CN112608949B - 一种三七花提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
一种三七花提取物的制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112608949B CN112608949B CN202011505186.8A CN202011505186A CN112608949B CN 112608949 B CN112608949 B CN 112608949B CN 202011505186 A CN202011505186 A CN 202011505186A CN 112608949 B CN112608949 B CN 112608949B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- notoginseng
- flower extract
- notoginseng flower
- extracting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 125
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 title abstract description 8
- 235000003181 Panax pseudoginseng Nutrition 0.000 title abstract description 8
- 241000180649 Panax notoginseng Species 0.000 claims abstract description 79
- 235000003143 Panax notoginseng Nutrition 0.000 claims abstract description 79
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 50
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 33
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 25
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 22
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 15
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 13
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 13
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 13
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 13
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 13
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 11
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 11
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 11
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 11
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 11
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 11
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 11
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 9
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 abstract description 24
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 14
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical class CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000009759 San-Chi Substances 0.000 description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 6
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N Dopaquinone Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N L-dopaquinone Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 235000002791 Panax Nutrition 0.000 description 1
- 241000208343 Panax Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012084 conversion product Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
- A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
Abstract
本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种三七花提取物的制备方法及其应用。三七花提取物的制备方法包括提取步骤：使用酿酒酵母发酵三七花粉碎后获得的药粉，获得发酵液。本方案可以解决三七花提取物美白效果不佳的技术问题。本方案制备的三七花提取物具有抑制酪氨酸酶活性的功能，可以有效地抑制黑色素的生成，从而实现对皮肤的美白。所以本方案获取的三七花提取物可以用于各类型的美白产品的制备中，进一步拓展了三七花的应用范围。
Description
技术领域
本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种三七花提取物的制备方法及其应用。
背景技术
三七花(Sanqi Flower Buds)为五加科人参属植物三七的花序。三七花有良好的止血功效，促进各类血细胞分裂生长，能明显提高失血性贫血病理模型的血红细胞数量，对失血性贫血具有较好的治疗作用。近年来，一些研究报道显示，三七花提取物具有美白功效，可以用于相关美白产品的开发。但是，对于三七花中具有美白效果的成分的研究还不够深入透彻，三七花的美白功效还未得到充分发掘和开发。现阶段的三七花提取物的美白效果尚不够理想，亟需研发一种适应于三七花的提取物制备工艺，以提高三七花提取物的美白功效，从而拓展三七花的应用范围。
发明内容
本发明意在提供一种三七花提取物的制备方法，以解决三七花提取物美白效果不佳的技术问题。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种三七花提取物的制备方法，包括提取步骤：使用酿酒酵母发酵三七花粉碎后获得的药粉，获得发酵液。
本方案的原理及优点是：使用酿酒酵母对三七花粉碎后获得的药粉进行发酵处理(微生物辅助提取)，酿酒酵母可以充分分解药粉的细胞壁等结构，实现对目的成分的充分分离和提取。并且酿酒酵母还可以对药粉中的活性成分进行分解或者转化，通过上述生物转化，获得的提取物的生物活性得以增强。在本方案中，发明人尝试使用酿酒酵母对药粉进行提取并同时进行生物转化，获得的三七花提取物具有优良的抑制酪氨酸酶活性。因为抑制酪氨酸酶的活性可以有效地抑制黑色素的生成，从而实现对皮肤的美白，所以本方案获取的三七花提取物可以用于各类型的美白产品(特别是化妆品)的制备，进一步拓展了三七花的用途。三七花作为一种药食同源的中草药，其成分和三七根(主要入药部位)有所不同，更具有开发成为新型化妆品的潜力。另外，发明人曾经尝试使用枯草芽孢杆菌在内的其他菌种进行微生物辅助提取，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的活性不如本方案获得的产物，这说明了使用酿酒酵母可以对三七花的功效成分有效地分离和提取，并将功效成分分解和转化，获得的产物具有较强的抑制酪氨酸酶的活性，而使用其他类型的微生物却不能达到理想的效果。
进一步，还包括纯化步骤：先使用氯仿萃取所述发酵液，取水相获得萃取液Ⅰ；然后使用乙酸乙酯萃取所述萃取液Ⅰ，取水相获得萃取液Ⅱ。
采用上述技术方案，使用氯仿和乙酸乙酯先后萃取纯化发酵液，可将功效成分富集，排除无美白功效的成分，最后获得的萃取液Ⅱ中含有大量的可抑制酪氨酸酶的活性的物质。
进一步，在提取步骤中，酿酒酵母在培养液中发酵所述药粉，所述培养液的成分为：酵母提取物0.75-1.50g/L、蛋白胨2.5-3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00-1.50g/L、硫酸镁0.25-0.50g/L、乳糖2-3g/L、硫酸锰0.10-0.20g/L、氯化铁0.01-0.10g/L、氯化钙0.01-0.08g/L、磷酸氢二钾1.20-1.50g/L、乙酸钠3.5-4.5g/L、吐温80 0.5-0.8ml/L。
采用上述技术方案，酿酒酵母在上述培养基中具有优良的分离提取功效成分以及生物转化上述功效成分的活性。发明人尝试调整上述培养基，例如增加酵母提取物和蛋白胨的含量、使用其他碳源或者使用纯水代替该培养液，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的效果并不理想。
进一步，在提取步骤中，每1g所述药粉中加入20-40ml所述培养液，获得前培养体系；对前培养体系进行灭菌处理后，加入酿酒酵母，获得培养体系；酿酒酵母在培养体系中的质量分数为4-6％。
采用上述技术方案，上述料液比和酿酒酵母的接种量可保证对功效成分进行充分的分离提取以及生物转化。
进一步，在提取步骤中，将所述培养体系置于27-32℃恒温摇床中，在80-120rpm的转速下培养48-60h，然后取液相部分获得所述发酵液。
采用上述技术方案，上述发酵条件可保证对功效成分进行充分的分离提取以及生物转化。
进一步，在纯化步骤中，所述氯仿和所述发酵液的体积比为1:1；所述乙酸乙酯和所述发酵液的体积比为1:1。
采用上述技术方案，上述萃取剂和待萃取溶液的比例可以保证目的成分得到充分富集，而非功效成分得以分离和排除。
进一步，在纯化步骤中，干燥处理所述萃取液Ⅱ，获得干粉状的三七花提取物。
采用上述技术方案，干粉状的三七花提取物轻巧便携，并且由于除水充分，其不易腐败变质，为提取物的进一步应用做好准备。
进一步，在提取步骤中，所述培养液的成分为：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、乳糖2.5g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。
采用上述技术方案，上述培养基为最优配置，可更好地促进酿酒酵母生长和发挥功效。
进一步，在提取步骤中，所述药粉的粒径为30-50目。
采用上述技术方案，将药粉处理成30-50目，药粉颗粒和培养液以及酿酒酵母之前可实现充分接触，提高提取和生物转化的效率。
进一步，一种三七花提取物的制备方法在制备美白功能的化妆品中的应用。
采用上述技术方案，本方案制备的三七花提取物具有良好的酪氨酸酶抑制活性，可以应用于制备美白功能的化妆品的实践操作中。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
实施例1
