CN109198602A - 一种复合灵芝多糖口服液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种复合灵芝多糖口服液，所述复合灵芝多糖口服液包括以下重量份数的组分：70‑95份灵芝菌体多糖发酵液、0.2‑6份灵芝菌丝体提取物、2‑12份破壁灵芝孢子提取物、0.5‑12份灵芝子实体提取物，该复合灵芝多糖口服液先使用反复冻融技术得到富含灵芝菌丝体成分的灵芝发酵液，再复合调配加入灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物、灵芝子实体提取物等制得，该复合灵芝多糖口服液中复合了灵芝发酵液、灵芝菌丝体、灵芝子实体、脱脂破壁灵芝孢子粉中的水提取物，水提物含灵芝绝大部分灵芝多糖，使灵芝多糖成分更加丰富完善，也避免了高温水提、浓缩、干燥等长时间高温处理对功效成分活性的破坏。

Description

一种复合灵芝多糖口服液及其制备方法
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种复合灵芝多糖口服液及其制备方法。
背景技术
现代化学研究表明，灵芝中含有三萜类、多糖类、核苷类、氨基酸、脂类、维生素类、有机酸和长链烷烃类等化学成分，其中灵芝多糖和灵芝三萜类化合物是灵芝发挥药效作用的关键药效成分。灵芝多糖来源于灵芝子实体、菌丝体、孢子粉以及灵芝发酵液中，其种类较多、结构复杂，研究表明灵芝子实体、菌丝体和孢子粉不仅多糖含量差异较大，在多糖的组成、分子量和对巨噬细胞激活活性等方面均表现出非常大的差异。大量药理学研究表明，由灵芝子实体、菌丝体和孢子粉产生的灵芝多糖具有重要的生物学功能，如抗肿瘤作用、免疫调节作用、抗氧化作用、抗衰老作用、抗辐射作用等，而灵芝发酵液多糖能明显地增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀菌能力并能通过激活机体免疫系统实现抗肿瘤作用，综上所述，灵芝多糖药理功效显著具有很好的开发价值。
现有市场灵芝产品已经引入“复合灵芝成分”的概念，主要是以灵芝子实体、菌丝体、孢子粉为原料所制成的组合物产品为主，也有少数是通过特别的栽培方式将灵芝子实体、菌丝体、孢子粉混合培养成一个产物，然后以其为原材料进行加工，然而含有丰富功效成分的灵芝发酵液还没有得到利用。因此目前“复合灵芝成分”概念产品还有很大发展空间，一方面产品的呈现方式依然是以胶囊、孢子油、孢子粉、提取物粉几大类为主，而涉及的加工工艺主要是萃取油、传统提取、孢子粉破壁等处理方式，在功效成分的提取及活性保护方面并没有明显突破。另一方面，含有丰富功效成分的灵芝发酵液没有得到利用。灵芝发酵液是由灵芝液体发酵而来，与灵芝菌丝体共同处理能节省不必要的能源消耗，灵芝发酵液口感清爽甘甜，带有鲜灵芝独特的香味，整体容易让人接受，其功效成分游离在液体当中，无需通过破壁、提取等方式的加工便能在人体吸收利用，处理工艺方便。因此充分利用灵芝发酵液生产的“复合灵芝多糖”产品正是市场上所缺的。
专利CN1297773A公开了一种全灵芝的生产方法，以灵芝孢子粉、灵芝粉和碳水化合物的混合物作为培养基，经灭菌后接入灵芝菌种，待菌丝长满培养基后将培养物粉碎、烘干而得全灵芝产品。该专利利用灵芝菌丝在生长过程中，不断分泌出胞外酶作用于灵芝孢子壁使其变薄破膜甚至破壁，并有部分孢子内容物转移至菌丝体中，较好地解决了破壁孢子保鲜难的问题。产品充分保留了灵芝的全部有效活性成分，易被人体吸收，具有营养、保健、增强人体免疫的功能。但该专利所使用方法属于固体发酵范畴，从对灵芝孢子粉破壁的方向考虑，是一个新颖且实用的方法，但一般灵芝固体发酵随着灵芝多糖等一些成分的增多反而会抑制菌丝体的生长，所以其有效成分的总含量以及功效是否大于破壁孢子粉、子实体和菌丝体的总和还有待进一步证实。
专利CN1883590A公开了全灵芝孢子油的制备方法，选用灵芝孢子粉、灵芝粉为原料，经酶法破壁、湿法制粒，超临界CO2萃取、离心精制后得到淡黄色油状物，具有增强免疫力功能、对肝损伤具有辅助保护作用、抑制肿瘤细胞生长等多种生理功能。该专利制得的全灵芝孢子油，除了含有灵芝孢子萃取物，还增加了灵芝子实体、灵芝菌丝体的超临界CO2萃取物，其有效成分三萜类化合物的种类更加齐全。与常规机械破壁孢子萃取的灵芝孢子油相比，全灵芝孢子油抑制肿瘤细胞生长效果提高一倍，并且明显降低了过氧化值，解决灵芝孢子油容易氧化的问题，提高产品品质。该专利使用灵芝固体发酵产物进行超临界CO2萃取，并对其产物功效进行动物试验。相比与专利CN1297773A，专利CN1883590A完善了对功效的验证，不足之处在于功效试验当中选取了常规机械破壁孢子萃取的灵芝孢子油作为对照，然而其产品的原材料却不止灵芝孢子一种，而是由灵芝孢子、灵芝粉、以及培养产生的灵芝菌丝体为原材料一同萃取的孢子油，应该选由常规机械破壁孢子、灵芝粉、普通培养的灵芝菌丝体一同萃取的灵芝孢子油作对照。研究表明灵芝孢子粉多糖的含量明显较子实体样品高，但灵芝子实体中所含的三萜类化合物含量明显高于灵芝孢子粉，而无论是多糖还是三萜化合物，灵芝菌丝体都高于灵芝子实体，所以由常规机械破壁孢子、灵芝粉、普通培养的灵芝菌丝体一同萃取的灵芝孢子油抗肿瘤效果未必就比“全灵芝孢子油”差一倍，甚至可能比其效果更好。
