑黄菌种接种至桑黄菌丝体培养基中，将接种后的桑黄菌丝体培养基通过深层发酵培养，得到的桑黄菌丝体冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末，将S桑黄菌丝体粉末与含水率为30％‑50％的深共熔溶剂按照1:30‑1:50的质量比混合；将S混合液在超声提取器中提取30‑50分钟，在超速离心机中离心，取上清液；将上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液，将混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚。本发明能够对桑黄多酚进行更有效的提取，使桑黄菌丝体能够充分利用，不浪费资源，对环境友好。
Description
技术领域
本发明涉及桑黄活性成分高效利用领域，具体涉及一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法。
背景技术
桑黄是著名的药用真菌，被誉为“森林黄金”、“菌中极品”，其味甘辛，无毒。现代药理研究表明，桑黄具有提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗突变、抗病毒、降血糖、降血压、抗胃溃疡、保护肝脏等多种药理活性。目前已经发表的研究证实，桑黄多酚类物质是桑黄中一类重要活性物质，在抗氧化、抗衰老及降低血糖进而治疗糖尿病方面功效显著。
桑黄子实体为多年生，生长缓慢，野生桑黄资源量少，栽培困难，多年生子实体中有效成分因易纤维化而降低，因此不能够满足人们日益增长的需求。而以深层发酵生产的桑黄，在几项有效成分及功效上的表现并不比子实体差。而且桑黄发酵产品生长快速，成本降低，产品不发生纤维化，活性成分含量稳定，是桑黄开发的优势方向。
发明内容
为了提高桑黄多酚提取效率，本发明提供了一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，该高效制备方法制备简单，成本低，绿色环保，，简化了提取工艺，提高了桑黄多酚提取率，有广阔的应用前景。
本发明是这样实现的：
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为30％-50％的深共熔溶剂按照1：30-1:50的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30-50分钟，超声提取温度为50-70℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚。
进一步地：所述S4：运用深共熔溶剂法(deep eutectic solvents，DESs)提取桑黄中的活性成分多酚。
进一步地，所述S4中深共熔溶剂组合为氯化胆碱：苹果酸，摩尔比为1:1。
进一步地，所述S5中超声处理的频率为100-500Hz，超声处理功率为200-500W。
一种桑黄菌丝体液体培养基，该培养基按重量份比包以下组分：酵母浸粉20g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨12g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾1g/L，维生素B1 0.1g/L，余量为水。
本发明至少具有以下有益效果：
1、本发明利用冻干技术冻干桑黄菌丝体，不破坏桑黄中的有效物质，极大程度上保留了桑黄中酚类物质的药理活性。
2、本发明将超声提取和深共熔溶剂有机结合，超声能够使桑黄细胞壁破碎，促进细胞内活性成分的溶出，从而达到提高提取率的效果。
3、本发明所用的深共熔溶剂，制备简单，成本较低，绿色环保，这种提取简化了提取工艺，降低了提取成本，使桑黄多酚的提取率提高一倍以上，且提取的多酚活性更强，有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体的实施例，对本发明做详细的描述。
实施例1
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为30％的深共熔溶剂按照1：30的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为50℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为10.74mg/ml。
实施例2
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为40％的深共熔溶剂按照1：30的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为60℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为11.26mg/ml。
实施例3
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为40％的深共熔溶剂按照1：40的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取40分钟，超声提取温度为60℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为14.04mg/ml。
实施例4
一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为50％的深共熔溶剂按照1：50的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为70℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为10.86mg/ml。
对比例1
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与70％的乙醇按照1：30的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为50℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为5.61mg/ml。
对比例2
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与70％的乙醇按照1：30的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为60℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为5.85mg/ml。
对比例3
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与70％的乙醇按照1：40的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取40分钟，超声提取温度为60℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为6.03mg/ml。
对比例4
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与70％的乙醇按照1：50的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30分钟，超声提取温度为70℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚，测得桑黄多酚的含量为5.52mg/ml。
实验结果
分别将实施例1-实施例4和对比例1-对比例4得到的桑黄多酚进行测定，得到的测定数据见表I。
通过表I的结果可以看出，将超声提取和深共熔溶剂有机结合，超声能够使桑黄细胞壁破碎，促进细胞内活性成分的溶出，从而达到提高提取率的效果，通过实施例1和对比例1可以看出，桑黄多酚得率相较于醇提，提高94.3％；通过实施例2和对比例2可以看出，桑黄多酚得率相较于醇提，提高103.6％；通过实施例3和对比例3可以看出，桑黄多酚得率相较于醇提，提高153.88％；通过实施例4和对比例4可以看出，桑黄多酚得率相较于醇提，提高96.38％。
以上所述，仅为本发明的优选实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，本领域技术人员应该理解，在不脱离由权利要求及其等同物限定其范围的本发明的原理和精神的情况下，可以对这些实施例进行修改和完善，这些修改和完善也应在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：将桑黄菌种接种至桑黄液体培养基中，菌种接入后，摇动物料将菌种与桑黄液体培养基混匀；
S2：将接种后的桑黄液体培养基通过深层发酵培养，培养时间为11天，培养完成后，收集桑黄菌丝体，此时桑黄多酚含量达到最高；
S3：将S2得到的桑黄菌丝体放在-80℃的真空冻干机中冻干后并粉碎，过40目筛，得到桑黄菌丝体粉末；
S4：将S3得到的桑黄菌丝体粉末与含水率为30％-50％的深共熔溶剂按照1:30-1:50的质量比混合；
S5：将S4中的混合液在超声提取器中提取30-50分钟，超声提取温度为50-70℃；
S6：将S5中超声提取完成的混合液在超速离心机中离心10min，转速为5000r/min，取上清液；
S7：将S6得到的上清液经过D101大孔树脂分离纯化，得到精制桑黄多酚混合液；
S8：将S7得到的混合液经过旋转蒸发后除去乙醇，得到精制桑黄多酚。
2.如权利要求1所述的从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，其特征在于：所述S4：运用深共熔溶剂法(deep eutectic solvents，DESs)提取桑黄中的活性成分多酚。
3.如权利要求1所述的从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，其特征在于：所述S4中深共熔溶剂组合为氯化胆碱：苹果酸，摩尔比为1:1。
4.如权利要求1所述的从桑黄深层发酵菌丝体中获得桑黄多酚的高效制备方法，其特征在于：所述S5中超声处理的频率为100-500Hz，超声处理功率为200-500W。
5.一种桑黄菌丝体液体培养基，其特征在于：该培养基按重量份比包以下组分：酵母浸粉20g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨12g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾1g/L，维生素B1 0.1g/L，余量为水。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210416 |
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