取三七花(饮片，即干制三七花，参照《云南省食品安全地方标准》DBS 53/023-2017制作)，破碎后过40目，获得药粉1kg。将药粉加入培养液中(获得前培养体系)，然后121℃、0.1MPa湿热灭菌30min，再进行酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，
18824)的接种(需待培养液冷却)。其中，培养液的成分以及含量为：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、乳糖2.5g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。药粉和培养液的质量体积比为1g：30ml，酿酒酵母的接种量为5％(酿酒酵母在培养体系中的质量分数)，完成接种后获得培养体系。将培养体系放置于30℃恒温摇床(100rpm)中培养54h。培养结束之后，将培养体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵液。用发酵液等体积的氯仿萃取发酵液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。然后使用与萃取液Ⅰ等体积的乙酸乙酯对萃取液Ⅰ进行萃取分层，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理5h，得到浸膏，然后对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物(含水量达到5％以下)。1kg药粉提取获得三七花提取物217.36g。
实施例2
取三七花(饮片)，破碎后过30目，获得药粉。将药粉加入培养液中(获得前培养体系)，然后121℃、0.1MPa湿热灭菌30min，再进行酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，
18824)的接种(需待培养液冷却)。其中，培养液的成分以及含量为：酵母提取物0.75g/L、蛋白胨2.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00g/L、硫酸镁0.25g/L、乳糖2g/L、硫酸锰0.10g/L、氯化铁0.01g/L、氯化钙0.01g/L、磷酸氢二钾1.20g/L、乙酸钠3.5g/L、吐温80 0.5ml/L。药粉和培养液的质量体积比为1g：20ml，酿酒酵母的接种量为4％(酿酒酵母在培养体系中的质量分数)，完成接种后获得培养体系。将培养体系放置于27℃恒温摇床(80rpm)中培养48h。培养结束之后，将培养体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵液。用发酵液等体积的氯仿萃取发酵液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。然后使用与萃取液Ⅰ等体积的乙酸乙酯萃取对萃取液Ⅰ进行萃取分层，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理5h，得到浸膏，然后对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物(含水量达到5％以下)。1kg药粉提取获得三七花提取物222.47g。
实施例3
取三七花(饮片)，破碎后过50目，获得药粉。将药粉加入培养液中(获得前培养体系)，然后121℃、0.1MPa湿热灭菌30min，再进行酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，
18824)的接种(需待培养液冷却)。其中，培养液的成分以及含量为：酵母提取物1.50g/L、蛋白胨3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.50g/L、乳糖3g/L、硫酸锰0.20g/L、氯化铁0.10g/L、氯化钙0.08g/L、磷酸氢二钾1.50g/L、乙酸钠4.5g/L、吐温80 0.8ml/L。药粉和培养液的质量体积比为1g：40ml，酿酒酵母的接种量为6％(酿酒酵母在培养体系中的质量分数)，完成接种后获得培养体系。将培养体系放置于32℃恒温摇床(120rpm)中培养60h。培养结束之后，将培养体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵液。用发酵液等体积的氯仿萃取发酵液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。然后使用与萃取液Ⅰ等体积的乙酸乙酯萃取对萃取液Ⅰ进行萃取分层，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理5h，得到浸膏，然后对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物(含水量达到5％以下)。1kg药粉提取获得三七花提取物212.39g。
本方案设置对比例1-对比例10，具体情况如下：
对比例1-对比例5基本同实施例1，不同点是对于培养液的成分以及含量进行了调整，具体调整情况如下：对比例1的培养液的具体情况如下：酵母提取物3g/L、蛋白胨8g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、乳糖2.5g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。1kg药粉提取获得三七花提取物237.40g。对比例2的培养液的具体情况如下：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。1kg药粉提取获得三七花提取物219.33g。对比例3的培养液的具体情况如下：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、甘油2.5g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。1kg药粉提取获得三七花提取物234.91g。对比例4的培养液的具体情况如下：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、乳糖2.5g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L。对比例5使用等量纯水代替培养液。1kg药粉提取获得三七花提取物208.52g。