专利CN102920749A公开了一种全效灵芝保健品的制作方法，以青蒿渣为主料，经发芽后的谷物为辅料，制备培养灵芝的培养基，然后培养灵芝孢子粉、子实体和菌丝体，然后采用灵芝孢子粉破壁，子实体和菌丝体醇水提取的方法提取灵芝活性成分，加入环糊精制成全效灵芝颗粒。采用该方法生产出的全效灵芝保健品无农药和重金属残留，并且综合了灵芝孢子粉、灵芝子实体、灵芝菌丝体的多重有益功效。该专利能很好的利用灵芝和灵芝培养包，是一种比较环保的方法。但其产品当中所使用的培养包菌丝体与平常培养的菌丝体存在差异，培养包菌丝体经过长时间的培养，其功效成分含量减少，经过成分转化其结构很有可能也已经发生变化。
专利CN1484981A公开了一种灵芝组合物及其制备方法，该灵芝组合物包括以下组份及含量(重量份)：灵芝破壁孢子粉20～35，灵芝菌丝体提取物38～58，灵芝实体提取物30～42。该灵芝组合物的制备方法包括原料制备、混合、制粒、压片等工艺步骤。该灵芝组合物只包含了灵芝破壁孢子粉、灵芝菌丝体提取物和灵芝实体提取物，并没有充分利用营养丰富的灵芝发酵液，此外，当中的灵芝破壁孢子粉的功效成分除了灵芝三萜，还含有大量灵芝多糖，直接以灵芝破壁孢子粉的形式服用导致灵芝多糖吸收率和利用低，而灵芝破壁孢子粉中还含有大量的几丁质等不可利用成分导致灵芝三萜和灵芝多糖吸收慢、口感差，同时灵芝菌丝体采用加水煮沸直接提取，并不能充分利用灵芝菌丝体功效成分易破壁溶出的特性，使灵芝菌丝体中的功效成分在长时间高温处理下活性难以保留，综上所述，产品整体有效成分利用率低、生物活性低、吸收慢、口感差。因此该灵芝组合物的材料组成配方和功效成分的提取方式还有待进一步提高。
灵芝当中的主要功效成分灵芝多糖来源于灵芝子实体、菌丝体、孢子粉以及灵芝发酵液，其种类较多、结构复杂，为了更好发挥灵芝的功效，一方面需要保证灵芝多糖的种类齐全，另一方面尽可能保留灵芝多糖的结构完整。关于灵芝成分复合的相关研究如今已经得到业界的关注，但市场上的灵芝产品主要以灵芝子实体、菌丝体、孢子粉为原料，同时运用到灵芝子实体、菌丝体、孢子粉以及灵芝发酵液的“复合灵芝多糖”产品却没有相关的报道，而灵芝子实体、菌丝体、孢子粉以及灵芝发酵液都各自具有不同的功效与作用机理，开发由以上几种多糖提取物组成的产品将是灵芝产业未来发展的目标之一。
此外，现有的灵芝多糖的提取技术目前还不成熟，工业上仍采取时间长、温度高、能耗大、得率低、活性差的热水提取法，微波提取、超声波提取和酶法提取技术等都仅限于实验室研究，尚未能实现工业化生产，这限制了灵芝产业的发展。
因此有必要开发一种提取效率高、易于实现工业化的灵芝多糖提取方法，采用该方法提取的灵芝多糖能实现提取的灵芝多糖的种类齐全和结构完整，充分发挥灵芝的使用价值。
发明内容
本专利提供了一种复合灵芝多糖口服液及其制备方法，使用反复冻融技术得到富含灵芝菌丝体成分的灵芝发酵液，复合调配加入灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物、灵芝子实体提取物等制得，该复合灵芝多糖口服液的灵芝多糖成分更加丰富完善。
本发明提供了一种复合灵芝多糖口服液及其制备方法，本口服液选用灵芝发酵液、灵芝菌丝体、脱脂破壁灵芝孢子粉、灵芝子实体为原料，分别制得富含灵芝多糖的灵芝菌体多糖发酵液与灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物、灵芝子实体提取物，再经复合调配、过滤、灌装、灭菌即得该复合灵芝多糖口服液。
本发明采用的技术方案是：一种复合灵芝多糖口服液，所述复合灵芝多糖口服液包括以下重量份数的组分：70-95份灵芝菌体多糖发酵液、0.2-6份灵芝菌丝体提取物、2-12份破壁灵芝孢子提取物、0.5-12份灵芝子实体提取物。
更优选的，所述复合灵芝多糖口服液包括以下重量份数的组分：75-90份灵芝菌体多糖发酵液、0.5-3份灵芝菌丝体提取物、5-12份破壁灵芝孢子提取物、1-8份灵芝子实体提取物。
优选的，所述复合灵芝多糖口服液还包括0.01-10份矫味剂和0.01-0.3份防腐剂。
更优选的，所述复合灵芝多糖口服液包括以下重量份数的组分：80-85份灵芝菌体多糖发酵液、0.8-1.5份灵芝菌丝体提取物、3-6份破壁灵芝孢子提取物、1-6份灵芝子实体提取物。和0.01-1.5份矫味剂和0.01-0.05份防腐剂。
优选的，所述矫味剂选自甜菊糖苷、蜂蜜、罗汉果提取物和红枣提取物等天然甜味剂中的一种或几种。
