CN104825383A - 一种三七发酵物提取方法及应用 - Google Patents
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Abstract
一种三七发酵物提取方法及应用，该提取方法步骤为（1）菌种活化；（2）菌种纯化；（3）菌种扩培；（4）三七混悬液制备；（5）菌种接种；（6）发酵提取六个步骤。本发明的应用为，将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。本发明的有益效果是，节约生产成本，提高产品的质量，最大化的简化了生产步骤，使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。该三七发酵物优点在于：一、纯天然，100%的植物精华，不含任何化学成分，因此不会给肌肤造成任何负作用；二、易吸收，通过发酵工艺得到的提取液，可以比普通提取方法分子获得更小的成分，能够让皮肤充分吸收。
Description
技术领域
本发明涉及中药材的三七发酵物提取方法技术。
背景技术
三七又名田七、金不换、参三七，是云南特产中药材，来源于五加科人参属植物的根茎，以干燥的根入药。主产于云南省文山州，具有散瘀止血、消肿定痛的功效，是我国名贵的中药材，被誉为血症良药、伤科要药。自20世纪20年代起，人们对三七的化学成分进行了大量研究，三七主要含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸等有效成分。目前，三七的药理活性成分研究主要集中在三七总皂苷（PNS）、三七多糖和氨基酸上。近年来随着中药提取技术研究的发展，植物活性物的提取工艺有了很大进展。三七活性物的提取工艺也不断深入和完善,但是提取方法还是主要以水煎醇沉法为基础。
目前，在化妆品应用上，基本上都是采用将三七提取物只考虑作为辅料进行添加，而且其使用量太微量，例如在现有的面膜中或在精华液中三七提取物所占比例仅为0.5﹪～1﹪，这种产品其中的三七提取物所起到的作用微乎其微，而主要依靠其它成分的原料为主导作用。使得这种产品的生产成本比较高，效果并不尽然，没有充分发挥三七提取物所起到的作用。究其原因，除了制作工艺复杂、生产成本的因素外，主要是还没有对三七发酵物提取液在护理人体肌肤上所产生的作用和机理具有充分的认识。尚还没有人考虑到将整个三七发酵物提取液直接作为面膜或精华液，而不采用其它任何添加辅料。
目前，三七提取物在美容护肤中的应用已经有了很多，三七对于皮肤的功效主要是美白、淡斑、抗衰老、保湿等方面。但由于三七提取物的成本限制，在护肤品中的添加量很低，仅为0.1﹪～1﹪，因此在护肤品中能起到的作用微乎其微。
发酵技术在护肤品中应用已有大量报道，最著名的例子就是SKII的神仙水，专利成分Pitera（覆膜酵母菌发酵产物滤液），利用一种特殊的天然酵母“Saccharomycopsis”发酵后提炼出的成分，含有健康皮肤不可或缺的氨基酸、矿物质、有机酸、无机酸等自然成分。
即使是SKII的神仙水，专利成分Pitera在产品中也只是作为一种功效性成分加入其中，产品中还含有其它大量化学成分。化妆品中一般添加的化学成分有：硅油、增稠剂、pH调节剂、乳化剂、香精、抗氧化剂、色素等，这些成分对皮肤并没有实际功效，反而会增加潜在的皮肤刺激性。
究其原因，除了制作工艺复杂、生产成本的因素外，主要是还没有对三七发酵物提取液在护理人体肌肤上所产生的作用和机理具有充分的认识。尚还没有人考虑到将整个三七发酵物提取液直接作为面膜或精华液，而不采用其它任何添加辅料。
在三七活性物提取优化研究中，一般都会结合微波、超声波、酶法等现代提取方法，在省时间、耗能低的基础上能够取得较好的实验结果，但这方面的研究还是比较少，故采用高新科技对三七活性物提取优化研究将是今后的重点。热水提取三七活性物、超声波辅助提取三七活性物，是目前较为常用的提取方法，而用酶法提取三七活性物还未见报道。
微生物法又可称为发酵法，是以细菌、霉菌等微生物为体系对外源底物进行结构修饰的化学反应，其实质是利用微生物体内的酶对外源化合物进行催化反应。微生物种类繁多，分布广，繁殖快，易变异，对自然环境的变化有极强的适应能力，含有丰富的酶。利用微生物及其产生的酶进行生物转化能够产生许多有用的化合物。该方法反应专一有效，微生物转化不需要添加其它的催化剂，只需先培养出大量的微生物菌种，然后加入底物进行能实现的反应，所以微生物法比化学试剂的反应法更专一、更有效；反应条件温和，微生物发酵一般都是在常温和pH为7左右的条件下进行催化反应，不需要高温、高压等苛刻的条件；设备的运行操作也比较简单、安全，产生的公害较少，一般不会造成环境污染，后处理也相对简单；筛选不同的菌种与优化反应条件可提高转化率，对同一底物进行微生物转化的菌种可能有多种，通过筛选选出最佳菌种，可以保证较高的转化率。
当今国内外许多研究者采用生物法生产多糖，即微生物法、酶法、植物细胞组织培养等多种生物转化法结合，已经呈现出明显优势。因为绝大多数的发酵过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯和能耗少，是一个与环境友善的绿色化学过程。随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。
现有的三七活性物提取最常采用的是醇提法：
取人参用8倍60%乙醇回流提取4h，过滤，滤液减压回收乙醇 ,减压干燥得干膏。
利用发酵来提取三七活性物的技术目前还没有文献或者专利报道。
发明内容
本发明的目的正是为了克服上述现有技术在对三七发酵物提取液的应用上存在的局限而提供一种全新的三七发酵物提取液的使用方法，本发明选择了更加合适的菌种和优化发酵条件，最终得到一个发酵过程简单，产品质量高的发酵生产工艺。
本发明技术方案如下：
一种三七发酵物提取方法，本发明步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉0.9-1.1%，蛋白胨1.8-2.2%，葡萄糖1.8-2.2%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：70-100目5g-10g的三七粉加入到190g-210g的水中，混匀，118-126℃高压灭菌，19-21min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液5-30mL；
（6）发酵提取： 20℃-36℃摇床中进行发酵4-52小时后，将所得发酵液进行110-120℃高压灭菌，19-21min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在11000-13000r/min、离心半径为8-10cm的条件下离心19-21min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
一种三七发酵物的应用，本发明将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
本发明根据不同的生产量的三七发酵提取物，过程中的材料的量要相应的增加，并选择合适规模的仪器。
本发明技术的关键点是：发酵用菌的种类；加入菌种的量；水料的配比；发酵pH值；发酵温度；发酵时间的控制。
本发明技术需要保护的是：发酵用菌的种类；加入菌种的量；水料的配比；发酵pH值；发酵温度；发酵时间的控制。