对比例6-对比例7基本同实施例1，不同点是对发酵液采用的萃取方法不同，具体为：对比例6采用的萃取方法为：用发酵液等体积的氯仿萃取发酵液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅰ进行减压蒸发处理5h，得到浸膏，然后对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物。1kg药粉提取获得三七花提取物304.31g。对比例7采用的萃取方法为：在获得萃取液Ⅱ之后，使用萃取液Ⅱ等体积的水饱和正丁醇对萃取液Ⅱ进行萃取操作，静置分层后取水相(萃取液Ⅲ)和正丁醇相(萃取液Ⅳ)。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪分别对萃取液Ⅲ和萃取液Ⅳ进行减压蒸发处理5h，得到相应的浸膏，然后分别对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物A(来自萃取液Ⅲ)和三七花提取物B(来自萃取液Ⅳ)。1kg药粉提取获得三七花提取物A 103.76g(含水量达到5％以下)，提取获得三七花提取物B 93.88g(含水量达到5％以下)。
对比例8
本对比例利用传统的乙醇提取的方法对三七花进行提取，具体方案如下：
取三七花(饮片)，破碎后过40目，获得药粉。6倍量(1kg药粉对应6L乙醇)体积分数为75％乙醇室温浸泡1h，然后回流提取3次，每次2h，完成提取后过滤并合并滤液，获得取提取液。用提取液等体积的氯仿萃取提取液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。然后使用与萃取液Ⅰ等体积的乙酸乙酯对萃取液Ⅰ进行萃取操作，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理5h，得到浸膏，然后对浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七花提取物。1kg药粉提取获得三七花提取物158.39g(含水量达到5％以下)。
对比例9基本同实施例1，不同点在于，本对比例使用枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，
6051)替代酿酒酵母。1kg药粉提取获得三七花提取物179.97g(含水量达到5％以下)。对比例10基本同实施例1，不同点在于，本对比例使用三七根(常规入药部分)制作的饮片代替三七花饮片作为原材料来进行提取和纯化，获得三七根提取物。1kg药粉提取获得三七花提取物137.48g(含水量达到5％以下)。
实验例
本实验例对实施例1-3和对比例1-10制备的干粉状的提取物来进行酪氨酸酶抑制实验(其中，实施例1-3和对比例1-9是三七花提取物，对比例10是三七根提取物)。体内黑色素的生成是以酪氨酸为基质，通过酪氨酸酶的作用而形成，抑制酪氨酸酶的活性，可以有效地抑制黑色素的生成，从而实现对皮肤的美白。在酪氨酸酶催化反应生成黑色素的过程中，会产生多巴醌，该物质可以用分光光度计在475nm处测量。具体实验过程如下：
先将干粉状的提取物(三七花或者三七根)用双蒸水稀释，获得待测样品溶液。在待测样品溶液中，提取液的浓度为0.2mg/ml(即每0.2mg的干粉状的提取物使用1ml双蒸水溶解)。在试管中1ml pH6.8的磷酸盐缓冲液和质量分数为0.15％的L-酪氨酸溶液，充分混匀后，在室温下孵育10min，然后在试管中加入1g马铃薯(使用切碎后的马铃薯肉，用以提供酪氨酸酶)，然后继续在室温下孵育10min，获得待测体系，转移待测体系到比色皿中，在475nm处测量吸光光度值(记为A1)。在试管中加入1ml pH6.8的磷酸盐缓冲液和质量分数为0.15％的L-酪氨酸溶液，以及1ml的待测样品溶液，充分混匀后，在室温下孵育20min，获得待测体系，转移待测体系到比色皿中，在475nm处测量吸光光度值(记为A2)。在试管中加入1ml pH6.8的磷酸盐缓冲液和质量分数为0.15％的L-酪氨酸溶液，以及1ml的待测样品溶液，充分混匀后，在室温下孵育10min，然后在试管中加入1g马铃薯(使用切碎后的马铃薯肉，用以提供酪氨酸酶)，然后继续在室温下孵育10min，获得待测体系，转移待测体系到比色皿中，在475nm处测量吸光光度值(记为A3)。在试管中1ml pH6.8的磷酸盐缓冲液和质量分数为0.15％的L-酪氨酸溶液，充分混匀后，在室温下孵育20min，获得待测体系，转移待测体系到比色皿中，在475nm处测量吸光光度值(记为A4)。酪氨酸酶的抑制率的计算方法为：抑制率(％)＝((A1-A2)-(A3-A4))/(A1-A2)×100％。针对实施例1-实施例3和对比例1-10获得的待测样品溶液进行上述检测，针对每一份待测样品溶液均测量A1-A4值，对同一待测样品溶液重复测量3次，然后计算平均抑制率，检测结果如表1所示。
表1：对实施例1-3和对比例1-10制备的提取的酪氨酸酶抑制率检测结果(平均值±标准方差，n＝3)
注：*表示与实施例1组相比有显著差异(T检验，p小于0.05)；