优选的，所述防腐剂选自山梨酸及其钾盐、ε-聚赖氨酸盐酸盐、二甲基二碳酸盐(又名维果灵)、蜂胶粉、壳聚糖等低毒或天然防腐剂中的一种或几种。
优选的，所述破壁灵芝孢子提取物为脱脂破壁灵芝孢子提取物。
本发明还提供了复合灵芝多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)灵芝菌体多糖发酵液和灵芝菌丝体提取物获得：
①灵芝发酵物分离：采用液体深层发酵方法培养灵芝，发酵培养完毕后，将灵芝菌丝体与灵芝发酵液进行分离，分别得到灵芝菌丝体和灵芝发酵液；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：采用反复冻融法将灵芝菌丝体进行破壁，反复进行1～5次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在步骤②灵芝菌丝体最后一次冷冻前加入2～5倍重量灵芝发酵液一同冷冻，溶解，灭活，均质以形成菌桨，离心，取上清液即得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在步骤③离心得到的沉淀中加水，微沸提取，进行固液分离，浓缩，即得灵芝菌丝体提取物；
(2)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加水提取，进行固液分离，浓缩，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(3)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体，粉碎，加水提取，进行固液分离，浓缩，即得灵芝子实体提取物；
(4)将灵芝菌体多糖发酵液、灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物和灵芝子实体提取物进行复合调配，即得复合灵芝多糖口服液。
优选的，步骤①中，采用液体深层发酵方法培养灵芝时，使用的培养基每升包括以下组分：碳源20-50g、氮源3-35g、KH2PO4 0.5-3g、MgSO4 0.2-2g、VB1 0.02-1g。
所述碳源包括葡萄糖、木糖和玉米水解液等。
所述氮源包括蛋白胨、豆粕粉、豆浆和黄豆等。
优选的，步骤①中，将灵芝菌丝体与灵芝发酵液进行分离时，采用40～80目筛网进行分离，分离后，将灵芝发酵液放入4℃的环境中存放。
优选的，步骤②中，反复冻融法的具体操作为：将灵芝菌丝体放入0～-28℃环境中冷藏3～6h，然后取出于45～60℃水浴溶解，反复进行1～5次。
优选的，步骤③中，采用胶体磨、高剪切均质机、高压均质机进行均质以形成菌桨。
优选的，步骤④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(2)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(3)中的灵芝子实体提取物的形式为浸膏或干燥的提取物粉。
优选的，步骤(4)中，复合调配过程中，还包括加入矫味剂。
更具体的，本发明的复合灵芝多糖口服液制备方法如下：
(1)灵芝菌丝体以及灵芝发酵液获得：采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为2～20％，转速为100～300r/min，在温度为20～35℃暗光条件下培养2～10d，得到灵芝菌丝体以及灵芝发酵液；
(2)灵芝发酵液及灵芝菌丝体后处理：
①灵芝发酵物分离：灵芝液体发酵培养完毕后，在出料口加40～80目筛网对灵芝菌丝体与灵芝发酵液进行初步分离，灵芝发酵液放入4℃的环境中存放；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：灵芝菌丝体采用反复冻融法进行破壁，将灵芝菌丝体放入0～-28℃环境中冷藏3～6h，然后取出于45～60℃水浴溶解，反复进行1～5次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在步骤②菌丝体最后一次冷冻前加入2～5倍重量灵芝发酵液一同冷冻，冷藏后80～100℃水浴溶解并持续20～40分钟灭活；溶解后的混合物通过胶体磨、高剪切均质机、高压均质机等均质设备处理形成菌桨，使破壁菌丝体与发酵液充分接触使成分得以溶出；菌浆离心取上清液，得到富含灵芝菌丝多糖的发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在上述③离心沉淀中加2～10倍重量水，80～98℃微沸提取1～3h，采用板框压滤机、三足式离心机、蝶式离心机、卧式离心机等设备进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为35～75％(糖度计显示)的浸膏或干燥制成40～100目提取物粉，即得灵芝菌丝体提取物；