本发明的有益效果是，该方法不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且使产品更加天然，选择更加合适的菌种，不仅提高产品的质量，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。三七发酵物提取液直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品使用，而不是某一个成分的加入，本发明采用100%的三七发酵物提取液做成成品，相比于现有市面上的其他产品相比优点在于：一、纯天然，100%的植物精华，不含任何化学成分，因此不会给肌肤造成任何负作用；二、易吸收，通过发酵工艺得到的提取液，可以比普通提取方法分子获得更小的成分，能够让皮肤充分吸收。
具体实施方式
一种三七发酵物提取方法，本发明步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉0.9-1.1%，蛋白胨1.8-2.2%，葡萄糖1.8-2.2%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：70-100目5g-10g的三七粉加入到190g-210g的水中，混匀，118-126℃高压灭菌，19-21min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液5-30mL；
（6）发酵提取： 20℃-36℃摇床中进行发酵4-52小时后，将所得发酵液进行110-120℃高压灭菌，19-21min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在11000-13000r/min、离心半径为8-10cm的条件下离心19-21min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
一种三七发酵物的应用，本发明将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
实施例一
一种三七发酵物提取方法，本发明步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值=1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉1%，蛋白胨2%，葡萄糖2%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：将扩培培养基里的发酵菌菌液20mL接种到80目5g-10g的三七粉加入到200g的水中，混匀，121℃高压灭菌，20min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液18mL；
（6）发酵提取：28℃摇床中进行发酵48小时后，将所得发酵液进行115℃高压灭菌，20min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min、离心半径为9cm的条件下离心20min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
本发明将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
实施例二
一种三七发酵物提取方法，本发明步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值=1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉0.9%，蛋白胨1.8%，葡萄糖1.8%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：将扩培培养基里的发酵菌菌液20mL接种到70目5g的三七粉加入到190g的水中，混匀，118℃高压灭菌，21min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液5mL；
（6）发酵提取： 20℃摇床中进行发酵52小时后，将所得发酵液进行110℃高压灭菌，21min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在11000r/min、离心半径为8cm的条件下离心21min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
本发明将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
实施例三
一种三七发酵物提取方法，本发明步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值=1.0时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度105-108CFU/ml；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉1.1%，蛋白胨2.2%，葡萄糖2.2%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：将扩培培养基里的发酵菌菌液20mL接种到100目10g的三七粉加入到210g的水中，混匀，126℃高压灭菌，19min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液30mL；
（6）发酵提取： 36℃摇床中进行发酵4小时后，将所得发酵液进行120℃高压灭菌，19min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在13000r/min、离心半径为10cm的条件下离心19min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
本发明将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
Claims (2)
1.一种三七发酵物提取方法，其特征是，步骤为：
（1）菌种活化：从保藏的斜面中挑取菌落放入液体培养基中，放入摇床中将菌种活化；
（2）菌种纯化：将活化的菌种梯度稀释铺板，以便获取单菌落；
（3）菌种扩培：将待用菌种接种到相应液体培养基中，在25-32℃的摇床中培养，至其合适OD值时，菌种处在对数期，即为合适的接种浓度；所用培养基为YPD培养基，组成如下：酵母浸粉0.9-1.1%，蛋白胨1.8-2.2%，葡萄糖1.8-2.2%；其中，所述菌种为酱油酿造酵母、黄酒酵母、清酒酵母、果酒酵母、食醋酿造酵母、乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、乳球菌、肠球菌中的任意排列组合；
（4）三七混悬液制备：70-100目5g-10g的三七粉加入到190g-210g的水中，混匀，118-126℃高压灭菌，19-21min；
（5）菌种接种：灭菌后的三七混悬液调节pH值到6-8，加入扩培培养基里的发酵菌菌液5-30mL；
（6）发酵提取： 20℃-36℃摇床中进行发酵4-52小时后，将所得发酵液进行110-120℃高压灭菌，19-21min高压灭菌，使菌失活，将灭菌后的发酵液在11000-13000r/min、离心半径为8-10cm的条件下离心19-21min，收集上清液，即为三七发酵提取物。
2.一种三七发酵物的应用，其特征是，将三七发酵提取物直接作为面膜或精华液或爽肤水的成品，而不添加任何辅料。
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