根据表1数据可知，实施例1-实施例3中提取获得的三七花提取物有较好的抑制酪氨酸酶的功效，而对比例8采用传统的乙醇回流的方式进行三七花提取物的制备，获得的产物的美白功效不如采用微生物辅助提取法所获得产物的功效。使用微生物辅助提取法可以对三七花形成的药粉中的功效成分实现充分提取，并且还可以一定程度上分解转化一些功效成分，获得的转化产物的美白效果更佳。对比例9使用枯草芽孢杆菌代替酿酒酵母，但是枯草芽孢杆菌对于三七花形成的药粉的提取和转化的效果较酿酒酵母差，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的活性差。对比例1-对比例5对于培养液的组成进行了测试，实验结果显示：对比例1增加培养液中酵母提取物和蛋白胨的含量，会对酿酒酵母的分解和发酵作用产生负面影响，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的效果不佳。对比例2不使用乳糖作为碳源，对比例3使用甘油作为碳源代替乳糖，都会对三七花提取物的抑制酪氨酸酶的效果产生负面影响。这说明碳源的使用情况会对微生物辅助提取的效果产生较大影响，发明人分析原因在于：乳糖对酿酒酵母有一定的毒性作用，酿酒酵母在其作用下会产生一定的应激反应，进而增加了酿酒酵母的辅助提取效果。对比例4的培养液中没有使用吐温、硫酸锰、氯化铁和氯化钙，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的效果不佳，这说明上述物质的加入对实现目的产物的充分提取和转化非常重要。对比例5使用纯水代替培养液，酿酒酵母生活在无营养环境中，其活性不佳，获得的三七花提取物的抑制酪氨酸酶的效果也不理想。对比例6减少了乙酸乙酯萃取步骤，功效成分没有进一步富集，所获得的产物的抑制酪氨酸酶的效果较实施例1-3差。对比例7使用水饱和正丁醇进一步萃取纯化萃取液Ⅱ，获得水相(萃取液Ⅲ)和正丁醇相(萃取液Ⅳ)。三七花提取物A(来自萃取液Ⅲ)的酪氨酸酶抑制效果和三七花提取物B(来自萃取液Ⅳ)的酪氨酸酶抑制效果均不如实施例1-3的三七花提取物，这说明美白功效成分不能通过水饱和正丁醇来进行富集和分离，三七花提取物A和三七花提取物B联合(即使用实施例1-3的三七花提取物)使用才能获得理想的美白效果。对比例10是针对三七根进行提取，由于根部的细胞组成以及功效成分的类别和三七花有一定区别，采用本方案的提取方法，不能有效提取获得目的产物。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (4)
1.一种三七花提取物的制备方法，其特征在于，包括提取步骤：
每1g三七花粉碎后获得的药粉中加入20-40ml培养液，获得前培养体系；对前培养体系进行灭菌处理后，加入酿酒酵母，获得培养体系；酿酒酵母在培养体系中的质量分数为4-6％；
将所述培养体系置于27-32℃恒温摇床中，在80-120rpm的转速下培养48-60h，然后取液相部分获得发酵液；
所述培养液的成分为：酵母提取物0.75-1.50g/L、蛋白胨2.5-3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00-1.50g/L、硫酸镁0.25-0.50g/L、乳糖2-3g/L、硫酸锰0.10-0.20g/L、氯化铁0.01-0.10g/L、氯化钙0.01-0.08g/L、磷酸氢二钾1.20-1.50g/L、乙酸钠3.5-4.5g/L、吐温800.5-0.8ml/L；
还包括纯化步骤：先使用氯仿萃取所述发酵液，取水相获得萃取液Ⅰ；然后使用乙酸乙酯萃取所述萃取液Ⅰ，取水相获得萃取液Ⅱ；干燥处理所述萃取液Ⅱ，获得干粉状的三七花提取物；所述氯仿和所述发酵液的体积比为1:1；所述乙酸乙酯和所述发酵液的体积比为1:1。
2.根据权利要求1所述的一种三七花提取物的制备方法，其特征在于，在提取步骤中，所述培养液的成分为：酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.0g/L、柠檬酸氢二铵1.3g/L、硫酸镁0.40g/L、乳糖2.5g/L、硫酸锰0.15g/L、氯化铁0.05g/L、氯化钙0.05g/L、磷酸氢二钾1.30g/L、乙酸钠4.0g/L、吐温80 0.7ml/L。
3.根据权利要求2所述的一种三七花提取物的制备方法，其特征在于，在提取步骤中，所述药粉的粒径为30-50目。
4.根据权利要求3所述的一种三七花提取物的制备方法在制备美白功能的化妆品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011505186.8A CN112608949B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种三七花提取物的制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011505186.8A CN112608949B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种三七花提取物的制备方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112608949A CN112608949A (zh) | 2021-04-06 |
| CN112608949B true CN112608949B (zh) | 2022-11-04 |
Family
ID=75241148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011505186.8A Active CN112608949B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种三七花提取物的制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112608949B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116832073B (zh) * | 2023-06-30 | 2024-01-02 | 金七药业股份有限公司 | 一种三七花提取物的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103356471A (zh) * | 2013-05-26 | 2013-10-23 | 上海珍馨化工科技有限公司 | 剥离型三七面膜及其制备方法 |
| WO2018112666A1 (en) * | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Klox Technologies Inc. | Biophotonic compositions comprising lichen extract and their use to treat skin disorders |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101269098A (zh) * | 2007-03-23 | 2008-09-24 | 中天生物科技股份有限公司 | 具有抑制癌细胞效果的三七发酵液及其制备方法 |