(3)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加6～20倍重量水，80～98℃微沸提取1～3h，提取1～3次，采用板框压滤机、三足式离心机、蝶式离心机、卧式离心机等设备进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为35～75％(糖度计显示)的浸膏或干燥制成40～100目提取物粉，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(4)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体粉碎，加6～20倍重量水，80～98℃微沸提取1～3h，提取1～3次，采用板框压滤机、三足式离心机、蝶式离心机、卧式离心机等设备进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为35～75％(糖度计显示)的浸膏或干燥制成40～100目提取物粉，即得灵芝子实体提取物；
(5)将步骤(2)④的灵芝菌丝体提取物、步骤(3)的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(4)的灵芝子实体提取物与步骤(2)③的菌体多糖发酵液、矫味剂(或不加)进行复合调配，加入1～100份水溶解，过滤，滤液加入防腐剂搅拌均匀后灌装，121℃灭菌15～20分钟，即得复合灵芝多糖口服液。
本文中的灵芝菌丝体指的是液体发酵灵芝菌丝体。
本发明提供的复合灵芝多糖口服液，利用反复冻融技术，使灵芝菌丝体多糖溶出于发酵液中，避免了溶剂、高温长时间处理等理化因素影响，有效地保留了灵芝多糖的生物活性。采用灵芝菌体多糖发酵液、灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物和灵芝子实体提取物制成复合灵芝多糖口服液，该复合灵芝多糖口服液含有从生长最开始的菌丝体与发酵液、到生长过程中的子实体、以及成熟之后产生的孢子粉各阶段中的灵芝多糖。灵芝多糖的整体性以及菌丝体、发酵液多糖的高活性充分地发挥了灵芝的功效价值。
本专利利用鲜灵芝菌丝体易破壁的特性，采用反复冻融技术使大量菌丝体多糖通过均质离心过滤转移到灵芝发酵液中，使灵芝菌体多糖发酵液不经过提取、浓缩、干燥等长时间高温处理，有效的保留灵芝多糖的结构完整性，产生的菌丝体滤渣经水提制成提取物，配合脱脂破壁灵芝孢子提取物、灵芝子实体提取物制成复合灵芝多糖口服液，使灵芝多糖的种类与功效更齐全，以更好的运用灵芝的天然多糖成分，充分发挥灵芝的使用价值，促进灵芝对人类健康的贡献。
本发明具有以下有益效果：
1、复合灵芝多糖口服液中复合了灵芝发酵液、灵芝菌丝体、灵芝子实体、脱脂破壁灵芝孢子粉中的水提取物，水提物含灵芝绝大部分灵芝多糖，使灵芝多糖成分更加丰富完善；
2、在灵芝菌体多糖发酵液制作过程中，一方面，使用反复冻融技术破壁灵芝菌丝溶出成分于发酵液，避免了高温水提、浓缩、干燥等长时间高温处理对功效成分活性的破坏；另一方面，反复冻融技术破坏了灵芝菌丝与发酵液中蛋白质的稳定，使蛋白质沉淀、灵芝菌体多糖溶液更为澄清均一；
3、经过均质处理能使破壁菌丝体与发酵液充分接触，使成分更好地溶出，而结合反复冻融技术，既保留了功效成分的活性也保证了高的提取率，提高了总粗多糖含量；
4、采用液体深层发酵方法培养灵芝菌丝体和发酵液，有培养周期短、劳动生产率高、劳动强度低、占地面积少等优点，而用于制备口服液，可以节省对原材料的干燥处理减少耗能；
5、本方法未使用有机溶剂进行提取、无有毒溶剂残留问题，食用安全性更有保障；
6、本方法充分利用了破壁灵芝孢子粉萃取油脂成分后剩余的副产物脱脂破壁灵芝孢子粉，提高灵芝的利用率，避免不必要的浪费；
7、本方法灵芝菌体多糖发酵液保留了新鲜菌菇的香味，并且减少用水溶解提取物，使产品风味更调和，可不加矫味剂直接做成产品，更优地，可以调配甜菊糖苷、蜂蜜、罗汉果提取物等天然甜味剂使味道更佳。
附图说明
图1为采用编号1的处理方法处理所得的样品的照片；
图2为采用编号2的处理方法处理所得的样品的照片；
图3为采用编号3的处理方法处理所得的样品的照片；
图4为采用编号4的处理方法处理所得的样品的照片；
图5为复合灵芝多糖口服液的工艺流程图。
具体实施方式
实施例1
一种复合灵芝多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)灵芝菌丝体以及发酵液获得：
培养基配方为：葡萄糖40g/L、蛋白胨5g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4 0.5g/L、VB10.05g/L，PH自然，采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为10％，转速为150r/min，在温度为26℃暗光条件下培养7d，得到灵芝菌丝体与灵芝发酵液；
(2)灵芝发酵液及菌丝体后处理：
①灵芝发酵物分离：灵芝液体发酵培养完毕后，在出料口加60目筛网对灵芝菌丝体与发酵液进行初步分离，发酵液放入4℃的环境中存放；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：灵芝菌丝体采用反复冻融法进行破壁，将灵芝菌丝体放入-8℃环境中冷藏3h，然后取出45℃水浴溶解，反复进行2次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在上述②最后一次冷冻前加入3倍重量灵芝发酵液一同冷冻，冷藏后95℃水浴溶解并持续20分钟灭活，溶解后的混合物通过高剪切均质机设备处理形成菌桨，菌浆离心取上清液，得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在上述③离心沉淀中加10倍重量水，95℃微沸提取1h，采用板框压滤机进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，干燥制成60目提取物粉，即得灵芝菌丝体提取物；
(3)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加10倍重量水提取一次，提取两次共20倍重量水，95℃微沸提取1.5h，采用蝶式离心机和卧式离心机设备进行固液分离，合并滤液。在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，干燥制成60目提取物粉，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(4)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体粉碎，加10倍重量水提取一次，提取两次共20倍重量水，95℃微沸提取1.5h，采用板框压滤机进行固液分离，合并滤液，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，干燥制成60目提取物粉，即得灵芝子实体提取物；
(5)将步骤(2)④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(3)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(4)中的灵芝子实体提取物与步骤(2)③中的灵芝菌体多糖发酵液，按照重量份灵芝菌体多糖发酵液95份、灵芝菌丝体提取物1份、脱脂破壁灵芝孢子提取物4份、灵芝子实体提取物1份复合调配，加入6份水溶解，过滤，滤液加入0.01份防腐剂搅拌均匀后灌装，121℃灭菌15分钟，即得复合灵芝多糖口服液。每100ml复合灵芝多糖口服液含215.00mg粗多糖(以葡聚糖计算)。
实施例2
一种复合灵芝多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)灵芝菌丝体以及发酵液获得：
培养基配方为：葡萄糖30g/L、豆粕粉33.2g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4 0.5g/L、VB10.05g/L，PH自然，采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为7.5％，转速为150r/min，在温度为28℃暗光条件下培养7d，得到灵芝菌丝体与灵芝发酵液；
(2)灵芝发酵液及菌丝体后处理：
①灵芝发酵物分离：灵芝液体发酵培养完毕后，在出料口加40目筛网对灵芝菌丝体与发酵液进行初步分离，发酵液放入4℃的环境中存放；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：灵芝菌丝体采用反复冻融法进行破壁，将灵芝菌丝体放入-12℃环境中冷藏3h，然后取出45℃水浴溶解，反复进行3次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在上述②最后一次冷冻前加入4倍重量灵芝发酵液一同冷冻，冷藏后95℃水浴溶解并持续20分钟灭活，溶解后的混合物通过高压均质机等均质设备处理形成菌桨，菌浆离心取上清液，得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在上述③离心沉淀中加8倍重量水，95℃微沸提取2h，采用板框压滤机进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为50％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝菌丝体提取物；