| CN108310672A (zh) * | 2012-09-14 | 2018-07-24 | 克洛克斯科技公司 | 美容生物光子组合物 |
| CN104825383A (zh) * | 2015-05-28 | 2015-08-12 | 云南白药集团股份有限公司 | 一种三七发酵物提取方法及应用 |
| JP6859099B2 (ja) * | 2016-12-28 | 2021-04-14 | 小林製薬株式会社 | 男性ホルモン増加促進用組成物 |
| CN106947675A (zh) * | 2017-04-25 | 2017-07-14 | 云南宏斌绿色食品集团有限公司 | 发酵鲜花与多菌种复合微生物发酵甜白酒及其制作方法 |
| CN107233244B (zh) * | 2017-06-08 | 2020-03-31 | 无限极（中国）有限公司 | 一种三七发酵液的制备方法及其应用 |
| CN107151583B (zh) * | 2017-06-09 | 2021-04-02 | 红河啤酒有限公司 | 一种添加三七花的啤酒及其制备方法 |
| CN108653144B (zh) * | 2018-07-11 | 2021-02-09 | 广州香蒲兰电子商务有限公司 | 一种美白化妆品 |
| CN110974735A (zh) * | 2019-09-23 | 2020-04-10 | 田宇 | 植物精华酵母软膜粉 |
| CN111512915A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-08-11 | 西南林业大学 | 一种防治三七根结线虫病的育苗方法 |
-
2020
- 2020-12-18 CN CN202011505186.8A patent/CN112608949B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103356471A (zh) * | 2013-05-26 | 2013-10-23 | 上海珍馨化工科技有限公司 | 剥离型三七面膜及其制备方法 |
| WO2018112666A1 (en) * | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Klox Technologies Inc. | Biophotonic compositions comprising lichen extract and their use to treat skin disorders |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112608949A (zh) | 2021-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111317694B (zh) | 一种杜仲发酵提取液及其制备方法和其在化妆品中的应用 | |
| CN102357212B (zh) | 采用超临界co2萃取的复方制品及其制备方法 | |
| CN107189949B (zh) | 米根霉ljh3及在生物转化槐角苷制备染料木素中的应用 | |
| CN113912750B (zh) | 一种发酵预处理提取灵芝子实体多糖的方法 | |
| CN112608949B (zh) | 一种三七花提取物的制备方法及其应用 | |
| CN100394928C (zh) | 樟芝菌丝体发酵提取物在制备抗辐射损伤药物中的应用 | |
| CN103815279A (zh) | 一种富含辅酶q10红曲及其制备方法 | |
| CN107987178A (zh) | 一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法 | |
| CN112451554B (zh) | 一种三七茎叶提取物的制备方法及其应用 | |
| CN116355816A (zh) | 一种发酵翅果油种子的微生物及其降血脂组合物 | |
| CN105998222A (zh) | 益生菌发酵生附子的组合物及其制备方法和应用 | |
| TWM590969U (zh) | 具有仿生物間質系統的芸香科植物發酵液微粒結構 | |
| CN110833187A (zh) | 一种酵素原液及其制备方法 | |
| CN113502230B (zh) | 猴头菇菌株及其培养方法、猴头菌-人参双向固体发酵方法和高效转化稀有人参皂苷的方法 | |
| CN115820783A (zh) | 一种刺梨发酵获得多种三萜的制备方法 | |
| CN112656829B (zh) | 一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法及其应用 | |
| KR20120053564A (ko) | 영지발효삼 음료 제조방법과 그 음료 | |
| CN115024480A (zh) | 利用三七废渣制备香精香料的方法 | |
| CN111763705B (zh) | 一种人参皂苷组合物的制备方法及其应用 | |
| CN108969430B (zh) | 一种西洋参发酵液作为护肤品或护肤品添加剂的应用 | |
| CN101085051A (zh) | 一种何首乌发酵炮制的方法 | |
| CN111743837A (zh) | 一种具有美白功效的发酵中药面膜及其制备方法 | |
| CN105918547B (zh) | 一种双孢菇沙棘速溶茶及其制备方法 | |
| CN114224800B (zh) | 一种蔷薇属植物提取物及其制备方法、组合物及应用 | |
| CN102908390A (zh) | 含有粗多糖的五味子蓝靛果口服液的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| OL01 | Intention to license declared | ||
| OL01 | Intention to license declared |