(3)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加8倍重量水提取一次，提取两次共16倍重量水，95℃微沸提取2h，采用蝶式离心机和卧式离心机设备进行固液分离，合并滤液，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为50％(糖度计显示)的浸膏，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(4)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体粉碎，加8倍重量水提取一次，提取两次共16倍重量水，95℃微沸提取2h，采用板框压滤机进行固液分离，合并滤液，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为50％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝子实体提取物；
(5)将步骤(2)④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(3)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(4)中的灵芝子实体提取物与步骤(2)③中的灵芝菌体多糖发酵液，按照重量份灵芝菌体多糖发酵液85份、灵芝菌丝体提取物1份、脱脂破壁灵芝孢子提取物10份、灵芝子实体提取物6份、甜菊糖苷0.1份复合调配，加入1份水溶解，过滤，滤液加入0.3份防腐剂搅拌均匀后灌装，121℃灭菌15分钟，即得复合灵芝多糖口服液。每100ml复合灵芝多糖口服液含346.46mg粗多糖(以葡聚糖计算)。
实施例3
一种复合灵芝多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)灵芝菌丝体以及发酵液获得：
培养基配方为：木糖40g/L、豆浆(黄豆27.1g/L)、KH2PO4 1.5g/L、MgSO4 1.0g/L、VB10.05g/L，PH自然，采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为12％，转速为180r/min，在温度为24℃暗光条件下培养7d，得到灵芝菌丝体与灵芝发酵液；
(2)灵芝发酵液及菌丝体后处理：
①灵芝发酵物分离：灵芝液体发酵培养完毕后，在出料口加80目筛网对灵芝菌丝体与发酵液进行初步分离，发酵液放入4℃的环境中存放；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：灵芝菌丝体采用反复冻融法进行破壁，将灵芝菌丝体放入-18℃环境中冷藏3h，然后取出50℃水浴溶解，反复进行3次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在上述②最后一次冷冻前加入2倍重量灵芝发酵液一同冷冻，冷藏后98℃水浴溶解并持续30分钟灭活，溶解后的混合物通过胶体磨设备处理形成菌桨，菌浆离心取上清液，得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在上述③离心沉淀中加5倍重量水，90℃微沸提取2h，采用三足式离心机进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝菌丝体提取物；
(3)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取破壁脱脂灵芝孢子粉，加8倍重量水提取一次，提取两次共16倍重量水，90℃微沸提取2h，采用蝶式离心机和卧式离心机设备进行固液分离，合并滤液，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(4)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体粉碎，加8倍重量水提取一次，提取两次共16倍重量水，90℃微沸提取2h，采用板框压滤机进行固液分离，合并滤液，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝子实体提取物；
(5)将步骤(2)④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(3)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(4)中的灵芝子实体提取物与步骤(2)③中的灵芝菌体多糖发酵液，按照重量份灵芝菌体多糖发酵液85份、灵芝菌丝体提取物2份、脱脂破壁灵芝孢子提取物9份、灵芝子实体提取物3份、甜菊糖苷0.05份复合调配，加入5份水溶解，过滤，滤液加入0.1份防腐剂搅拌均匀后灌装，121℃灭菌15分钟，即得复合灵芝多糖口服液。每100ml复合灵芝多糖口服液含368.13mg粗多糖(以葡聚糖计算)。
实施例4
一种复合灵芝多糖口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)灵芝菌丝体以及发酵液获得：
培养基配方为：玉米水解液200g/L、蛋白胨10g/L、KH2PO4 1.5g/L、MgSO4 1.0g/L、VB1 0.05g/L，PH自然，采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为12％，转速为150r/min，在温度为24℃暗光条件下培养8d，得到灵芝菌丝体与灵芝发酵液；
(2)灵芝发酵液及菌丝体后处理：
①灵芝发酵物分离：灵芝液体发酵培养完毕后，在出料口加60目筛网对灵芝菌丝体与发酵液进行初步分离，发酵液放入4℃的环境中存放；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：灵芝菌丝体采用反复冻融法进行破壁，将灵芝菌丝体放入-24℃环境中冷藏3h，然后取出45℃水浴溶解，反复进行2次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在上述②最后一次冷冻前加入2倍重量灵芝发酵液一同冷冻，冷藏后90℃水浴溶解并持续20分钟灭活，溶解后的混合物通过胶体磨设备处理形成菌桨，菌浆离心取上清液，得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在上述③离心沉淀中加3倍重量水，90℃微沸提取2h，采用三足式离心机进行固液分离，在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝菌丝体提取物；
(3)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加10倍重量水提取一次，提取两次共20倍重量水，90℃微沸提取2h，采用蝶式离心机和卧式离心机设备进行固液分离，合并滤液。在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(4)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体粉碎，加10倍重量水提取一次，提取两次共20倍重量水，90℃微沸提取2h，采用板框压滤机进行固液分离，合并滤液。在真空度达到-0.075MPa以上温度小于75℃的条件下浓缩，制成固形物含量为60％(糖度计显示)的浸膏，即得灵芝子实体提取物；
(5)将步骤(2)④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(3)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(4)中的灵芝子实体提取物与步骤(2)③中的灵芝菌体多糖发酵液，按照重量份灵芝菌体多糖发酵液90份、灵芝菌丝体提取物1份、脱脂破壁灵芝孢子提取物8份、灵芝子实体提取物5份、红枣提取物1份、罗汉果提取物0.5份复合调配，加入6份水溶解，过滤，滤液加入0.05份防腐剂搅拌均匀后灌装，121℃灭菌15分钟，即得复合灵芝多糖口服液。每100ml复合灵芝多糖口服液含281.86mg粗多糖(以葡聚糖计算)。
实施例5
采用不同的方法处理灵芝发酵液和灵芝菌丝体，考察粗多糖含量的变化。
试验灵芝菌丝体以及发酵液按照以下配方进行培养：
培养基配方为：玉米水解液200g/L、豆浆(黄豆27.1g/L)、KH2PO4 1.5g/L、MgSO41.0g/L、VB1 0.05g/L，PH自然，采用液体深层发酵方法培养灵芝，其中接种量为10％，摇床转速为150r/min，在温度为26℃暗光条件下培养7d，得到灵芝菌丝体与灵芝发酵液。
灵芝菌丝体与发酵液培养完毕后按照以下方法进行处理，并以葡聚糖计算检测粗多糖含量进行比较，结果如表1所示。
表1、不同方法提取灵芝菌丝体及发酵液样品粗多糖含量数据
将表1样品处理方法中离心或抽真空过滤的渣料，通过水浴提取等处理，以葡聚糖计算检测提取物粗多糖含量，结果如表2所示。
表2、渣料水浴提取样品粗多糖含量数据
图1为编号1的样品，图2为编号2的样品，图3为编号3的样品，图4为编号4的样品。图1中的样品主要是灵芝发酵液，图2中的样品主要是菌丝体提取液，图3中的样品主要是灵芝发酵液和灵芝菌丝体提取液的混合液，图4中的样品主要是灵芝发酵液和灵芝菌丝体经过反复冻融处理后提取的混合液。从图1-4可以看出，从浑浊程度来看，图1中的样品看起来非常浑浊，接着依次是图3、图4和图2，由于图2只含有菌丝体提取液，其呈澄清状态。但将图2中的菌丝体提取液与到图1中的灵芝发酵液混合后，也呈现浑浊状态，这时最澄清的是图4，这是因为反复冻融技术破坏了灵芝菌丝与发酵液中蛋白质的稳定，使蛋白质沉淀、灵芝菌体多糖溶液更为澄清均一，而图3均质后菌丝体蛋白质分散使发酵液更浑浊。
参考表1，从粗多糖含量来看，编号3的样品比编号1和2的样品的粗多糖含量之和提高了24.5％，编号4与编号3的样品的粗多糖含量数值比较接近，可以看出经过均质处理高温水浴提取，粗多糖成分含量比发酵液和菌丝体(分别采用高温水浴提取)的粗多糖总和提高了24.5％，而通过反复冻融技术均质溶出的菌体多糖发酵液粗多糖含量也接近均质处理高温水浴提取，进一步说明反复冻融方法既保留了功效成分的活性也保证了高的提取率。
参考表2，编号6样品的粗多糖含量比编号5样品粗多糖含量提高24％，编号7样品的粗多糖含量比编号5样品的粗多糖含量提高1.2倍，表明与没进行特别处理的菌丝体滤渣作比较，经过均质处理高温水浴提取后得到的渣料的粗多糖含量提高24％，进行反复冻融后均质提取后得到的渣料的粗多糖含量提高1.2倍。
综合表1和表2，可以看出，编号3和6样品的粗多糖含量之和比编号1、2、5样品的粗多糖含量之和提高26.9％，编号4和7样品的粗多糖含量之和比编号1、2、5样品的粗多糖含量之和提高39.3％，这表明与没进行特别处理的菌丝体滤渣作比较，进行均质处理提取总粗多糖含量提高26.9％，经过反复冻融与均质处理菌丝体后，渣料再进行水浴提取粗多糖含量有明显提高，总粗多糖含量也得到明显提高，提高了39.3％。也就是，本发明采用反复冻融与均质处理菌丝体和发酵液，可以大大提高总粗多糖提取率，也保留了功效成分的活性。

Claims (10)

1.一种复合灵芝多糖口服液，其特征在于，所述复合灵芝多糖口服液包括以下重量份数的组分：70-95份灵芝菌体多糖发酵液、0.2-6份灵芝菌丝体提取物、2-12份破壁灵芝孢子提取物、0.5-12份灵芝子实体提取物。
2.一种复合灵芝多糖口服液，其特征在于，所述复合灵芝多糖口服液还包括0.01-10份矫味剂和0.01-0.3份防腐剂。
3.根据权利要求1或2所述的复合灵芝多糖口服液，其特征在于，所述破壁灵芝孢子提取物为脱脂破壁灵芝孢子提取物。
4.权利要求1-3中任一项所述的复合灵芝多糖口服液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)灵芝菌体多糖发酵液和灵芝菌丝体提取物获得：
①灵芝发酵物分离：采用液体深层发酵方法培养灵芝，发酵培养完毕后，将灵芝菌丝体与灵芝发酵液进行分离，分别得到灵芝菌丝体和灵芝发酵液；
②灵芝菌丝体反复冻融处理：采用反复冻融法将灵芝菌丝体进行破壁，反复进行1～5次；
③灵芝菌体多糖发酵液获得：在步骤②灵芝菌丝体最后一次冷冻前加入2～5倍重量灵芝发酵液一同冷冻，溶解，灭活，均质以形成菌桨，离心，取上清液即得到灵芝菌体多糖发酵液；
④灵芝菌丝体提取物获得：在步骤③离心得到的沉淀中加水，微沸提取，进行固液分离，浓缩，即得灵芝菌丝体提取物；
(2)脱脂破壁灵芝孢子提取物获得：取脱脂破壁灵芝孢子粉，加水提取，进行固液分离，浓缩，即得脱脂破壁灵芝孢子提取物；
(3)灵芝子实体提取物获得：取灵芝子实体，粉碎，加水提取，进行固液分离，浓缩，即得灵芝子实体提取物；
(4)将灵芝菌体多糖发酵液、灵芝菌丝体提取物、脱脂破壁灵芝孢子提取物和灵芝子实体提取物进行复合调配，即得复合灵芝多糖口服液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤①中，采用液体深层发酵方法培养灵芝时，使用的培养基每升包括以下组分：碳源20-50g、氮源3-35g、KH2PO4 0.5-3g、MgSO40.2-2g、VB1 0.02-1g。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤①中，将灵芝菌丝体与灵芝发酵液进行分离时，采用40～80目筛网进行分离，分离后，将灵芝发酵液放入4℃的环境中存放。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤②中，反复冻融法的具体操作为：将灵芝菌丝体放入0～-28℃环境中冷藏3～6h，然后取出于45～60℃水浴溶解，反复进行1～5次。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤③中，采用胶体磨、高剪切均质机、高压均质机进行均质以形成菌桨。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤④中的灵芝菌丝体提取物、步骤(2)中的脱脂破壁灵芝孢子提取物、步骤(3)中的灵芝子实体提取物的形式为浸膏或干燥的提取物粉。
10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，复合调配过程中，还包括加入矫味剂。
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